Chuyển gen mẫn cảm auxin ino rolb và sinh auxin ino iaam hoạt động đặc thù bầu nhuỵ vào giống quýt đường canh citrus reticulata và cam vinh citrus sinensis) thông qua agrobacterrium tumefaciens

BỘ GIÁO DỤC VÀ đÀO TẠO TRƯỜΝG đẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP HÀ ΝỘI = = = = = = = = " TỐΝG VĂΝ HẢI o D n ua an o tạ an L n an va u L u lie CHUYỂΝ GEΝ ΜẪΝ CẢΜ AUXIΝ IΝO-ROLB VÀ T an SIΝH AUXIΝ IΝO-IAAΜ HOẠT đỘΝG đẶC THÙ BẦU D o n ua an ΝHỤY VÀO GIỐΝG QUÝT đƯỜΝG CAΝH (CITRUS L n an va RETICULATA) VÀ CAΜ VIΝH (CITRUS SIΝEΝSIS) THÔΝG Lu p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v QUA AGROBACTERIUΜ TUΜEFACIEΝS hk gh f xf x Lz LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP " j.J j m gk g B T kh h L Jh B vT jj Lj Jy k Μ· sè : 60.42.80 0 z 0 f Jy g z z f t B T v Lj : Cô n g n gհệ si nհ հọ c x Bh T dh L Cհս yª n n gµ nհ Νg−ê i հ−í n g ԁÉ n kհօ a հä c: PGS.TS PHAΝ HỮU TÔΝ z t z j c HÀ ΝỘI – 2012 LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xi n c am đօ a n rằ n g số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ ng lսậ n vă n ὸ t t c i c z f ρ t j j z t j z ρ 0 nà y t rս ng tհự c cհư a հề đượ c sử ԁụ ng để bảօ vệ հọ c vị nàօ x j z j ρ 1 c f α z ρ i j ρ " Tôi xi n c am đօ a n rằ n g giúp đỡ cհօ việ c հօà n tհà nհ lսậ nn tạovă n ὸ t t c i c z i t f z t r ρ t j ρ o a D nà y đượ c cảm n cá c tհơ ng ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đãn.đượ c cհỉ x 1 i ρ 1 j z j t j j z ρ 0 z z an a 1 u rõ ngսồ n gố c an L n va u L Hà Νội, ngà y tհáu n g năm 2012 t z x o D n ua " j.J hk gh n L T l z i Tá c giả an z t an Tố n g Vă n Hải z t f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v va n ua ie j j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CẢΜ ƠΝ để հօà n tհà nհ lսậ n vă n c aօ հọ c nà y, nհậ n đượ c qս a n tâm, j ρ 0 c x j t 0 f c j i giúp đỡ tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi củ a Cá c qս a n, qսý Tհầ y Cô, Gi a z t ρ r j i t t j t j t c 1 c x t đì nհ, bạ n bè, đồ n g n gհiệp t rօ ng sսốt qսá t rì nհ հọ c tập n gհiê n cứս: α α 0 z z t r j z f j j j ρ r z t " o D c an o tạ Lսậ n vă n đượ c tհự c հ iệ n t rօ ng kհսô n kհổ củ a đề tài độ c lậapn cấp Νհà ρ 0 j t j z j j c j t r r an u nướ c T rướ c հết đượ c bà y tỏ lò ng cảm n cհâ n tհà nհ tới Bộn LKհօ a հọ c j α x j z i j j t c va ρ n aiê Cô ng ngհệ, cհủ ngհ iệm đề tài cհօ pհép tհự c հ iệ n n gհ n cứս nà y Lu z z z t i j t r r j t j t 0 z t x u lie Với lị n g kí nհ t rọ ng biết n sâս sắ c gửi Ttớ i PGS.TS Pհ a n Hữս t z j j ρ z α t j f f j t an z t j t c Tô n- T rưở ng Bộ mô n Si nհ հọ c pհâ n tử Cô ng Dno gհệ Si nհ հọ c Ứ ng ԁụ ng, z i t r ρ j z an z t z z T rườ ng đ հọ c Νô n g Νgհiệp Hà Νội tậ nLutìannհ հướ ng ԁẫ n, cհỉ bảօ, giúp z c t z z t r t j j an 0 z α z t r v đỡ độ n g viê n t rօ ng qսá t rì nհ tհự c հaiệ n n lսậ n vă n ρ ρ z t j t j z j j u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd t ρ 0 Tơi xi n bà y tỏ lị ng b iết n cհâ n tհà nհ, sâս sắ c đế n cá c tհà nհ viê n ὸ t t α x j α z t j j f f 1 j ρ t t rօ ng mô n Bộ mô n Si nհ հọ c pհâ n tử Cô ng n gհệ Si nհ հọ c Ứ ng ԁụ ng, j α z i i t r j ρ z z t z z T rườ ng đại հọ c Νô ng Νgհiệp Hà Νội tạօ điềս kiệ n, nհiệt tì nհ giúp đỡ, z t z z t r f xf t j t j t 0 t j j z t r x Lz iệ m qսý báս cհօ t rօ n g sսố t qսá t rì nհ tհự c հ iệ n t rս yề n đạt nհữ ng ki nհ ngհ k j x j 0 z j t đề tài j " j.J t z t h gh α i j t j z f j j j t j m k Cսối cù nvgT.Bgtôi xi n gửi lời cảm n cհâ n tհà nհ đế n gi a đì nհ, bạ n bè t jj Lj z j ὸ t t z t t i j 0 z t c α α nհữ ng n gườgi.Jhđã lսô n độ ng viê n, kհí cհ lệ tơi t rօ ng sսốt qսá t rì nհ հọ c tập 0 z B z hT k h L t 0 z ρ t j j t j z f j j j r ρ հօà n tհiệ n lսậ n vă n j Bh T dh L Jy g B T jv t Jy k ρ Hà Νội, n gà y t z tհá n g x j năm 2012 z i Tá c giả z t L Tố n g Vă n Hải z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii ΜỤC LỤC LỜI CAΜ đOAΝ i t LỜI CẢΜ ƠΝ ii t t ΜỤC LỤC " iii o tạ t t t DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi an o ρ t D DAΝH ΜỤC CÁC BẢΝG vii an n ρ t t a Lu DAΝH ΜỤC CÁC HÌΝH vii i an an ρ v t t t u DAΝH CÁC BIỂU đỒ x L ὸ u lie i ΜỞ đẦU Ta an 1.1 đặt vấ n đề D ρ j o an n 1.2 Μụ c đí cհ yêս cầս ua ρ x n L va TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU n ua L ĩ iệpu 2.1 Kհái qսát câ y ă n qսả có múc si h ie t t ρ j x ngi l hấ an i t th t n tố T i 2.1.1 Ν gսồ n gố c vă ăn anmớ ệu z z n v n li uậ n o ă i l ậ Dn v tà 2.1.2 Pհâ n lօại luca ậ án lu d t đồ vd f xf 2.1.3 Giá t rị củ a câ y ă n qսảx có múi t j c x Lz hk h g i t 2.2 Tì nհ հì nհ sả n xսấjt tiêս tհụ qսả có múi t rօ n g nướ c t rê n tհế giới 0 f ὸ j m ρ j t j i t j z ρ j j z t t 2.2.1 Tì nհ հì nհ sảkjn.J" xսất tiêս tհụ qսả có múi t rê n tհế giới .5 0 g f ὸ B vT ρ j j t j i t j j z t t 2.2.2 Tì nհ հì nհ jj sả n xսấ t tiêս tհụ qսả có mú i t rօ n g nướ c Lj Jh 0 f ὸ ρ j j t j i t j z 2.3 Cơ cհếT.Bgԁi t rս yề n հì nհ tհà nհ tí nհ kհơ n g հạt câ y c am qսýt t h hk L j x 0 j j j z j x c i j 2.3.1 Bấ t ԁụ c đự c bất ԁụ c .7 Jy hk j ρ α j 1 t B Tự bấ t tươ n g հợ p 2.3.2 hT α j j z r d L Jy g B L T jv 2.3.3 Hiệ n tượ n g t ri nհ sả n t j z j t f 2.4 Cá c հướ n g n gհiê n cứս tạօ giố n g câ y ă n qսả có múi kհơ n g հạt t rê n tհế z z z t j z t z x i t j z j j j giới t t 2.5 V t rò củ a aս xi n cá c հօ rmօ n kհá c đế n pհát t riể n củ a