Sự xuất hiện các K. pneumoniae tiết men ESBL đang ngày càng gia tăng trên toàn thế giới. Ở VN, tỷ lệ này lên đến 66%. Đây là dấu hiệu rõ nét của tình trạng đa kháng thuốc của chủng vi khuẩn này. Carbapenem được khuyến cáo sử dụng và trở thành thuốc KS dự phòng cho các trường hợp nhiễm trùng nặng. Các cơ chế đề kháng carbapenem Tiết men blactamase (AmpC hay ESBL) + Mất hay thay đổi kênh porin Thay đổi các protein gắn kết penicillin (PBPs) Tiết men carbapenemase
KLEBSIELLA PNEUMONIAE ENTEROBACTER HORMAECHEI SỞ HỮU GEN blaKPC ĐỀ KHÁNG CARBAPENEM TẠI ViỆT NAM Ths Trần Nhật Phương, Phòng R & D, Cty TNHH CNSH Nam Khoa Ncs Trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên, ĐH Quốc Gia TPHCM HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Nội dung Giới thiệu Lần phát KPC Việt Nam K neumoniae Ent hormaechei Kết bàn luận HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Giới thiệu Sự xuất K pneumoniae tiết men ESBL ngày gia tăng toàn giới Ở VN, tỷ lệ lên đến 66% Đây dấu hiệu rõ nét tình trạng đa kháng thuốc chủng vi khuẩn Carbapenem khuyến cáo sử dụng trở thành thuốc KS dự phòng cho trường hợp nhiễm trùng nặng 225 200 202 (66.4%) ESBL [+] ESBL [-] 155 (63.8%) 175 150 125 88 (36.2%) 100 75 50 19 (54.3%) 16 (45.7%) 25 Enterobacter E coli HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Klebsiella 102 (33.6%) Giới thiệu Các chế đề kháng carbapenem Tiết men -lactamase (AmpC hay ESBL) + Mất hay thay đổi kênh porin Thay đổi protein gắn kết penicillin (PBPs) Tiết men carbapenemase Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase (KPC): Carbapenemase lớp A, nhóm 2f (Bush, 2008) Được phát lần Bắc Carolina, Hoa Kỳ, 2001 Gen mã hóa cho enzyme nằm plasmid HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Giới thiệu Sự xuất ngày gia tăng nhóm vi khuẩn kháng carbapenem lan tràn nhiều nước Mỹ, Nam Phi, Pháp, Anh, Israel, Trung Quốc… Sự lan truyền K pneumoniae sở hữu gen KPC trở thành mối lo ngại cho nhà điều trị lâm sàng vì: Đây chủng gây nhiễm trùng bệnh viện Gen tích lũy lậy truyền tác nhân kháng đa kháng sinh cho đối tượng khác ESBL Khó phát gen phương pháp kháng sinh đồ truyền thống HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 Các điểm nóng phân bố dịch tễ gen blaKPC (2009) HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 Nội dung Giới thiệu Lần phát KPC Việt Nam K neumoniae Ent hormaechei Thảo luận HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 Lần phát gen KPC Việt Nam K neumoniae Ent hormaechei Chủng nghiên cứu - K pneumoniae tiết men -lactamase phổ rộng sàng lọc từ PTN vi sinh bệnh viện Việt Nam Chủng kiểm tra chất lượng (Quality control) - Chủng E.coli ATCC 25922, - K pneumoniae có ESBL dương ATCC 700603; - K pneumoniae có KPC dương tính ATCC BAA 1705 có KPC âm tính ATCC BAA 1706 HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 Lần phát gen KPC Việt Nam K neumoniae Ent hormaechei IDS 14 GNR LDC MOB KIA OXIDASE Phương pháp nghiên cứu 1.Định danh - Phương pháp sinh hóa thường quy tra cứu hệ thống mã định UREKhoa) CIT IND MLO danh IDS14 GNR (CôngNIT ty Nam GLU ONPG PAD ESC VP - Giải trình tự 16sRNA Xác định kiểu hình kháng carbapenem - Kiểu hình ESBL: Phương pháp đĩa đơi đĩa kết hợp theo CLSI 2011 - Kiểu hình kháng carbapenem: Đĩa KS carbapenem, MIC Hodge Test cải biên HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Lần phát gen KPC Việt Nam K neumoniae Ent hormaechei Phương pháp nghiên cứu Tm55 1.