Nƣớc mắm từ trƣớc đến giờ đánh giá chất lƣợng dựa vào HL N tổng: bất cập n Triển khai định lƣợng đƣợc acid amin định hƣớng đánh giá chất lƣợng theo hƣớng acid amin. n Xây dựng quy trình định lƣợng acid amin bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao Nƣớc mắm n Các loại acid amin: có tính tan trong nƣớc không có nhóm chromophore: khó tách, khó phát hiện
BỘ Y TẾ VIỆN VỆ SINH Y TẾ CÔNG CỘNG TP HCM XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ACID AMIN TRONG NƯỚC MẮM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC LÝ LỎNG HIÈU NĂNG CAO ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ CHÂU VĨNH THỊ TP HỒ CHÍ MINH 12/2011 Nội dung - - Đặt vấn đề Tổng quan Đối tƣợng – Phƣơng pháp nghiên cứu Kết quả- bàn luận Kết luận- kiến nghị ĐẶT VẤN ĐỀ n n n Nƣớc mắm từ trƣớc đến đánh giá chất lƣợng dựa vào HL N tổng: bất cập Triển khai định lƣợng đƣợc acid amin định hƣớng đánh giá chất lƣợng theo hƣớng acid amin Xây dựng quy trình định lƣợng acid amin sắc ký lỏng hiệu cao TỔNG QUAN n n Nƣớc mắm Các loại acid amin: có tính tan nƣớc khơng có nhóm chromophore: khó tách, khó phát Mono amino monocarboxylic acid amin Tên gọi Glycine Alanine Cơng thức câú tạo COOH Kí hiệu viết tắt Gly H2N CH2 COOH H2N CH CH3 Ala COOH Leucine Isoleucine Valine H2N CH CH2 CH CH3 CH3 COOH H2N CH CH C2H5 Ile CH3 COOH H2N CH CH Leu Val CH3 CH3 COOH Serine Ser HC CH2 OH NH2 COOH Threonine HC CH CH3 NH2 OH Thr Monoamino dicarboxylic acid Tên gọi Cơng thức cấu tạo Kí kiệu viết tắt COOH Aspartic acid Asp HC CH2 COOH NH2 COOH Glutamic acid Glu HC CH2 CH2 COOH NH2 Diamino monocarboxylic Tên gọi Cơng thức cấu tạo Kí hiệu viết tắt COOH Lysine HC (CH2)4 NH2 Lys NH2 COOH Arginine HC (CH2)3 N C NH2 NH2 H NH Arg Acid amin có vịng thơm Tên gọi Cơng thức cấu tạo COOH HC CH2 Phenylalanine NH2 Kí hiệu viết tắt Phe COOH Tyrosine HC CH2 OH Tyr NH2 Acid amin có sulfur Tên gọi Cơng thức cấu tạo Kí hiệu viết tắt COOH Cysteine HC CH2 S CH3 Cys NH2 COOH Cystine HC CH2 S S HOOC CH2 CH NH2 H2N COOH Methionine HC CH2 SH NH2 Met Amit Tên gọi Công thức cấu tạo Kí hiệu viết tắt COOH Asparagine HC CH2 C NH2 NH2 Asn O COOH Glutamine Gln HC CH2 CH2 C NH2 O NH2 Acid amin dị vòng Tên gọi Cơng thức cấu tạo Kí hiệu viết tắt COOH CH2 CH Tryptophane Trp NH2 N H N Histidine HN COOH CH2 CH His NH2 HOOC Proline HN Pro Các phƣơng pháp phân tích AA GC: n CE: n HPLC: ☻Xƣa: tạo dẫn xuất tiền cột: reverse phase,Fluorescent Hậu cột: SCX, UV Các hệ thống AA: chuyên biệt đắt tiền ☻ Nay: MS, MS/MS n Không tạo dẫn xuất underivatization Vấn đề: - Vấn đề tách AA: SCX, RP, iopair - hữu - Vấn đề phát hiện:giữa AA có ion chính, phụ trùng nhau: isoleucin-leucin: M,đồng phân 132 Lysin-Glutamin: ion 147 Pro-Asp-Asp:ion Pro trùng ion phụ 116-133-134 Thr-Phe: ion Thr trùng ion phụ Phe PHẢI GIẢI QUYẾT VẤN ĐỀ TÁCH CÁC AA TRƢỚC + SIM ION CHÍNH n Xác định thứ tự Rt peak AA n Tiêm riêng lẽ AA để xác định thứ tự Rt: TT ACID AMIN Taurin (124) Aspartic(134) Serine(106) Threonin(120) Glutamic(148) Glycin(76) Alanine (90) Proline(116) Valine(118) 10 Tyrosine(182) Rt (phut) 2,292 5,419 5,44 5,764 5,918 6,599 7,007 8,5 8,937 11 Methionin(150) 9,17 12 Isoleucin(132) 11,196 13 Leucin(132) 11,679 14 Cystein(122) 12,5 15 Cystin(241) 12,511 16 Phenylalanin(166) 12,868 17 Histidin(156) 17,783 18 Tryptophan (188) 18,337 19 Lysine(147) 18,338 20 Arginin(175) 19,988 Kết sắc ký hệ HPLC-MS Kết sắc ký hệ HPLC-MS n TT độ ổn định peak Acid amin Thời gian lưu lần chạy chuẩn Trung bình Độ lệch chuẩn RSD% Alanine (90) 6,599 6,567 6,567 6,567 6,593 6,764 6,610 0,077 1,166 Arginin(175) 19,988 19,95 19,955 19,988 19,998 19,933 19,969 0,026 0,131 Aspartic(134) 5,419 5,41 5,4 5,419 5,436 5,424 5,418 0,012 0,226 Cystin(241) 12,511 12,484 12,5 12,511 12,551 12,499 12,509 0,023 0,181 Glutamic(148) 5,918 5,899 5,9 5,918 5,938 5,884 5,910 0,019 0,322 Glycin(76) 6 6,033 6,033 6,067 6,022 0,027 0,453 Histidin(156) 17,783 17,835 17,837 17,8 17,9 17,774 17,822 0,046 0,261 Isoleucin(132) 11,196 11,147 11,199 11,896 11,249 11,151 11,306 0,291 2,576 Leucin(132) 11,679 11,648 11,678 11,67 11,758 11,656 11,682 0,039 0,338 10 Lysine(147) 18,338 18,332 18,342 18,33 18,342 18,2 18,314 0,056 0,306 11 Methionin(150) 9,17 9,13 9,131 9,16 9,202 9,124 9,153 0,030 0,331 12 Phenylalanin(166) 12,868 12,801 12,833 12,86 12,922 12,744 12,838 0,061 0,476 13 Proline(116) 7,007 6,999 6,993 7,043 6,754 6,966 0,105 1,513 14 Serine(106) 5,44 5,428 5,433 5,442 5,46 5,443 5,441 0,011 0,201 15 Threonin(120) 5,764 5,749 5,755 5,758 5,779 5,789 5,766 0,015 0,266 16 Tyrosine(182) 8,937 8,906 8,875 8,905 8,988 8,873 8,914 0,043 0,485 17 Valine(118) 15,518 15,433 15,433 15,467 15,589 15,367 15,468 0,077 0,499 18 Taurin (124) 2,292 2,267 2,267 2,28 2,294 2,297 2,283 0,014 0,594 19 Tryptophan (188) 18,337 18,309 18,321 18,32 18,336 18,2 18,304 0,052 0,284 20 Cystein(122) 17,867 17,833 17,867 17,8 17,9 17,8 17,845 0,040 0,227 5.3 Kết khảo sát quy trình xử lý loại tạp: Acid amin (ppm) Alanine (90) Arginin(175) Aspartic(134) Glutamic(148) Glycin(76) Histidin(156) Isoleucin(132) Leucin(132) Lysine(147) Methionin(150) Methanol Ethanol Phenylalanin(166) 6.638,66 6.540,04 Proline(116) 1.112,44 603,46 Serine(106) 3.367,10 2.824,02 11.545,53 11.637,62 2.409,12 918,94 11.668,69 4.874,19 Threonin(120) 8.004,17 6.370,69 15.055,77 9.745,86 Tyrosine(182) 2.176,48 2.447,02 2.020,75 1.185,27 Valin (118) 25.028,14 23.869,20 7.114,58 6.454,91 Taurin (124) 1.142,54 939,33 2.490,72 2.790,49 Tryptophan (188) 193,64 204,94 2.492,35 2.773,25 Cystein(122) 396,16 434,55 19.098,60 16.562,15 2.967,10 2.791,69 124.922,53 106.967,63 Tổng cộng Loại NaCl MeOH tốt EtOH Khoảng tuyến tính TT Acid amin NỒNG ĐỘ (PPM) Alanine (90) 2,23 6,68 11,13 15,58 22,25 29,67 37,08 44,50 59,33 74,17 Arginin(175) 1,34 4,01 6,69 9,36 13,37 17,83 22,29 26,75 35,66 44,58 Aspartic(134) 4,36 13,07 21,78 30,49 43,55 58,07 72,58 87,10 116,13 145,17 Cystin(241) 3,00 9,01 15,02 21,03 30,04 40,05 50,06 60,08 80,10 100,13 Glutamic(148) 3,68 11,03 18,39 25,74 36,78 49,03 61,29 73,55 98,07 122,58 Glycin(76) 1,88 5,63 9,38 13,14 18,77 25,02 31,28 37,54 50,05 62,56 Histidin(156) 3,88 11,64 19,40 27,16 38,80 51,73 64,67 77,60 103,47 129,33 Isoleucin(132) 3,28 9,84 16,40 22,96 32,80 43,73 54,67 65,60 87,47 109,33 Leucin(132) 3,28 9,84 16,40 22,96 32,80 43,73 54,67 65,60 87,47 109,33 10 Lysine(147) 3,66 10,97 18,28 25,59 36,55 48,73 60,92 73,10 97,47 121,83 11 Methionin(150) 3,73 11,19 18,65 26,11 37,30 49,73 62,17 74,60 99,47 124,33 12 Phenylalanin(166) 4,13 12,39 20,65 28,91 41,30 55,07 68,83 82,60 110,13 137,67 13 Proline(116) 2,88 8,63 14,39 20,14 28,78 38,37 47,96 57,55 76,73 95,92 14 Serine(106) 2,63 7,88 13,14 18,39 26,28 35,03 43,79 52,55 70,07 87,58 15 Threonin(120) 2,98 8,93 14,89 20,84 29,78 39,70 49,63 59,55 79,40 99,25 16 Tyrosine(182) 4,53 13,59 22,65 31,71 45,30 60,40 75,50 90,60 120,80 151,00 17 Valine(118) 2,93 8,79 14,65 20,51 29,30 39,07 48,83 58,60 78,13 97,67 18 Taurin (124) 15 25 35 50 60 70 80 90 100 19 Tryptophan (188) 15 25 35 50 60 70 80 90 100 20 Cystein(122) 15 25 35 50 60 70 80 90 100 Kết thẩm định quy trình định lƣợng -độ xác Hàm lượng acid amin (ppm) ACID AMIN Lần Lần Lần Lần Lần Lần Trung bình Độ lệch chuẩn Độ tin cậy RSD % Alanine (90) 9.751,09 9.951,17 9.983,97 9.416,64 8.945,15 9.303,05 9.558,51 408,38 428,48 4,27 Arginin(175) 9,76 9,04 9,86 9,97 10,26 9,40 9,71 0,43 0,45 4,46 Aspartic(134) 20.679,80 21.294,66 21.254,72 19.504,42 20.767,38 