Khảo sát khả năng nhân nhanh protocorm like bodies và tái sinh chồi like bodies và tái sinh chồi lan mokara vàng chanh trong hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời rita

I HỌ QU GI TH NH PH H H MINH TRƢỜNG I HỌ BÁ H KHO VƢƠNG THỊ H NG LO N KHẢO SÁT KHẢ NĂNG NHÂN NH NH PROTO ORM LIKE BODIES V TÁI SINH H I L N MOK R V NG H NH TRONG HỆ TH NG NI ẤY NGẬP HÌM T M THỜI RIT ® HUY N NG NH M S ÔNG NGHỆ SINH HỌ NG NH LUẬN VĂN TH HƢ NG D N KHO HỌ SĨ TS L THỊ THỦY TI N TP HỒ H MINH TH NG N M ng tr nh c ho n th nh t i: Trƣờn ọ B K o - HQG-TP.HCM án h ớng dẫn khoa học : (Ghi rõ họ tên học h m học vị v chữ ký) án chấm nhận xét : (Ghi rõ họ tên học h m học vị v chữ ký) án chấm nhận xét : (Ghi rõ họ tên học h m học vị v chữ ký) Luận văn th c sĩ ng y tháng c b o vệ t i Tr ng i Học ách Khoa HQG Tp H M năm Th nh ph n Hội ồng ánh giá Luận văn th c sĩ gồm: (ghi rõ họ tên học h m học vị c a Hội ồng chấm b o vệ luận văn th c sĩ) Xác nhận c a h tịch Hội ồng ánh giá LV v Tr chuyên ng nh sau luận văn HỦ TỊ H H I NG ng khoa qu n lý c s a chữa (nếu c ) TRƢỞNG KHO ẠI HỌ QUỐ GIA TP H M TRƢỜNG I HỌ BÁ H KHO NG HÕ X H I HỦ NGHĨ VIỆT NAM ộ lập - Tự - H n p ú NHIỆM VỤ LUẬN V N THẠ SĨ Họ tên học viên: V ơng Thị Hồng Loan MSHV: 10310943 Ng y tháng năm sinh: 01/10/1982 Nơi sinh: H Nội huyên ng nh: ng nghệ Sinh học M số : 60.42.80 I T N Ề T I K ảo s t k ả năn n ân n n Proto orm l ke bod es t sn l n Mok r Vàn n tron ệ t ốn n n ập ìm t m ® t RITA II NHIỆM VỤ V N I DUNG  T o PL s từ mẫu phát hoa ex vitro: s dụng hai lo i cytokinin A v Kinetin  Kh o sát nh h nồng ộ khác ng c a kết h p A v NAA ến tăng sinh c a PL s v tái sinh chồi từ PL s m i tr  Kh o sát nh h ng th ch ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA®  Kh o sát nh h ng c a mật ộ PL s tới tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA® III NG Y GI O NHIỆM VỤ : tháng năm IV NG Y HO N TH NH NHIỆM VỤ: tháng năm V ÁN B HƢ NG D N: TS Lê Thị Thuỷ Tiên Tp HCM, ngày tháng năm 20 ÁN B HƢ NG D N (Họ tên v chữ ký) HỦ NHIỆM B MÔN OT O (Họ tên v chữ ký) TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HO HỌ (Họ tên v chữ ký) i LỜI ẢM ƠN c th ho n th nh luận văn th c sĩ t i may mắn nhận c h tr ộng viên c a: h ớng dẫn TS Lê Thị Th y Tiên - thực s a chữa v tận t nh h ớng dẫn t i ph ơng pháp ng g p ý kiến quý báu ồng th i ộng viên tinh th n gi p t i ho n th nh luận văn cao học ác th y c m n C ng nghệ Sinh học - truy n t kiến th c chuyên ng nh v ph ơng pháp nghiên c u khoa học tiếp thêm h nh trang t i tự tin học tập v c ng tác an Giám ốc Trung tâm Nghiên c u v phát tri n N ng nghiệp c ng nghệ - cao Th nh phố Hồ hí Minh t o i u kiện v th i gian kinh phí gi p t i ho n th nh luận văn n y ác b n ồng nghiệp phòng - ng nghệ tế b o thực vật gi p ỡ chia sẻ buồn vui suốt th i gian l m việc gi p t i ho n th nh nhiệm vụ c giao - Gia nh b n bè ặc biệt l mẹ chồng v ng x t o i u kiện ộng viên phụ gi p t i chăm s c gái nhỏ l m ch dựa tinh th n vững cho t i yên tâm học tập v c ng tác T i c thực luận văn yêu th ơng quý mến v h tr nhiệt t nh c a tất c ng i T i xin c m ơn v g i l i ch c s c khỏe ến tất c V ơng Thị Hồng Loan ii TÓM TẮT LUẬN VĂN Hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i mang l i hiệu qu v t trội v kh nhân nhanh nhi u lo i thực vật nh