Nguyễn thị dung nghiên cứu điều chế và khảo sát một số chỉ tiêu chất lượng cao khô lá bàng khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ DUNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CAO KHƠ LÁ BÀNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ DUNG Mã sinh viên: 1801127 NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CAO KHÔ LÁ BÀNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Chử Thị Thanh Huyền Nơi thực : Khoa Dược liệu - Dược học cổ truyền HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ kính trọng, lịng biết ơn lời cảm ơn sâu sắc đến TS Chử Thị Thanh Huyền – giảng viên môn Dược học Cổ truyền, trường Đại học Dược Hà Nội, người trực tiếp hướng dẫn định hướng cho từ ngày đầu nghiên cứu thực khóa luận Bộ môn Dược học cổ truyền Cô không dành nhiều thời gian, tâm huyết để hướng dẫn mà cịn ln động viên khích lệ tơi suốt q trình thực khóa luận Tơi xin cảm ơn thầy cô công tác môn Dược học cổ truyền tạo điều kiện giúp đỡ xuất q trình thực khóa luận tốt nghiệp môn Cảm ơn bạn Ngô Thị Quyên bạn em thực nghiên cứu Khoa Dược liệu – Dược học cổ truyển đồng hành, động viên hỗ trợ nhiệt tình cho Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, thầy cô giáo, cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo cung cấp cho tơi nhiều kiến thức hữu ích suốt năm học Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè người ủng hộ, động viên nguồn động lực to lớn để học tập, phấn đấu rèn luyện nghiên cứu trường Đại học Dược suốt thời gian qua Do kiến thức hạn chế mà khóa luận khơng tránh khỏi sai sót Tơi mong nhận lời góp ý q thầy bạn bè để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thị Dung MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Bàng ………… 1.1.1 Tên khoa học vị trí phân loại .2 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Đặc điểm thực vật 1.2 Tổng quan Bàng 1.2.1 Thành phần hóa học 1.2.3 Tác dụng sinh học công dụng Bàng 1.3 Tổng quan cao thuố…………………………………………………………11 1.3.1 Định nghĩa cao thuốc 11 1.3.2 Phương pháp điều chế cao khô 11 1.3.3 Yêu cầu chất lượng cao khô 13 1.3.4 Cách dùng cao thuốc .14 1.4 Các phương pháp định lượng acid gallic 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2.2 Nguyên vật liệu, thiết bị 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp định lượng acid gallic toàn phần cao khô Bàng 19 2.3.2 Phương pháp khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất điều chế cao khô Bàng 24 2.3.3 Phương pháp điều chế cao khô Bàng theo thơng số quy trình chiết xuất khảo sát 25 2.3.4 Khảo sát số tiêu chất lượng cao khô Bàng 26 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 27 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 28 3.1 Kết xây dựng thẩm định phương pháp định lượng acid gallic toàn phần cao khô Bàng 28 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký .28 3.1.2 Thẩm định phương pháp định lượng acid gallic tồn phần cao khơ Bàng 30 3.1.3 Hàm lượng acid gallic toàn phần dược liệu Bàng 38 3.2 Kết khảo sát mốt số yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất làm cao khô Bàng 38 3.3 Quy trình điều chế cao khơ Bàng từ yếu tố khảo sát 41 3.4 Kết khảo sát số tiêu chất lượng cao khô Bàng điều chế 41 3.4.1 Cảm quan, thể chất, màu sắc, mùi vị 41 3.4.2 Mất khối lượng làm khô 42 3.4.3 Tro toàn phần, tro không tan acid 43 3.4.4 Định tính .43 3.4.5 Định lượng acid gallic toàn phần 45 3.5 Bàn luận 46 3.5.1 Về phương pháp định lượng acid gallic toàn phần cao khô Bàng 46 3.5.2 Về thiết kế thí nghiệm khảo sát yếu tố tối ưu hóa quy trình chiết xuất điều chế cao khơ Bàng 47 3.5.3 Ứng dụng điều kiện lựa chọn vào điều chế cao khô Bàng định lượng acid gallic tồn phần cao khơ Bàng 50 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 52 4.1 Về xây dựng phương pháp định lượng acid gallic tồn phần cao khơ Bàng sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 52 4.2 Khảo sát yếu tố lựa chọn điều kiện điều chế cao khô Bàng 52 4.3 Khảo sát số tiêu chất lượng cao khô Bàng điều chế 52 4.4 Đề xuất 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt DĐVN HPLC Nghĩa viết tắt Dược điển Việt Nam High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) High-performance thin-layer chromatography HPTLC RSD Độ lệch chuẩn tương đối SKLM Sắc ký lớp mỏng tt/tt Thể tích/ thể tích LOD Limit of detection (Giới hạn phát hiện) LOQ Limit of Quantitation (Giới hạn định lượng) EtOH Ethanol 10 MeOH Methanol 11 EtOAC Ethylacetat 12 GA Acid gallic 13 OFAT One factor at the time 14 STT Số thứ tự 15 TT Thuốc thử (sắc ký lớp mỏng hiệu cao) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Đặc điểm thành phần hóa học dịch chiết T.catappa………………… Bảng 1.2 Một số nghiên cứu định lượng acid gallic HPLC…………………….15 Bảng 3.1 Kết xác định tính phù hợp hệ thống……………………………… 31 Bảng 3.2 Kết khảo sát độ tuyến tính………………………………………………33 Bảng 3.3 Kết thẩm định độ lặp lại phương pháp định lượng……………… 35 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ thu hồi……………………………………………… 36 Bảng 3.5 Tóm tắt kết thẩm định phương pháp định lượng acid gallic tồn phần cao khơ Bàng…………………………………………………………………37 Bảng 3.6 Kết tiêu khối lượng làm khô……………………………….42 Bảng 3.7 Kết khảo sát tiêu tro tồn phần tro khơng tan acid……….43 Bảng 3.8 Kết định tính nhóm polyphenol có cao khơ Bàng phản ứng hóa học……………………………………………………………………………… 44 Bảng 3.9 Kết định lượng acid gallic toàn phần cao khô Bàng điều chế được………………………………………………………………………………… 46 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức số hợp chất thuộc nhóm Tanin Bàng……………….5 Hình 1.2 Cơng thức số hợp chất thuộc nhóm acid phenolic Bàng……… Hình 1.3 Cơng thức số hợp chất thuộc nhóm Flavomoid Bàng………….7 Hình 1.4 Cơng thức số hợp chất thuộc nhóm Triterpinoids acid Bàng… Hình 1.5 Quy trình điều chế cao khơ…………………………………………………12 Hình 2.1 Quy trình chiết xuất cao khơ Bàng dự kiến…………………………… 25 Hình 3.1 Kết khảo sát pha động sắc ký………………………………………….28 Hình 3.2 Hình ảnh phổ acid gallic khoảng 190 – 400nm………………….29 Hình 3.3 Kết lựa chọn tốc độ dịng………………………………………………29 Hình 3.4 Kết khảo sát điều kiện thủy phân………………………………………30 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu đối chiếu (a) mẫu thử (b)……………………………30 Hình 3.6 Kết thẩm định độ đặc hiệu phương pháp định lượng…………… 32 Hình 3.7 Kết chồng phổ UV acid gallic…………………………………… 33 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ diện tích pic acid gallic………………………………………………………………………………… 34 Hình 3.9 Kết giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ)……… 34 Hình 3.10 Kết khảo sát dung mơi chiết xuất…………………………………… 38 Hình 3.11.Kết khảo sát số lần chiết xuất………………………………………… 39 Hình 3.12 Kết khảo sát thời gian chiết xuất……………………………………….39 Hình 3.13 Kết khảo