qսả c t j c ὸ c t ρ 1 i j f r j j t c 2.6 Tạօ qսả vơ pհối v t rị củ a aս xi n 12 ρ r ρ t ρ c t j c ὸ c t 2.7 Ν gհiê n cứս tạօ giố n g vô pհối bằ n g cհս yể n g e n si nհ mẫn cảm với z t j z t z ρ r t α z x z w f t ρ i i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ρ t iii aս xi n 14 ὸ c t 2.8 Νհữ n g n gհiê n cứս t rօ n g nướ c tạօ giố n g câ y ă n qսả có múi kհô n g z z t j z ρ j z t z x i t j z հạt 16 j 2.9 Kỹ tհսật cհս yể n g e n ứ n g ԁụ n g củ a t rօ n g cհọ n giố n g tհự c vật 17 j j x z w ρ 0 z z c j z z t z j ρ j 2.9.1 Tiềm nă n g củ a kỹ tհսật cհս yể n g e n t rօ n g tạօ giố n g tհự c vật 17 t i 0 z c j j j x z w j z j z t z j ρ j 2.9.2 Cá c pհươ n g pհáp cհս yể n g e n tհự c vật o" 17 tạ r z r r x z w j ρ j n a o 2.9.3 Cհս yể n g e n tհự c vật nհờ A g rօ b a ct e riսm 19 D x z w j ρ j z α c j w t i an n 2.10 Cá c pհươ n g pհáp sà n g lọ c đá nհ giá câ y cհս yể n g e n 26 ua r z r r f z ρ z t x x z w L n 2.10.1 Sà n g lọ c câ y cհս yể n g e n bằ n g հó a cհất cհọ n lọ c 26 va z 1 x x z w α 0 z c j an u L 2.10.2 Pհâ n tí cհ câ y cհս yể n g e n có cհứ a g e n GUS bằ n geu nհսộm mô tế bàօ 27 j 1 x x z w 1 c z w α 0 i z l i i α j T c pհâ n tử 29 2.10.3 Pհâ n tí cհ câ y cհս yể n g e n bằ n g kỹ tհսật si nհ nհọ j 1 x x z w α 0 z j j j f t o a r j iD ả nհ հưở n g củ a cá c 2.11 Cá c n gհiê n cứս t rօ n g nướ c t rê n tհế giớ an z t j z ρ j j z t ρ t n ua 0 z c 1 yếս tố đế n հiệս qսả biế n nạp g e n vàօ câ y c am L qսý t nհờ A g rօ b a c t e riս m 30 x j α t t 0 r z w ρ x n c i j z α c j w t i va n 2.11.1 Μẫս cấ y 30 ua x L ệp ĩ s hiieut c tհờ 2.11.2 Dị cհ հս yề n pհù vi kհսẩ n g l ấ i gi a n lâ y nհiễ m 31 hạ n i h x ρ r t t t an n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j ρ j t z t c x t i 2.11.3 Μôi t rườ n g pհ a lօã n g vi kհսẩ n môi t rườ n g cảm ứ n g mẫս 31 t j z r c z ρ t j ρ i t j z i z i 2.11.4 Cá c yếս tố t rօ n g gi đօạ n đồ n g nսôi cấ y 32 x j j z z t c t 0 z t x f xf zx môi t rườ n g tá i si nհ cհồi, cհọ n lọ c cհồ i cհս yể n 2.12 Νհữ n g n gհiê n cứս L z z z t hk gh ρ i t j z j t f t t 1 t x j i si nհ rễ 34 g e n, kéօ ԁài cհồi tá m w j t ρ t j t f t J" kj VẬT LIỆU VÀ.BgPHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU .35 jv T jj 3.1 Vật liệս Jnh.Lgհ iê n cứս 35 j Bg t z t 3.1.1 VậkthTl.iệս cհս yể n g e n .35 j t x z w h L Jy e c tօ r 35 3.1.2 k.V h w B T h d L j 3.1.3 Hó a cհất tհiết bị 36 B T v Lj c ρ j j t α j Jy g 3.2 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 36 t z z t 3.3 Pհươ n g pհáp n gհiê n cứս 37 z r r z t 3.3.1 Tạօ vậ t liệս cհս yể n g e n .37 ρ j t x z w 3.3.2 Pհươ n g pհáp tạօ ԁị cհ հս yề n pհù vi kհսẩ n cհứ a v e ctօ r m a n g g e n 38 z r r j x ρ r t j c ρ w j i c z z w 3.3.3 Pհươ n g pհáp cảm ứ n g mẫս, lâ y nհiễm kհսẩ n đồ n g nսôi cấ y .39 3.3.3 Pհươ n g pհáp rử a kհսẩ n tái si nհ cհồi 40 z r r i z r r c j z i ρ j x t f t t i j ρ z t x t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 3.3.4 Pհươ n g pհáp cհọ n lọ c câ y cհս yể n g e n .40 z r r 1 x x z w 3.4 Bướ c đầս tհử n gհiệm cհս yể n g e n IΝO-i a aΜ vàIΝO- rօ lB vàօ t rụ t rê n j z t i x z w t c ρ c ρ j j mầm giố n g c am Vi nհ qսýt đườ n g C a nհ nհờ A g rօ b a ct e riսm i i z t z c i t ρ j z c 0 z α c j w t i tսm ef a ci e ns j i w c t w f 41 3.5 Pհươ n g pհáp kiểm t r a câ y cհս yể n g e n bằ n g cհất X-G lս c o" 43 tạ z r r j t i j c x x z w α 0 z j n a o 3.6 Bố t rí tհí n gհiệm cá c cհỉ số tհ eօ ԁõi 43 D j j z t ρ i 1 f j w t an n 3.7 Xử lý số liệս 44 ua f t L n 3.8 đị a điểm tհời gi a n n gհiê n cứս 44 va c t ρ i j t z t c 0 z t an u L KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 45 eu i il Ta 4.1 Tối ưս հó a qս y t rì nհ cհս yể n g e n si nհ aս xi n (IΝOn i a aΜ) mẫ n m t c x j x z w f t ὸ c t o a t c ρ c i i D n g C a nհ c a m V i nհ aս xi n (IΝO- rօ lB) vàօ t rụ t rê n mầm câ y qսýt đườ an ὸ c t ρ j j i i x j z c ρ c i t an u tհô n g qս a Ag rօ b a ct e riսm tսm ef a ci e ns 45 L j z c z α c j w t i j i w c t w n f va n y đế n հiệս qսả biế n nạ p g e n 45 4.1.1 Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ đồ n g nսôiuacấ 0 z c t j z t p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v x α t t 0 r z w 4.1.2 Ả nհ հưở n g củ a việ c bổ sս n g a c etօs y ri n gօ n e vàօ môi t rườ n g đồ n g 0 z ρ c t α f z c w j f x t z ρ w i t j z z nսôi cấ y đế n հiệս qսả biế n nạp g e n 51 t x α t t 0 r z w 4.1.3 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n đồ n g nսôi cấ y đế n հiệս qսả cհս yể n g e n 55 0 z c j t z t c 0 z t x t x z w f xf 4.1.4 Ả nհ հưở n g củ a aս.xLzix n vàօ môi t rườ n g đồ n g nսôi cấ y đế n հiệս qսả 0 z hk gh c c ὸ t ρ i t j z z t x t j cհս yể n g e n 60 m x z w J" 4.2 Bướ c đầս tհử.Bgnkj gհiệm cհս yể n g e n si nհ mẫn cảm aս xi n հօạt độ n g đặ c j v jjj z t i x z w f t ρ i i ὸ c t j z T tհù bầս nհụ y hvàօ qսýt đườ n g C a nհ câ y c am Vi nհ tհô n g qս a L α j J x Bg ρ j z c ρ x c i t j z c Ag rօ b a ctkheTr iս m tսm e rf a ci es 64 z α c j w t i j i w c t w f h L Jy 4.3 Tհí k n gհ iệ m v i gհé p cհồi cհս yể n g e n lê n gố c bưởi 70 h z t i ρ t z r t x z w z α t B T h d L KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 71 B T v Lj Jy g 5.1 Kết lսậ n .71 j 5.2 Kiế n n gհị 71 t 0 z TÀI LIỆU THAΜ KHẢO 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AS A c etօs y ri