chuối lan hồ iệp c phê khoai tây … Nghiên c un y c thực nhằm xác ịnh v i th ng số quan trọng nh h ng tới hiệu qu tăng sinh PL s c nguồn gốc từ cọng phát hoa lan Mokara v ng chanh v tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA® Kết qu cho thấy tăng sinh PL s cao sung A mg/l kết h p với NAA mật ộ 5g PL s m i tr mg/l với th i gian ngập ch m ph t sau m i gi i u kiện n y tỷ lệ tăng sinh PL s cao gấp m i tr ng th ch v gấp ộ lắc vòng/ph t ng MS bổ 779 l n so với m i tr 43 l n so với nu i ng lỏng c lắc liên tục với tốc hế ộ ngập ch m thích h p cho tái sinh chồi từ PL s hệ thống RITA® l ph t ngập ch m sau m i gi với mật ộ kh i PL s/b nh m i tr l ng MS bổ sung A mg/l kết h p với NAA ng chồi tái sinh hệ thống RITA® cao gấp th ch v gấp l n so với m i tr ng lỏng lắc iii ul mg/l Số l n so với m i tr ng MỤ LỤ DANH MỤ ẢNG………………………………………………………….… vii DANH MỤ HÌNH………………………… ……………………………… … viii DANH MỤ ẢNH……………………… …………………………………….… ix DANH MỤ HỮ VIẾT TẮT………………………………………………… …x HƢƠNG MỞ ẦU 1 Tín ấp t ết ủ đề tà Mụ t u n HƢƠNG n ứu TỔNG QU N T I LIỆU Sơ lƣợ đặ đ ểm ủ Mok r vàn chanh (Full moon) Nguồn gốc v phân bố ặc i m h nh thái .3 ặc i m sinh tr ng 4 T o nguồn PL s v tính .5 Hệ t ốn nuô n ập ìm t m t Giới thiệu .7 Nguyên tắc vận h nh v cấu tr c b n c a hệ thống 2.2.1.2 Phân lo i hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i n n ứu tron n oà nƣớ 15 2.3.1 Các nghiên c u ngo i n ớc 15 Ảnh h ng c a hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i ến hiệu suất sinh học c a ki u vi nhân giống khác 15 ác th ng số nh h ng tới hiệu qu c a hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i .18 ác nghiên c u n ớc 20 iv HƢƠNG VẬT LIỆU – PHƢƠNG PHÁP NGHI N ỨU Vật l ệu 24 P ƣơn p pn n ứu 26 Ph ơng pháp t o mẫu s ch in vitro .27 Kh o sát nh h 3 Kh o sát nh h ng c a A v KIN lên t o PL s từ phát hoa 28 ng c a kết h p nồng ộ A v NAA ến tăng sinh c a PL s v tái sinh chồi từ PL s m i tr 3.2.4 Kh o sát nh h ng th ch .29 ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA® 30 Kh o sát nh h ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tăng sinh PL s .30 Kh o sát nh h ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tái sinh chồi từ PL s .31 3.2.5 Kh o sát nh h ng c a mật ộ PL s tới tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA® 32 Kh o sát nh h ng c a mật ộ PL s tới tăng sinh PL s 32 Kh o sát nh h ng c a mật ộ PL s tới tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA® 33 Ph ơng pháp x lý số liệu 34 HƢƠNG KẾT QUẢ - B N LUẬN Kết 35 Kh o sát nh h Ảnh h ng c a A KIN lên t o PL s từ phát hoa 35 ng c a A v NAA lên tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PL s m i tr ng th ch 41 v Kh o sát nh h ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tăng sinh PL s hệ thống RITA® 46 4 Kh o sát nh h ng c a mật ộ PL s ến tăng sinh PL s 53 Kh o sát nh h ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tái sinh chồi từ PL s 54 Kh o sát nh h ng c a mật ộ PL s kh i u tới tái sinh chồi 61 Bàn luận 63 4 Ảnh h ng c a cytokinin lên h nh th nh PL s c a mẫu cấy .63 ác th ng số nh h ng ến hiệu qu tăng sinh PL s v tái sinh chồi c a hệ thống ngập ch m t m th i RITA® .64 Ảnh h ng c a mật ộ PL s kh i u hệ thống nu i cấy .67 4 Ảnh h ng c a h nh th c nu i cấy tới tăng sinh