Đánh giá hàm lượng hợp chất thứ cấp trong sinh khối rễ bất định cây ba kích morinda officinalis how

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ “ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG HỢP CHẤT THỨ CẤP TRONG SINH KHỐI RỄ BẤT ĐỊNH CÂY BA KÍCH (Morinda officinalis How.)” Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Trịnh Thị Hương Thành phố Hồ Chí Minh - 2020 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ “ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG HỢP CHẤT THỨ CẤP TRONG SINH KHỐI RỄ BẤT ĐỊNH CÂY BA KÍCH (Morinda officinalis How.)” (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 6/1/2020) Chủ nhiệm nhiệm vụ: Chủ tịch Hội đồng nghiệm thu (Ký ghi rõ họ tên) Trịnh Thị Hương Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Đồn Kim Thành Thành phố Hồ Chí Minh - 2020 THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP.HCM, ngày tháng năm 2020 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Vườn ươm Sáng tạo Khoa học Công nghệ trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Trịnh Thị Hương Ngày, tháng, năm sinh: 20-03-1987 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến sĩ Chức danh khoa học: Chức vụ Điện thoại: Tổ chức: 028 3816 1673 Nhà riêng: Mobile: 0982 406 187 Fax: E-mail: huongtt@hufi.edu.vn Tên tổ chức công tác: Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TP.HCM Địa tổ chức: 140 Lê Trọng Tấn, Phường Tây Thạnh; Quận Tân Phú, Tp.HCM Địa nhà riêng: 19/43 Lam sơn, Phường 5, quận Phú Nhuận, Tp.HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Điện thoại: 028.38.230.780 Fax: E-mail: khoahoctre@gmail.com Website: khoahoctre.com.vn Địa chỉ: Số 01 Phạm Ngọc Thạch, Phường Bến Nghé, Quận Họ tên thủ trưởng tổ chức: Đoàn Kim Thành Số tài khoản: 3713.0.1083277.00000 - Tại Kho bạc Nhà nước Quận Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Cơng nghệ TP.HCM II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ 30 tháng 12/ năm 2019 đến 30 tháng 12/ năm 2020 - Thực tế thực hiện: từ tháng 10/năm 2019 đến tháng 10/năm 2020 - Được gia hạn (nếu có): Khơng - Lần từ tháng… năm… đến tháng… năm… - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 80 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 80 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 1/2020 40 6/2020 24 12/2020 16 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 4/2020 40 10/2020 24 - Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công Theo kế hoạch Tổng NSKH lao 62,44441 62,44441 Thực tế đạt Nguồn Tổng khác 62,44441 NSKH 62,44441 Nguồn khác động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, 9 lượng Thiết bị, máy 0 móc Xây dựng, sửa 0 chữa nhỏ Chi khác 8,555590 8,555590 Tổng cộng 9 0 0 0 0 0 8,555590 8,555590 - Lý thay đổi (nếu có): Khơng Đối với dự án: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Thiết bị, máy móc mua Nhà xưởng xây dựng mới, cải tạo Kinh phí hỗ trợ cơng nghệ Chi phí lao động Nguyên vật liệu, lượng Thuê thiết bị, nhà xưởng Khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ cơng đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban Tên văn TT hành văn … Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Ghi Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Tên cá nhân tham gia thực Nội dung tham gia Chủ nhiệm đề tài, tham gia tất nội dung Xây dựng đề cương; Xác định hàm lượng hợp Nguyễn Phạm Nguyễn Phạm chất thứ cấp Hương Huyền Hương Huyền rễ bất định; tổng hợp viết báo cáo đề tài Trịnh Hương Thị Trịnh Hương Thị Nghiên cứu thu Nguyễn Minh Nguyễn Minh nhận rễ bất định Phương Phương ba kích Nghiên cứu nhân Ngơ Thị Kim Ngơ Thị Kim nhanh rễ bất định Mộng Mộng ba kích Ghi * Sản phẩm chủ yếu đạt Báo cáo tổng hợp - Kết chuyên đề xác định hàm lượng polysaccharide anthraquinon - Báo cáo tổng hợp - Kết chuyên đề nghiên cứu cảm ứng tạo rễ bất định - Kết chuyên đề nghiên cứu nhân nhanh rễ bất định - Lý thay đổi ( có): Khơng Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) - Nội dung: Đánh giá hàm lượng hợp chất thứ cấp rễ bất định ba kích - Thời gian: 8/10/2020 - Kinh phí: 4,9 tr.