Định danh Tên mồi Trình tự o định danh - Phương pháp sinh hóa thường quy tra 1cứu chuhệkỳthống95mã C phút IDS14 GNR (Công ty Nam Khoa) blaKPC-F 5’-TCTGGACCGCTGGGAGCTGG-3’ 40 chu kỳ 94oC 30 giây - Giải trình tự 16sRNA 55oC 30 giây Xác 5’-TGCCCGTTGACGCCCAATCC-3’ định kiểu hình kháng carbapenem blaKPC-R - Kiểu hình ESBL: Phương pháp đĩa đôi đĩa kết hợp theo CLSI 2011 72oCvà phút Kiểu hình kháng carbapenem: Đĩa KS carbapenem, MIC Hodge Test blaKPCu-F 5’- CAGCTCATTCAAGGGCTTTC-3’ cải biên chu kỳ 72oC 10 phút blaKPCu-R AGTCATTTGCCGTGCCATAC-3’ Xác 5’định kiểu gen -Xác định gen blaKPC kỹ thuật PCR -Giải trình tự xác định kiểu gen blaKPC HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 ĐỊNH DANH Kết nuôi cấy Kết định danh sinh hóa IDS 14 GNR 15 chủng K pneumoniae, chủng cịn lại giải trình tự 09 Kết giải trình tự chủng K pneumoniae chủng Enterobacter asburiae (ID05) chủng Enterobacter hormaechei (ID09) KẾT LUẬN 18 chủng K pneumoniae chủng Enterobacter asburiae chủng Enterobacter hormaechei HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT chủng Shigella boydii (ID15) Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 chủng Shigella boydii THỬ NGHIỆM HODGE CẢI BIÊN (MHT) 13 chủng có MHT dương: Các chủng kháng hay trung gian với loại carbapenem thử nghiệm Trong chủng số chủng Ent Hormaechei kháng với loại kháng sinh nghiên cứu HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 PHÁT HIỆN GEN blaKPC 600 bp 600 bp 400 bp400 bp 600 bp 400 bp L L chủng có gen blaKPC: 02, 03, 04, 06, 07, 09, 12, 13, 18, 20 Các HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT chủng có MHT dương chủng chủng Y TẾ CƠNG CỘNGtính, - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010số – 2012 Ent hormaechei ID Kết định danh ESBL Biện luận theo đường kính vịng vơ khuẩn Imi Biện luận theo Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) ERT R MERO R DORI R PCR Hodge KPCu KPC - - - K pneumoniae - R Mero R K pneumoniae - R R R R R + + + K pneumoniae + R R R R R + + + K pneumoniae - R R I I R + + + Ent asbureae - R I R I R + - - K pneumoniae - R R R R R + + + K pneumoniae - R R R R R + + + K pneumoniae + S R R R - - S R - E hormaechei S R - S R + + + 10 K pneumoniae + R R R R R - - - 11 K pneumoniae + S R S R - - S R - K pneumoniae S R - 12 S R + + + 13 K pneumoniae - R R I I R + + 14 K pneumoniae + S S S S S + + - 15 Shigella boydii + S + R S R R R - - K pneumoniae S R - 16 S R 17 K pneumoniae + S K pneumoniae - R S I S R S R + + - 18 S R 19 K pneumoniae - R R R R R - 20 K pneumoniae + S I R S R 21 K pneumoniae - R R R S R + - + - + + + - - - HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 Tất sản phẩm PCR giải trình tự sản phẩm khuyếch đại gen blaKPC HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CƠNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHỊNG 2010 – 2012 KẾT LUẬN Đã phân lập phát 18/21 chủng K pneumoniae, ba chủng Enterobacter kháng với carbapenem 10/ 18 chủng có kiểu hình Carbapenemase dương tính với thử nghiệm MHT Trong có chủng Ent hormaechei 8/ 10 chủng K pneumoniae chủng Ent hormaechei có kiểu gen đề kháng gen blaKPC mang kiểu gen KPC-2 Đây công bố VN xuất chủng K pneumoniae Ent hormaechei sở hữu gen mã hóa cho enzyme -lactamase đề kháng với carbapenem, bước đầu xác định thuộc loại KPC-2 HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Nội dung Giới thiệu Lần phát KPC Việt Nam K neumoniae Ent hormaechei Bàn luận HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 Bàn luận Israel, 2006, dịch toàn quốc gây K Pneumoniae mang gen KPC-2 HỘI KPC-3, tỉ KHOA HỌC KỸ THUẬT NGHỊ lệ tử vong lên đến 44% Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012 (Leavitt cs, 2008) Nordmann P et al LID 2009 Gen kháng lan truyền cho vi khuẩn gram âm khác: K oxytoca, Sallmonella, S enterica, E cloacae, E coli Mỹ E coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinobacter baumannii Israel, Enterobacter Anh (Woodford, 2007), Serratia marcescens Trung Quốc (Zhang, 2007), E coli Enter cloacae Pháp (Petrella, 2008) HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT Y TẾ CÔNG CỘNG - Y TẾ DỰ PHÒNG 2010 – 2012