PL s v tái sinh chồi 68 Ảnh h ng c a hệ thống ngập ch m lên chất l ng nu i cấy 69 HƢƠNG KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ Kết luận .71 5 Sự t o PL s 71 Sự tăng sinh PL s v tái sinh chồi m i tr ng th ch 71 Sự tăng sinh PL s hệ thống RITA® 71 Sự tái sinh chồi từ PL s hệ thống RITA® 71 K ến n ị 73 T I LIỆU TH M KHẢO 74 vi D NH MỤ BẢNG Bản Ảnh h ng c a A KIN lên t o PL s từ phát hoa sau 45 ng y nu i cấy .36 Bản Ảnh h ng c a A v NAA lên tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PLBs môi tr ng th ch sau 45 ng y nu i cấy 42 Bản ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tăng Ảnh h sinh PL s sau 45 ng y nu i cấy: 47 Bản Ảnh h ng c a mật ộ PL s tới tăng sinh PL s sau 45 ng y nu i cấy: .53 Bản Ảnh h ng c a t n suất ngập ch m v th i gian ngập ch m tới tái sinh chồi từ PL s sau 45 ng y nu i cấy 55 Bản Ảnh h ng c a mật ộ PL s kh i u tới tái sinh chồi sau 45 ng y nu i cấy .61 vii D NH MỤ HÌNH Hình 2.1 Hệ thống AP S Hình 2.2 Sơ hệ thống nu i cấy bán tự ộng 10 Hình 2.3 Sơ hệ thống nu i cấy bán tự ộng………………………………… 11 Hình 2.4 Hệ thống RITA® (Teisson Alvard, 1995) 13 Hình 2.5 Hệ thống b nh i IT® (Escalona v cộng 998) 14 Hình 2.6 Hệ thống Plantima® 14 Hình 3.1 Sơ nghiên c u chung 26 Hình 3.2 Sơ kh trùng mẫu 27 Hình 4.1 Ảnh h ng c a A KIN lên tỷ lệ mẫu t o PL s sau 45 ng y nu i cấy 37 Hình 4.2 Ảnh h ng c a A KIN lên số l ng PL s/mẫu sau 45 ng y nu i cấy .37 Hình 4.3 Ảnh h ng c a A v NAA ến tăng sinh PL s m i tr ng th ch sau 45 ng y nu i cấy 43 Hình 4.4 Ảnh h ng c a A v NAA ến tái sinh chồi từ PL s m i tr ng th ch sau 45 ng y nu i cấy 43 Hình 4.5 Ảnh h ng c a th i gian v t n suất ngập ch m tới tăng sinh PL s hệ thống RITA® sau 45 ng y nu i cấy 48 Hình 4.6 Ảnh h trọng l ng c a th i gian v t n suất ngập ch m tới số l ng PL s/g ng t nu i cấy hệ thống RITA® sau 45 ng y nu i cấy 48 Hình 4.7 Ảnh h ng c a th i gian v t n suất ngập ch m tới tái sinh chồi từ PL s hệ thống RITA® sau 45 ng y nu i cấy 56 Hình 5.1 Quy tr nh tăng sinh v tái sinh chồi lan Mokara v ng chanh hệ thống RITA® 72 viii Phát hoa ng y tuổi Kh trùng: Javel Mỹ H o 5% 10 phút Mẫu cấy (dày 3-5 mm) M i tr ng MS + NAA 0,5 mg/l + BA mg/l T o PL s PLBs Th i gian mẫu ngập ph t sau m i gi Mật ộ PL s: 5g M i tr ng MS + A mg/l + NAA 0,5 mg/l Tăng sinh PL s hệ thống RITA® PLBs Th i gian mẫu ngập ph t sau m i gi Mật ộ PL s M i tr ng MS + A mg/l + NAA 0,2 mg/l Tái sinh chồi hệ thống RITA® hồi Hình 5.1 Quy trình tăng sinh tái sinh chồi lan Mokara vàng chanh hệ thống RITA® (đề xuất) 72 5.2 K ến n ị  Kh o sát nh h ng c a vị trí lát cắt phát hoa tới t o PL s  Tiếp tục kh o sát th ng số nh th tích m i tr khí cung cấp v o hệ thống xác ịnh ng nu i cấy l u l ng c i u kiện tốt cho tăng sinh PL s v tái sinh chồi từ PL s hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i RITA®  Kh o sát kh tăng tr c th ánh giá ng v rễ c a hệ thống RITA® c trọn vẹn hiệu qu nhân giống lan hệ thống nu i cấy n y 73 T I LIỆU TH M KHẢO T I LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Nguyễn c Minh Hùng v cộng ( ) Nhân nhanh giống lan Mokara hệ thống bioreactor bán ch m Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nơng thơn số 16 [2] D ơng ng Kiên ( 6) Nuôi cấy mô thực vật, tập NX i học quốc gia TP Hồ hí Minh [3] Nguyễn cL ng Lê Thị