đ - Địa điểm: Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TP.HCM Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) - Nội dung: Đánh giá hàm lượng hợp chất thứ cấp rễ bất định ba kích - Thời gian: 8/10/2020 - Kinh phí: 4,9 tr.đ - Địa điểm: Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TP.HCM Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Khơng Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngồi) Số TT Các nội dung, cơng việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế Thực tế hoạch đạt Nghiên cứu thu nhận rễ bất định ba kích 1/20205/2020 Nghiên cứu nhân nhanh rễ bất định ba kích 6/20209/2020 Xác định hàm lượng hợp chất thứ cấp có rễ bất định ba kích 8/202012/2020 Người, quan thực - Trịnh Thị Hương 1/2020- Nguyễn Minh Phương 5/2020 - ĐH Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM - Trịnh Thị Hương Ngô 6/2020- Thị Kim Mộng 9/2020 - ĐH Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM - Trịnh Thị Hương Nguyễn Phạm Hương 8/2020- Huyền 12/2020 - ĐH Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM; Trung tâm Sâm dược liệu TP.HCM - Lý thay đổi (nếu có): Khơng III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Yêu cầu khoa học cần đạt Tên sản phẩm Theo kế hoạch Thực tế đạt Quy trình ni cấy thu Xác định Xác định nhận rễ bất định ba kích mơi trường mơi trường khống, nồng khoáng, nồng độ loại độ loại auxin, nồng độ auxin, nồng độ đường, loại đường, loại mẫu nuôi cấy mẫu nuôi cấy với cách đặt với cách đặt thích hợp cho thích hợp cho q trình cảm q trình cảm ứng nhân ứng nhân nhanh rễ bất nhanh rễ bất định định Ghi - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Bài báo Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt Tạp chí nước, có 01 tạp chí có số ISSN hay Hội số ISSN, thảo, Hội nghị tồn HĐGS cơng nhận Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thực quốc có số ISSN (0,5 điểm) phẩm - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) Kết sơ 2 Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: Nghiên cứu xây dựng quy trình ni cấy thu nhận sinh khối rễ bất định ba kích, tạo nguồn vật liệu rễ ba kích ban đầu có chứa hoạt chất anthraquinone tương đương với củ ba kích điều kiện trồng tự nhiên hàm lượng polysacharide đạt yêu cầu dược điển Đây sở cho ni cấy sinh khối ba kích với quy mô lớn, chủ động tạo nguồn vật liệu rễ ba kích cho ngành cơng nghiệp dược, mỹ phẩm, thực phẩm chức b) Hiệu kinh tế xã hội: Kết thu đề tài sở cho việc thu nhận lựa chọn nguồn vật liệu thích hợp cho q trình ni cấy sinh khối ba kích đạt hiệu cao Kết đạt ứng dụng để ni cấy sinh khối ba kích quy mơ lớn cung cấp nguồn nguyên liệu cho công ty sản xuất trà, thực phẩm chức năng, y dược, Từ đó, giúp đẩy mạnh việc sản xuất dạng thực phẩm chức từ ba kích, phục vụ nhu cầu sức khoẻ người giúp giảm giá thành sản phẩm Kết nghiên cứu giúp làm giảm tình trạng khai thác ba kích tự nhiên, góp phần bảo tồn đa dạng sinh học Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra nhiệm vụ: Số TT I II III Nội dung Báo cáo tiến độ Lần Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) 6/2020 