Phân tích các thành phần biến đổi gen có trong thức ăn chăn nuôi

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Ọ  ĐỀ TÀI: “ Â Í Á R À Ầ B Ế ĐỔ Ứ Ă Tên sinh viên Ă ” : Nguyễn Thị Thảo n : Công nghệ sinh học GV ƣ n d n : PGS GV đồn : TS Phạm Thị Dung ƣ ng d n ƣu Min Hà Nội, tháng 7/ 2022 úc E Ờ MĐ Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thời gian qua Những số liệu kết nghiên cứu trung thực, hoàn toàn đƣợc thực phòng Giám định Sinh vật Sản phẩm biến đổi gen, Viện Di truyền Nông nghiệp, không chép nguồn khác Ngoài ra, báo cáo có sử dụng số nguồn tài liệu tham khảo đƣợc trích dẫn nguồn thích rõ ràng Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan trên! Hà Nội, ngày 22 tháng 06 năm 2022 Sinh viên thực uyễn ị ảo i Ờ ẢM Ơ Để hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp này, ngồi nỗ lực thân, tơi cịn nhận quan tâm giúp đỡ nhiều tập thể cá nhân Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc tới PGS TS Lưu Minh Cúc - Viện Di truyền Nông nghiệp TS Phạm Thị Dung - Bộ môn Công nghệ Sinh học phân tử - Khoa Công nghệ Sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện cho tơi, hướng dẫn tận tình, chu đáo giúp tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Bên cạnh đó, tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu, nhiệt tình tập thể cán phòng Giám định Sinh vật Sản phẩm biến đổi gen Viện Di truyền Nông nghiệp, nơi tiến hành khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô Bộ môn Sinh học Phân tử - Khoa Công nghệ Sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam có ý kiến đóng góp để tơi hồn thành khóa luận cách hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu đó! Hà Nội, ngày 22 tháng 06 năm 2022 Sinh viên thực Nguyễn Thị Thảo ii MỤ Ụ LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VI T T T v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG T NG QUAN T I LIỆU 1.1 Khái niệm GMC 1.2 Ngô đậu tƣơng biến đổi gen có thức ăn chăn ni 1.2.1 Những lợi ích GMC nói chung thành phần biến đổi gen thức ăn chăn ni nói riêng 1.2.2 Những rủi ro có từ GMC 1.3 Khái quát ADN qui trình thí nghiệm 1.3.1 ADN 1.3.2 Quy trình thí nghiệm 1.4 Phƣơng pháp tách chiết ADN CTAB 10 1.5 Phƣơng pháp điện di gel agarose 11 1.6 Phƣơng pháp PCR 12 1.6.1 Tổng quan phƣơng pháp PCR 12 1.6.2 Realtime PCR 13 CHƢƠNG 17 V T LIỆU V PHƢƠNG PH P NGHI N CỨU 17 2.1 Vật liệu nghiên cứu 17 iii 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Phƣơng pháp tách chiết ADN CTAB 21 2.2.2 Định lƣợng kiểm tra độ tinh DNA máy NanoDrop2000 23 2.2.3 Định lƣợng DNA tách chiết phƣơng pháp điện di gel agarose 23 2.2.4 Phản ứng Real-time PCR 25 2.2.5 Biểu thị kết PCR Realtime : 26 CHƢƠNG 27 K T QUẢ NGHI N CỨU 27 3.1 Kết đo nồng độ ADN tách chiết CTAB 27 3.2 Kết điện di kiểm tra ADN gel agarose 1% 28 3.3 Kết Real - time PCR 29 3.3.1 Kết phân tích kiện ngơ biến đổi gen 29 Chƣơng 52 K T LU N V KI N NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Kiến nghị: 53 T I LIỆU THAM KHẢO 54 iv MỤ Ừ Ế ADN : Axit Deoxyribonucleic ARN : Axit Ribonucleic GMO : Sinh vật biến đổi gen ( Genetically Modified Organism) GMC : Cây trồng biến đổi gen ( Genetically Modified Crops) GMM : Ngô biến đổi gen ( Genetically Modified Maize ) EtBr : Ethidium Bromide PCR : Phản ứng chuỗi trùng hợp ( Polymerase chain reaction) TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TE : Tris – EDTA UV : Ultraviolet CTAB : Cetyltrimethylammonium bromide A,C,G,T,U : Adenine , Cytosine, Guanine, Thymine, Uracil Bp : Base pair v MỤ Ì Hình 1.1: Sơ đồ quy trình thí nghiệm phân tích phát biến đổi gen 10 Hình 1.2: Biểu đồ nhân Realtime PCR 15 Hình 3.1:Kết điện di DNA tổng số