Th y Tiên ( 6) Công nghệ tế bào NX i học quốc gia TP Hồ hí Minh [4] D ơng Tấn Nhựt v cộng ( 7) Nghiên c u kh nhân nhanh protocorm like body c a hoa ịa lan (Cymbidium sp ) hệ thống bioreactor tự t o Kỷ yếu hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa NX n ng nghiệp [5] ung Ho ng Phi Ph ng v cộng ( 7) ớc u ng dụng hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i nhân giống lan Hồ iệp lai – Phalaenopsis Hybrid Kỷ yếu hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa NX n ng nghiệp [6] ung Ho ng Phi Ph ng v cộng ( 9) ớc u ng dụng th nh c ng hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i nhân giống ki ng Spathiphyllum sensation [7] Nguyễn Ngọc Quỳnh v cộng ( 8) Ứng dụng hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i việc nhân nhanh PL s v chồi lan Dendrobium, Phalaenopsis Viện khoa học kỹ thuật N ng nghiệp mi n Nam [8] D ơng Hoa X ( ) Kỹ thuật trồng hoa lan Mokara Nh xuất b n N ng nghiệp T I LIỆU TIẾNG NƢ NGO I [9] Aitken-Christe J, Davies HE (1988) Development of a semi-automated micropropagation system Acta Hort 230: 81-87 [10] Aitken-Christie J, Jones C (1987) Towards automation: radiata pine shoot hedges in vitro Plant Cell, Tiss Org Cult 8: 185-196 74 [11] Akita M, Takayama S (1994) Stimulation of potato (Solanum tuberosum L.) tuberization by semicontinuous liquid medium surface level control Plant Cell Rep 13: 184-187 [12] Alvard D, Teisson C (1993) Comparison of methods of liquid medium culture for banana micropropagation Effects of temporary immersion of explants Plant Cell, Tiss Org Cult 32: 55-60 [13] Angela M Mordocco Jean A Brumbley (2009) Development of a temporary immersion system (RITA®) for mass production of sugarcane (Saccharum spp interspecific hybrids) In Vitro Cell Dev Biol.-Plant (2009) 45: 450–457 [14] Berthouly M et al (1995) Coffee micropropagation in a liquid medium using the temporary immersion technique In: ASIC Publishers (eds) 16th International Scientific Colloquium on Coffee, Kyoto, Japan (pp 514-519) [15] Berthouly M, Etienne H (1999) Somatic embryogenesis of coffee In: Jain SM, Gupta PK & Newton RJ (eds) Somatic Embryogenesis in Woody Plants, Vol (pp 259-288) [16] Berthouly M, Etienne H (2005) Temporary immersion system: a new concept for use liquid medium in mass propagation Liquid Culture Systems for in vitro Plant Propagation, 165–195 [17] Cabasson C, Alvard D, Dambier D, Ollitrault P and Teisson C (1997) Improvement of Citrus somatic embryo development by temporary immersion Plant Cell,Tiss Org Cult 50: 33-37 [18] Chakrabarty D.; Dewir E.H.Y; Hahn E.E.J; Datta E.S.K Paek (2007) The dynamics of nutrient utilization and growth of apple root stock „M9 EMLA‟ in temporary versus continuous immersion bioreactors Plant Growth Regulation, January 2007, vol 51, no 1, p 11-19 [19] Chu I (1995) Economic analysis of automated micropropagation Automation and Environmental Control in Plant Tissue Culture (pp 19-27) Kluwer Academic Publischers, Dordrecht 75 [20] Connor AJ, Meredith CP (1984) An improved polyurethane support system for monitoring growth in plant cell cultures Plant Cell, Tiss Org Cult 3: 59-68 [21] Elisa Quiala et al (2006) Biomass production of Cymbopogon citratratus (D.C) Stapf., a medicinal plant, in temporary