Đã hồn thành nội dung nghiên cứu cảm ứng tạo rễ bất định nhân nhanh rễ bất định ba kích Mơi trường SH bổ sung mg/l IBA, 30 g/l sucrose thích hợp cho ni cấy cảm ứng tạo rễ bất định từ mẫu đốt thân với cách đặt đứng, nuôi cấy điều kiện tối Môi trường nhân nhanh rễ bất định SH + 50 g/l sucrose, nuôi cấy môi trường đặc thích hợp điều kiện lỏng lắc Báo cáo giám định Lần Nghiệm thu sở Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) Trịnh Thị Hương Đoàn Kim Thành Sau đo mật độ quang dãy chuẩn thu kết bảng 3.11 Sử dụng phần mềm MS Excel 2010, xây dựng đường chuẩn rhein đường tuyến tính có dạng y = 0,0403x - 0,0154 với hệ số tương quan R2 = 0,9901 > 0,95 Chứng tỏ nồng độ chất chuẩn mật độ quang có mối tương quan chặt chẽ, sử dụng đường chuẩn xây dựng để xác định hàm lượng anthraquinon mẫu thử khảo sát Mật độ quang 0.8 0.6 y = 0.0403x - 0.0154 R² = 0.9901 0.4 0.2 0 10 15 20 Nồng độ (µg/ml) Hình 3.15 Đường chuẩn rhein Các mẫu thử sau tạo phức với magie acetat 0,5% tiến hành đo quang bước sóng 519 nm thu kết ghi nhận bảng 3.12 Bảng 3.12 Hàm lượng anthraquinon toàn phần mẫu rễ ba kích khảo sát Hàm lượng anthraquinon mẫu dược liệu (%) Mẫu MO1 (Mẫu tự nhiên, cơng ty dược liệu Sài Gịn) 0,0320 ± 0,0017b MO2 (Mẫu tự nhiên, Quảng Ninh) 0,0447 ± 0,0004a MO3 (Rễ bất định nuôi cấy in vitro) 0,0485 ± 0,0271a * Các chữ a, b, c,… cột biểu diễn khác biệt có ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95% 66 Hàm lượng AQ (%) 0.08 0.06 0,0447 0.04 b 0,0485 b 0,0320 a 0.02 0.00 MO1 MO2 MO3 Hình 3.16 Hàm lượng anthraquinon mẫu ba kích Dan et al., (2011) nghiên cứu định lượng anthranoid toàn phần M officinalis phương pháp so màu xác định hàm lượng anthranoid toàn phần 0,023% [34] Trong nghiên cứu hàm lượng anthraquinon thu nhận từ ba mẫu ba kích cao kết Dan et al., (2011) [34] Hàm lượng anthraquinon mẫu MO2 (0,0447%) MO3 (0,0485%) tương đương cao mẫu MO1 (0,0320%) (Bảng 3.12; Hình 3.14) Như vậy, rễ bất định ba kích thu nhận có chứa hàm lượng anthraquinon với mẫu rễ củ tự nhiên năm tuổi thu nhận nguồn gốc huyện Ba Chẽ, Quảng Ninh; cao mẫu tự nhiên thu nhận cơng ty dược liệu Sài Gịn Anthraquinon iridoid glycosid hợp chất hoạt tính sinh học M officinalis [31, 49] Trong nghiên cứa Liang et al (2017), thành phần hóa học cao chiết rễ ba kích tự nhiên (MORE) cao chiết rễ tơ ba kích (MOHRE) so sánh định lượng HPLC Kết rằng, MOHRE có nhiều pic đặc biệt mà khơng quan sát thấy sắc ký đồ MORE Thành phần iridoid MORE (3,10%) MOHRE (3,01%) tương tự nhau, hàm lượng anthraquinon MOHRE (0,66%) cao MORE (0,14%) Kết chứng minh rằng, hiệu MORE MOHRE điều trị viêm đại 67 tràng tương đương [50] Các kết cho thấy, rễ ba kích ni cấy in vitro thay cho rễ ba kích tự nhiên Ngồi ra, ni cấy in vitro, điều khiển gia tăng hàm lượng hoạt chất cách bổ sung thêm hợp chất elicitor Thêm vào đó, q trình nuôi cấy in vitro rút ngắn thời gian thu nhận rễ, không chịu tác động điều kiện ngoại cảnh, dễ dàng điều khiển điều kiện nuôi cấy để thu nhận sinh khối với quy mô lớn Hàm lượng anthraquinon rễ củ ba kích có nguồn gốc từ Quảng Ninh cao so với rễ củ thu nhận từ công ty dược liệu Sài Gịn, có khu vực trồng Lâm Đồng Kết cho thấy khu vực địa lý trồng có ảnh hưởng mạnh đến hàm lượng anthraquinon rễ ba kích KẾT LUẬN Nội dung 1: Nghiên cứu tạo rễ bất định ba kích Nguồn mẫu đốt thân với cách đặt đứng thích hợp để tạo rễ bất định mẫu Nồng độ NAA thích hợp cho cảm ứng tạo rễ bất định từ đốt thân mg/L Nồng độ IAA thích hợp cho cảm ứng tạo rễ bất định từ đốt thân mg/L Nồng độ IBA thích hợp cho cảm ứng tạo rễ bất định từ đốt thân mg/L Trong loại auxin (NAA, IAA