Vannasack oudomsin chiết xuất, phân lập một số hợp chất và đánh giá hoạt tính ức chế enzym α glucosidase, α amylase của cây pệnh nua (cnidoscolus aconitifolius (mill ) i m johnst ) trồng ở viêng chăn, lào luận văn thạc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VANNASACK OUDOMSIN CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM αGLUCOSIDASE, α-AMYLASE CỦA CÂY PỆNH NUA (CNIDOSCOLUS ACONITIFOLIUS (Mill.) I.M.Johnst.) TRỒNG Ở VIÊNG CHĂN, LÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VANNASACK OUDOMSIN CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM αGLUCOSIDASE, α-AMYLASE CỦA CÂY PỆNH NUA (CNIDOSCOLUS ACONITIFOLIUS (Mill.) I.M.Johnst.) TRỒNG Ở VIÊNG CHĂN, LÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển HÀ NỘI 2023 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển, người thầy trực tiếp hướng dẫn đề tài này, tận tình bảo hỗ trợ tơi suốt q trình thực nghiên cứu Thầy đam mê, tâm huyết nghiên cứu, tác phong làm việc thể chuyên nghiệp Bằng tất yêu quý biết ơn, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn sinh viên Mina KHAMSALY, Anthala LACHIEMPHONE, Hoàng Khắc Long, Trần Thị Vân, Bùi Thu Trang, Hoàng Thu Trang, Nguyễn Phương Thảo đồng hành suốt thời gian làm nghiên cứu luận văn thạc sĩ khoa Dược liệu - Dược học cổ truyền Tôi xin chân thành cảm ơn tới NCS ThS Lê Hương Giang công tác khoa Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội, TS Lê Thanh Hương, công tác Trường Đại học Khoa học công nghệ Hà Nội bảo giúp đỡ nhiều mặt kiến thức chun mơn q trình thực đề tài Sự hỗ trợ góp phần khơng thể thiếu để tơi hồn thiện đề tài Tơi xin gửi lời biết ơn tới tồn thể thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội suốt khoảng thời gian học tập trường, xin kính chúc thầy cô mạnh khỏe công tác tốt Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Học viên Vannasack OUDOMSIN i MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Chi Cnidoscolus 1.1.1 Đặc điểm thực vật khóa phân loại chi Cnidoscolus 1.1.2 Phân bố chi Cnidoscolus Pohl 1.1.3 Tác dụng chi Cnidoscolus Pohl 1.2 Loài Cnidoscolus aconitifolius (Mill.) I.M.Johnst 1.2.1 Vị trí phân loại, phân bố đặc điểm thực vật 1.2.2 Thành phần hóa học 1.2.3 Tác dụng sinh học loài Cnidoscolus aconitifolius 14 1.2.3.1 Hạ đường huyết 14 1.3 Tổng quan enzym α-glucosidase, α-amylase chất ức chế 16 1.3.1 Enzym α-amylase 16 1.3.2 Enzym α-glucosidase 16 1.3.3 Các chất ức chế enzym α-glucosidase, α-amylase 17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Nguyên liệu, hoá chất, thiết bị 20 2.1.1 Nguyên liệu 20 2.1.2 Hoá chất, thiết bị nghiên cứu 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.2.1 Nghiên cứu thành phần hóa học 21 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng ức chế hoạt độ enzym α-glucosidase, enzym αamylase in vitro phân đoạn hợp chất phân lập 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Nghiên cứu thành phần hóa học 21 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế hoạt độ enzym α -glucosidase enzym α - amylase của cao phân đoạn hợp chất phân lập 25 2.4 Nơi thực 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 Kết nghiên cứu thành