gel agarose 1% 28 Hình 3.2 :Biểu đồ nhân Realtime PCR mẫu CP092.18 CP093.18 kiện Ngô 30 Hình 3.3:Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu CP092.18 CP093.18 kiện Ngô 30 Hình 3.4:Biểu đồ nhân Realtime PCR mẫu CP099.18 CP103.18 kiện Ngô 31 Hình 3.5: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu CP099.18 CP103.18 kiện Ngô 31 Hình 3.6:Biểu đồ nhân Realtime PCR mẫu CP092.18 CP093.18 kiện Đậu Tƣơng 42 Hình 3.7 :Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu CP092.18 CP093.18 kiện Đậu Tƣơng 42 Hình 3.8 :Biểu đồ nhân Realtime PCR mẫu CP099.18 CP103.18 kiện Đậu Tƣơng 43 Hình 3.9:Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu CP099.18 CP103.18 kiện Đậu Tƣơng 43 vi MỤ BẢ Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi mẫu dò tƣơng ứng với kiện biến đổi gen 18 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR Realtime 26 Bảng 3.1: Kết đo nồng độ DNA máy NanoDrop2000 27 Bảng 3.2: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện NK60332 Bảng 3.3: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON89034 33 Bảng 3.4: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON88017 34 Bảng 3.5: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện BT11 35 Bảng 3.6: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện GA21 36 Bảng 3.7: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON810 37 Bảng 3.8: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện TC1507 38 Bảng 3.9: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện T25 39 Bảng 3.10: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MIR604 40 Bảng 3.11: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MIR162 41 Bảng 3.12: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện CV127 44 Bảng 3.13: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện DP305423 45 Bảng 3.14: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện DAS44406-6 46 Bảng 3.15: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON87705 47 Bảng 3.16: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON 87708 48 vii Bảng 3.17: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON 87701 49 Bảng 3.18: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện MON89788 50 Bảng 3.19: Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu kiện GTS4032 51 viii MỞ ĐẦ Sinh vật biến đổi gen (Genetically Modified Organism – GMO) sinh vật mà vật liệu di truyền đƣợc thay đổi nhân tạo phòng thí nghiệm thơng qua kỹ thuật di truyền (genetic engineering – GE) Sinh vật biến đổi gen (GMO) đƣợc tạo với mục đích sử dụng khác nhau, nhƣ tạo ta giống trồng chuyển gen kháng sâu, kháng thuốc diệt cỏ, v.v Nhƣ vậy, mục đích tiêu chí cơng nghệ gen nhằm tạo sinh vật biến đổi gen đem lại lợi ích to lớn cho lồi ngƣời Những công bố chuyển gen bắt đầu xuất từ năm đầu thập niên 80 kỉ XX mở triển vọng – sản xuất chuyển gen tạo sản phẩm nhƣ dƣợc phẩm ,thực phẩm có phẩm chất cao, chống chịu với yếu tố bất lợi sinh học phi sinh học … Và từ kĩ thuật chuyển gen trở thành cơng cụ hữu hiệu đƣợc ứng dụng cải tiến giống trồng Việt Nam cấp phép 52 kiện biến đổi gen sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn nuôi Đây bƣớc tiến quan trọng việc áp dụng thành tựu công nghệ sinh học Nhiều nghiên cứu giới chứng minh thực phẩm có nguồn gốc từ trồng biến đổi gen an toàn nhƣ loại thực phẩm truyền thống khác Việc quản lý trồng sản phẩm trồng biến đổi gen để đảm bảo an ninh lƣơng thực nƣớc quyền lợi ngƣời tiêu dùng thông tin sản phẩm trở nên minh bạch, công khai yêu cầu bắt buộc số nƣớc, có Việt Nam Trong số loại trồng sản phẩm trồng biến đổi gen đƣợc cấp phép Việt Nam, ngô đậu tƣơng loại chủ lực Do nguồn cung ngô đậu