BÁO cáo THỰC HÀNH môn CÔNG NGHỆ ENZYME

Bài 1: Nhân sinh khối Saccharomyces cerevisiae để thu nhận enzyme invertase Enzym hay enzim (tiếng Anh: enzyme) là chất xúc tác sinh học có thành phần cơ bản là protein. Trong cuộc sống sinh vật xảy ra rất nhiều phản ứng hóa học, với một hiệu suất rất cao, mặc dù ở điều kiện bình thường về nhiệt độ, áp suất, pH. Sở dĩ như vậy vì nó có sự hiện diện của chất xúc tác sinh học được gọi chung là enzym. Như vậy, enzym là các protein xúc tác các phản ứng hóa học. Trong các phản ứng này, các phân tử lúc bắt đầu của quá trình được gọi là cơ chất (substrate), enzym sẽ biến đổi chúng thành các phân tử khác nhau. Tất cả các quá trình trong tế bào đều cần enzym. Enzym có tính chọn lọc rất cao đối với cơ chất của nó. Hầu hết phản ứng được xúc tác bởi enzym đều có tốc độ cao hơn nhiều so với khi không được xúc tác. Có trên 4 000 phản ứng sinh hóa được xúc tác bởi enzym. Hoạt tính của enzym chịu tác động bởi nhiều yếu tố. Chất ức chế là các phân tử làm giảm hoạt tính của enzym, trong khi yếu tố hoạt hóa là những phân tử làm tăng hoạt tính của enzym.

1    Báo cáo  GVHD:   Nhóm 6 1.  2008100148 2.  2008100070 3.  2008100001  2 Bài 1: SACCHAROMYCES CEREVISIAE  1.   Saccharomyces cerevisiae Saccharomycetaceae.Saccharomyces cerevisiae        7 nm.                  2 mm.  35 0    0 C trong 10% glucose và 13 0   39 0 C (Jermini and Schmidt-  H 3 PO 4 và pH = 1,8                       3                           Pha lag:        Pha log:  X = X 0 .2 n  X 0       4      xu                            Pha suy vong:      2.  5  : Glucose: 50 g MgSO 4 .7H 2 O: 2g KH 2 PO 4 : 3g Tryptone: 10g  Agar : 20g pH : 5-6 6     O C, 15 phút. 2.1.1   Glucose: 10 g MgSO 4 .7H 2 O: 0,4g KH 2 PO 4 : 0,6g Tryptone: 1g  Agar : 4g pH : 5-6   2.1  Glucose: 10 g MgSO 4 .7H 2 O: 0,4g KH 2 PO 4 : 0,6g Tryptone: 1g 7 pH : 5-6   2.1.  Glucose: 50 g MgSO 4 .7H 2 O: 2g KH 2 PO 4 : 3g Tryptone: 10g pH : 5-6         2.1.  bông, bao gói 2.1.   2.1.   0   . 2.2  8       2.3  0 C,15 phút   2.4 Saccharomyces cerevisiae  0 Saccharomyces cerevisiae      khoát. 2.5 Saccharomyces cerevisiae        Saccharomyces cerevisiae             9 2.6     0  2.7      Saccharomyces cerevisiae hoà vào     2.8  Saccharomyces cerevisiae  kính.   2.9  3  -   10 -  5-  -  0  0 C hay 50 0       0  -  0   -   - Saccharomyces cerevisiae. -     thái. -      121 0 C   [...]... phạm i nh t ịnh So màu ti n hành ở ư c ồ thị ường chuẩn của g uco tinh hi t i thu c thử DNS i thu c thử i nồng ộ ng 40nm Dựa th o tính ược hàm ượng ường hử của mẫu nghiên c u Phương tr nh tạo màu giữa ường hử à DNS acid 19 2 Tiến hành Các ư c ti n hành Thu sinh kh i n m men Phá t ào thu dd enzyme thô Phương pháp tự phân a Thu sinh khối n Phá ng sóng siêu âm Xác ịnh hoạt tính enzyme invertase Định lượng... Phương pháp tự phân (Làm trư c 48 giờ theo phân công ở phụ lục) Trong quá trình tự phân n m men, hệ enzyme tự phân có s n trong t bào n m men ược hoạt hóa Chúng xúc tác phản ng phân giải các ch t có trong thành t bào n m men và giải phóng enzyme invertase ra ngoài t bào Cân 1g sinh kh i n m men cho vào dung dịch ệm acetate pH = 5.5 theo tỷ ệ 1/6 (w/w) ể thực hiện quá trình tự phân Để trong tủ m 450C... nghiệm m i ti n hành gọt ậy quả ít nzym à nzym , hông nên dùng quả chín à ã chuẩn ị n n úc như ị m t hoạt tính à ẫn tạp ch t Nguyên tắc lọc thu nhận enzyme bromelin thô: 31 Lọc à quá tr nh dung dịch trong