phần hóa học 28 3.1.1 Chiết xuất, phân lập hợp chất 28 ii 3.2 Kết đánh giá tác dụng ức chế enzym α-glucosidase enzym αamylase in vitro 48 3.2.1 Đánh giá tác dụng ức chế α-glucosidase in vitro 48 CHƯƠNG BÀN LUẬN 56 4.1 Nghiên cứu thành phần hóa học, chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất phân lập 56 4.1.1 Về đối tượng nghiên cứu 56 4.1.2 Về phương pháp chiết xuất, phân lập 57 4.2 Đánh giá tác dụng ức chế enzym α-glucosidase α-amylase in vitro 62 4.2.1 Đánh giá tác dụng ức chế enzym α-glucosidase in vitro 64 4.2.2 Đánh giá tác dụng ức chế enzym α-amylase in vitro 65 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 71 5.1 Kết luận 71 5.2 Kiến nghị 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO i iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ý nghĩa tiếng Việt Chữ viết tắt Từ nguyên Các phương pháp sắc ký CC Column Chromatography Sắc ký cột Sắc ký lỏng hiệu cao High Performance Liquid Chromatography HPLC-DAD High Performance Liquid HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography Diode Array Detect ghép chuỗi di-ốt quang HPLC-DAD High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao MS ghép di-ốt quang phổ khối Chromatography Diode Array Detection Mass Spectroscopy RP-18 Reversed Phase C-18 Hạt pha đảo C-18 TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng Các phương pháp phổ 13 C-NMR H-NMR ESI-MS UV-Vis C-Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân C13 H-Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân H1 13 ElectroSpray Ionization Mass Phổ khối ion hóa phun điện Spectroscopy tử Ultra Violet - Visible Phổ tử ngoại Các loại dung môi, phân đoạn dịch chiết DCM Dichloromethane Dichloromethan DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxid EtOAc Ethyl acetat Ethyl acetat EtOH Ethanol Ethanol MeOH Methanol Methanol n-Hex n-Hexan n-Hexan n-Bu n-Butanol n-Butanol Các ký hiệu viết tắt khác Ac Acetyl Acetyl Ara Arabinopyranose Arabinopyranose iv br s Broad singlet - C Cnidoscolus Cnidoscolus d Doublet Mũi đôi dd Doublet of doublet Mũi đôi mũi đôi ĐTĐ Đái tháo đường Đái tháo đường Gal Galactopyranose Galactopyranose Glc Glucopyrasnose Glucopyrasnose Hz Hertz Héc j Coupling Hệ số tương tác m/z Mass to charge ratio Khối lượng/diện tích Mean Mean Giá trị trung bình ppm Parts per million Phần triệu Rha Rhamnopyranose Rhamnopyranose s Singlet Mũi đơn SD Standard deviation Độ lệch chuẩn t Triplet Mũi ba TLTK Tài liệu tham khảo Tài liệu tham khảo TT Thứ tự Thứ tự v/v Volume/volume Thể tích/thể tích δ Chemical Shift Độ dịch chuyển hóa học v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Loài C.aconitifolius (Mill.) I.M.Johnst Viêng chăn, Lào [6] Hình 1.2 Đặc điểm thực vật lồi C aconitifolius (Mill.) I.M.Johnst.