tƣơng nƣớc hạn chế, nên hàng năm nƣớc ta hàng tỷ USD cho nhập ngô, đậu tƣơng, khô dầu đậu tƣơng làm nguyên liệu sản xuất thức ăn Bảng 3.11: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện MIR162 iá trị c u kỳ n ƣỡn (Ct) ên m u Cp092.18 Cp093.18 Cp099.18 Cp103.18 Đối chứng (+) ần Không phát Không phát 41,84 Không phát Khơng phát iá trị ần trung bình Không phát Không phát hiện Không phát Không phát hiện Không phát 41,84 Không phát Không phát ết địn tín Khơng phát Khơng phát hiện 34,47 34,94 34,71 Không phát Không phát Không phát Không phát Không phát Đối chứng (+) AOCS1208 Phát (hình 3.5) Đối chứng (-) NTC Không phát Không phát Không phát hiện Không phát Bảng 3.11 cho thấy kiện MIR162, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình khoảng 41,84 >39.Khơng phát thấy có kiện MIR162 mẫu CP092.18, CP093.18, CP099.18 CP103.18 41 Hình 3.6:Biểu đồ nhân Realtime PCR mẫu CP092.18 CP093.18 kiện Đậu Tương Ở hình 3.6 có chữ ký hiệu A, B, C, D, E, F, G, H hàng PCR plate 56 giếng, gồm hàng (A, B, C, D, E, F, G, H) cột Máy tự động cho hàng ký hiệu màu để dễ nhìn thể hình ảnh Hình 3.7 :Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu CP092.18 CP093.18 kiện Đậu Tương 42 Hình 3.8:Biểu đồ nhân Realtime PCR mẫu CP099.18 CP103.18 kiện Đậu Tương Ở hình 3.8 có chữ ký hiệu A, B, C, D, E, F, G, H hàng PCR plate 55 giếng, gồm hàng (A, B, C, D, E, F, G, H) cột Máy tự động cho hàng ký hiệu màu để dễ nhìn thể hình ảnh Hình 3.9:Kết Realtime PCR sàng lọc mẫu CP099.18 CP103.18 kiện Đậu Tương 43 Bảng 3.12: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện CV127 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u Cp092.18 Cp093.18 Cp099.18 Cp103.18 ần Không phát Không phát Không phát Không phát Đối chứng (+) AOCS0911C iá trị ần trung bình Khơng phát Khơng phát hiện Không phát Không phát hiện Không phát Không phát ết địn tín Khơng phát Khơng phát hiện 23,74 23.75 Không phát Không phát Không phát Không phát Phát 23,76 (hình 3.7) Đối chứng (+) AOCS0911C 26,94 26,93 Phát 26,93 (hình3.5) Đối chứng (-) Khơng phát NTC Khơng phát Không phát hiện Không phát Bảng 3.12 cho thấy kiện CV127, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình âm Khơng phát thấy có kiện CV127 mẫu CP092.18, CP093.18, CP099.18 CP103.18, 44 Bảng 3.13: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện DP305423 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u Cp092.18 Cp093.18 Cp099.18 Cp103.18 Đối chứng (+) BF426D (hình 3.7) Đối chứng (+) ần Khơng phát Không phát Không phát Không phát 28,73 Không phát Đối chứng (-) Không phát NTC iá trị ần trung bình Khơng phát Khơng phát hiện Không phát Không phát hiện Không phát Không phát hiện Không phát Không phát hiện 30,30 29,51 Không phát Không phát hiện Không phát Khơng phát ết địn tín Khơng phát Không phát Không phát Không phát Phát Không phát Không phát Bảng 3.13 cho thấy kiện DP305423, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình âm Khơng phát thấy có kiện DP305423 mẫuCP092.18,CP093.18,CP099.18 CP103.18, 45 Bảng 3.14: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện DAS44406-6 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u Cp092.18 Cp093.18 Cp099.18 Cp103.18 ần ần bình Không phát Không phát Không phát hiện Không phát Không phát Không phát hiện Không phát Không phát Không phát hiện Không phát Không phát Không phát hiện 31,29 31,35 29,79 29,86 Không phát Không phát Không phát hiện Đối chứng (+) 31,40 BF436 (hình 3.7) Đối chứng (+-6) 29,93 BF436D (hình3.9) Đối chứng (-) iá trị trun NTC ết địn tính Khơng phát Khơng phát Khơng phát Không phát Phát Phát Không phát Bảng 3.14 cho thấy kiện