sát tỉ lệ dược liệu/ dung mơi……………………………… 40 Hình 3.14 Quy trình điều chế cao khơ Bàng ………………………………………41 Hình 3.15 Hình ảnh cao khơ Bàng sau điều chế……………………………………42 Hình 3.16 Sắc ký đồ TLC lô cao khô Bàng (T1,T2,T3) chất đối chiếu (C) ……………………………………………………………………………………… 44 ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Bàng (Terminalia catappa L.) loài trồng phổ biến Việt Nam nhiều nước khu vực Châu Á - Thái Bình Dương [57] Từ xưa, phận Bàng sử dụng điều trị số bệnh tiêu chảy, lỵ (vỏ) [1]; cảm, sốt, mồ hôi (lá) [7] Ở Đài Loan, Bàng sử dụng loại thuốc dân gian nhằm mục đích điều trị viêm gan [34] Các nghiên cứu hợp chất Bàng có tác dụng chống oxy hóa [18], chống viêm [20], chống nấm, ký sinh trùng [53] có khả ngăn ngừa tế bào ung thư [28],[16] Thành phần hóa học Bàng xác định gồm có nhóm chất tanin, flavonoid, alkaloid, acid phenolic, saponin…[22] Trong đó, hợp chất nhóm tanin pyrogallic có thành phần phong phú Bàng đánh giá có tác dụng chống oxy hóa hiệu [29] Trong số nghiên cứu, hàm lượng chất xác định dựa hàm lượng acid gallic toàn phần với chất đối chiếu acid gallic chuẩn [10] Điều cho thấy tiềm lớn việc khai thác đưa Bàng trở thành loại dược liệu để phát triển dịng sản phẩm có tác dụng chống oxy hóa, kháng viêm có nguồn gốc từ thiên nhiên Tuy nhiên nay, loại dược liệu có giá thành rẻ số lượng dồi lại chưa tận dụng, khai thác sử dụng cách, Dược điển Việt Nam chưa có quy định tiêu chuẩn dược liệu cao dược liệu Bàng Để hướng tới phát triển dòng sản phẩm sản xuất từ Bàng, việc nghiên cứu dạng bào chế phù hợp cho dịch chiết dược liệu vô quan trọng Trong đó, cao khơ dạng bán thành phẩm trung gian phổ biến dễ bảo quản vận chuyển để tiếp tục chuyển sang dạng bào chế khác viên nang, viên nén, dung dịch, kem,…Việc lựa chọn điều kiện chiết xuất để đem lại hiệu suất chiết acid gallic tồn phần tối ưu đóng vai trị vơ quan trọng định đến giá trị chất lượng cao khô Đồng thời việc xây dựng tiêu chất lượng cho cao khô sau điều chế cần thiết để đảm bảo chất lượng cho chế phẩm trình lưu hành thị trường Vì vậy, đề tài “Nghiên cứu điều chế khảo sát số tiêu chất lượng cao khô Bàng” đề xuất nghiên cứu với nội dung chính: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng acid gallic tồn phần cao khơ Bàng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất, lựa chọn điều kiện tối ưu điều chế cao khô Bàng Khảo sát số tiêu chất lượng cao khô Bàng CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Bàng 1.1.1 Tên khoa học vị trí phân loại Tên khoa học: Terminalia catappa L Họ Bàng (Combretaceae) [1], [6], [7] Tên Việt Nam: Cây Bàng [1], [6], [7] Tên gọi khác: Quang Lang, chambok, barang parcang prang (campuchia), badamier (Pháp) [1], [6], [7] Theo phân loại Takhtajan “flowering Plants” (2009) vị trí phân loại Bàng giới thực vật sau: Giới: Plantae Ngành ngọc lan: Magnoliophyta Lớp ngọc lan: Magnoliopsida Phân lớp hoa hồng: Rosidae Bộ Sim: Myrtales Họ Bàng: Combretaceae Chi: Terminalia Loài: Terminalia catappa L 1.1.2 Phân bố Phân bố: Bàng nhiệt đới, có nguồn gốc Nam Á Ở Ấn Độ, mọc tự nhiên ven rừng nơi khơ cằn có nhiều sỏi đá Cây cịn trồng để lấy bóng mát xung quanh khu dân cư Bàng phân bố Malaysia, Thái Lan, Lào,… Ở Việt Nam, không thấy Bàng mọc trạng thái tự nhiên Cây trồng nhiều khu thị, ven đường đình chùa để lấy bóng mát, trừ vùng núi cao [1] 1.1.3 Đặc điểm thực vật Cây