0109 nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng vitamin c trong viên sủi đa thành phần bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao

Í Gen PL Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học BO Y TE TRUONG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CÀN THƠ ĐÈ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CÁP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C TRONG VIEN SUI DA THANH PHAN BANG PHUONG PHAP SAC Ki LONG HIEU NANG CAO Ts NGUYEN THI NGOC VAN Can Tho - 2015 Í Gen PL Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học BO Y TE TRUONG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CÀN THƠ ĐÈ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CÁP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C TRONG VIÊN SỦI ĐA THANH PHAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chủ tịch hội đồng we ed PGS.TS Phạm Thị Tâm Chủ nhiệm đề tài V Ts Nguyén Thi Ngoc Van Can Tho - 2015 Gen PL Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học iy MUC LUC Trang đ9099.6)09/ S0ƠỊƠỎ i MỤC TLC isa sccscccssssorsuvonsstverevscvsncoversssosensersonneserevonsesoussnenooevves oussenesasasvassnssusessese ii KHĂN 9: TÔM TẤT ĐỀ TÀI Ga anh eeeieesennnseeseeeeseeesee ii PHAN 2: TOAN VAN CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨPU - x DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIÉT TẮTT 2-5 se xi ĐANH MỤC CÁC BÀ NỔ ca PRAT ME RA TH VFHAN MO DẤTT agaa-a.-y-.-aanguadagagtionaddaooaan xiii cu ỹÿŸÝŸŸỸ.agggdaaogaaddgaaaraaaguaraden xv ng eaeoanbodOOSSDOGDONIiIGS2-ai30510800ã00 28A Chuong =< TONG QUAN TAL LIRU cssccssssssnsisssecisecsssosesssconoasacovecesassontesstbiacss 1.1 Téng quan vé vitamin C o ccccccssceseccsscssssesveseesesvescscecacevevensucarsteaeereareneeesacaee 1.2'Céc phirong phan phan tich vitamin C | scsecssssssnsocessesevssesesveaussesseansvessssconssss 1.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu mang a0 .c.ccscssesessescsssesesseseseereersnesseatenees 12 1.4 Tham định quy trình phương pháp HPLC - se +x+s+24 12 Chương - ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 DGi tuong nghién CU cccccccsesscsesescesescsvssesvsucsescasscavacscacacsverseeneacencaveneees 15 2.2 Địa điểm phương tién nghién CUU .ccccccecessesesecetscscsescecseseesesreareneeessees l6 2.3 Phương pháp nghiên cứu - Ặ- - SH ng ng 17 Chương 3-RẾT QUÁ NGHIÊN CỨU na iiiiiioiaaiaaa-Ÿ-aa 22 3.1 Xây dựng thầm định quy trình -¿- - 5s xxx cEgxr ve zez 22 3.2 Áp dụng quy trình định lượng . - + xxx kv vEkrErrrrkrrererxre 40 Chương - BÀN LUẬN -5-5 ©s< Sen Sư xu xxx xeerersrsre 44 4.1 Xây dựng thầm định quy trÌn 6xx SE eEvEEkzrevxrsrcera 44 4.2 Áp dụng quy trình định lượng - ¿2 - + xxx ‡EvEkvkckkrsrsersri 52 KET LUAN VA KIEN NGHỊ, .s< 55s s6 cessssessessssspsssessese 54 TAI LIEU THAM KHAO PHU LUC ii (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học ˆ PHAN 1: TOM TAT DE TAI tii Gen PL Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học V I.PHÀN MỞ ĐÀU Ngày viên nén sủi bọt có chứa vitamin C dạng thực