DAS44406-6, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình âm Khơng phát thấy có kiện DAS44406-6 mẫu CP092.18, CP093.18, CP099.18 CP103.18 46 Bảng 3.15: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện MON87705 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u Cp092.18 Cp093.18 Cp099.18 Cp103.18 ần ần trung bình ết địn tính Khơng phát Khơng phát Khơng phát hiện Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện 26,26 26,24 Đối chứng (+) AOCS0210A iá trị Không phát Phát 26,23 (hình 3.7) Đối chứng (+) Đối chứng (-) NTC Khơng phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Bảng 3.15 cho thấy kiện MON87705, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình âm Khơng phát thấy có kiện MON87705 mẫu CP092.18,CP093.18,CP099.18 CP103.18 47 Bảng 3.16: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện MON 87708 Giá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u ần iá trị ần ết địn tính trung bình Khơng phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Cp093.18 38,10 37,42 37,76 Phát Cp099.18 33,80 32,95 33,37 Phát Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện 24,30 24,38 Cp092.18 Cp103.18 Đối chứng (+) AOCS311A Phát 24,45 (hình 3.7) Đối chứng (+) AOCS0311A 23,90 23,81 Phát 23,73 (hình 3.7) Đối chứng (-) NTC Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Bảng 3.16 cho thấy kiện MON87708, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình khoảng 31,36 đến 31,71 Phát thấy có kiện MON87708 mẫu CP093.18, CP099.18 khơng phát mẫu CP092.18 CP103.18 48 Bảng 3.17: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện MON 87701 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u ần iá trị ần ết địn tính trung bình 29,83 29,72 Cp093.18 32,24 32,04 32,14 Phát Cp099.18 34,35 34,79 34,57 Phát Cp103.18 29,49 29,62 29,55 Phát 25,55 27,70 Đối chứng (+) AOCS0809A 29,77 Phát Cp092.18 Phát 25,86 (hình3.7) Đối chứng (+) AOCS0809A 25,84 25,86 Phát 25,89 (hình3.9) Đối chứng (-) NTC Khơng phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Bảng 3.17 cho thấy kiện MON87701, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình khoảng 29,55 đến 34,57 Phát thấy có kiện MON87701 mẫu CP092.18, CP093.18, CP099.18 CP103.18 49 Bảng 3.18: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện MON89788 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u ần iá trị ần ết địn tính trung bình Phát Cp092.18 30,40 30,35 30,37 Cp093.18 32,24 32,70 32,47 Phát Cp099.18 32,55 31,66 32,10 Phát Cp103.18 30,18 29,48 29,83 Phát 24,76 24,74 Đối chứng (+) AOCS0908B (hình Phát 24,73 3.7) Đối chứng (+) AOCS0906B 24,07 24,41 Phát 24,75 (hình 3.9) Đối chứng (-) NTC Không phát Không phát Không phát hiện Không phát Bảng 3.18 cho thấy kiện MON89788, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình khoảng 29,83 đến 32,47 Phát thấy có kiện MON89788 mẫu CP092.18, CP093.18, CP099.18 CP103.18 50 Bảng 3.19: Kết Realtime PCR sàng lọc m u đối v i kiện GTS4032 iá trị c u kỳ n ƣỡn ( t) ên m u ần iá trị ần ết địn tính trung bình Phát Cp092.18 29,74 30,07 29,90 Cp093.18 29,66 29,77 29,71 Phát Cp099.18 34,04 34,30 34,17 Phát Cp103.18 28,31 27,59 27,95 Phát 27,87 27,95 Đối chứng (+) BF410GK Phát 28,02 (hình 3.7) Đối chứng(+) 28,36 28,36 Phát BF410GK (hình 3.9) Đối chứng (-) NTC Không phát Không phát Không phát Không phát hiện hiện Bảng 3.19 cho thấy kiện GTS4032, kết Realtime PCR với mẫu phân tích thí nghiệm cho thấy, giá trị Ct trung bình khoảng 27,95 đến 34,17 Phát thấy có kiện GTS4032 mẫu CP092.18, CP093.18, CP099.18 CP103.18 Qua kết khảo sát cho thấy, mẫu thức ăn chăn nuôi đƣợc sử dụng luận văn chứa nhiều loại biến đổi gen khác nhau, gồm vài loại biến đổi gen Việc khảo sát