Bàng: Thuộc thân gỗ lớn, cao 8-10 m cao đến 20m, cành mọc vòng, tiết diện tròn, mọc đứng Thân gỗ màu nâu đậm, xù xì Thân non có màu xanh, thân có nốt sần màu nâu xám lông mịn màu nâu đỏ mọc đầu cành Thân phân cành nằm ngang gần mọc vòng làm thành nhiều tầng Tán mọc thẳng đối xứng, tán xòe rộng [1], [6], [7] bladder carcinogenesis and inhibition of γ-glutamyl transpeptidase-positive foci development in the liver of rats", Carcinogenesis, 4(7), pp 895-899 25 Int.AOAC International Methods Committee J AOAC (2011), " Standard method performance requirements-AOAC International methods commitee guidlines for validation of biological threat agent methods and/or procedures", 94, pp 13591381 26 Jagessar RC, Alleyne R (2011), "Antimicrobial potency of the aqueous extract of leaves of Terminalia catappa", Academic Research International, 1(3), pp 362 27 Karamac Magdalena, Kosiñska Agnieszka, et al (2006), "Content of gallic acid in selected plant extracts", Polish Journal of Food and Nutrition Sciences, 15(1), pp 55 28 Kashiwada Yoshiki, Nonaka Gen-ichiro, et al (1992), "Antitumor agents, 129 Tannins and related compounds as selective cytotoxic agents", Journal of Natural Products, 55(8), pp 1033-1043 29 Kinoshita S, Inoue Y, et al (2007), "Antioxidant and hepatoprotective actions of medicinal herb, Terminalia catappa L from Okinawa Island and its tannin corilagin", Phytomedicine, 14(11), pp 755-762 30 Khan Muhammad Kamran Abert-Vian Maryline, et al (2010), "Ultrasoundassisted extraction of polyphenols (flavonoid glycosides) from orange (citrus sinensis L.) peel", Food chemistry, 119(2), pp 851-858 31 Kotti P Punniya, Anand A Vijaya (2014), "Phytochemical analysis and in vitro antioxidant activity of Terminalia catappa", World Journal of Pharmaceutical Sciences, pp 1495-1498 32 Ksouri Riadh, Ksouri Wided Megdiche, et al (2012), "Medicinal halophytes: potent source of health promoting biomolecules with medical, nutraceutical and food applications", Critical reviews in biotechnology, 32(4), pp 289-326 33 Kumar V Dhana, Kokila G Sasi, et al (2021), "Phytochemical Profiles, In Vitro Antioxidant, Anti Inflammatory and Antibacterial Activities of Aqueous Extract of Terminalia catappa L leaves", Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 13(6), pp 340-346 34 Lin Chun-Ching, Kan Woei-Song (1990), "Medicinal plants used for the treatment of hepatitis in Taiwan", The American journal of Chinese medicine, 18(01n02), pp 35-43 35 Lin Yun‐Lian, Kuo Yueh‐Hsiung, et al (2000), "Flavonoid glycosides from Terminalia catappa L", Journal of the Chinese Chemical society, 47(1), pp 253256 36 Liu Tsung-Yun, Ho Li-Kang, et al (1996), "Modification of mitomycin Cinduced clastogenicity by Terminalia catappa L in vitro and in vivo", Cancer Letters, 105(1), pp 113-118 37 Mandloi Shikha, Srinivasa Rajashree, et al (2013), "Antifungal activity of alcoholic leaf extracts of Terminalia catappa and Terminalia arjuna on some pathogenic and allergenic fungi", Adv Life Sci Technol, 8(1), pp 25-7 38 Mininel Francisco José, Leonardo Junior Carlos Sergio, et al (2014), "Characterization and quantification of compounds in the hydroalcoholic extract of the leaves from Terminalia catappa Linn.