IBA) IBA (2 mg/L) thích hợp cho cảm ứng tạo rễ bất định ba kích NAA IAA Mơi trường khống thích hợp cho cảm ứng tạo rễ bất định ba kích từ mẫu đốt thân mơi trường SH Điều kiện ni cấy tối thích hợp cho q trình cảm ứng tạo rễ bất định điều kiện sáng Nội dung 2: Nghiên cứu nhân nhanh rễ bất định ba kích Rễ bất định ni cấy điều môi trường đặc tăng sinh tốt môi trường lỏng lắc 68 Nồng độ đường sucrose thích hợp cho trình tăng sinh 45 g/L Nội dung 3: Xác định hàm lượng hợp chất thứ cấp rễ bất định ba kích Hàm lượng polysaccharide tổng số thu nhận rễ bất định 2,435%, thấp so với mẫu rễ củ năm tuổi thu nhận điều kiện trồng tự nhiên (7,738% 11,137% tướng ứng mẫu Lâm Đồng Quảng Ninh) Hàm lượng anthraquinone thu nhận rễ bất định 0,0485% với mẫu rễ củ tự nhiên năm tuổi có nguồn gốc từ Quảng Ninh (0,0447%) cao mẫu rễ củ tự nhiên có nguồn gốc Lâm Đồng (0,0320%) Từ kết đạt hàm lượng polysaccharide anthraquinon rễ ba kích, kết luận rằng, rễ bất định nuôi cấy in vitro nguồn vật liệu đầy tiềm nuôi cấy sinh khối thu nhận rễ ba kích thay cho ba kích trồng tự nhiên, cung cấp nguồn nguyên liệu cho ngành công nghiệp dược cách chủ động, không phụ thuộc vào điều kiện nuôi trồng tự nhiên, thổ nhưỡng, thời gian nuôi trồng rút ngắn 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Y Tế (2018) Dược điển Việt Nam V Tập 2, Chuyên luận Ba kích, NXB Y học, Hà Nội: 1064 Bùi Quốc Thái (2016) Nghiên cứu chiết xuất, phân lập tinh chế Monotropein từ Ba kích làm nguyên liệu thiết lập chuẩn Trường đại học Dược Hà Nội – Luận văn thạc sĩ dược học Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học: 303-306 Dương Tấn Nhựt, Nguyễn Cửu Thành Nhân, Hoàng Xuân Chiến, Nguyễn Phúc Huy, Nguyễn Bá Nam, Trần Xuân Ninh, Phạm Phong Hải, Vũ Quốc Luận, Phan Quốc Tâm, Vũ Thị Hiền, Trịnh Thị Hương, Trần Công Luận, Paek Kee Yoeup (2012) Một số hệ thống nuôi cấy nghiên cứu nhân nhanh rễ bất định rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 10(4A): 887-897 Hoàng Đăng Hiếu, Chu Thị Thu Hà, Phạm Bích Ngọc, Lâm Đại Nhân, Nguyễn Thị Thúy Hường, Chu Hoàng Hà (2016) Sử dụng thị ISSR việc đánh giá đa dạng di truyền quần thể ba kích Quảng Ninh Tạp chí Sinh học, 38(1): 89-95 Hoàng Thị Thế, Nguyễn Thị Phương Thảo, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Thủy (2013) Quy trình nhân giống in vitro ba kích (Morinda officinalis How.) Tạp chí Khoa học Phát triển: 285-292 Lê Đình Sáng (2010), Sổ tay thuốc vị thuốc đông y, Trường đại học y khoa Hà Nội: 28-36 Lê Thị Thúy, Trịnh Mộng Nhi, Phạm Văn Lộc (2014) Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng thực vật môi trường nuôi cấy đến 70 khả tạo rễ cà rốt nuôi cấy in vitro Tạp chí Đại học Thủ Dầu Một, 5(18): 62-67 Ngơ Thị Ngọc Hương, Đinh Văn Khiêm, Nguyễn Thị Quỳnh (2015) Ảnh hưởng thành phần khoáng lên sinh trưởng sâm Việt Nam (P vietnamensis Ha et Grushv.) nuôi cấy in vitro điều kiện quang tự dưỡng Tạp chí sinh học, 37(1): 96-102 10 Ngơ Vân Thu, Trần Hùng (2010), Dược liệu học Tập 1, NXB Y học, TP.Hồ Chí Minh: 323-348 11 Nguyễn Hồng Hồng, Trịnh Thị Hương, Lê Kim Cương, Vũ Thị Hiền, Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Phúc Huy, Vũ Quốc Luận, Hà Thị Mỹ Ngân, Phạm Bích Ngọc, Chu Hồng Hà, Dương Tấn Nhựt (2014) Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng rễ tơ sâm ngọc linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) chuyển gen Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 12(3): 467-476 12 Nguyễn Lê Thụ Minh, Nguyễn Thụy Phương Duyên, Lê Thị Tuyết Anh, Nguyễn Thị Quỳnh (2017) Ảnh hưởng nồng độ đường, vitamin, cường độ ánh sáng thành phần khoáng lên tăng