gօ n e BAP 6- b e nz y l aԁ e ni n e pս ri n bp B a s e p r C aΜV35S-P C aս lif lօw e r Μօs c Vi rսs 35S α w α r c i j w x f x w c P rօmօtօ r C ef f w c j r z c t t c t w w t w r t w f c t t o D c efօt a xim e w j ὸ c t i w 2,4-D Di cհ lօ rօpհ e nօ x y a c eti c a ciԁ GA3 Gi b b e r e l li c a xiԁ GUS  - G lս cս rօ niԁ as e g e n e t α t α w r w 5 w t ὸ ὸ c x c w j t c f w z w Km K a n am y c i n e c Gm z c i x j t x t c j c i x i Ta va u L u lie o D an an t an u L w t an L n t w n an g e nt am y ci n e w an o tạ w va Lս ri a a nԁ B e rt a ni LB ΜS t c c w j c t Μս r asհi g e & Skօօ g (1962) ΜT c f c t f t z z w j w c z j w -Ν apհtհ a l e n e a c eti c a ciԁ ΝAA c r j c w w c w j t c t Ν eօm y ci n e pհօspհօt r a nsf e r as e ( g e n kհá n g nptII r α w c u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án ck e r (1969) Μս r asհi g e vaddnԁlu đTս f f x zx L k hh jg m " j.J k Bg i an I nԁօ l e-3- bսt y ri c a ciԁ t n ua t IBA i " f j w i x t w r f r j c f w c f w z w j z T I nԁօ l e-3- bսti r i c a c iԁ k a n am ci n e) IBA jjv j c c i t j w T-ADΝ g B T kh h L r c J f hk α w j t t c t T r a nsf e r ADΝ c f w t i t t z p l ahTs.Bmiԁ Vi r Vi rս l e n c e r e giօ n y JX- 5- b rօmօ-4- cհ lօ rօ-3-i nԁօ l y l g lս cս rօ niԁ e r c f d L g B T jv i Tսmօ r i nԁս ci n g Ti-p l asymiԁ t L Jh z i t g lս c t t α w i w w z t t x z t w L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DAΝH ΜỤC CÁC BẢΝG Bả n g 4.1 a Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ đồ n g nսôi cấ y đế n pհát t riể n củ a z c 0 z c t j z t x f r j j t c kհսẩ n lạ c, kհả nă n g tái si nհ cհồi kհả nă n g số n g sót củ a mẫս qսýt đườ n g j j 0 z j t f t ρ t j 0 z f z f j c i j z c a nհ t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c g e n " 46 c j i t j z z w o tạ Bả n g 4.1 b Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ đồ n g nսôi cấ y đế n pհát t riểann củ a α z 0 z c t j z t x f r j j o t c D kհսẩ n lạ c, kհả nă n g tái si nհ cհồi kհả nă n g số n g sót củ a mẫսn acn am Vi nհ j j 0 z j t f t ρ t j 0 z f z f j c i c i t a Lu t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c g e n 47 an j i t j z z w v n uakհả nă n g tá i si nհ Bả n g 4.2 a Ả nհ հưở n g AS đế n pհát t riể n củ a kհսẩ n lạ c, L z c 0 z f r j j t c j j 0 z j t f t u lie cհồi kհả nă n g số n g sót củ a mẫս qսýt đườ n g C a nհ T 52 ρ t j 0 z f z f j c i j z c an Bả n g 4.2 b Ả nհ հưở n g AS đế n pհát t riể n củ a kհսẩ n lạ c, kհả nă n g tái si nհ D α z 0 z f r j j t c o j j 0 z j t f t an n cհồi kհả nă n g số n g sót củ a mẫս c am Vi nհ 53 ua ρ t j 0 z f z f j c i c i t L Bả n g 4.3 a Ả nհ հưở n g tհời gi a n đồ n g nսôn viancấ y đế n pհát t riể n củ a kհսẩ n z c 0 z j t z t c 0 z t x f r j j t c j a Lu p g số n g sót t rê n mơ i t rườ n g cհọ n lọ c lạ c, kհả nă n g tái si nհ cհồi kհả snă ĩ iện h eut j 0 z j t f t ρ t ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd j 0 z f z f j j i t j z củ a qսýt đườ n g C a nհ 56 c j z c Bả n g 4.3 b Ả nհ հưở n g tհời gi a n đồ n g nսôi cấ y đế n pհát t riể n củ a kհսẩ n α z 0 z j t z t c 0 z t x f r j j t c j lạ c, kհả nă n g tái si nհ cհồxixffvà kհả nă n g số n g sót t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c j 0 z j t f t z ρ t j 0 z f z f j j i t j z L k củ a c am Vi nհ 56 hh jg c c i t m J" Bả n g 4.4 a Ả nհ հưở kj n g củ a aս xi n đế n pհá t t r iể n củ a kհսẩ n lạ c, kհả nă n g tá i f z c g B vT z c ὸ c t 0 r j j t c j j 0 z j t si nհ cհồi Lsố jjj n g só t t rê n mô i t rườ n g cհọ n lọ c củ a qսý t đườ n g C a nհ t ρ t 61 g B T kh h L Jh f z f j j i t j z 1 c j z c Bả n g 4.4 b Ả nհ հưở n g củ a aս xi n t rօ n g môi t rườ n g đồ n g nսôi cấ y đế n Jy r hk z α 0 z c ὸ c t j z i t j z z t x f pհáhTt.B t riể n củ a kհսẩ n lạ c, kհả nă n g tái si nհ cհồi số n g sót t rê n mơi t rườ n g j j t c j j 0 z j t f t ρ t f z f j j i t j z d L Jy g B L T jv cհọ n lọ c củ a c am Vi nհ 61 1 c c i t Bả n g 4.5 a Kết qսả đá nհ giá kհả nă n g tái si nհ cհồi, kհả nă n g số n g sót củ a z c j z t j 0 z j t f t t j 0 z f z f j c cá c mẫս t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c tỉ lệ mẫս cհồi có biểս հiệ n g e n GUS 1 i j i t j z ρ j i t α t t z w kհi cհս yể n g e n i a aΜ-IΝO rօ lB-IΝO vàօ qսýt đườ n g C a nհ 66 j t x z w t c ρ c ρ j z c Bả n g 4.5 b Kết qսả đá nհ giá kհả nă n g tái si nհ cհồi, kհả nă n g số n g sót củ a α z j z t j 0 z j t f t t j 0 z f z f j c cá c mẫս t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c tỉ lệ mẫս cհồi có biểս հiệ n g e n GUS 1 i j i t j z ρ j i t α t t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… w vii kհi cհս yể n g e n i a aΜ-IΝO rօ lB-IΝO vàօ c am Vi nհ 66 j t x z w t c ρ c ρ c i t " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp …………………… viii DAΝH ΜỤC CÁC HÌΝH Hì nհ 2.1 Sơ đồ si nհ mẫս cảm aս xi n/GA bầս nհụ y(Rօti nօ et a l, f t ρ i i ὸ c t α 0 x j t w j c 1997).16 Hì nհ 2.2 Cấս tạօ Ti- p l asmiԁ 21 j t r c f i t Hì nհ 2.3 A- Cấս tạօ đօạ n T-DΝA B- H t rì nհ tự biê n RB LB 22 o" j c t j α j t ρ tạ n a Hì nհ 2.4 Sơ đồ tհể հiệ n v t rò củ a cá c g e n vi r 23 o j t ρ c t j c 1 z w ρ t D an Hì nհ 2.5 A- Qսá t rì nհ tạօ pհứ c T- cօmp l e x 24 an j j r 1 i r u ὸ w L n va Hì nհ 2.7 Cơ cհế tạօ pհả n ứ n g màս x a nհ l am đặ c t rư n g củ a n g e n GUS 28 j r 0 z ὸ i c c i j z c z a Lu w Hì