20.925,63 20.737,77 653,92 686,09 3,15 Glutamic(148) 9.252,19 9.036,79 9.105,43 8.385,54 8.793,31 9.244,28 8.969,59 331,80 348,13 3,70 Glycin(76) 2.841,53 3.063,66 2.979,97 2.775,36 2.821,51 2.777,01 2.876,51 118,41 124,24 4,12 Histidin(156) 6.686,49 6.587,75 6.775,02 6.660,45 6.972,27 7.066,80 6.791,46 188,92 198,21 2,78 Isoleucin(132) 5.003,22 5.041,87 4.959,91 4.959,91 5.038,04 5.061,60 5.010,76 43,65 45,79 0,87 Leucin(132) 5.314,47 5.212,30 5.285,07 5.714,11 5.655,02 5.665,26 5.474,37 226,55 237,70 4,14 Lysine(147) 6.221,17 5.851,63 6.261,81 6.205,58 6.415,99 6.768,74 6.287,49 299,95 314,71 4,77 Methionin 3.784,42 3.601,58 3.701,10 3.663,64 3.778,23 3.713,26 3.707,04 69,48 72,90 1,87 Phenylalanin 13.054,41 13.592,56 13.131,22 12.729,88 13.776,37 13.651,60 13.322,67 411,56 431,81 3,09 Proline(116) 5.660,49 5.573,29 5.519,73 5.468,83 5.625,79 5.521,33 5.561,58 72,13 75,68 1,30 Serine(106) 9.290,33 8.670,52 8.750,71 9.127,69 8.872,30 8.705,92 8.902,91 252,00 264,40 2,83 Threonin(120) 14.301,63 13.955,06 14.244,93 13.298,70 13.877,61 13.918,49 13.932,73 357,57 375,16 2,57 Tyrosine(182) 882,85 804,36 839,32 780,84 813,96 863,72 830,84 38,33 40,21 4,61 1.628,69 1.773,10 1.799,30 1.672,37 1.827,04 1.852,50 1.758,83 89,08 93,47 5,06 Taurin (124) Tryptophan (188) 364,41 383,70 395,84 374,28 369,37 355,85 373,91 14,24 14,94 3,81 732,88 725,87 659,20 659,18 729,75 723,16 705,01 35,64 37,40 5,06 Cystein(122) 524,52 558,39 517,58 553,27 550,88 523,52 538,03 18,02 18,91 3,35 115.984,34 115.687,31 116.174,68 111.960,65 115.640,25 116.651,11 115.349,72 Valin (118) TỔNG Kết thẩm định quy trình định lƣợng -độ đúng: tỷ lệ phục hồi, bias ACID AMIN HÀM LƯỢNG MẨU 80% MẪU MẪU MẪU HÀM LƯỢNG MẨU 60% MẪU MẪU MẪU HL LÝ THUYẾT 80% HL LÝ THUYẾT 60% Alanine (90) 7.800,87 8.159,96 7.887,34 5.850,65 6.269,24 5.790,70 7.646,81 5.735,11 Arginin(175) 7,81 7,41 7,79 5,86 5,70 5,72 7,77 5,83 16.543,84 17.461,62 16.791,23 12.407,88 13.415,63 12.327,74 16.590,21 12.442,66 Glutamic(148) 7.401,75 7.410,17 7.193,29 5.551,31 5.693,18 5.281,15 7.175,67 5.381,76 Glycin(76) 2.273,23 2.512,20 2.354,17 1.704,92 1.930,11 1.728,38 2.301,20 1.725,90 Histidin(156) 5.349,19 5.401,96 5.352,26 4.011,89 4.150,28 3.929,51 5.433,17 4.074,88 Isoleucin(132) 4.002,57 4.134,33 3.918,33 3.001,93 3.176,38 2.876,75 4.008,61 3.006,45 Leucin(132) 4.251,58 4.274,09 4.175,20 3.188,68 3.283,75 3.065,34 4.379,50 3.284,62 Lysine(147) 4.464,96 4.491,15 4.434,85 3.527,91 3.276,95 3.222,27 