phẩm chức bổ sung vitamin cho thể ưa chuộng nhiều công ty dược nước sản xuất nhiều hàm lượng khác Trong đó, vitamin C hợp chất hữu tan nước, tham gia vào nhiều trình sinh học quan trọng co thé [18] Tuy nhiên, thể người không tự tổng hợp vitamin C va vitamin C cung cấp cho thể phần lớn qua thực phẩm dạng viên bổ sung vitamin C, đặc biệt viên sủi bọt [16] Do đặc trưng vitamin C dễ bị phân hủy nên việc định lượng để xác định hàm lượng vitamin C cần thiết để đảm bảo tác dụng viên sủi sức khỏe người sử dụng [20] Việc định lượng vitamin C đề cập USP 35, BP 2013, EP 7:2010 với phương pháp chuẩn độ thể tích [7].[31].[32] Thêm vào đó, Dược Điển Việt Nam IV chưa có chuyên luận định lượng vitamin C dạng viên sủi, việc định lượng vitamin C nguyên liệu hay viên nén dừng lại phương pháp chuẩn độ thể tích Do đó, nhằm xây dựng quy trình định lượng với độ nhạy độ xác cao phương pháp HPLC để góp phần cải tiến quy trình định lượng vitamin C, tiền hành thực đề tài: “Xây dựng quy trình định lượng vitamin C viên sủi đa thành phần phương pháp HPLC” Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng thâm định quy trình định lượng vitamin C viên sủi đa thành phần phương pháp HPLC Ứng dụng định lượng hàm lượng vitamin C có sản phâm viên sủi đa thành phần lưu hành thị trường H ĐÓI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Các sản phẩm mua từ nhà thuốc Cần Thơ, thời hạn sử dụng bảo quản nhiệt độ theo khuyến cáo nhà sản xuất IV I\6[ruwpuis Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học Chất chuẩn gốc: Vitamin C (L-(+)-Ascorbic acid) 99,5%, độ tỉnh khiết 99,17% mua từ Viện kiểm nghiệm Thành Phố Hồ Chí Minh Số lô: 016 070614 Được bảo quản theo điều kiện khuyến cáo ghi nhãn | Phương pháp nghiên cứu ~- Xây dựng quy trình định lượng vitamin C có sản phẩm + Dung môi pha mẫu: dung dịch đệm phosphat pH 3,0 + Chuẩn bị mẫu chuẩn: từ dung dịch chuẩn gốc vitamin C 300ppm, tiến hành pha dung dịch chuẩn vitamin C có nồng độ 30; 60ppm bảo quản 5°C, + Chuẩn bị mẫu thử: cân 20 viên chế phẩm, tính khối lượng trung bình nghiền nhanh thành bột mịn Cân lượng bột viên tương ứng với 60mg vitamin C cho vào becher, hòa tan mẫu khoảng 20ml dung dịch đệm pH 3,0, sau điều chỉnh pH dung dịch mẫu pH 3,0 dung dịch H;POx 4%, đánh siêu âm phút để loại khí Cho dung dịch mẫu vào bình định mức 100ml bỗổ sung vừa đủ thể tích (A) Pha lỗng (A) thành nồng độ khác cho q trình phân tích + Thăm dò điều kiện sắc ký tối ưu Sử dụng phổ UV đề tìm bước sóng hấp thu cực đại vitamin C mẫu chuẩn Thực thăm dò điều kiện sắc ký tối ưu điều kiện sắc ký dự kiến Sau: - Hệ thống máy HPLC Dionex Ultimate 3000 - Pha tĩnh: cột Phenomenex Luna C18 (250mm; 4,6mm; Sum; 100A) - Các pha động: MeOH : nước acid H3PO4 pH 4,0 với tỉ lệ 5:95 (1) MeOH : nước acid H:POa pH 3,5 với tỉ lệ 5:95 (2) MeOH : nước acid H:POa pH 3,0 với tỉ lệ 5:95 (3) - Thể tích tiêm mẫu: 20uI ~- Nhiệt độ cột: 255C - Đầu đò: UV-Vis bước sóng 248nm - Tốc độ dịng: 1,0ml/phút Gen PL Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học Vi \ + Xác định tính tương thích