trưởng sâm bố (Hibiscus sagittifolius Kurz) ni cấy in vitro Tạp chí Sinh học, 39(1): 86-95 13 Nguyễn Thị Hiền, Trần Bảo Trâm, Phan Xuân Bình Minh, Nguyễn Thị Thanh Mai, Trương Thị Chiên, Phạm Hương Sơn, Đặng Thị Thủy (2017) Đánh giá sinh trưởng thành phần dược chất ba kích (Morinda officinalis How) ni cấy in vitro trồng Cao Bằng Phú Yên Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 7: 1166-1171 14 Nguyễn Thị Ngọc Hương, Võ Thị Bạch Mai (2009) Tìm hiểu phát sinh hình thái rễ ni cấy in vitro nhàu (Morinda citrifolia L.) Tạp chí phát triển Khoa học Công nghệ, 12(17): 100-105 71 15 Nguyễn Trung Hậu, Trần Văn Minh (2015) Nuôi cấy mô đinh lăng (Polyscias fruticosa L Harms) tạo rễ tơ nhận biết hoạt chất saponin tích lũy Tạp chí khoa học trường Đại học An Giang, 7(1): 75-83 16 Nguyễn Trung Thành, Paek Kee Yoeup (2008) Nhân nhanh rễ bất định Nhân sâm Panax ginseng C.A Meyer: Ảnh hưởng số nhân tố lý hóa lên tăng trưởng sinh khối sản phẩm trao đổi chất ginsenosides Tạp chí Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 24: 318-323 17 Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Thuỳ Linh, Nguyễn Tuấn Minh, Nguyễn Quỳnh Chi, Trần Thị Anh Đào (2016) Nghiên cứu cảm ứng nuôi cấy rễ bất định ba kích (Morinda officinalis How.) Tạp chí KH Nơng Nghiệp Việt Nam, 6(14): 921-930 18 Tạ Văn Vạn (2015) Quy trình kỹ thuật trồng dược liệu địa bàn huyện Sóc Sơn – ba kích (Morinda officinalis How.) Dự án đánh giá tiềm tổ chức áp dụng mơ hình trồng dược liệu địa bàn huyện Sóc Sơn Sở Khoa học Cơng nghệ Hà Nội 19 Trịnh Thị Hương, Hồ Thanh Tâm, Hà Thị Mỹ Ngân, Ngơ Thanh Tài, Nguyễn Phúc Huy, Hồng Xuân Chiến, Nguyễn Bá Nam, Vũ Quốc Luận, Vũ Thị Hiền, Nguyễn Thị Thúy Hường, Phạm Bích Ngọc, Chu Hồng Hà, Dương Tấn Nhựt (2012) Ảnh hưởng nguồn mẫu kích thước mẫu số loại auxin lên khả tái sinh rễ bất định củ sâm ngọc linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) nuôi cấy in vitro Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 10(4A): 877-886 20 Trịnh Thị Hương, Nguyễn Hồng Hoàng, Vũ Thị Hiền, Hoàng Thanh Tùng, Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Phúc Huy, Vũ Quốc Luận, Bùi Thế Vinh, Trần Đình Phương, Lâm Diệp Thảo, Phạm Bích Ngọc, Trần Cơng Luận, Chu Hồng Hà, Dương Tấn Nhựt (2015) Ảnh hưởng số elicitor lên sinh trưởng tích lũy hoạt chất rễ tơ sâm Ngọc Linh chuyển gen Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 13(3): 843-851 72 21 Trịnh Thị Hương, Phạm bích Ngọc, Chu Hoàng Hà, Dương Tấn Nhựt (2016) Đánh giá khả sinh trưởng tích lũy saponin rễ bất định rễ tơ sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 14(2): 231-236 22 Trương Quỳnh Như, Võ Thanh Phúc, Lê Thị Thủy Tiên (2015) Khảo sát ảnh hưởng auxin lên hình thành tăng sinh rễ bất định dừa cạn (Catharanthus roseus (L.) G Don) Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ, 18: 75-86 23 Viện Dược liệu (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập 1, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 101-106 24 Võ Châu Tuấn, Huỳnh Minh Tư (2010) Nghiên cứu nhân giống in vitro ba kích (Morinda officinalis How.) Tạp chí khoa học cơng nghệ Đại học Đà Nẵng, 5(40): 1-9 25 Vũ Thị Ánh, Trần Phú Cường, Nguyễn Thị Duyên (2017) Nghiên cứu hoàn thiện quy trình phân tích anthraquinone tổng số dược liệu phương pháp đo quang Tạp chí Khoa Học & Công Nghệ, 166(06): 33-36 26 Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, NXB Giáo dục: 5-33 Tài liệu tiếng Anh 27 Attfield E.M and Evans P.K (1991) Stages in the initiation of root and shoot organogenesis in cultured leaf exphant of Nicotiana tabacum cv Xanthi