mẫu thức ăn chăn ni có ý nghĩa việc quản lý chuỗi thức ăn quy trình sản xuất thực phẩm chăn ni hữu cơ, phục vụ cho nông nghiệp hữu cơ- xu Việt Nam 51 ƣơn KẾ 4.1 À Ế Ị ết luận - Đã tách chiết thành công DNA từ mẫu thức ăn chăn nuôi, bao gồm mẫu Cp092.18 : Thức ăn hỗn hợp 101S cho lợn tập ăn 20Kg thể trọng; Cp093.18: Thức ăn hỗn hợp 102M cho lợn siêu nạc (20kg- 50kg thể trọng); Cp099.18: Hỗn hợp cho heo nái chửa M116; Cp103.18: Thức ăn hỗn hợp dạng viên cho heo thịt siêu nạc 131S+ (12-25 kg) Các mẫu có nồng độ ADN lớn 30 ng/µl, số A260/280 khoảng từ 1,86 – 1,94, đạt độ tinh - Đã kiểm tra mẫu thức ăn chăn nuôi 10 kiện Ngơ, kiện Nk603,BT11,MON88017,GA21,MON810,TC1507,T25(Cp093.18 Cp103.18), MON89034 (Cp092.18;Cp093.18;Cp103.18) Giá trị Ct mẫu ≤ 39, mẫu đƣợc kết luận mẫu dƣơng tính; Các kiện MON89034(mẫu Cp099.18),MIR162(mẫu Cp099.18) T25 (mẫu Cp092.18 Cp099.18) giá trị Ct mẫu ≥ 39, mẫu đƣợc kết luận mẫu âm tính -Đã kiểm tra mẫu thức ăn chăn nuôi kiện Đậu Tƣơng, kiện GTS4032,MON89788,MON87701,MON87708(mẫu Cp093.18 Cp099.18),MIR640 (Cp099.18 Cp103.18)giá trị Ct mẫu≤ 39, mẫu đƣợc kết luận mẫu dƣơng tính; Các kiện MON87705, DP305423, CV127, DAS444066 , MON87708 (mẫu Cp092.18 Cp03.18),MIR640 (Cp092.18 Cp093.18) giá trị Ct mẫu ≥ 39, mẫu đƣợc kết luận mẫu âm tính - Qua kết khảo sát cho thấy, mẫu thức ăn chăn nuôi đƣợc sử dụng luận văn chứa nhiều loại biến đổi gen khác nhau, gồm vài loại biến đổi gen Việc khảo sát mẫu thức ăn chăn ni có ý 52 nghĩa việc quản lý chuỗi thức ăn quy trình sản xuất thực phẩm chăn ni hữu cơ, phục vụ cho nông nghiệp hữu cơ- xu Việt Nam 4.2 iến n ị: - Tiếp tục đánh giá định lƣợng với mẫu thức ăn chăn ni để biết đƣợc xác hàm lƣợng loại biến đổi gen mẫu thức ăn chăn nuôi Việc phát định lƣợng biến đổi gen thiết thực sản xuất nông nghiệp hữu Việt Nam, phục vụ nhu cầu phát triển nông nghiệp 53 À M Ả i liệu tiến iệt: [1] https://vneconomy.vn/tang-dien-tich-trong-ngo-de-giam-phu-thuoc-nguonnguyen-lieu-nhap-khau.htm [2] Ts Lƣu Ngọc Huyền, Giáo trình Sinh học phân tử Công nghệ DN, Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ [3] TCVN 7606:2007, ISO 21571:2005, Thực phẩm – phương pháp phân t ch để phát sinh vật biến đổi gen sản phẩm có nguồn gốc biến đổi gen – tách chiết axit nucleic oodstuffs – Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products – Nucleic acid extraction), Cục tiêu chuẩn đo lƣờng chất lƣợng [4] https://vi.wikipedia.org/wiki/Ng%C3%B4 [5] http://www.vfc.com.vn/vfc/vi/tin-tuc-thi-truong-nongduoc/692-ba-gingngo-bin-i-gen-u-tien-ti-vit-nam.html [6] http://tailieu.vn/doc/tach-chiet-DNA-253631.html [7] https://duybiotech.wordpress.com/2010/07/14/chi%E1%BA%BFtxu%E1%BA%A5t-ADN/ [8] http://thietbiphongthinghiem.net/tin-tuc/khoa-hoc/tong-quan-ve-ky-thuatrealtime-pcr.html i liệu tiến [9] n https://www.statista.com/statistics/254294/distribution-of-global-cornproduction-by-country-2012/ [10] https://www.statista.com/statistics/671353/production-of-maize-invietnam/ [11] Berthelet M., Whyte L.G., and Greer C.W.: Rapid, direct extraction of ADN from soils forr PCR analysis using polyvinylpolypyrrolidone spin columns FEMS Microbiology Letters, 1996 54 [12] Roger S.O and Bendich A.J Extraction of ADN from plant tisues Plant Molecular Biology Manual, 1988 [13] Kim C.S, Lee C.H, Shin J.S, Chung Y.S and Hyung N.I A simple and rapidmethod for isolation of high quality genomic ADN from fruit trees and conifers using PVP Nucleic Acids Research 1997 [14] Sambrook J., Fritsch E.F., and Maniatis, Molecular Cloning: a Laboratory Manual 2nd e Vol , Appendix B 16, 1989 Proteinase-K [15] https://en.wikipedia.org/wiki/Genetically_modified_maize 55