hệ thống quy trình định lượng + Tham định quy trình định lượng: tính đặc hiệu, tính tuyến tính miền giá trị, độ xác, độ đúng, giới hạn phát giới hạn định lượng - Xác định hàm lượng vitamin C viên sii đa thành phân Tiến hành sắc ký mẫu thử Từ phương trình tuyến tính diện tích đỉnh vitamin C mẫu thử suy hàm lượng vitamin C trung bình l viên theo cơng thức : _ Stx mtb x Dx100 1,0617x Px 1000 (mg) Với: X: Hàm lượng vitamin C trung bình I viên (mg) St: Dién tich đỉnh vitamin € có mẫu thử (mAU.phút) mtb: Khéi lượng trung bình viên sản phẩm (g) D: Độ pha loãng P: Lượng bột viên cân (g) II KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết xây dựng quy trình định lượng vitamin C có sản phẩm 3.1.1 Kết khảo sát điều kiện sắc ký tối ưu Điều kiện sắc ký tối ưu là: - Hệ thống máy HPLC Dionex Ultimate 3000 - Hệ pha động: MeOH : nước acid H:POa pH 3,0 (Š:95) - Pha tĩnh: cột Phenomenex Luna C18 (250mm; 4,6mm; 5pm; 100A) - Thé tich tiém: 20p1 - Tốc độ dòng: 1,0ml/phút - Nhiệt độ cột: 259C - Đầu đị: UV-Vis, bước sóng phát hiện: 248nm 3.1.2 Kết khảo sát tính trơng thích hệ thống Thơng số thời gian lưu diện tích đỉnh vitamin C mẫu chuẩn mẫu thử Bocalex Plusssz có RSD% nhỏ 2,0% vi (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học Vụ ( 3.1.3 Kết thẩm định quy trình Tính đặc hiệu: quy trình có tính đặc hiệu cho vitamin C Tính tuyến tính miền giá trị Phương trình tuyến tính nồng độ: = 1,0617x + 0,3306 Với R2 = 0,9999, Phương trình hồi quy nồng độ : ¥ = 1,0617x Miền giá trị (ppm): [15-120] Độ xác Đạt độ xác độ xác liên ngày vitamin C mẫu thử Bocalex, mẫu thử Plusssz, mẫu thử Myvita, mẫu thử Beroca Độ Đạt độ vitamin C mẫu thử Bocalex, mẫu thử Plusssz, mẫu thử Myvita, mau thir Beroca Giới hạn phát giới hạn định lượng LOD = 0,22ppm LOQ = LOD x 3,3 = 0,73ppm 3.2 Áp dụng quy trình định lượng Hàm lượng vitamin C trung bình lơ sản phẩm Bocalex 56,66mg, 56,02mg va 56,61 mg So voi gia tri ghi nhãn 60mg, hàm lượng đạt theo Tiêu chuẩn sở: + 20% so với hàm lượng nhãn (48mg — 72mg vitamin C) Tương tự, hàm lượng vitamin C trung bình lơ sản phẩm Plusssz 65,70mg, 63,5mg 64,54mg so với giá trị ghi nhãn 60mg Hàm lượng vitamin C trung bình lơ sản phẩm MyVita 69,59mg Hàm 69,81mg, va 68,67mg so với giá trị ghi nhãn 75mg lượng vitamin C trung bình lô sản phẩm Berocca la 503,11mg, 501,51mg 498,43mg so với giá trị ghi nhãn 500mg IV KẾT LUẬN Sau thời gian thực hiện, hoàn thành số mục tiêu đề luận văn, bao gôm: Vii (wrox PL Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học Xây dựng thâm định quy trình định lượng vitamin C sản phẩm viên sủi đa thành phần phổ biến lưu hành thị trường phương pháp HPLC với hệ pha động isocratic MeOH : H3PO4 pH 3,0 (5:95) va pha tinh la cét Phenomenex Lunar C18 (250mm; 4,6 mm; im; 100Ả) Thời gian cho lần tiêm mẫu 10 phút pic vitamin C xuất khoảng phút thứ 4, tách khỏi pic tạp Áp dụng định lượng thành công hàm lượng vitamin C lô khác sản phẩm VIii I\6[ruwpuis Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học Tạ = 0,682 < Tị = 1,996 Nên chấp nhận giá trị Xmax + Giá trị hàm lượng vitamin C nhỏ Xmia = 63,18 Tin = 1,682 < Ty = 1,996 Nén chap nhận giá trị Xmin Do đó, khơng có sai số thơ dãy số liệu độ xác mẫu thử Plusssz Néng dé vitamin C va RSD% ham lượng vitamin C có mẫu thử Bocalex khoảng 30 ppm 0,64%, với Plusssz khoảng 30 ppm 1,32% Theo Số tay Hướng dẫn đăng ký thuốc, giá trị RSD (%) kết định lượng hàm lượng hoạt chất có mẫu phải < 2,0% Do đó, RSD% hàm lượng hoạt chất mẫu thử đáp ứng yêu cầu độ xác Số tay Hướng dẫn đăng ký thuốc 4.1.3.4 Độ Theo Số tay Hướng dẫn đăng ký thuốc, độ phương pháp phải nằm khoảng 98,0% đến 102,0% giá trị RSD < 2,0% Với mẫu thử Bocalex, độ hồi phục thấp 98,62%, cao 101,52%, trung bình mẫu thử 100,35%, Với mẫu thử Plusssz, độ hồi phục thấp 98,66%, cao 101,48%, trung bình mẫu thử 100,47%, Độ hồi phục nồng độ độ hồi phục trung bình mẫu thử nằm giới hạn yêu cầu theo Số tay Hướng dẫn đăng ký thuốc Hệ thống máy HPLC Dionex Ultimate 3000 cho thấy hiệu tốt với độ lặp lại cao Với hệ pha động MeOH: H;POx pH 3,0 (5:95), pic vitamin C xuất phút thứ 4,02 với hệ số bất đối khoảng 0,95-1,02, tách khỏi pic tá dược pic vitamin khdc với hệ số phân giải đạt yêu cầu Sự có mặt thành phần khác cơng thức viên sủi vitamin khác (Bl, Bó, B12, v.v ) số tá dược không làm ảnh hưởng đến pic vitamin C Do phương pháp có tính chọn lọc vitamin C Miền giá trị phương pháp 15-120ppm với đường tuyến tính có hệ sế R®=0,9999 Độ xác phương pháp chứng minh qua giá trị RSD% nồng độ vitamin C có mẫu thử (0,64% mẫu thử Bocalex 1,32% đối 51 I\6[ruwpuis Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học với mẫu thử Plusssz) Độ phục hồi vitamin C khoảng 98,62-101,52% chứng minh độ phương pháp Nhìn chung, kết cho thấy quy trình xây dựng thích hợp để định lượng vitamin C ứng dụng quy trình để định lượng sản phẩm viên sủi đa thành phan vitamin C 4.2 Áp dụng quy trình định lượng Các lơ Bocalex Plusssz, MyVita Berocca định lượng có thành phần nhãn giống với lơ thẩm định Do đó, áp dụng quy trình định lượng cho lơ sản phẩm Hàm lượng vitamin C trung bình lô sản phẩm Bocalex 56,66mg, 56,02mg 56,61mg So với giá trị ghỉ nhãn 60mg, hàm lượng đạt theo Tiêu chuẩn sở: + 20% so với hàm lượng nhãn (48mg — 72mg vitamin C) Tương tự, hàm lượng vitamin C trung bình lô sản phẩm Plusssz 65,70mg, 63,5mg 64,54mg so với giá trị ghi nhãn 60mg Hàm lượng vitamin C trung bình lơ sản phẩm MyVita 69,81mg, , 69,59mg 68,67mg so với giá trị ghi nhãn 75mg Hàm lượng vitamin C trung bình lơ sản phẩm Berocca 203,11mg, 501,51mg va 498,43mg so voi giá trị ghi nhãn 500mg Theo khuyến cáo Thông tư Quy định quản lý thực phẩm chức (43/2014/TT-BYT), hàm lượng vitamin có thực phẩm theo liều khuyên dùng ngày nhà sản xuất phải đạt tối tiểu 15% RNI hàm lượng tối đa vitamin có thực phẩm theo liều khuyên dùng ngày nhà sản xuất không vượt mức tối đa cho phép vitamin có thực phẩm chức Liều vitamin C khuyên dùng ngày từ 25-55mg/ngày tùy theo nhóm ti mức tối đa cho phép vitamin C thực phẩm chức quy định thông tư 1000mg/ngày [3] Liều khuyên dùng ngày từ nhà sản xuất sản phẩm Bocalex Plusssz