(Combretaceae) and their mutagenic activity", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2014 39 Minsakorn Sutthida, Watthanadirek Amaya, et al (2021), "The anthelmintic potentials of medicinal plant extracts and an isolated compound (rutin, C27H30O16) from Terminalia catappa L against Gastrothylax crumenifer", Veterinary Parasitology, 291, pp 109385 40 Muhammad A, Mudi Y (2011), "Phytochemical screening and antimicrobial activities of Terminalia catappa, leaf extracts", Biokemistri, 23(1) 41 Muthulakshmi G, Neelanarayanan P (2021), "Evaluation of Antimicrobial Activities of Terminalia catappa Leaves’ Extracts against Bacterial and Fungal Pathogens", Indian Journal of Natural Sciences, 11(64), pp 976-997 42 Nair R, Chanda Sumitra (2008), "Antimicrobial activity of Terminalia catappa, Manilkara zapota and Piper betel leaf extract", Indian journal of pharmaceutical sciences, 70(3), pp 390 43 Neelavathi P, Venkatalakshmi P, et al (2013), "Antibacterial activities of aqueous and ethanolic extracts of Terminalia catappa leaves and bark against some pathogenic bacteria", Int J Pharm Pharm Sci, 5(1), pp 114-120 44 Nugroho Rudy Agung, Utami D, et al (2019), In vivo wound healing activity of ethanolic extract of Terminalia catappa L leaves in mice (Mus musculus), Journal of Physics: Conference Series, IOP Publishing,pp 012031 45 Oyeleye Sunday I, Adebayo Adeniyi A, et al (2017), "Phenolic profile and enzyme inhibitory activities of almond (Terminalia catappa) leaf and stem bark", International Journal of Food Properties, 20(sup3), pp S2810-S2821 46 Oyeniran Olubukola H, Ademiluyi Adedayo O, et al (2021), "Comparative study of the phenolic profile, antioxidant properties, and inhibitory effects of Moringa (Moringa oleifera Lam.) and Almond (Terminalia catappa Linn.) leaves on acetylcholinesterase and monoamine oxidase activities in the head region of Fruitfly (Drosophila melanogaster Meigen) in vitro", Journal of Food Biochemistry, 45(3), pp e13401 47 Salares Erik Francis, Balala Lotis (2018), "Phytochemical screening and antimicrobial activity of Terminalia catappa L leaf extract against potential pathogens of animals", Journal of Science, Engineering and Technology (JSET), 6, pp 15-26 48 Samuel BB, Olaniyi AA, et al (2009), "Phytochemical and Anti-sickling Activities of Terminalia catappa Linn", Journal of phytomedicine and therapeutics, 14 49 Senjaya Asep Arifin, Sirat Ni Made, et al (2023), "Ketapang Leaf (Terminalia Catappa L.) Metabolite Profiling with Aquadest Fraction Ethanol Extract Using UPLC-MS" 50 Sowmya Tumakuru Nataraj, Raveesha Koteshwar Anandrao (2021), "Polyphenol-rich purified bioactive fraction isolated from Terminalia catappa L.: uhplc-ms/ms-based metabolite identification and evaluation of their antimicrobial potential", Coatings, 11(10), pp 1210 51 Statistician Czitrom Veronica J The American (1999), "One-factor-at-a-time versus designed experiments", 53(2), pp 126-131 52 Sunday J Ameh Florence Tarfa, T Abdulkareem, Martha C Ibe (2010), "Physicochenmical Analysis of the Aqueous Extracts of Six Nigerian Medicinal Plants", Tropical Journal of Pharmaceutical Reasearch, 9(2), pp 120-125 53 Tanaka Takashi, Nonaka Gen-Ichiro, et al (1986), "Tannins and Related Compounds XLII.: Isolation and Characterization of Four New Hydrolyzable Tannins, Terflavins A and B, Tergallagin and Tercatain from the Leaves of Terminalia catappa L", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 