5.029,99 3.772,49 Methionin(150) 3.027,54 2.953,30 2.923,87 2.270,65 2.269,00 2.146,64 2.965,63 2.224,22 10.443,53 11.145,90 10.373,67 7.832,65 8.563,31 7.616,11 10.658,14 7.993,60 Proline(116) 4.528,39 4.570,10 4.360,59 3.396,29 3.511,18 3.201,44 4.449,26 3.336,95 Serine(106) 7.432,27 7.109,83 6.913,06 5.574,20 5.462,43 5.075,41 7.122,33 5.341,75 Threonin(120) 11.441,30 11.443,15 11.253,49 8.580,98 8.791,69 8.262,06 11.146,19 8.359,64 Tyrosine(182) 706,28 659,58 663,06 529,71 506,75 486,81 664,67 498,51 1.302,95 1.453,94 1.421,45 977,21 1.117,05 1.043,59 1.407,07 1.055,30 Taurin (124) 291,53 314,64 312,71 218,65 241,73 229,59 299,13 224,35 Tryptophan (188) 586,30 595,21 520,77 439,73 457,30 382,34 564,00 423,00 Cystein(122) 419,61 457,88 408,88 314,71 351,79 300,19 430,42 322,82 Aspartic(134) Phenylalanin(166) Valin (118) Bảng : Hàm lượng acid amin phân tích mẫu pha lỗng 80% 60% Tính Tỷ lệ phục hồi, bias TỶ LỆ PHỤC HỐI MẨU 80% TỶ LỆ PHỤC HỐI MẨU 60% MẪU MẪU MẪU MẪU MẪU MẪU Tỷ lệ phục hồi TB Alanine (90) 102,01 106,71 103,15 102,01 109,31 100,97 Arginin(175) 100,47 95,38 100,27 100,47 97,70 99,72 105,25 101,21 99,72 103,15 103,27 100,25 Glycin(76) 98,78 109,17 Histidin(156) 98,45 Isoleucin(132) ACID AMIN độ lệch mẫu 80% độ lệch mẫu 60% MẪU MẪU MẪU MẪU 104,03 2,01 6,71 3,15 2,01 9,31 0,97 4,03 98,15 98,74 0,47 4,62 0,27 0,47 2,30 1,85 1,66 107,82 99,08 102,13 0,28 5,25 1,21 0,28 7,82 0,92 2,63 103,15 105,79 98,13 102,29 3,15 3,27 0,25 3,15 5,79 1,87 2,91 102,30 98,78 111,83 100,14 103,50 1,22 9,17 2,30 1,22 11,83 0,14 4,31 99,43 98,51 98,45 101,85 96,43 98,85 1,55 0,57 1,49 1,55 1,85 3,57 1,76 99,85 103,14 97,75 99,85 105,65 95,69 100,32 0,15 3,14 2,25 0,15 5,65 4,31 2,61 Leucin(132) 97,08 97,59 95,34 97,08 99,97 93,32 96,73 89,29 88,17 93,52 86,86 85,41 88,67 4,66 11,8 0,03 88,77 2,41 10,7 2,92 Lysine(147) 2,92 11,2 6,48 13,14 6,68 14,5 3,27 11,3 102,09 99,58 98,59 102,09 102,01 96,51 100,15 2,09 0,42 1,41 2,09 2,01 3,49 1,92 Phenylalanin 97,99 104,58 97,33 97,99 107,13 95,28 100,05 2,01 4,58 2,67 2,01 7,13 4,72 3,85 Proline(116) 101,78 102,72 98,01 101,78 105,22 95,94 100,91 1,78 2,72 1,99 1,78 5,22 4,06 2,92 Serine(106) 104,35 99,82 97,06 104,35 102,26 95,01 100,48 4,35 0,18 2,94 4,35 2,26 4,99 3,18 Threonin(120) 102,65 102,66 100,96 102,65 105,17 98,83 102,15 2,65 2,66 0,96 2,65 5,17 1,17 2,54 Tyrosine(182) 106,26 99,23 99,76 106,26 101,65 97,65 101,80 6,26 0,77 0,24 6,26 1,65 2,35 2,92 Valin (118) 92,60 103,33 101,02 