nc Journal of Experimental Botany, 42: 59-63 28 Berlin J and Sasse F (1985) Selection and screening techniques for plant cell cultures Advanced Biochemistry and Engineering, 31: 99-132 29 Chee R (1986) In vitro culture of Vitis: the effects of light spectrum, manganese sulfate and potassium iodide on morphogenesis Plant Cell Tissue and Organ Culture, 7: 121-134 30 Chen D L., Zhang P., Lin L., Shuai O., Zhang H.M., Liu S.H., and Wang J.Y (2013) Protective effect of Bajijiasu against β - amyloid - induced 73 neurotoxicity in PC12 cells Cell Molecules Neurobiological, 33(6): 837850 31 Choi J., Lee K., Choi M., Nam J.H., Jung H.J., Park S.K., and Park H.J (2005) Antinociceptive anti-inflammatory effect of monotropein isolated from the root of Morinda officinalis Biol Pharm Bull., 28: 1915-1918 32 Choi K.T., Ahn I.O and Park J.C (1994) Production of ginseng saponin in tissue culture of ginseng (Panax ginseng C.A Mayer) Russian Journal of Plant Physiology, 41: 784-788 33 Chueh F.S., Chen C.C., Sagare A.P., and Tsay H.S (2000) Quantitative determination of secoiridoid glucoside in in vitro propagated plants of Gentiana davidii var formosana by high performance liquid chromatography Planta Medica, 67: 70-73 34 Dan W., Ke W and Mou Z (2011) The Content Determination of Total Anthraquinone in Morindae officinalis Journal of Hubei University fornationalities, 28(2): 37-47 35 Dicosmo F and Misawa M (1995) Plant cell and tissue culture: Alternatives for metabolite production Biotechnology Advance, 13(3): 425-453 36 Fink S (1982) Adventitious root primordial - The cause of abnormally broad xylem rays in hard and softwoods International Association of Wood Anatomists, 3: 31-38 37 Geneve R.L., Hackett W.P and Swanson B.T (1990) Root initiation in debladed petioles from juvenile and mature enghlish ivy in response to inhibitors of ethylens biosynthesis and action Journal of the American Society for Horticultural Science, 113: 630-635 38 George R.F., Davies W., (2008) Effects of the physical environment In: George E.F., Hall M.A., Klerk G.J (eds) Plant propagation by tissue 74 culture (3rded) Vol 1: The background Springer, Dordrecht, The Netherlands: 424-468 39 George E.F and Sherington P.D (1984) Plant propagation by tissue culture: handbook and directory of commercial laboratories Exegetics Ltd., Eversley: 709 40 Goleniowski M., and Trippi V.S (1999) Effect of growth medium composition on psilostachyinolides and altamisine production Plant Cell Tissue and Organ Culture, 56: 215-218 41 Harbage J.T., Stimart D.P and Evert R.F (1993) Anatomy of adventitious root formation in microcuttings of malus domestica Borkh Gala Journal of American Society for Horticultural Science, 118: 680-688 42 Harborne J.B (1978) Phytochemical methods (3rd.) Chapman and Hall, London 43 Hong H., Xiao S., Xian J., and Xu H (2000) In vitro culture and plant regeneration of Morinda officinalis How Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 17(4): 353-354 44 Hu Y., and Liu C (2014) Application of hight-peed counter-curent chromatography mode for rapid isolation of anthraquinone from Morinda officinalis How Journal of Liquid Chromatography and Related technologies, 37(8): 1187-1198 45 Huang N.Z., Fu C.M., Zhao Z.G., Tang F.L., and Feng L (2007) Tissue culture and rapid proliferation of Morinda officinalis How Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine: 662-670 46 James D J (1983) Adventitious root formation in vitro in apple rootstock (Malus pumila) Physiologia Plantarum, 57: 231-218 47 Kim J.S., Hahn E.J., Yeung E.C., and