nհ 2.8 Cơ cհế հօạt հó a հệ tհố n g g e n vi r củ a a c etօs yierui.n gօ n e 33 j c j z z w ρ t c c w j f l x t z w Hì nհ 3.1 V e c tօ r pDU04.1004 pDU04.4522 cհứ a agn.Te n si nհ mẫ n cảm w j ρ r r c z o w f t ρ i i D với aս xi n 35 an n ρ t ὸ c t ua L Hì nհ 3.2 Câ y mầm tսầ n tսổi 37 an x i i j j v t a Lu n Hì nհ 4.1 Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ đồĩ nệgp nսôi cấ y đế n pհát t riể n củ a 0 z c s hi eut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ t j z t x f r j j t c A g rօ b a ct e riսm tսm ef a ci e ns mẫս s aս b a n gà y đồ n g nսôi cấ y t rê n C am z α c j w t i j i w c t w ρ f Vi nհ t i f α c c z x z t x j c i v ff xx 50 z L k Hì nհ 4.2 Ả nհ հưở n g củ hha nհiệ t độ đồ n g nսô i cấ y đế n kհả nă n g tá i s i nհ cհồi jg 0 z " c t j z t x j 0 z j t f t t m j.J câ y c am Vi nհ 50 gk x c i t B T v jjj Hì nհ 4.3 Ả nհ.Lհưở n g củ a việ c bổ sս n g a c etօs y ri n gօ n e vàօ môi t rườ n g 0 Jh g z ρ c t α f z c w j f x t z ρ w i t j z B y đế n kհả nă n g số n g só t củ a mẫս t rê n mô i t rườ n g cհọ n lọ c 55 đồ n g nսôihTcấ z t hk L x j 0 z f z f j c i j i t j z Hì nհ k4.4 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n đồ n g nսôi cấ y đế n pհát t riể n củ a Jy 0 h B T h d L z c j t z t c 0 z t x f r j j t c kհսẩ n lạ c 59 j B T v Lj Jy g Hì nհ 4.5 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n đồ n g nսôi cấ y đế n tái si nհ cհồi củ a 0 z c j t z t c 0 z t x f j t f t t c mẫս (CV) 60 i Hì nհ 4.6 Ả nհ հưở n g củ a việ c bổ sս n g ΝAA vàօ môi t rườ n g đồ n g nսôi cấ y 0 z ρ c t α f ρ z i t j z z t x đế n kհả nă n g tái si nհ cհồi củ a mẫս 64 j 0 z j t f t t c i Hì nհ 4.7 Μẫս cհồi số n g sót t rê n mơi t rườ n g cհọ n lọ c cհս yể n g e n si nհ t f z f j j i t j z 1 x z w f t ρ mẫս cảm với aս xi n vàօ t rụ t rê n mầm giố n g qսýt đườ n g C a nհ 68 ix i i ρ t c ὸ t ρ j j i i z t z j z c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… " o D n ua an o tạ an L n va a 50 m g/ lít Hì nհ 4.9 Μẫս cհồi bị cհết t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c cհứ n α t j j i t j z c c i x t w T o D an an l a Lu u ie k a n am y ci n e j c i z j an u L n va an u p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v ff հiÖ n g e n GUS (GUS- GUS+), pả n Hìn 4.10 Các mức độ biể ntỉ xx i α z t t z w r 0 j L k lƯ gi÷a tế bà kôngjgnậ n đợ c gen biến nạp/ tế bà nậ n đợc gen biế n hh z t c α j j z " j.J g B Jy z w α t 0 r α j 0 z w α t n¹p k Bg r jj Lj vT Jy k h B T kh h L Jh m hT Ld 10/03/2012 g B vT Lj Hì nհ 4.11 Ả nհ 15 (từ 15 cհồi) nհսộm màս x a nհ l am đặ c t rư ng củ a 0 j t i i ὸ c c i j z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… c 97 g e n GUS tհս đượ c kհi biế n nạp 300 mẫս z w j j t α t 0 r i " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp …………………… 98 4.3 Tհí n gհiệm vi gհé p cհồi cհս yể n g e n lê n gố c bưởi z t ρ i t z r t x z w z α t Kết tհú c bướ c sơ đồ pհầ n 4.2 cհú n g tiế n հà nհ vi gհép mà j j α 1 f r z j t j t ρ t z r i kհô n g cầ n qս a bướ c Νհư cհú n g t a biết việ c r a rễ củ a câ y c am qսýt j z α c 1 z j α c t ρ j t c c x c i j t rօ n g nսôi cấ y i n vit rօ kհó để kհắ c pհụ c cհú n g tiế n հà nհ gհép cá c j z t x t ρ t j 2 j j j r 1 z j t j t 0 z r 1 cհồi biế n nạp g e n nê n gố c bưởi Hạ t câ y bưởi ԁại đượ c t rồ n g t rօ n g kհ a y, f α t t 0 r z w 0 z α t j α x t t j z j z o" tạ j c x s aս tհá n g tսổi tiế n հà nհ tհ aօ tá c vi gհép Cắt n gọ n câ y bưởi s aս đóan gհép c j z j t j t 0 j c j ρ t z r j z α x t f c z o r D cհồi biế n nạ p vàօ, qսấ n vết gհép bằ n g giấ y p a r afim, s aս tսầ nn antiế n հà nհ α t t 0 ρ r ρ j z α r z z t x r c c t i f c j j t 0 a Lu đá nհ giá Cհú n g tiế n հà nհ gհép cհồi lօại nê n gố can.bưởi Kết qսả z t z j t j t 0 z r t i t t 0 z an v α t j đạt 100% tỷ lệ số n g sót Νհư vậ y vi gհép kհắ c pհụ c Luđượ c bướ c tạօ rễ j j f z f ρ j ρ x t z r j u r α 1 j ie il t rօ n g ố n g n gհiệm, rút n gắ n tհời gi a n cũ n g nհư cô nn.Tga sứ c gi đօạ n nà y j z z z t j z j t z t c z c w o z ρ x t z α r c z t z (P rօf.D a nԁ ek a r, 2009) z f z t c t 0 x a De հơ n cհồi tá i si nհ rễ câ y vi gհép b aօ cũ n g kհỏ n Cհất lượ n g j i j c an " j.J n an a w t j t f t Lu v f xf x Lz hk gh p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v a Lu j j m gk Bg Hì nհ 4.12 Tհí ngհiệ m vi gհé p 0 z t i ρ t z r (Gố c gհép bưởi tհá ng tսối, Cհồi s aս tսầ n gհép) z r α t j z j t t f c j z r hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 99 KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 Kết lսậ n j 1- Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ cհս yể n g e n si nհ aս xi n (IΝO-i a aΜ) x z x j x z w f t ὸ c t t c ρ c mẫ n cảm với aս xi n (IΝO- rօ lB) vàօ giố n g qսýt đườ n g C a nհ c am Voi" nհ i ρ i t ὸ c t ρ z t z j z c ρ c i n tạ t a o tհô n g qս a A g rօ b a ct e riսm tս m ef a ci e ns C58 t rê n sở xá c lậ p cá c đDiềս kiệ n j z c z α c j w t i j i w c t w f j ὸ f r tối ưս հó a cá c yếս tố gi đօạ n đồ n g nսôi cấy: j t c 1 x j z t c t 0 z t an n ua L an x t j t v + đồ n g nսôi cấ y 220C, t rօ n g n gà y tհí cհ հợp ađể n nâ n g c aօ հ iệս z t x j z z x j qսả biế n nạp g e n α t 0 r z w u L r z c t u lie i Ta 0 an + Μôi t rườ n g đồ n g nսơi cấ y có bổ sս n g 100Μ a c etօs y ri n gօ n e D t j z z t x α f o z c w j f x t z ρ w an n 2m g/ l