immersion systems Instituto de iotecnologı´a de las Plantas Universidad entral „Marta Abreu‟ de Las Villas arretera de amajuanı´ Km 5 Santa lara P 5483 uba [22] Escalona M, Lorenzo JC, González B, Daquinta M, Fundora Z, Borroto CG, Espinosa D, Arias E and Aspiolea ME (1998) New system for in vitro propagation of pineapple (Ananas comosus (L.) Merr) Pineapple News 5: 5-7 [23] Escalona M, Lorenzo JC, González B, Daquinta M, González JL, Desjardins Y and Borroto CG (1999) Pineapple (Ananas comosus L Merr) micropropagation in temporary immersion systems Plant Cell Rep 18: 743-748 [24] Etienne H, Berger A and Carron MP (1991) Water status of callus from Hevea brasiliensis during induction of somatic embryogenesis Physiol Plant 82: 213-218 [25] Etienne-Barry D, Bertrand B, Vásquez N & Etienne H (1999) Direct sowing of Coffea arabica somatic embryos mass-produced in a bioreactor and regeneration of plants Plant Cell Rep 19: 111-117 [26] Gawel NJ & Robacker CD (1990) Somatic embryogenesis in two Gossypium hirsutum genotypes on semi-solid versus liquid proliferation media Plant Cell, Tiss Org Cult 23: 201-204 [27] Gupta, Pramod K Timmis Roger (2005) Mass propagation of conifer tress in liquid cultures-progress towards commercialization Plant Cell, Tissue and Organ Culture, vol 81, no 3, p 339-346 [28] Hamilton R, Pederson H & Chin CK (1985) Plant tissue culture on membrane rafts BioTechniques p 96 [29] Hammerschlag F (1982) Factors affecting establishment and growth of peach shoots in vitro HortScience 17: 85-86 [30] Harris RE & Mason EB (1983) Two machines for in vitro propagation of plants in liquid media Can J Plant Sci 63: 311-316 [31] Harris RE & Stevenson JH (1982) In vitro propagation of Vitis Vitis 21: 22-32 76 [32] Hussey G (1986) Problems and prospects in the in vitro propagation of herbaceous plants In: Withers LA & Alderson PG (eds) Plant Tissue Culture and its Agricultural Applications (pp 69-84) Butterworths, Boston [33] Jones AM & Petolino JF (1988) Effects of support medium on embryo and plant production from cultured anthers of soft-red winter wheat Plant Cell, Tiss Org Cult 12: 243-261 [34] Kitto SL (1997) Commercial micropropagation Hort Sci 32: 1012-1014 [35] Krueger S, Robacker C & Simonton W (1991) Culture of Amelanchier x grandiflora in a programmable micropropagation apparatus Plant Cell, Tiss Org Cult 27: 219-226 [36] Kevers, C., Franck, T., Strasser, R.J., Dommes, J., Gasper, T., 2004 Hyperhydricity of micropropagated shoots: a typically stress induced change of physiological state Plant Cell Tiss Org Cult 77: 181-191 [37] Lorenzo JC, Gonzalez BL, Escalona M, Teisson C, Espinosa P & Borroto C (1998) Sugarcane shoot formation in an improved temporary immersion system Plant Cell, Tiss Org Cult 54: 197-200 [38] Luo JP, Wang Y, Zha XQ, Huang L (2008) Micropropagation of Dendrobium densiflorum Lindl ex Wall through protocorm-like bodies: effects of plant growth regulators and lanthanoids Plant Cell, Tissue Organ Culture, 93: 333-340 [39] Monette PL (1983) Influence of size of culture vessel on in vitro proliferation of grape in a liquid medium Plant Cell Tiss Org Cult 2: 327-332 [40] Niknejad et al (2011) In vitro plant regeneration from protocorms-like bodies (PLBs) and