Paek K.Y (2003) Lateral root development and saponin accumulation as affected by IBA or NAA in 75 adventitious root cultures of Panax ginseng C.A Meyer In Vitro Cellular and Developmental Biology - Plant, 39(2): 245-249 48 Lee C.W.T., and Shuler M.L (2000) The effect of inoculum density and conditioned medium on the production of ajmalcine and catharanthine from immobilizes Catharanthus roseus cells Biotechnology Bioengineering, 67: 61-71 49 Li C.M., Dong J., Tian J.C., Deng Z.P and Song X.J (2016) LC/MS/MS determination and pharmacokinetic study of iridoid glycosides monotropein and deacetylasperulosidic acid isomers in rat plasma after oral administration of Morinda officinalis extract Biomed Chromatogr., 30: 163-168 50 Liang J., Liang J., Hao H., Lin H., Wang P., Wu Y., Jiang X., Fu C., Li Q., Ding P., Liu H., Xiong Q., Lai X., Zhou L., Chan S and Hou S (2017) The extracts of Morinda officinalis and its hairy roots attenuate dextran sodium sulfate-induced chronic ulcerative colitis in mice by regulating inflammation and lymphocyte apoptosis Front Immunol., 8: 1-17 51 Ling A.P., Tan K.P., and Hussein S (2013) Comparative effects of plant growth regulators on leaf and stem explants of Labisia pumila var alata Journal of Zhejiang University Science B, 14(7): 621-631 52 Merkli A., Christen P., and Kapetanidis I (1997) Production of diosgenin by hairy root cultures of Trigonella foenum-graecum L Plant Cell Reports, 16(9): 632-636 53 Misawa M (1994) Plant tissue culture: An alternative for production of useful metabolite FAO Agricultural Services Bulletin: 108 54 Mitsuhashi K.M., Shibaoka H., and Shimokoriyama M (1978) Anatomical and physiological aspects of developmental processes of adventitious root formation in Azukia cuttings Plant and Cell Physiology, 19: 867-874 76 55 Moncousin C (1991) Rooting of microcuttings: fundamental aspects Acta Hortic, 289: 311-317 56 Moreno P R H., Heijden R., and Verpoorte R (1993) Effect of terpenoid precusor feeding and elicitation on formation of indole alkaloids in cell suspension cultures of Catharanthus roseus Plant Cell Reports, 12: 702705 57 Mulbagal V., Tsay H.S (2004) Plant cell cultures an alternative and efficient source for the production of biologically important secondary metabolites International Journal of Applied Science and Engineering, 2(1): 29-48 58 Olatunde O.Z., Yang Y., Yong J., and Lu C (2018) Progress of the components and biological activities of M.officinalis How Biomedical Research and Reviews, 2(3): 1-10 59 Rao S.R (2000) Biotechnological production of phyto – pharmaceuticals Journal of Biochemistry Molecular Biology Biophysics, 4: 73-102 60 Robert M.L., Herrera J.L., Contreras F., and Cooper K.N (1988) In vitro propagation of Agave fourcroydes Lem Plant Cell Tissue and Organ Culture, 8: 37-48 61 San José M.C., Romero L., and Janeiro L.V (2012) Effect of indole-3butyric acid on root formation in Alnus glutinosa microcuttings Silva Fennica, 46(5): 643-654 62 Sandison S (1934) The rooting of cuttings of Lonicera japonica New Phytologist, 33: 211-217 63 Silvestrini A., Pasqua S., Botta B., Monacelli B., Heijden R., and Verpoorte R (2002) Effect of alkaloid precusor feeding on a Camptotheca acuminata cell line Plant Physiology and Biochemistry, 40: 749-753 77 64 Skrzypczak L., Wesolowska M., and Skrzypczak E (1993) Gentiana species: in vitro culture, regeneration and production of secoiridoid glucosides In: Bajaj YPS (ed), Biotechnology in agriculture and forestry Medicinal and aromatic plants IV, Springer, Berlin Heidelberg New York: 172-186 