[110] Hình 1.3 Khung cấu trúc acid phenolic Hình 1.4 Khung cấu trúc anthranoid Hình 1.5 Khung cấu trúc flavan Hình 1.6 Khung cấu trúc flavanol 10 Hình 1.7 Khung cấu trúc flavanon 10 Hình 1.8 Khung cấu trúc flavonol 10 Hình 1.9 Khung cấu trúc flavononol 11 Hình 1.10 Khung cấu trúc retronecin pyrrolizidine alkaloid 13 Hình 1.11 Khung cấu trúc triterpenoid 13 Hình 1.12 Sơ đồ chuyển hóa đường thể 17 Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất cao tồn phần, cao phân đoạn……………………… 22 Hình 3.1 Sơ đồ kết chiết xuất cao toàn phần, cao phân đoạn……………… 28 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 31 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn n-Butanol 32 Hình 3.4 Kết định tính hợp chất PE1 TLC 33 Hình 3.5 Sắc ký đồ HPLC hợp chất PE1 34 Hình 3.6 hình dạng hợp chất PE1 34 Hình 3.7 Công thức cấu trúc hợp chất PE1 36 Hình 3.8 Kết định tính hợp chất PE2 TLC 36 Hình 3.9 Sắc ký đồ HPLC hợp chất PE2 37 Hình 10 Hình dạng hợp chất PE2 38 Hình 3.11 Công thức cấu trúc hợp chất PE2 40 Hình 3.12 Kết định tính hợp chất PB1 TLC 41 Hình 3.13 Sắc ký đồ HPLC hợp chất PB1 41 Hình 3.14 Hình dạng hợp chất PB1 42 Hình 3.15 Công thức cấu trúc hợp chất PB1 44 Hình 3.16 Kết định tính hợp chất PB3 TLC 44 Hình 3.17 Sắc ký đồ HPLC hợp chất PB3 45 vi Hình 3.18 Hình dạng hợp chất PB3 45 Hình 4.1 Cấu trúc hóa học quercetinc………………………………………68 Hình 4.2 Tóm tắt nhóm cấu trúc flavonoid ảnh hưởng đến tác dụng ức chế α-glucosidase α-amylase 69 Hình 4.3 Cấu trúc hóa học acid ursolic 70 vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chất acid phenolic phân lập từ loài C aconitifolius Bảng 1.2 Một số hợp chất anthranoid phân lập từ loài C aconitifolius Bảng 1.3 Một số hợp chất flavan phân lập từ loài C aconitifolius Bảng 1.4 Một số hợp chất flavanol phân lập từ loài C aconitifolius 10 Bảng 1.5 Một số hợp chất flavanon phân lập từ loài C aconitifolius 10 Bảng 1.6 Một số hợp chất flavonol phân lập từ loài C aconitifolius 11 Bảng 1.7.Một số hợp chất flavononol phân lập từ loài C aconitifolius 11 Bảng 1.8 Một số alkaloid phân lập từ loài C aconitifolius 13 Bảng 1.9 Một số triterpenoid phân lập từ loài C acotifolius 14 Bảng 1.10 Một số hợp chất tự nhiên ức chế enzym α-amylase 17 Bảng 1.11 Một số hợp chất tự nhiên ức chế enzym α-glucosidase 18 Bảng 3.1 Khối lượng hàm ẩm dược liệu cao phân đoạn 29 Bảng 3.2 Kết định tính nhóm hợp chất phản ứng hóa học cao phân đoạn 29 Bảng 3.3 So sánh liệu NMR hợp chất PE1 với tài liệu tham khảo 35 Bảng 3.4 So sánh liệu NMR hợp chất PE2 với tài liệu tham khảo 39 Bảng 3.5 So sánh liệu NMR hợp chất PB1 với tài liệu tham khảo 43 Bảng 3.6 So sánh liệu NMR hợp chất PB3 với tài liệu tham khảo 46 Bảng 3.7 Kết đánh giá tác dụng ức chế enzym α-glucosidase cao phân đoạn hợp chất phân lập từ Pệnh Nua 48 Bảng 3.8 Phương trình đường chuẩn, hệ số tuyến tính (R2) giá trị IC50 50 Bảng 3.9 Kết đánh giá tác dụng ức chế enzym α-amylase cao phân đoạn hợp chất phân lập từ Pệnh Nua 52 Bảng 3.10 Phương trình đường chuẩn, hệ số tuyến tính (R2) giá trị IC50 53 viii PHỤ LỤC 9.3 Phổ 1H NMR PE2 xxxii PHỤ LỤC 10.1 Phổ 13C NMR PE2 xxxiii PHỤ LỤC 10.2 Phổ 13C NMR PE2 xxxiv PHỤ LỤC 11 Phổ MS PE2 xxxv PHỤ LỤC 12.1 Phổ 1H NMR PB1 xxxvi PHỤ LỤC 12.2 Phổ 1H NMR PB1 xxxvii PHỤ LỤC 12.3 Phổ 1H NMR PB1 xxxviii PHỤ LỤC 13.1 Phổ 13C NMR PB1 xxxix PHỤ LỤC 13.2 Phổ 13C NMR PB1 xl PHỤ LỤC 14.1 Phổ 1H NMR PB3 xli PHỤ LỤC 14.2 Phổ 1H NMR PB3 xlii PHỤ LỤC 14.3 Phổ 1H NMR PB3 xliii PHỤ LỤC 14.3 Phổ 1H NMR PB3 PHỤ LỤC 15.1 Phổ 13C NMR PB3 xliv PHỤ LỤC 15.2 Phổ 13C NMR PB3 xlv PHỤ LỤC 16 Phổ MS PB3 xlvi