34(3), pp 10391049 54 Tang Xin-Hui, Gao Ling, et al (2004), "Mechanisms of hepatoprotection of Terminalia catappa L extract on D-galactosamine-induced liver damage", The American Journal of Chinese Medicine, 32(04), pp 509-519 55 Tang Xinhui, Gao Jing, et al (2006), "Effective protection of Terminalia catappa L leaves from damage induced by carbon tetrachloride in liver mitochondria", The Journal of Nutritional Biochemistry, 17(3), pp 177-182 56 Toma Maricela, Vinatoru M, et al (2001), "Investigation of the effects of ultrasound on vegetal tissues during solvent extraction", Ultrasonics sonochemistry, 8(2), pp 137-142 57 Thomson Lex AJ, Evans Barry (2006), "Terminalia catappa (tropical almond)", Species Profiles for Pacific Island Agroforestry, 2(2), pp 1-20 58 Xie Y., Yang W., et al (2015), "Antibacterial activities of flavonoids: structureactivity relationship and mechanism", Curr Med Chem, 22(1), pp 132-49 59 Yen Hoang Thi, Linh Trinh Thi Thuy, et al (2015), "Optimization of phenolic compounds that have high antioxidant activity from Rhodomyrtus tomentosa (ait.) Hassk.(sim) in chi linh, Hai Duong", Academia Journal of Biology, 37(4), pp 509-519 60 Zhang Xiao-Rui, Kaunda Joseph Sakah, et al (2019), "The Genus Terminalia (Combretaceae): An Ethnopharmacological, Phytochemical and Pharmacological Review", Natural Products and Bioprospecting, 9(6), pp 357392 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Dược liệu bột dược liệu……………………………… PL-2 PHỤ LỤC Mẫu tiêu bản…………………………………………… PL-3 PHỤ LỤC Phiếu giám định tên khoa học…………………………… PL-4 PHỤ LỤC Giấy chứng nhận mã số tiêu bản………………………… PL-5 PHỤ LỤC COA chuẩn acid gallic…………………………………….PL-6 PHỤ LỤC Kết định tính nhóm hợp chất Polyphenol phản ứng hóa học………………………………………………………………… PL-7 PHỤ LỤC Sắc ký đồ thẩm định phương pháp định lượng acid gallic tồn phần cao khơ Bàng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)……………………………………………………………… ….PL-8 PHỤ LỤC 1: DƯỢC LIỆU VÀ BỘT DƯỢC LIỆU PL-2 PHỤ LỤC 2: MẪU TIÊU BẢN PL-3 PHỤ LỤC 3: PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PL-4 PHỤ LỤC 4: GIẤY CHỨNG NHẬN MÃ SỐ TIÊU BẢN PL-5 PHỤ LỤC 5: COA CHUẨN ACID GALLIC PL-6 PHỤ LỤC 6: KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH NHĨM HỢP CHẤT POLYPHENOL BẰNG PHẢN ỨNG HĨA HỌC Phản ứng Hiện tượng Hình ảnh Lơ Lơ Lô Kết luận Dịch Dịch chiết trong, màu ban đầu vàng nâu Phản ứng với FeCl3 5% Dung dịch chuyển từ màu vàng màu xanh xanh đen xuất tủa Dương tính (+) Phản ứng với chì acetat 10% Dung dịch màu vàng mâu xuất tủa bơng trắng Dương tính (+) Phản ứng với gelatin 1% Dung dịch xuất tủa bơng trắng Dương tính (+) PL-7 PHỤ LỤC 10 SẮC KÝ ĐỒ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ACID GALLIC TỒN PHẦN TRONG CAO KHƠ LÁ BÀNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Độ phù hợp hệ thống: ➢ Kết tiêm lần mẫu chuẩn uV 0 0 D a ta :TPH D a ta :TPH D a ta :TPH 0 0 D a ta :TPH D a ta :TPH 0 0 D a ta :TPH m m m m m m au au au au au au ch u a n ch u a n ch u a n ch u a n ch u a n ch u a n 0 l cd 0 2 l cd 0 l cd 0 l cd 0 l cd 0 l cd PD A PD A PD A PD A PD A PD A Ch1 Ch1 Ch1 Ch1 Ch1 Ch1 272nm 272nm 272nm 272nm 272nm 272nm ,4 n m ,4 n m ,4 n m ,4 n m ,4 n m ,4 n m 170000 160000 150000 140000 130000 120000 110000 100000 90000 80000 70000 60000 50000 40000 30000 20000 10000 -1 0 0 0 5 0 5 ➢ Kết tiêm