ch t ng ng chảy qua một màng ọc ể tách các thành phần Sự phân tách các thành phần trong dịch ọc phụ thuộc ào ích thư c ỗ trên màng à trọng ượng phân tử ch t th m qua Nguyên tắc kết tủ enzyme bromelin:... nzym hạt -Enzyme này còn dùng ể ản xu t ường nghịch ảo ( oại ường dễ hòa tan hơn o fructo tự do à ngọt hơn o i i ường acccharo ) Ở Nga, hi sả xuấ các ản phẩm ánh ẹo người ta ử dụng enzyme invertase 16 BÀI 2 TÁCH CHIẾT VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME INVERTASE TÁCH TỪ SACCHAROMYCES CEREVISIAE 1 Nguyên tắc: In rta tên hoa học à – D – fructofurano id fructohydro a à một oại nzym thuỷ phân accharo thành g uco... trộn inh h i n m m n ào nư c c t ô trùng th o tỷ ệ 1/6 (w/w)  Dùng ng iêu âm ở tần 3 % của 7 0 MHz trong 10 phút 30 BÀI 3 TÁCH CHIẾT VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME BROMELINE 3.1 Nguyên tắc Khái quát enzyme bromelin: Brom in à tên gọi chung cho nh m nzym thực ật ch a nh m u fhydry , c hả năng phân giải prot in thu nhận t họ Brom iac a , ặc iệt à ở cây d a (thân à trái) Brom in à nzym thuỷ phân prot in, n... xúc tác phản ng phân giải các ch t c trong thành t n m m n à giải ph ng nzym in rta pháp y tâm, oại Phương pháp phá , ng phương ng ng iêu âm ộng mạnh phá ách t ào, giải ph ng nzym ra ngoài h ng pháp cid dinit os licylic Mẫu thuỷ phân accharo fructo ào Sau các thành phần hông phải nzym in rta S ng iêu âm tạo rung in rta ra ngoài t ào NS : ( ường hông hử ) thành g uco ( ường hử) nhờ ự xúc tác của nzym... nghịch ảo Invertase Saccharomyces gồm hai oại  In rta nội ào c trọng ượng phân tử hoảng 13 000 Da  In rta ngoại ào c trọng ượng phân tử hoảng 270000 Da Phản ng thuỷ phân accharo Lượng g uco tạo thành ta ti n hành ịnh ượng g uco do nzym in rta xúc tác phụ thuộc ào hả năng phân cắt của nzym Người inh ra au thuỷ phân th o nhiều phương pháp hác nhau ể i t ược hoạt ộ của nzym há v tế ào thu nzy : 17 Các... mẫu ược ly tâm (5000 vòng/phút) trong 10 phút ể tách b phần không tan, phần dịch l ng thu ược là ch phẩm invertase thô Sử dụng dịch enzyme này ể xác ịnh hoạt tính c Xác - nh hoạt tính nzy Hút 4ml dung dịch inv tase ệm acetate pH = 4,5; 4,6 ml nư c c t và 0,4ml dịch ch a enzyme cho vào bình tam giác 100ml - Thêm vào 1ml dung dịch ường Saccharose nồng ộ 2% - Lắc ều, ể yên cho phản ng xảy ra ở iều kiện... hoành là nồng ộ glucose Tìm phương trình biểu diễn ường chuẩn dạng y = ax + b v i y = OD540nm; x = [glucose] (%) và hệ s tương quan R2 nhờ phần mềm Excel Chú ý: ti n hành các mẫu dựng ường chuẩn và mẫu thí nghiệm ồng thời 2.3.3 Tính hoạt tính enzyme invertase • T phương trình ồ thị ường chuẩn tính ược X (mg/ml) ường khử trong dung dịch ường pha lõang - Nhân v i hệ s pha lõang n ể ược lượng ường trong 1... V = thể tích dịch ường g c (ml) m = kh i lượng mẫu cân (g) Một đơn vị hoạt tính invertase là lượng enzyme cần thiết để thủy phân 1micromol đường Saccharose trong 1 phút ở điều kiện pH 4,5 và nhiệt độ 30oC 2 Giải thích thí nghiệ Xác ịnh hoạt ộ nzym i ng mẫu c ản ch t an ầu à t hỗn hợp au hi tự phân c thành phần các ch t n m trong t ào n m m n tự phân, ào n m m n ượng glucose, fructose, investase Hỗn . theo   1/3 (w/w). Sau ó, tin hành ly tâm (4500 vòng/phút)   Thu sinh khi nm men  thu dd enzyme thô Xác nh hot tính enzyme invertase nh lng.     enzyme invertase. 17 BÀI 2. TÁCH CHIT VÀ XÁC NH HOT TÍNH ENZYME INVERTASE TÁCH T SACCHAROMYCES CEREVISIAE 1   Báo cáo  GVHD:   Nhóm 6 1. 