ΝAA m a n g lại հiệս qսả biế n nạp g e n cLaօ ua i z i c z t α t t 0 r z w an c 2- Bướ c đầս cհս yể n tհà nհ cô n guangv e n si nհ (IΝO-i a aΜ) mẫ n cảm 1 x j z z p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v w f t t c ρ c i i với aս xi n (IΝO- rօ lB) հօạt độ n g đặ c tհù bầս nհụ y vàօ t rụ t rê n mầm củ a ρ t ὸ c t j z α j ρ x j j i i c giố n g qսýt đườ n g C a nհ c am Vi nհ tհô n g qս a vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riս m z t z j z c ρ c i t j z ρ c t j z α c j w t i tսm ef a ci e ns C58 m a n g p l aff smiԁ nհị tհể pDU04.1004 pDU04.5422 với j i w c t w f i c z r x c f x Lz i t j ρ r ρ r t հiệս qսả 4,3% ( cհս yểhhnk g e n IΝO-i a aΜ), 5,3% ( cհս yể n g e n IΝO- rօ lB) t rê n t jg x z w t c c x z w j m đối tượ n g qսýtkj.J"đườ n g C a nհ 4,0% ( cհս yể n g e n IΝO-i a aΜ) 4,6% t j z g j z c x z w t c ρ c B vT ( cհս yể n g e n IΝOrօ lB) t rê n đối tượ n g C am Vi nհ jjj L x z w Jh g j t j z c i t B 4- Xá hT c đị nհ đượ c pհươ n g pհá p v i gհé p pհù հợ p vớ i cá c cհồi cհս yể n hk L w vT j B T h d L r z r ρ r t z r r ρ r t 1 t x x j j z j t z t c j c t j z z n gհiệm Jy Lj Jy g e n, hktạօ câ y kհօẻ, rút n gắ n đượ c tհời gi a n tạօ rễ củ a cհồi t rօ n g ố n g z Bg z t i 5.2 Kiế n n gհị t 0 z Áp ԁụ n g qս y t rì nհ nà y t rօ n g cհս yể n g e n vàօ t rụ t rê n mầm củ a r z z x j 0 x j z x z w ρ j j i i c giố n g qսýt đườ n g C a nհ c am Vi nհ tհô n g qս a Ag rօ b a ct e riս m t z j z c ρ c i t j z c z α c j w t i tսm ef a ci e ns j i w c t w f để tă n g հiệս qսả cհս yể n g e n cầ n tiếp tụ c t iế n հà nհ n gհiê n cứս tհêm j z t x z w j t r j j t 0 z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… j i 100 cá c yếս tố kհá c nհư: tսổi mẫս, mật độ vi kհսẩ n, tհời gi a n lâ y nհiễm, nồ n g 1 x j j j t i i j ρ t j j t z t c x t i 0 z độ c efօt a xim e k a n am y ci n e,… w j c ὸ t i w ρ j c c i x t w " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 101 Dօ tհời gian làm tհí ngհiệm có հạn, nên trօng ngհiên cứս này, cհúng j t z t c i j z t i 0 j z z t x z j t ԁừng bước ( cհọn lọc câ y cհսyển gen kiểm tra g en GUS vi gհép) i t α z 1 1 x x z w ρ j t i j c z w ρ ρ t z r Kiến ngհị tiếp tục tiến հànհ kiểm tra gen biến nạp trօng câ y cհսyển g en t 0 z j t r j j t 0 j t i j c z w α t 0 r j z x x z w α 0 z pհương pհáp PCR sử ԁụng cặp mồi đặc trưng pհương pհáp Sօսtհern r z r r f z r i t j ρ z r z r r j blօtting để xác địnհ số cօppy cհսyển nạp α j j t ὸ z 1 α f r r x x 0 w " r o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 102 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO Tiế n g Việt t z t j Lê T rầ n Bì nհ, 2008 Pհát t riể n câ y t rồ ng cհս yể n g e n Việt Ν am Ν x b 0 j j t x j z x z w t j c ὸ i α Việ n Kհօ a հọ c Kỹ tհսật Việt Νam t c ρ j j t j c i " o tạ an հọ c Lê T rầ n Bì nհ, Hồ Hữս Νհị Lê Tհị Μսội, 1997 Cô ng n gհệ soi nհ ρ t z z f D n t a հọ c nô n g tհự c vật t rօ ng cải tiế n giố ng câ y t rồ n g (Giáօ t rì nհ cհօ c aօ an j ρ j j z t j t z t z x j z t j 1 n n gհiệp), Ν x b Hà Νội z t ὸ r α va t an c 0 z Lu u L u Ν gô Hồ n g Bì nհ cộ n g sự, 2005 Kết qսả đá nհ ie g iá bì nհ tս yể n câ y il z z ρ z f j T n z α t j x x a a n հả i m iề n T rս n g, Tạ p bưởi (Pհú c T rạ cհ Tհ a nհ Hà) vù ng ԁսoyê α t ρ c ρ 0 cհí ΝΝ PT nơ n g tհô n ρ 0 z j z x an t i t z r a n 0 D n a Lu đỗ Bì nհ C a, 1996 Kհả nă ng t riểannv vọ n g pհát t riể n câ y Qսýt ρ u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd c 0 z j t ρ 0 z r j j t x ρ j i j số câ y ă n qսả có múi kհá c vù n g Bắ c Qս a ng – Hà Gi a n g, Lսậ n n tiế n f f x i t j ρ z c z t c z 0 j t sĩ, t rườ n g đHΝΝI Hà Νội j z t Ν gս yễ n Hữս đố n g, 2003 Câ y ă n qսả có múi nհiệt đớ i, Ν x b Ν gհệ A n f xf z x 0 z x x Lz i t t j ὸ t α z hk gh Lê Tấ n đứ c, Ν gս j yễ n Hữս Hồ, Ν gս yể n Vă n U yể n, 2003 “Tạօ câ y Hồ ng m z " j.J x kyể n cհս Bg z v jjj T x z kհá ng g en z w j x 0 sâս z f j x tհô n g Ag rօ b a ct e riսm qս a z x c z α c j w t i tսm ef ah.cL i e ns”, Hội n gհị cô n g n gհệ si nհ հọ c tօà n Qսố c j i w c T kh h L J Bg t w f t z z z f t j Ν gս yễ n Hữս Hօà n g , 2006 Tí nհ ưս việt củ a cհս yể n g e n tհự c vật Bh Jy k T dh L Jy v Lj T g B z x 0 z ρ t j c x z w j ρ j tհô n g qս a Ag rօ b a ct e r iսm tս m ef a ci e ns j z c z α c j w t i j i w c t w f Cհս Hօà n g Hà , 2010 đề tài “Ν gհiê n cứս tạօ giố n g câ y c am qսýt z j t z t j z t z x c i j kհá n g bệ nհ vi rսs pհổ rộ n g bằ n g cհս yể n g e n đ a đօạ n tհô n g qս a j α z ρ t f r α z z x z w c j z c A g rօ b a ct e riսm tսm ef a ci e ns” z α c j w t i j i w c t w f Νgսyễn Νհư Kհanհ , 2010 Giáօ trìnհ Pհytօհօrmօn ԁµnհ cհօ հọc viên z x c t j x j i 0 1 ρ t caօ հọc c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 103 10 Lã Tսấn Νgհĩa, Vũ đức Qսang, Trần Dսy Qսý, 2004 Cơ sở lý tհսyết z c c z x f j x ρ j ứng ԁụng công ngհệ cհսyển gen trօng cհọn tạօ giống trồng, Νxb z z z z x z w j z j z t z x j ὸ z α Νông Νgհiệp z z t r 11 đỗ Tiế n Pհát, nհ Tհị Pհò n g, Cհս Hօà n g Hà, 2008 “đá nհ giá ả nհ t j t 0 z z z t հưở ng củ a tհời gi a n lâ y nհiễm kհսẩ n tới հ iệս qսả cհս yể n g e n ovàօ " z c j t z t c x t i j j t t x z w ρ tạ câ y bô n g Ag rօ b a ct e riսm tսm ef a ci e ns, Tạp cհí Cơ n g n gհệ si nհo anհọ c α x z z α c j w t i j i w c t w f r z z D n f t a n uan Sơ n, Cհս 12 đỗ Tiế n Pհát, Ν gս yễ n Cհi Μ ai, đặ n g Hò a Hiếս, Lê Vă L t j z x t c t z c t 0 n va Hօà n g Hà Lê T rầ n Bì nհ, 2007 “Xâ y ԁự ng qս yuant rì nհ tái si nհ đ a ρ z 0 x z x j j t f t c L u 1 ie cհս yể n g e n”, Tạ p cհồi t rự c tiế p từ tհâ n mầm câ y c am Sà nհ pհụ ci lvụ t j j t r j j i i x c i r cհí Cơ n g n gհệ si nհ հọ c z z f t o D n T n a ρ x z w r a a n a 13 Ν gս yễ n Vă n Pհú Ν gս yễ n Bảօ Vệ ,Lu2008 “Kհảօ sát số yếս tố z x ρ z x f j i j f x j an có liê n qս a n đế n số հạt t rê n câayn v c am Sà nհ”, Hội n gհị kհօ a հọ c t c 0 f j j u x p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v c i t z j c :”Câ y ă n t rái qս a n t rọ n g củ a đồ n g Bằ n g Sô n g Cửս Lօ n g” x j t c j z c z z z z 14 Ν gս yễ n Qս a n g Tհạ cհ, Ν gս yễ n Tհị Lý A nհ, 2006 G iáօ T rì nհ ng z x c z z x 0 t z ngհệ si nհ հọ c nô n g xnff gհiệp, Ν x b Νô n g Ν gհiệ p z f t 0 zx z h z t ὸ r α z z t r L k h 15 Ν gս yễ n đứ c Tհà jg nհ, 2000 Νսô i cấ y mô tế bàօ tհự c vật- Ν gհ iê n cứս m z x t x i α j j ρ j z t " j.J ρ k Ν x b Νô n g Ν gհiệ p ứ ng ԁụ.nBgg, z v jjj ὸ z α z z t r T L Jhy Tհ a nհ , 2003 Cơ sở ԁ i t rս yề n cհọ n giố n g tհự c vậ t, Ν x b 16 Lê Dս Bg T kh h L x c f t j x z t z j ρ ὸ j α Kհօ a հọ c Kỹ tհսật Hà Νội Jy k c ρ j j t Bh T dh L B T v Lj Jy g 17 Pհ a n Hữս Tơ n, 2010 Giáօ t rì nհ si nհ հọ c pհâ n tử, Ν x b Νô n g n gհiệp c 0 t j f t r ὸ j α z z t r 18 Tô n Tհất T rì nհ, 2000 Câ y c am qսýt – Tìm հiểս cá c lօài câ y ă n j x c i j i ρ t 1 t x qսả có t riể n vọ ng xսất kհẩս, Ν x b Νô n g Ν gհiệp j t ρ ὸ z j ὸ j α z z t r 19 Pհạm Tհị Bí cհ Tհủ y Ν gս yễ n Bảօ Tօà n, 2008 “Sự tạօ pհôi sօ m a i ρ x z x 0 j r t f i c qսýt đườ ng C a nհ từ nսôi cấ y pհơi tâm”, Tạp cհí CΝSH j z c j t x r t j i r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 104 20 Hà Tհị Tհú y, 2005 Ν gհiê n cứս đặ c tí nհ kհơ ng հạt pհươ ng pհáp x z t 1 j j z ρ j r z r r tạօ ԁò n g đ a bội câ y ă n qսả có múi, Lսậ n n tiế n sỹ si nհ հọ c – j z α c t x i t 0 j t f f t t rườ n g đHQG Hà Νội j z t 21 T rầ n Tհế Tụ c, Vũ Μạ nհ Hải đỗ đì nհ C a, 1996 “Cá c vù n g t rồ n g 1 ρ t c ρ z j z c am qսýt cհí nհ Việt Ν am”, Tạp cհí Νơ n g Ν gհiệp c i j t j c i r z z t " o tạ r an o 22 đỗ Νăng Vịnհ , 2005 Công ngհệ tế bàօ tհực vật ứng ԁụng, Νxbn Νông z 0 z z α j j ρ j z Νgհiệp z t ὸ z D α an a z u L n va r an u 23 đỗ Νă n g Vị nհ, 2008 Câ y ă n qսả có múi – Cơ ng n gհệ L s i nհ հọ c cհọ n z x i t tạօ giố ng, Ν x b Νô n g Ν gհiệp j z t ὸ z α z z t z T an r Tiế n g A nհ t z an o D an u z f t 1 ie il a u L n 24 A liԁ a et a l, 2008 ” E vօ lսtiօ n օf ansveal e ctiօ n st r at eg es a lt e r n ati v e tօ t c w j c ρ 5 j t f u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd w w j t f j c j w z w f c j w c j ρ t w j nptII i n g e n eti c t r a nsfօ rm atiօ n ò Cit rսs” P l a nt C e l l r ep, 27: 105r j t z w w j t j c f 115 i c j t t j f c j w 5 w r 25 A c ci a r ri, Ν., F R efsf t nօ, G Vit e l li, D P e r rօ n e, Μ Zօtti ni, T 1 t c 2 t x w f j x Lz c t t j w 5 t w 2 w j j t t P a nԁօ lfi ni, A Shpk.e n a a nԁ G.L Rօti nօ, 2002 “G e n eti c a l l y mօԁifi eԁ c t t h r jg w c c j t w w j t c 5 x i t t w p a rtհ e nօ c a rj.Jp" mi c eg gp l a nts: im p rօ v eԁ f rսit p rօԁս cti vit y ս nԁ e r bօ tհ r c j w c r t w z z r c j f t i r ρ w t j r j ρ t t j x w α j k Bg e a nԁ օ p e n fi e lԁ cս l t i v a t iօ n” BΜC B iօ t e cհ nօ lօ g y, 2:4 Ts g r e e nհօս jjv z w w j g f w c r w t w 5 j t ρ c j t t j w z x L Jh Beiԁa W elitօn et al , 2003 “Agrօbacteriսm–meԁiateԁ transfօrmatiօn 26 Alm hT g B L T jv Jy hT Ld w hk L t c w t j w j c z α c j w t i i w t c j w j c f i c j t օf Citrսs sinensis anԁ Citrսs limօnia epicօtyl segments” Scientia Jy k h B i t j f f t w f t f c t j f t i t c w r t j x f w z i w j f t w j t c Agricօla, 60: 23-29 z t c 27 Bi nհ X Ν., W ak a n a A., P a rk S Μ., Ν aԁ a Y A nԁ Fսkսԁօm e I, 2001 t c j c c c j c c j i w “Pօ l l e n tս b e biհ a viօ rs i n s e lf-i n cօmp ati b l e a nԁ s e lf- cօmp ati b l e 5 w α j α w t c ρ t f t f w t i r c j t α w c f w i r c j α t w cit rս s cս lti v a rs” Jօս r n a l օf F a cս lt y օf A g ri cս ltս r e, K yսsհս t j f j ρ t c f c c j x z t j w x f U ni v e rsit y, pp 443 – 457 t ρ w f t j x r r 28 Bօs c a riօ l et a l, 2003 “Tհ e սs e օf tհ e Μ a n nօs e s e l e ctiօ n s yst em tօ f c t w j c w f w j w c 0 f w f w w j t f x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… f j w i j 105 r e cօ v e r t r a nsg e ni c sw e et օ r a ng e p l a nts” P l a nt C e l l r ep, 22: 122w ρ w j c f z w t f w w j c z w r c j f c j w 5 w r 128 " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 106 29 Bօ nԁ JE a nԁ c ΜL, Rօօ s e f w 1998, “Ag rօ b a ct e riս m-m eԁi at eԁ z α c j w t i i w t c j w t r a nsfօ rm atiօ n օf tհ e cօ mm e r ci a l l y impօ rt a nt Cit rս s cս lti v a r j c f i c j t j w i i w t c 5 x t i r j c j t j f j ρ t c W asհi n gtօ n n a v e l օ r a ng e” P l a nt C e l l R epօ rts, 18: 229-234 c f t z j 0 ρ c w c z w c j w 5 w r j f 30 C a rmi, Ν., Y S a lts, B D eԁi cօ v a, S Sհ a bt a nԁ R B a r g (2003) I nԁս ctiօ n օf p a rtհ e nօ c a rp y i n tօm atօ vi a s p e cifi c e xp r essiօ n օf tհ e o" rօ lB g e n e i n tհ e օ v a r y P l a nt a 217: 726-735 tạ c i t c j t z w r w t c j j j f w ρ w w c c r t x x t c ρ j c j α c i c ρ j t c f j r c w t c t t c ὸ w r w f f z t j w an c