l-2viên/ngày, tương đương 60-120mg vitamin C/ngày Do đó, liều ghỉ nhãn sản phẩm phù hợp theo Quy định 52 I\6[ruwpuis Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), nhu cầu vitamin C theo nhóm tuổi trình bày bảng 4.5 Bảng 4.5 Nhu cầu vitamin C ngày theo WHO Nhóm ti Nhu câu vitamin C (mg/ngày) Trẻ em 0-9 tuôi 25-35 10-18 tuôi 40 19-65 tuôi 45 Trên 65 tuôi 45: Phụ nữ có thai 55 Tuy nhiên số người, dùng vitamin C 2-3g/ngày dẫn đến tiêu chảy Bên cạnh đó, oxalat (sản phẩm dị hóa cuối vitamin C) yếu tố quan trọng góp phần hình thành sỏi thận, đặc biệt liều dùng 1000mg/ngày [37] Liều vitamin C ngày khuyên dùng từ nhà sản xuất cững phù hợp theo quy định WHO 53 I\6[ruwpuis Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học KÉT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ Kết luận Sau thời gian thực hiện, hoàn thành hai mục tiêu đề bao gồm: Xây dựng thẩm định quy trình định lượng vitamin C sản phẩm viên sủi đa thành phần phổ biến lưu hành thị trường phương pháp HPLC với hệ pha động isocratic MeOH : H:POx pH 3,0 (5:95) pha tĩnh cột Phenomenex Lunar C18 (250mm; 4,6 mm; um; 100Ä) Thời gian cho lần tiêm mẫu 10 phút pic vitamin C xuất khoảng phút thứ 4, tách khỏi pic tạp Ứng dụng quy trình định lượng thành công hàm lượng vitamin C lô khác sản phẩm Kiến nghị: Áp dụng định lượng lô sản phẩm khác lưu hành thị trường Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng dành cho thực phẩm chức sản xuất nước nhập khâu đẻ đảm bảo hàm lượng tác dụng hoạt chất 54 (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học PB TÀI LIỆU THAM KHẢO TAL LIEU TIENG VIET Bộ Y Tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất ban Y học Bộ Y Tế (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam, lần xuất thứ hai tập I, Nhà xuất Khoa học Kỹ Thuật Bộ Y Tế (2014), hông tư Quy định quản lý thực phẩm chức Cục Quản lý Dược (2013), Sổ tay Hướng dẫn đăng ký thuốc Liên Bộ mơn Hóa Phân Tích - Kiểm nghiệm — Độc chất (2014), Giáo trình lý thuyết Kiểm nghiệm Dược Phẩm, Khoa Dược — Đại học Y Dược Cần Thơ, tr.87 — 130 Liên Bộ mơn Hóa Phân Tích ~ Kiểm nghiệm — Độc chất (2012), Giáo trình lý thuyết Hóa phân tích 2, Khoa Dược — Đại học Y Dược 187 Cần Thơ, trang 160 — ‘ TAI LIEU TIENG ANH Council of Europe (2010), European Pharmacopoeia Seventh edition Supplement 7.1, Juan Du, Joseph J Cullen, Garry R Buettner (2012), “Ascorbic acid: Chemistry, biology and the treatment of cancer”, Biochimica et Biophysica Acta, 1826 443457 Juan Du , Sean M Martin , Mark Levine , Brett A Wagner , Garry R Buettner, Sih-han Wang, Agshin F Taghiyev , Changbin Du , Charles M Knudson, and Joseph J Cullen (2010), Mechanisms of Ascorbate-Induced Cytotoxicity in Pancreatic Cancer, Clinical Cancer Research 10 Michael Graham Espeya, Ping Chenb , Brian Chalmersb, J eanne Driskob, Andrew Y Suna, Mark Levinea, and Qi Chen (2011), “Pharmacologic ascorbate Synergizes with gemcitabine in preclinical models of pancreatic cancer”, Free Radical Biology and Medicine Journal, Vol 50, 1610-1619 11 John N Hathcock PhD (2004), Vitamin and mineral safty 2" edition, Council For Responsible Nutrition Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học SL 12 Ashley N Hiatt, Mario G Ferruzzi, Lynne S Taylor, and Lisa J Mauer (2011), “Deliquescence behavior and chemical stability of vitamin C forms (ascorbic acid, sodium ascorbat, and calcium ascorbat) and blends”, International Journal of Food Properties, 14:1330—1348 13 Ashley N Hiatt, Lynne S Taylor, Lisa J Mauer (2010), Simultaneous Variations in Temperature and Relative Humidity Stability of Two Vitamin C Forms and Implications “Influence of on Chemical for Shelf Life Models”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, Volume 58; issue 14 ICH (2005), 02(RI) Validation of analytical procedures: Text and Methodology 15 Hallberg L, Brune M, Rossander L (1986), "Effect absorbtion on different types of meals”, Human of ascorbic acid on iron Nutrition: Applied Nutrition, 40A: 97-113 l6 Mark Levine, Steven C Rumsey, Rushad Daruwala, Jae B Park, Yaohui Wang (1999), Criteria and recommendations Jor vitamin C intake, American Medical Association 17 S Maggini, S Wenzlaff and D Hornig (2010), “Essential Role of Vitamin C and Zinc in Child Immunity and Health”, The Journal of International Medical Research, 38: 386 — 414, 18 Snezana S Mitié, Danijela A Kostié, Danijela C Naskovié-Dokié, Milan N Mitic (2011), “Rapid and Reliable HPLC Method for the Determination of Vitamin C in Pharmaceutical Samples”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 10 (1): 105-111, K Akhilender Naidu (2003), "Vitamin C in human health and disease is still a mystery ? An overview", Journal Nutrition, 2, (7) \O (re 20 L Nova’kova’, P Solich, D Solichova (2008), "HPLC determination of ascorbic and methods for simultaneous dehydroascorbic acids”, Adegoke, and Akintunde, Trends in Analytical Chemistry, Vol 27, No 10 21 Oyetade, O.A., Oyeleke, G.O., B.M A.O (2012), “Stability Studies on Ascorbic Acid (Vitamin C) From Different Sources”, JOSR I\6[ruwpuis Tài liệu phục vụ học tập, nghiền cứu khoa học Sử Journal of Applied Chemistry (IOSR-JAC), ISSN: 2278-5736 Volume 2, Issue (Sep-Oct 2012), PP 20-24 22 Pavlos Papoulidis Ampatzidou , Olga Ananiadou, Eleftherios Chalvatzoulis , Charilaos Koutsogiannidis , Theodoros , Fotini Karaiskos , Athanasios Madesis , George Drossos (2010), The role of ascorbic acid in the prevention of atrial fibrillation after elective on-pump myocardial revascularization surgery: a single-center experience — a pilot study 23 Ranu Paul, Uma Ghosh (2012), “Effect of thermo treatment on acid ascorbic content of pomegranate juice”, Indian Journal of Biotechnology, Vol 11, pp 309313 24 Valeria Radulescu, Diana-Carolina Ilies, Jon Voiculescu(2013), “Determination of acid ascorbic in shoots from different coniferous species by HPLC”, Farmacia, Vol 61, 6, 1158-1166 25 Brittney J Randolph, “Ascorbic acid Hardikkumar attenuates the M Patel pressor & Matthew response to D Muller voluntary (2015), apnea in postmenopausal women”, Physiologycal