92,60 105,85 98,89 99,05 7,40 3,33 1,02 7,40 5,85 1,11 4,35 Taurin (124) Tryptophan (188) 97,46 105,19 104,54 97,46 107,75 102,34 102,46 2,54 5,19 4,54 2,54 7,75 2,34 4,15 103,95 105,53 92,33 103,95 108,11 90,39 100,71 3,95 5,53 7,67 3,95 8,11 9,61 6,47 Cystein(122) 97,49 106,38 95,00 97,49 108,98 92,99 99,72 2,51 6,38 5,00 2,51 8,98 7,01 5,40 Aspartic(134) Glutamic(148) Methionin MẪU MẪU độ lệch TN Kết xác định giới hạn phát LOD giới hạn định lƣợng thiết bị phân tích phƣơng pháp ACID AMIN Hà m lượ ng (pp m) TỶ LỆ S/N lần Lần lần lần lần lần ILOD (ppm) ILOQ (ppm) MLO D (ppm) MLO Q (ppm) Trung bình Alanine (90) 2,23 23,00 23,46 23,69 22,31 23,92 21,39 22,96 0,29 0,97 21,8 72,6 Arginin(175) 1,34 914,30 932,59 941,73 886,87 950,87 850,30 912,78 0,00 0,01 0,33 1,10 Aspartic(134) 4,36 36,79 37,53 37,89 35,69 38,26 34,21 36,73 0,36 1,19 26,6 88,9 Glutamic(148) 3,68 122,64 125,09 126,32 118,96 127,55 114,06 122,44 0,09 0,30 6,76 22,5 Glycin(76) 1,88 18,23 18,59 18,78 17,68 18,96 16,95 18,20 0,31 1,03 23,2 77,3 Histidin(156) 3,88 52,85 53,91 54,44 51,26 54,96 49,15 52,76 0,22 0,74 16,5 55,1 Isoleucin(132) 3,28 113,72 115,99 117,13 110,31 118,27 105,76 113,53 0,09 0,29 6,50 21,6 Leucin(132) 3,28 113,72 115,99 117,13 110,31 118,27 105,76 113,53 0,09 0,29 6,50 21,6 Lysine(147) 3,66 98,50 100,47 101,46 95,55 102,44 91,61 98,34 0,11 0,37 8,36 27,8 Methionin(150) 3,73 203,89 207,97 210,01 197,77 212,05 189,62 203,55 0,05 0,18 4,12 13,7 Phenylalanin 4,13 157,49 160,64 162,21 152,77 163,79 146,47 157,23 0,08 0,26 5,91 19,7 Proline(116) 2,88 76,55 78,08 78,85 74,25 79,61 71,19 76,42 0,11 0,38 8,47 28,2 Serine(106) 2,63 19,90 20,30 20,50 19,30 20,70 18,51 19,87 0,40 1,32 29,7 99,1 Threonin(120) 2,98 48,27 49,24 49,72 46,82 50,20 44,89 48,19 0,19 0,62 13,9 46,3 Tyrosine(182) 4,53 159,21 162,39 163,99 154,43 165,58 148,07 158,94 0,09 0,29 6,41 21,3 Valin (118) 2,93 50,00 51,00 51,50 9,91 52,00 9,50 37,32 0,24 0,79 17,6 58,8 Taurin (124) 0,50 184,27 187,96 189,80 178,74 191,64 171,37 183,96 0,01 0,03 0,61 2,04 Tryptophan 0,50 94,12 96,00 96,94 91,30 97,88 87,53 93,96 0,02 0,05 1,20 3,99 Cystein(122) 0,50 6,98 7,12 7,19 6,77 7,26 6,49 6,97 0,22 0,72 16,1 53,8 Độ khơng đảm bảo đo theo độ tái lặp phịng thí nghiệm, độ không đảm bảo đo theo độ lệch bias, độ khơng đảm bảo đo tồn phần ACID AMIN Alanine (90) Arginin(175) Aspartic(134) Glutamic(148) Glycin(76) Histidin(156) Isoleucin(132) Leucin(132) Lysine(147) Methionin(150) Urw (%) 4,27 4,46 3,15 3,70 