65 Veierskov B., and Anderson A.S (1982) Dynamics of extractable carbonhydrate in Oisum sativum III The effect of IAA and temperature on content and translocation of carbohydrates in pea cuttings during rooting Physiologia Plantarum, 55: 179-182 66 Villamor C.C (2010) Influence of media strength and sources of nitrogen on micropropagation of ginger (Zingiber officinale Rosc.) E-Int Sci Res J., 2(2): 150-155 67 Wang H.Q., Yu J.T and Zhong J.J (1999) Significant improvement of taxane production in suspension cultures of Taxus chinensis by sucrose feeding strategy Process Biochemistry, 35: 479-483 68 Wang M., Wang Q., Yang Q., Yan X., Feng S and Wang Z (2020) Comparison of anthraquinone, iridoid glycosides and triterpenoids in M officinalis and M citrifolia using UPLC/Q-TOF-MS and mutivariate statistical analysis Molecules, 25(1): 160 69 Wu YB., Wu JG (2013) Quantitative and chemical profiles analysis of the root of Morinda officinalis based on reversed-phase high performance liquid chromatography combined with chemometrics methods Journal of medicinal Plants Research, 7(30): 2249-2258 70 Yamada Y., and Sato F (1981) Production of berberine in cultured cells of Coptis japonica Phytochemistry, 20: 545-547 71 Yamamoto Y., Mizuguchi R., and Yamada Y (1982), “Selection of a high and stable pigment-producing strain in cultured Euphorbia millii cells”, Theoretical and Applied Genetics, 61, pp 113 – 116 78 72 Yang Z and Hu J (2011) Isolation and quantitative determination of inulin-type oligosaccharides in roots of Morinda officinalis Carbohydrate polymers 83(4): 1997-2004 73 Yong J., Lu C., Huang S., and Wu X (2015) Chemical components isolated from the roots of M.officinalis Chemistry of Natural Compounds, 51(3): 548-549 74 Yoshikawa M., Yamaguchi S., Nishisaka H., Yamahara J., Murakami N., (1995) Chemical constituents of Chinese nature medicine, morindae radix, the dried roots of Morinda officinalis How: Structures of morindolide and morofficinaloside Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 43(9): 1462-1465 75 Zhang H., Li J., Xia J., and Lin S.K (2013) Antioxidant activity and physicochemical properties of an acidic polysaccharide from Morinda officinalis International Journal of Biological Macromolecules, 58: 7-12 76 Zhou B., Chang J (2014) Qualitative and quantitative analysis of seven oligosaccharides in Morinda officinalis using double-development HPTLC and scanning densitometry Bio-Meical Materials and Engineering, 24(1): 953-960 77 Zhu M., Wang C., Gu Y., He C., Teng X., Zhang P., and Lin N (2009) Extraction, characterization of polysaccharides from M officinalis and its antioxidant activities Carbohydrate polymers, 78(3): 497-501 Zhu Z., Zhao X., Huang F., Wang F., and Wang W (2019) Morinda officinalis polysaccharides attenuate varicocele-induced spermatogenic impairment through the modulation of angiogenesis and relative factors Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2: 1-13 78 79 QUY TRÌNH NI CẤY THU NHẬN RỄ BẤT ĐỊNH BA KÍCH Vật liệu ban đầu: Mẫu đốt thân kích thước 1,5 cm Đốt thân thu nhận từ chồi ba kích ni cấy in vitro môi trường MS bổ sung mg/L BA + 30 g/L sucrose + g/L agar, pH = 5,8 Cảm ứng tạo rễ bất định: Nuôi cấy mẫu đốt thân môi trường SH + mg/L IBA + 30 g/L sucrose + g/L agar, pH = 5,8 Mẫu đốt thân đặt thẳng đứng môi trường theo chiều mọc tự nhiên Nuôi cấy đặt điều kiện tối Nhân nhanh rễ bất định: Rễ bất định cảm ứng từ nuôi cấy đốt thân cấy chuyền qua môi trường SH + mg/L IBA + 45 g/L sucrose + g/L agar, pH = 5,8 để tăng sinh Nuôi cấy đặt điều kiện tối 80