Đánh giá đa dạng di truyền một số mẫu bình vôi (stephania rotunda lour ) sử dụng chỉ thị rapd

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN MỘT SỐ MẪU BÌNH VƠI (STEPHANIA ROTUNDA LOUR.) SỬ DỤNG CHỈ THỊ RAPD Hà Nội - 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN MỘT SỐ MẪU BÌNH VƠI (STEPHANIA ROTUNDA LOUR.) SỬ DỤNG CHỈ THỊ RAPD Ngƣời thực : ĐẶNG HUYỀN TRANG Lớp : K63CNSHD Khoá : 63 Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hƣớng dẫn : TS NINH THỊ THẢO Hà Nội - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận tốt nghiệp “Đánh giá đa dạng di truyền số mẫu bình vơi (Stephania rotunda Lour.) sử dụng thị RAPD” cơng trình nghiên cứu riêng tơi dƣới hƣớng dẫn TS Ninh Thị Thảo Các nội dung nghiên cứu, số liệu kết nghiên cứu trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình Nếu phát gian lận tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm i LỜI CẢM ƠN Khố luận tốt nghiệp với đề tài “Đánh giá đa dạng di truyền số mẫu bình vơi (Stephania rotunda Lour.) sử dụng thị RAPD” kết trình cố gắng thân với giúp đỡ tận tình, động viên khích lệ thầy cơ, bạn bè ngƣời thân Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ngƣời giúp đỡ em thời gian học tập – nghiên cứu khoa học vừa qua Em xin trân trọng gửi đến cô TS Ninh Thị Thảo, ngƣời trực tiếp tận tình hƣớng dẫn nhƣ cung cấp tài liệu, thông tin khoa học cần thiết cho luận lời cảm ơn chân thành sâu sắc Em xin cảm ơn quý thầy, cô giáo Bộ môn Công nghệ sinh học Thực vật tạo điều kiện tốt giúp đỡ em suốt q trình thực khố luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo Khoa Công nghệ sinh học giảng viên trƣờng Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giảng dạy, trang bị cho em kiến thức quý giá suốt quãng thời gian học tập Học viện Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè, ngƣời thân ln bên cạnh ủng hộ, khích lệ tinh thần giúp em hồn thành khố luận tốt nghiệp Do giới hạn kiến thức khả lý luận thân nhiều thiếu sót hạn chế, kính mong dẫn đóng góp thầy, để luận em đƣợc hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 09 tháng năm 2022 Sinh viên thực ĐẶNG HUYỀN TRANG ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii TÓM TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan bình vơi 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc điểm sinh học bình vơi 2.1.3 Giá trị kinh tế giá trị dƣợc liệu bình vơi 2.1.4 Tình hình nghiên cứu bình vơi giới Việt Nam 2.2 Chỉ thị phân tử ứng dụng thị phân tử phân tích đa dạng di truyền 10 2.2.1 Khái niệm thị phân tử 10 2.2.2 Chỉ thị RAPD 11 2.3 Các nghiên cứu sử dụng thị phân tử (RAPD) phân tích đa dạng di truyền dƣợc liệu giới Việt Nam 12 2.3.1 Các nghiên cứu sử dụng thị RAPD phân tích đa dạng di truyền dƣợc liệu giới 13 2.3.2 Các nghiên cứu sử dụng thị RAPD phân tích đa dạng di truyền dƣợc liệu Việt Nam 13 PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 16 iii 3.2 Hoá chất 17 3.3 Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 18 3.3.1 Nội dung nghiên cứu 18 3.3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Kết tách chiết DNA tổng số 24 4.2 Kết RAPD-PCR 26 4.3 Kết phân tích đa dạng di truyền thị RAPD 27 4.4 Thảo luận 38 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 5.1 Kết luận 39 5.2 Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 PHỤ LỤC 42 iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Từ viết tắt AFLP cs Amplified Fragment Length Polymorphism Cộng DNA Deoxyribonucleic acid ISSR Inter-Simple Sequence Repeats RAPD Random Amplified Polymorphism DNA PCR Polymerase Chain Reaction PIC Polymorphic Information Content RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism Rp Resolving power SSR Simple Sequence Repeat TAE Tris base, acetic acid and EDTA v DANH MỤC BẢNG ảng 2.1 Phân loại khoa học chi Bình vơi (Stephania spp) Bảng 3.1 Danh sách 32 mẫu giống bình vơi sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 