4,12 2,78 0,87 4,14 4,77 1,87 Uc.ref (%) RMS bias 4 4 4 4 4 1,64 0,68 1,07 1,19 1,76 0,72 1,07 1,33 4,63 0,78 Ubias% 4,32 4,06 4,14 4,17 4,37 4,06 4,14 4,22 6,12 4,08 U% 6,08 6,03 5,21 5,58 6,00 4,92 4,23 5,91 7,76 4,49 Phenylalanin(166) Proline(116) Serine(106) Threonin(120) Tyrosine(182) Valin (118) Taurin (124) Tryptophan (188) Cystein(122) 3,09 1,30 2,83 2,57 4,61 5,06 3,81 5,06 3,35 4 4 4 4 1,57 1,19 1,30 1,04 1,19 1,78 1,69 2,64 2,20 4,30 4,17 4,21 4,13 4,17 4,38 4,34 4,79 4,57 5,29 4,37 5,07 4,86 6,22 6,69 5,78 6,97 5,66 5.6 Áp dụng quy trình định lƣợng acid amin nƣớc mắm ACID AMIN Hoà Hiệp Mộc Y Phụng Hồng hạnh Hưng thịnh Nam ngư Alanine (90) 859,42 7.330,12 2.626,78 10.586,75 11.240,67 8.355,45 Arginin(175) 56,18 3,08 14,24 52,52 71,78 13,19 3.266,25 514,97 3.787,05 8.479,83 8.044,97 6.384,41 Glutamic(148) 604,46 8.322,02 702,05 1.765,53 1.991,18 4.327,95 Glycin(76) 165,84 63,10 178,24 787,10 801,07 154,43 Histidin(156) 338,29 1.804,34 4.014,34 15.020,06 18.554,69 204,76 Isoleucin(132) 956,31 1.296,03 3.530,40 6.285,92 6.242,95 1.851,34 Leucin(132) 1.136,88 2.245,55 5.446,51 7.220,26 6.761,37 2.092,11 Lysine(147) 1.078,84 3.030,32 6.411,27 20.695,06 21.863,74 8.274,02 Methionin(150) 220,20 726,88 2.077,76 4.493,47 4.799,38 1.273,30 Phenylalanin(166) 350,88 1.000,88 2.450,17 7.070,88 7.498,86 2.213,33 Proline(116) 300,87 22,77 546,77 4.912,79 5.930,82 1.720,19 3.841,31 3.068,88 1.319,90 5.464,23 5.777,86 2.834,34 Threonin(120) 247,70 935,20 2.290,51 7.969,12 9.658,76 3.560,52 Tyrosine(182) 339,41 180,22 408,23 835,78 1.108,31 296,03 2.992,07 1.461,14 3.897,63 13.625,89 16.032,22 4.732,51 48,48 24,89 64,84 169,01 136,24 49,37 Tryptophan (188) 3,53 10,76 67,88 152,06 200,53 44,43 Cystein(122) 0,00 0,00 163,85 908,00 1.761,74 116,03 16.806,91 32.041,15 39.998,40 116.494,28 128.477,12 48.497,72 Aspartic(134) Serine(106) Valin (118) Taurin (124) TỔNG CÔNG Kết luận n n n n n n Kết việc thẩm định quy trình định lƣợng: Khoảng tuyến tính: 1,34ppm 137 ppm trừ cystin có khoảng tuyến tính ngắn Giới hạn phát thiết bị từ AA tùy loại từ 4ppp 136ppp Độ xác độ dƣới 20% Hiệu suất thu hồi acid amin 85% Độ không đảm bảo đo acid amin từ dƣới 10% Kiến nghị n n n Khảo sát độ tái lặp R quy trình thử nghiệm liên phịng Áp dụng thông số HPLC/MS thực phân tích mẫu khác nhƣ sữa, thực phẩm CN… So sánh kết phân tích mẫu nƣớc mắm sử dụng phƣơng pháp với số phƣơng pháp phân tích khác nhƣ: hệ AA hãng HITACH hay WATER XIN CÁM ƠN QUÝ VỊ ĐÃ LẮNG NGHE