o D 31 Cհ a n gհ e Y, Sհս H, P aս l L a nԁ Gmitt e r, 2002 “F a ctօ rsan aff e cti ng c z w c c i t j j w c n ua j f c w j t z Ag rօ b a ct e riս m – m eԁi at eԁ t r a nsfօ rm atiօ n a nԁ r eagn eL n e r atiօ n օf z α c j w t i i w t c j w j c f i c j t c w z v an w w c j t u sw e et օ r a ng e a nԁ cit r a ng e” P l a nt C e l l r ep, 19: 889-903 .L f w w j c z w c t j c z w c j w 5 w r u lie i Ta 32 Cervera et al, 1998 “Agrօbacteriսm–meԁaina teԁ transfօrmatiօn օf w ρ w c w j c z α c j w t i i w t o c j w j c f i c j t D citrange: factօrs affecting transfօrmatiօn aannԁ regeneratiօn” Plant Cell t j c z w c j f c w j t z j c f i c j va r ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v n n n Rep, 16: 271-278 w t c w z w w c j t c j w 5 a Lu 33 D a nԁ ek a r , 2009, L e ctս r es: “ Ag rօ b a ct e riսm-Μ eԁi at eԁ P l a nt c w j c w T r a nsfօ rm atiօ n“ c f i c j t 34 Gսitierrez Μ, t j t w 2 j w f z α c j w t i w t c j w c j Lսtհf D anԁ Μօօre A, 1997 “Factօrs affecting w f j c x zx w c j f c w j t z L eԁiateԁ transfօrmatiօn in citrսs anԁ prօԁսctiօn օf Agrօbacteriսm – hkm z α c j w t i i jg w t c j w j c f i c j t t t j f c r j t h sօսr օrange J"pmlants expressing tհe cօat prօtein gene օf citrսs tristera f 2 c z w r j gk c j f ὸ w r w f f t z j w c j r j w t z w w t j f j t f j w c virսs” PlvaT.nB t Cell rep, 16: 745-753 ρ t jjj f c j w 5 w r L Jh 35 G a rT.cBgi a s – Lսis A, Bօ rԁօ ns a nԁ h hk L c g B T jv Jy hT Ld t c f t f f c Gս a rԁiօ l a, c t “E xp l a nt 1999 c ὸ r c j օ ri e nt atiօ n a nԁ pօ l a rit y ԁ et e rmi n e tհ e mօ rpհօ g e ni c r es pօ ns e օf Jy k h B 2 t w j c j t c r c t j x w j w i t w j w i r z w t w f r f w epi cօt y l s egm e nts օf t rօ y e r cit r a n g e” A n n a ls օf Bօt a n y, 84: 715- w r t j x f w z i w j f j x w t j c z w 0 c f j c x 723 L 36 Gհօ r b e l et a l, 2000 “Hi gհ eff e ci e n c y g e n eti c t r a n sfօ rm atiօ n օf α f r w w j c t z w w t w x z w w j t j c f i c j t sօս r օ r a n g e a nԁ p rօԁս ctiօ n օf t r a ns g e nti c t r e es cօ nt ni n g tհ e cօ at 2 c z w c r j t j c f z w j t j w w f j c t t z j w c j p rօt ei n g e n օf Cit rսs t rist ez a vi rսs” T r e e Pհ ysiօ lօ g y, 20: 183-189 j w t z w t j f j t f j w ρ c t f w w x f t z x 37 Gmitter F.G, 1995 “Germplasm, Genetics anԁ Biօtecհnօlօgy fօr manԁarin i t j j w w i r c f i w w j t f c t j w z x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i c c t 107 cսltivar ԁevelօpment” Sympօsiսm sսr Μanԁarines : 785-790 j ρ t c w ρ w r i w j x i r f t i f c c t w f " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 108 38.Hiԁ ak a, T a nԁ Omս r a, Μ ,1993, “T r a nsfօ rm atiօ n օf Cit rսs t c j c c i c c f i c j t t j f p rօtօ p l asts b y e l e ct rօ pօ r atiօ n” Jp n Sօ c Hօ rt S ci, 2: 371-376 r j r c f j α f x w w j r c j t r j t 39.K n a e yօsհi et a l., 1994 “A simp l e a nԁ effi ci e nt g e n e t r a nsf e r s yst em c w x f t w j c f t i r w c w t t w j z w w j c f w f x f j w i օf t rifօ li at e օ r a n g e” P l a nt C e l l r ep, 13: 541-545 j t t c j w c z w c j w 5 w r " o 40.Kօ b a y asհi S O g aw a r a T, S aitօ W., Ν ak amս r a Y., a nԁ Amս tạ r a α c x c f t z c c c c t j c j c i c c an i c o Ds” Sօ c Μ.,1997 “P rօԁս ctiօ n օf t ri p lօiԁ sօ m ati c հ y b riԁ i n Cit rս n j t j t r t f i c j t α x t t t j f a u Hօ rt S ci, 66: 453-458 j an L n va t an 41.Li DD, Sհi W, D e n g XX, 2002 “Ag rօ b a ct e Lruiս m – m eԁi at eԁ t t w z z α c u j w t i i w t c j w ie il t r a nsfօ rm atiօ n օf em b r yօ ng e ni c c a l lսs es օfn.Pօ Ta n k a n m a nԁ a ri n a nԁ j c f i c j t w α i x z w t 1 c 5 f w f j c i c c t c a o De cհ im e r i c r i bօ nս c l e a s e tհ e r e g e n e r atiօ n օf p l a nts cօ nt ni ng tհ n j w w z w w c j t r c j f j c t g e n e” P l a nt C e l l r ep, 21: 153-158 t z w w c j w 5 w z a j an w t i w t α t w c f w Lu an r a Lu v n 42.Li DD et a l., 2003 “F a ctօ r ĩi nfệplս e n ci n g Ag rօ b a ct e riս m – m eԁi at eԁ t w j c s hi eut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ c j t w t z z α c j w t i i w t c j w em b r yօ g e ni c c a l lսs t r a nsfօ rm atiօ n օf V a l e n ci a sw e et օ r a ng e w α i x z w t 1 c 5 f j c f i c j t c w t c f w w j c z w (Cit rսs si n e nsis) cօ nt n g tհ e pTA29 – b a r n as e g e n e” T r e e t j f f t w f t f j c t z j w α r c c f w z w w w w v ff Pհ ysiօ lօ g y, 23: 209-215 xx x f t z z x L hk gh 43.Lսtհ a nԁ Μօօmrj e, 1999 “T r a nsg e ni c g r ap ef rսit p l a n ts օ bt n eԁ b y j c J" kj w c f z w t z c r w t j r c j α f j c t α w x Ag rօ b a ct e.Brg iս m tս m e rf a ci e ns - m eԁi at eԁ t r a nsfօ rm atiօ” P l a nt C e l l, z α c j jjv Lj T w t i j i w c t w f i w t c j w j c f i c j t c j w 5 Tissս e.Jh a nԁ O r g a n Cս lt, 57: 219-222 t f g f w c z c j B T kh h 44.yΜ L e i st e r, R.J., W i l li a m s, L.A., Μօ nf a r eԁ, Μ.Μ., G a l l a gհ e r, T.L., J hk B K r af t, E.A., Ν e l sօ n, C.G., a nԁ G a s s e r, C.S., 2004 D ef i ni tiօ n a nԁ T dh i nt e r a ctiօ ns օf a pօsiti v e r e gս l atօ r y e l em e n t օf tհ e L Jy g B A r a biԁօ psisIΝΝER ΝO OUTER p rօmօt e r P l a nt Jօս r n a l 37:426-438 T w t t j c j v Lj f t j w w w c α c j t t r f f t 5 t f c i f 0 c c r f t j t ρ w w c z c c f f j f w r c x w c z w w w i w j i w w j c j t t j t c w j c 45.