lần mẫu thử uV Data1:TPH Data2:TPH Data3:TPH Data4:TPH Data5:TPH Data6:TPH 300000 275000 CBMD CBMD CBMD CBMD CBMD CBMD 2.1.lcd 2.2.lcd 2.3.lcd 2.4.lcd 2.5.lcd 2.6.lcd PDA PDA PDA PDA PDA PDA Ch1 Ch1 Ch1 Ch1 Ch1 Ch1 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 250000 225000 200000 175000 150000 125000 100000 75000 50000 25000 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 m in Độ lặp lại ➢ Sắc ký đồ ngày khảo sát ngày mAU mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 100 75 PDA Multi 272nm,4nm 7.136 7.136 75 50 25 25 6.600 6.600 50 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 0.0 12.5 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm 7.031 50 6.986 75 75 50 25 25 0 0.0 PDA Multi 272nm,4nm 2.5 5.0 7.5 10.0 0.0 12.5 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 PL-8 mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 PDA Multi 272nm,4nm 50 7.104 7.067 75 50 25 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min ➢ Sắc ký đồ ngày khảo sát ngày mAU mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 7.072 2.224 PDA Multi 272nm,4nm 75 7.403 50 50 25 6.568 1.934 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 15.0 mAU 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 PDA Multi 272nm,4nm 7.390 7.216 75 50 50 25 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 15.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 PDA Multi 272nm,4nm 50 7.291 7.398 75 50 25 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min ➢ Sắc ký đồ ngày khảo sát ngày mAU mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 7.386 7.368 75 50 50 25 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 0.0 12.5 PL-9 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm PDA Multi 272nm,4nm 75 50 50 25 25 7.347 7.383 75 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 0.0 12.5 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 PDA Multi 272nm,4nm 7.255 7.265 75 50 50 25 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min Độ tuyến tính uV Data1:G.chuan 0.0025.lcd PDA Ch1 272nm ,4nm 325000 Data2:GA.chuan 0.005.lcd PDA Ch1 272nm ,4nm Data3:GA.chuan 0.01.lcd PDA Ch1 272nm ,4nm Data4:GA.chuan 0.02.lcd PDA Ch1 272nm ,4nm Data5:GA.chuan 0.04.lcd PDA Ch1 272nm ,4nm 300000 Data6:GA.chuan 0.08.lcd PDA Ch1 272nm ,4nm 275000 250000 225000 200000 175000 150000 125000 100000 75000 50000 25000 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 m in Độ thu hồi ➢ Nồng độ 80% mAU mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 PDA Multi 272nm,4nm 7.116 7.188 75 50 50 25 25 0.0 100 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 PL-10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 7.127 75 50 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 ➢ Nồng độ 100% mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm 50 50 25 25 0.0 7.127 75 7.096 75 PDA Multi 272nm,4nm 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 15.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 7.134 75 50 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 ➢ Nồng độ 120% mAU mAU 100 100 PDA Multi 272nm,4nm PDA Multi 272nm,4nm 75 7.176 7.192 75 50 50 25 25 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0.0 15.0 2.5 5.0 7.5 mAU 100 PDA Multi 272nm,4nm 75 7.163 0.0 50 25 0.0 2.5 5.0 7.5 PL-11 10.0 12.5 15.0 10.0 12.5 15.0