callus of Phalaenopsis gigantea (Epidendroideae: Orchidaceae) African Journal of Biotechnology Vol 10(56), pp 11808-11816 [41] Park SY, Murthy HN, Paek KY (2002) Rapid propagation of Phalaenopsis from floral stalk-derived leaves In Vitro Cell Dev Biol Plant, 38: 168-172 [42] Sandal, I., Bhattacharya, A., Ahuja, P.S., 2001 An efficient liquid culture system for tea shoot proliferation Plant Cell Tiss Org Cult 65: 75-80 77 [43] Sankar-Thomas, Y.D., Saare-Surminski, K., Lieberei, R., 2008 Plant regeneration via somatic embryogenesis of Camptotheca acuminata in temporary immersion system (TIS) Plant Cell Tiss Org Cult 95, 163-173 [44] Simonton W, Robacker C & Krueger S (1991) A programmable micropropagation apparatus using cycled medium Plant Cell, Tiss Org Cult 27: 211-218 [45] Söndhal MR, Nakamura T, Medina–Filho HP, Carvalho A, Fazuoli LC Costa WM (1984) Coffee In: Ammirato PV, Evans DA, Sharp WR & Yamada Y (eds) Handbook of Plant Cell Culture, Vol III Crop Species (pp 564–590) [46] Stevenson JH & Harris RE (1980) In vitro plantlet formation from shoot tip explants of Fuchsia hybrida cv Swingtime Can J Bot 58: 2190-2192 [47] Tanaka M & Sakanishi Y (1985) Regenerative capacity of in vitro cultured leaf segments excised from mature Phalaenopsis plants Bulletin Univ Osaka Pref Ser 37: 1-4 [48] Teisson C & Alvard D (1995) A new concept of plant in vitro cultivation liquid medium: temporary immersion In: Terzi M et al (eds) Current Issues in Plant Molecular and Cellular Biology (pp 105-110) [49] Teisson C & Alvard D (1999) In vitro production of potato microtubers in liquid medium using temporay immersion Potato research 42: 499-504 [50] Tisserat B, Jones D & Galletta PD (1993) Construction and use of an inexpensive in vitro ultrasonic misting system Hort.Technology 3: 75-79 [51] Tisserat B & Vandercook CE (1985) Development of an automated plant culture system Plant Cell, Tiss Org Cult 5: 107-117 [52]Tokuhara K, Mii M (2001) Induction of embryogenic callus and cell suspension culture from shoot tips excised from flower stalk buds of Phalaenopsis (Orchidaceae) In vitro Cell Dev Biol Plant, 37: 457-461 [53] Vij SP, Pathak P (1990) Micropropagation of orchids through leaf segments J Orchid Soc India 4: 69–88 78 [54] Young PS, Murthy HN, Yoeup PK (2000) Mass multiplication of protocormslike bodies using bioreactor system and subsequent plant regeneration in Phalaenopsis Plant Cell Tissue Organ Culture, 63: 67-72 [55] Zhao P, Wu F, Feng FS, Wang WJ (2008) Protocorm-like body (PLB) formation and plant regeneration from the callus culture of Dendrobium candidum Wall ex Lindl In Vitro Cell Dev Biol Plant, 44: 178-185 [56] Ziv, M., 1989 Enhanced shoot and cormlet proliferation in liquid cultured gladiolus buds by growth retardants Plant Cell Tiss Org Cult 17, 101-110 79 PHỤ LỤ P ụ lụ Mô trƣờn Mur s Th nh ph n khoáng a l e Skoo (19 ng ) (Mô trƣờn MS) Nồng ộ (mg/l) NH4NO3 1650,00 KNO3 1900,00 CaCl2.2H2O 440,00 MgSO4.7H2O 370,00 KH2PO4 170,00 Th nh ph n khoáng vi l ng Nồng ộ (mg/l) MnSO4.H2O 23,30 ZnSO4.7H2O 8,60 H3BO3 6,20 KI 0,83 NaMoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 NaEDTA 37,30 FeSO4.7H2O 27,80 Vitamine Amino acid Nồng ộ (mg/l) Thiamine HCl 0,10 Acid nicotinic 0,50 Pyridoxine