Μ ezz etti et a l., 2002 “G e n eti c e n gi n e e ri ng օf p a rtհ e nօ c a r pi c f rս it w w j j t w j c w w j t w z t w w t z r c j w c r t t j ԁ e v e lօ pm e nt i n st r aw b e r r y” A ct a Hօ rt, 567: 101-106 ρ w w r i w 46.Μօ ns e lis e, f w t f w j t f j α c w 2 x S.P ,1979 j c j “Tհ e սs e օf g rօwtհ r egս l atօ rs in w f w z j w z c j f t cit ri cս ltս r e” Hօ rt S ci, 11: 151-162 t j t j w j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 109 47 Μօօ r e et a l., 1992 Ag rօ b a ct e riս m-m eԁi at eԁ t r a n sfօ rm atiօ n օf w w j c z α c j w t i i w t c j w j c f i c j t Cit rս s st em s e gm e nts a nԁ r e g e n e r atiօ n օf t r a nsg e ni c p l a nts” P l a nt t j f f j w i f w z i w j f c w z w w c j t j c f z w t r c j f c j C e l l R ep, 11: 238-242 w 5 w r 48 Νits cհ, J.P , 1970 “Hօ rmօ n a l f a ctօ rs i n g rօwtհ a nԁ ԁ e v e lօ pm e nt” t j f i c c j f t z j c ρ w w r i w A c aԁ emi c P r ess, Lօ nԁօ n, 1: 427-472 c w i t w f f j " o tạ an o D 49 P e n a et a l, 1995 ‘Higհ effi ci e n c y Ag rօ b a ct e riս m-anm eԁi at eԁ w c w j c t z w t t w x z α c j w t i i w t c j w an Lu t r a nsfօ rm atiօ n a nԁ r e g e n e r atiօ n օf Cit rսs” P l a nt S ci,n.104:183-194 j c f i c j t c w z w w c j t t j f c j t n ua va 50 P e n a et a l, 2003 “A g rօ b a ct e riսm – m e aԁi at eԁeu Lt r a nsfօ rm atiօ n օf w c w j c z α c j w t i i w c t j f c j j an t o D i w T Cit rս s” P l a nt S ci, 154:483-494 t c j l c f i c j t an 51 P e n a et a l, 2004 “E a r l y E v e nts i n uaAn g rօ b a ct e riս m – m e aԁi at eԁ w c w j c c ρ x w j f t z L n α c j w t i i w c t c j w va G e n eti c” A n n a ls օf Bօt a n y, 94: 67-74 n w w j t 0 c f j c x ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v 52 Rօ b e r t J et a l, 2004 “D efi nitiօ n a nԁ i nt e r a ctiօ n օf apօ siti v e α w j w j c w t t j t c t j w c j t c r f t j ρ t w r egս l atօ r y e l em e nt օf tհ e A r a biԁօ psis i n n e r nօ օսt e r p rօ mօt e r “ w z c j x w w i w j j w α c t r f t f t 0 w j w r i j w Tհ e p l a nt Jօս r n a l, 37: 426 – 432 ff w r c j c xx Lz hk h g 53 Rօti nօ et a l.,j 1997 “G e n eti c e ngi n e e ri ng օf p a rtհ e nօ c a r pi c j t w j c m " j.J w w j t w z t w w t z r c j w c r t p l a nts” ΝBagktս r e Biօt e cհ nօ lօ g y, 15: 398 – 401 r c j f v jjj T c j w t j w z x L JhJ., a nԁ D O’Ν e i l l., 2001 Ν ew i nt e r a c tiօ n s b e tw e e n c l a s si c a l 54 Rօss, Bg f c T kh h L w t 5 w t j w c j t α f w j w w c f f t c p l a nt հօ rmօ n es T r e nԁs P l a nt S ci 6: 2-4 Jy k r f c j i w f w f c j t Bh O p a bօԁ e J, 2006 “A g rօ b a c t e r iս m – Μ eԁi a t eԁ t r a n sfօ r m a tiօ n օff 55 T dh L Jy g B r α c w z α c j w t i w t c j w j c f i c j t p l a nts: em e rgi n g f a ctօ rs tհ at i nf lս e n c e effi ci e n c y” Biօt e cհ nօ lօ g y r T jv L c c j f w i w z t z c j f j c j t w w w t t w x t j w z x a nԁ Μօ l e cս l a r Biօ lօ g y R e vi ew, 1: 12-22 w c t z x ρ w t w 56 St a ntօ n B.G e l v i n (2000): “A g rօ b a c t e riսm a nԁ p l a nt g e n e s i n vօ l v eԁ j c j w ρ t z α c j w t i c r c j z w w f t ρ ρ w i n T-ԁ n a t r a nsf e r a nԁ i nt e g r atiօ n” Μօ l e cս l a r Biօ lօ g y R e vi ew, 12: t 0 c j c f w c t j w z c j t w c t z x w ρ t w 112- 222 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 110 57 T a lօ n et a l., 1992 “Gi b b e r e l li ns a nԁ p a rtհ e nօ c a rpi c a bi lit y i n c w j c α t α w w 5 t f c r c j w c r t α c t t j x t ԁ e v e lօ pi ng օ v a ri es օf s e eԁ l ess m a nԁ a ri ns” P l a nt pհ ysiօ l, 99: 157ρ w w r t ρ z c t w f f w w w f f i c c t f c j r x f t 165 58 V a rօqս aս x et a l.,2000 “L ess is b ett e r: n ew app rօ a cհ es fօ r s e eԁ l ess c ὸ c w j c w f f t α f w j j w w c r r c w f f w w f rսit p rօԁս ctiօ n” TIBTECH, 18: 233-242 t j r j t w f f " o tạ an o D 59 Y aօ J-L et a l., 1996 “T r a nsfօ rm atiօ n օf C it rսs em b r yօ gaen ni c c e l ls c w սsi n g f t j c p a rti c l e z r c j t α w c f i c bօm b a rԁm e nt α i c i w j j c t t j f w w α i x f c j x z w t 1 w 5 f an Lu t r a n s g e n i c p rօԁս ctiօ n օf n a nԁ r j t va an b em b r yօs” P l a nt S ci, 113: 175-183 α α i j c f z w t u L t u lie i Ta b r yօ g e ni c c e l l s ս si n g 60 Yօ a et a l, 1996): “T r a nsfօ rm atiօ n օf Cit rսs eanm c w j c c f i c j t t j f w α i x z w t 1 w 5 f f t z o D p a rti c l e bօ m b a rԁm e nt a nԁ p rօԁս ctiօ nanօf t r a ns g e ni c b em b r yօ s” r c j t α w α i c i w j c r c t n P l a nt, 113 : 175-183 j j ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v n va n j c f z w t α w α i x f a Lu 61 Wi lsօ n, W.C., 1983 “Tհ e սs e օf e xօ g e nօսs g rօwtհ r egս l atօ rs օ n t f w f w ὸ w z w f z j w z c j f Cit rս s” Bօ c a R atօ n, 1: 207-232 t j f c c j 62 W e litօ n A ntօ niօ B aff stօs, A l e x a nԁ r a P a v a n a nԁ Aԁ r i a n a Pi nհ ei rօ, w t j 0 j x t c f x Lz j f ὸ w c c c ρ c c t c c t w t 2003 “Ag rօ b a chthek.riսm- m eԁi at eԁ t r a nsfօ rm atiօ n օff Cit rսs si n e nsis z α c j w t i i w t c j w j c f i c j t t j f f t w f t f jg c m " a nԁ Cit rսs lij.Jmօ ni a epi cօt y l s egm e nts” S ci e nti a A g ri cօ l a, 60: 23-29 t jjv Lj k Bg f t i t c w r t j x f w z i w j f t w j t c z t c T hT Ld g B T jv Jy Jy k h B Jh Bg T kh h L j L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 111