reports, Vol 26 Matthias W Rath va Linus C Pauling (1994), Prevention and treatment of occlusive cardiovascular disease with ascorbate and substances that inhibit the binding of lipoprotein (a), United States Patent 27 C Rekha, G Poornima, M Manasa, V Abhipsa, J Pavithra Devi, H T Vijay KumaRand, T R Prashith Kekuda (2012), “Ascorbic Acid, Total Phenol Content and Antioxidant Activity of Fresh Juices of Four Ripe and Unripe Citrus Fruits”, Chemical Science Transactions, 1(2), 303-310 28 Southern California-RAND Evidence-based Practice Center (2003), “Effect of Supplemental Antioxidants Vitamin C, Vitamin E, and Coenzyme Q10 for the Prevention and Treatment of Cardiovascular Disease”, Evidence Report/Technology Assessment, 83 29 Vitor Spinola, Berta Mendes, José S Camara, Paula C Castilho (2012), “Effect of time and temperature on vitamin C stability in horticultural extracts UHPLC- (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học bY PDA vs iodometric titration as analytical methods”, LWT - Food Science and Technology, ELSERVIER 30 Andrea Steskové— Monika Morochovicova - Emilia Leskova (2006), “Vitamin C degradation during storage of fortified foods”, Journal of Food and Nutrition Research, Vol 45, 2006, No 2, pp 55-61 31 The British Pharmacopoeia (2013), CD-Rom 32 The United States Pharmacopoeia 35 (2012), CD-Rom 33 James E Tingstad, Lee H Macdonald, and Peter D Meister (1963), “Stability of Ascorbic Acid in a Liquid Multivitamin Emulsion Containing Sodium Fluoride”, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 52, No 34, Shafqat ullah, Arshad Hussain, Javid Ali, Khaliqurrehman and Asad ullah (2012), “A Simple and Rapid HPLC Method for Analysis of Vitamin-C in Local Packed Juices of Pakistan”, Middle-East Journal of Scientific Research, 12 (8): 1085- 1091 35 M C Uprety, B Revis, S M Japar (1963), “Ascorbic Acid Stability in Certain Aqueous and Fruit Juice Vehicles Subjected to Elevated Temperature”, Journal of Pharmaceutical Sciences, 1002 36 Alley E Watada (1982), “A High-performance Liquid Chromatography Method for Determining Ascorbic Acid Content of Fresh Fruits and Vegetables”, HortScience, Vol 17(3): 334-335 37 World Health Organization (2004), Vitamin and Mineral Requirements in Human Nutrition, Second Edition, Geneva: World Health Organization (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học PHỤ LỤC (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học 60 PHỤ LỤC I1 PL.1.1 Tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn VitaminC Ta (phút) S Lan I Rs 4,05 N 63,58 As 4,41 Lan 13714 4,05 0,96 Lan 62,75 4,05 4,26 62,45 13492 Lan 4,46 0,99 4,05 13759 62,14 0,94 Lan 4,36 13816 4,04 0,97 61,38 Lân 4,41 4,04 13953 Trung bình RSD% 60,62 0,97 4,05 0,14 4,47 62,15 1,67 13953 4,4 1,76 0,95 13781,17 1,25 0,96 1,25 PL.1.2 Tinh tương thích hệ thống mẫu thử Bocalex VitaminC TR (phút) S Rs N As Lén 4,02 61,24 9,55 Ldn 12058 4,03 0,99 Lan 60,70 4,03 9,63 60,65 12192 Lan 9,74 0,98 4,03 12433 60,24 0,98 Lan 9,85 12240 4,03 1,00 59,78 Lan 