HCl 0,50 Glycine 2,00 ONEWAY Tongsochoi sochoitrungbinh trongluongchoi BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN ALPHA(0.05) Oneway Descriptives Std Std N Mean Deviation Error Tongsochoi 30.00 95.0000 3.00000 1.73205 50.00 184.333 7.09460 4.09607 70.00 312.666 9.71253 5.60753 90.00 328.333 27.53785 15.8989 Total 12 230.083 101.02426 29.1631 sochoitrungbi 30.00 3.1667 10000 05774 nh 50.00 3.6867 14189 08192 70.00 4.4667 13875 08011 90.00 3.6481 30598 17666 Total 12 3.7420 51258 14797 trongluongch 30.00 1093 00321 00186 oi 50.00 1063 00231 00133 70.00 1030 00458 00265 90.00 0953 00651 00376 Total 12 1035 00664 00192 Tongsochoi 30.00 50.00 70.00 90.00 Total sochoitrungbi 30.00 nh 50.00 70.00 90.00 Total trongluongch 30.00 oi 50.00 70.00 90.00 Total Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Minimu Maximu Bound Bound m m 87.5476 102.4524 92.00 98.00 166.7094 201.9573 178.00 192.00 288.5394 336.7939 302.00 321.00 259.9255 396.7412 310.00 360.00 165.8956 294.2711 92.00 360.00 2.9183 3.4151 3.07 3.27 3.3342 4.0391 3.56 3.84 4.1220 4.8113 4.31 4.59 2.8881 4.4082 3.44 4.00 3.4164 4.0677 3.07 4.59 1013 1173 11 11 1006 1121 11 11 0916 1144 10 11 0792 1115 09 10 0993 1077 09 11 Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic df1 df2 Tongsochoi 6.999 sochoitrungbi 2.908 nh trongluongch 842 oi Sig .013 101 508 Tongsochoi ANOVA Sum of Squares df 110440.917 Between Groups Within Groups 1824.000 Total 112264.917 sochoitrungbi Between 2.604 nh Groups Within Groups 286 Total 2.890 trongluongch Between 000 oi Groups Within Groups 000 Total 000 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Tongsochoi a Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 30.00 95.0000 50.00 184.333 70.00 312.666 90.00 328.333 Sig 1.000 1.000 240 Mean Square F 36813.639 161.463 11 228.000 11 036 11 000 868 000 Sig .000 24.279 000 5.519 024 sochoitrungbinh Duncan a NT 30.00 90.00 50.00 70.00 Sig N 3 3 Subset for alpha = 0.05 3.1667 3.6481 3.6867 4.4667 1.000 809 1.000 trongluongchoi Duncan NT 90.00 70.00 50.00 30.00 Sig a N 3 3 Subset for alpha = 0.05 0953 1030 1030 1063 1093 068 133 PHẦN L LỊ H TR H NG NG Họ v tên: VƯ NG TH HỒNG LOAN Ng y tháng năm sinh: ịa liên l c: / / 98 Nơi sinh: H Nội 33/ 4/7 Nguyễn Ảnh Th P Tân hánh Hiệp Q TP Hồ hí Minh Q TRÌNH OT O - Từ tháng 9/ ến tháng 6/ 5: sinh viên tr ng i học L t Chuyên ngành: Sinh học - Từ tháng 9/ ến nay: học viên cao học tr học quốc gia th nh phố Hồ hí Minh - Từ tháng 4/ ng huyên ng nh: i học ách Khoa – i ng nghệ sinh học ến nay: l m việc t i Trung tâm nghiên c u v phát tri n N ng nghiệp c ng nghệ cao thuộc an qu n lý khu N ng nghiệp c ng nghệ cao Th nh phố Hồ hí Minh ... tăng sinh v tái sinh chồi lan Mokara v ng chanh hệ thống RITA? ? 72 viii D NH MỤ ẢNH Ản Cây Mokara vàng chanh Ản Phát hoa Mokara v ng chanh Hệ thống nu i cấy ngập ch m RITA? ?(Cirad,... th c hệ số nhân chồi thấp chồi nu i cấy m i tr hay m i tr ng lỏng ngập ch m ph n c hệ số nhân l nhân chồi cao (>5) thu RITA? ? với ng th ch hệ số c hệ thống nu i cấy ngập ch m t m th i ph t ngập. .. PLBs, tái sinh chồi sinh tr ng chồi Khi nuôi cấy hệ thống bioreactor bán chìm nổi, hoa hồng lan tỏ thích h p cho mục ích nhân chồi (6,6 chồi/ mẫu) v sinh tr ng nhanh (chi u dài 45 mm), lan hồ