9,72 4,03 12280 Trung binh RSD% 58,86 0,95 4,03 0,1 9,82 60,25 1,39 12288 9,72 1,17 0,98 12248,5 1,01 0,98 1,71 (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học J PL.1.3 Tính tương thích hệ thống mẫu thử Plusssz VitaminC Lân Ldn Tr(phit) 3,99 3,99 § 71,55 71,43 Lân Rs 16,36 16,19 3,99 N 11678 11768 71,32 As 0,98 0,99 Lân 16,27 3,99 11672 0,97 70,84 Lan 16,14 3,99 11633 70,68 1,00 Lân 16,35 3,99 11813 Trưng bình 70,99 1,00 3,99 16,33 71,13 11633 RSD% 16,27 1,00 0,06 11699,50 0,49 0,99 0,56 0,64 1,28 (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học , b } PHỤ LỤC PL.2.1 Kết tính tuyến tính Nơng độ (ppm) 15,35 Diện tích đỉnh (mAU*phút) 30,70 32,94 61,41 65,45 92,11 122,81 97,37 16,89 131,3 PL.2.2 Kết xử lý phần mềm Microsoft Excel 2013 dựa vào kết trung bình diện tích đỉnh Regression Statistics Multiple R 0,999944092 R Square 0,999888188 Adjusted R Square 0,999850917 Standard Error 0,569926887 Observations (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học 02 ANOVA df SS MS F Significance F Regression 8714,06477 8714,06477 Residual 0,97445 0,32482 Total 26827,64136 5,01809E-07 - 8715,03922 Coefficient Standar S d Error tStat P- Lowe Upper Lowe Upper value r95% 95% r 95.0% 95.0% Intercept 0,33 0,49 0,68 0,55 -1,227 1,889 -1,227 1,889 xX 1,06175 0,01 163,7 0,00 1,041 1,082 1,041 1,082 Variable (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học sứ PHỤ LỤC PL.3.1 Kết định lượng hàm lượng vitamin C áp dụng quy trình lơ 680914B, 330914A, 630914B sản phẩm Bocalex Mẫu Lân I Diện tích đỉnh vitamin C Lô 680914B Lô 330914A Lô 630914B 29,80 30,46 30,40 29,65 30,24 30,29 30,08 29,91 29,77 30,17 29,70 30,07 29,86 29,34 29,80 30,32 29,09 29,69 RSD% 0,63 1,90 1,01 Trung binh 29,94 29,77 30,07 : ; Hàm lượng trung bình vitamin C mẫu (mg) 56,66 56,02 | 56,61 PL.3.2 Kết định lượng hàm lượng vitamin C áp dụng quy trình lơ 26408, 53518 06717 sản phẩm Plusssz Mau Lan Dién tich dinh cia vitamin C Lô 26408 Lô 53518 Lô 06717 35,15 34,11 34,36 35,13 34,25 34,47 Ĩ 34,79 33,70 34,15 34,93 33,82 34,49 34,81 33,57 34,27 34,69 33,15 33,95 RSD% 0,58 1,22 0,45 Trung binh 34,92 33,77 34,28 : Hàm lượng trung bình vitamin C mẫu (mg) 65,71 63,54 64,54 (re Tài liệu phục vụ học tập, nghiên cứu khoa học ( Œ PL.3.3 Kết định lượng hàm lượng vitamin C áp dụng quy trình lơ 1408230, 1405156, 1406250 sản phẩm Myvita Mẫu Lân I 2 ° RSD% 2 Trung binh Lơ 1408230 29,18 29,17 Diện tích đỉnh vitamin C Lô 1405156 29,60 29,08 Lô 1406250 29,24 29,12 29,02 28,69 28,28 27,88 1,97 28,78 28,23 28,74 28,21 1,70 28,78 28,48 27,97 28,06 1,95 28,70 28,77 28,61 Hàm lượng trung bình vitamin C mẫu (mg) 69.81 69,59 68,67 PL.3.4 Kết định lượng hàm lượng vitamin C áp dụng quy trình lơ CM28088, CM26445 CM27221 sản phẩm Beroca Mẫu Lân Diện tích đỉnh vitamin C Lơ CM28088 Lơ CM26445 Lô CM27221 32,01 30,60 30,38 31,74 30,42 30,08 31,53 29,89 31,41 31,15 31,32 31,22 31,00 31,17 31,42 30,90 30,72 31,04 RSD% 1,48 0,74 1,94 Trung binh 31,39 30,69 30,92 ? ° Hàm lượng trung bình vitamin C mẫu (mg) 503,11 501,51 498,43