3.2 Hoá chất sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 3.3 Danh sách mồi RAPD sử dụng nghiên cứu 18 Bảng 3.4 Thành phần phản ứng RAPD-PCR 21 Bảng 3.5 Chu kì nhiệt phản ứng RAPD-PCR 21 Bảng 4.1 Kết số OD nồng độ DNA 32 mẫu bình vơi nghiên cứu 24 Bảng 4.3 Kết phân tích 14 mồi RAPD 28 Bảng 4.4 Giá trị PIC Rp 14 mồi RAPD 30 Bảng 4.5 Hệ số tƣơng đồng 32 mẫu giống bình vơi sử dụng thị RAPD 34 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây bình vơi Hình 4.1 Hình ảnh điện di sản phẩm DNA tổng số 32 mẫu bình vơi 26 Hình 4.2 Kết chạy điện di sản phẩm RAPD-PCR mồi OPA01 27 Hình 4.3 Hình ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mồi OPC03 29 Hình 4.4 Hình ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mồi OPO01 29 Hình 4.5 Sơ đồ quan hệ di truyền 32 mẫu bình vơi dựa thị RAPD 36 vii TÓM TẮT Phân tích đa dạng di truyền 32 mẫu giống bình vơi thị phân tử RAPD Tách chiết DNA tổng số mẫu có độ tinh DNA cao nồng độ DNA cao Sau phân tích 14 mồi RAPD kết thu đƣợc cho thấy tất mồi cho đa hình Các mồi tạo 1346 băng, trung bình 42,06 băng mẫu bình vơi 96,14 băng/mồi Hệ số đa hình PIC biến động từ 0,09 đến 0,35 số sai khác 14 mồi RAPD (Rp) dao động từ 0,31 đến 0,97 Hệ số tƣơng đồng 32 mẫu giống bình vơi biến động từ 0,478 – 0,956 Ở mức khoảng cách di truyền trung bình (0,752), 32 mẫu bình vơi nghiên cứu đƣợc phân bố vào nhóm sơ đồ quan hệ di truyền viii Bảng 4.5 Hệ số tƣơng đồng 32 mẫu giống bình vơi sử dụng thị RAPD 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 1 0.833 0.822 0.811 0.856 0.733 0.589 0.589 0.611 0.589 0.822 0.789 0.778 0.678 0.7 0.7 0.789 0.733 0.789 0.744 0.722 0.7 0.7 0.767 0.622 0.611 0.811 0.722 0.7 0.744 0.733 0.656 10 11 12 13 14 15 16 0.922 0.822 0.844 0.7 0.667 0.6 0.711 0.667 0.856 0.8 0.722 0.733 0.733 0.756 0.8 0.833 0.822 0.844 0.778 0.778 0.778 0.778 0.722 0.711 0.756 0.778 0.778 0.822 0.744 0.667 0.789 0.856 0.667 0.656 0.544 0.656 0.633 0.8 0.767 0.711 0.722 0.789 0.722 0.833 0.756 0.767 0.767 0.767 0.722 0.767 0.744 0.667 0.656 0.722 0.744 0.722 0.767 0.756 0.656 0.822 0.722 0.644 0.556 0.689 0.644 0.833 0.8 0.811 0.756 0.733 0.756 0.822 0.833 0.8 0.8 0.756 0.822 0.778 0.756 0.722 0.711 0.733 0.8 0.756 0.8 0.789 0.667 0.744 0.644 0.556 0.667 0.622 0.789 0.778 0.789 0.756 0.778 0.756 0.8 0.789 0.8 0.778 0.733 0.756 0.756 0.733 0.656 0.667 0.733 0.756 0.733 0.778 0.789 0.6 0.811 0.744 0.833 0.744 0.711 0.678 0.711 0.611 0.7 0.7 0.722 0.711 0.678 0.744 0.7 0.678 0.7 0.744 0.644 0.633 0.722 0.656 0.656 0.7 0.667 0.567 0.756 0.867 0.8 0.656 0.622 0.589 0.622 0.644 0.689 0.689 0.611 0.644 0.667 0.644 0.644 0.711 0.667 0.633 0.622 0.622 0.644 0.644 0.689 0.633 0.511 0.822 0.733 0.611 0.6 0.478 0.556 0.556 0.667 0.622 0.589 0.511 0.644 0.578 0.622 0.578 0.6 0.589 0.6 0.6 0.578 0.533 0.578 0.544 0.533 0.867 0.678 0.644 0.589 0.644 0.667 0.733 0.711 0.722 0.622 0.778 0.667 0.733 0.711 0.711 0.7 0.689 0.689 0.667 0.667 0.711 0.656 0.622 0.611 0.6 0.567 0.667 0.622 0.667 0.689 0.656 0.622 0.689 0.622 0.689 0.667 0.667 0.7 0.667 0.689 0.667 0.644 0.667 0.611 0.578 0.856 0.756 0.789 0.767 0.767 0.811 0.822 0.811 0.811 0.767 0.767 0.789 0.722 0.667 0.656 0.744 0.767 0.767 0.811 0.756 0.656 0.744 0.733 0.733 0.733 0.756 0.744 0.8 0.756 0.733 0.733 0.756 0.689 0.722 0.644 0.711 0.733 0.733 0.756 0.744 0.6 0.7 0.789 0.767 0.744 0.711 0.789 0.722 0.7 0.7 0.744 0.678 0.689 0.656 0.7 0.722 0.7 0.744 0.733 0.567 0.733 0.778 0.778 0.767 0.778 0.756 0.733 0.733 0.733 0.622 0.656 0.644 0.644 0.756 0.756 0.8 0.767 0.578 0.822 0.822 0.744 0.733 0.778 0.733 0.733 0.822 0.689 0.7 0.689 0.689 0.778 0.733 0.778 0.789 0.644 0.844 0.811 0.8 0.844 0.8 0.844 0.867 0.711 0.767 0.778 0.689 0.822 0.822 0.867 0.833 0.667 34 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 0.833 0.822 0.867 0.844 0.844 0.867 0.711 0.722 0.733 0.756 0.867 0.822 0.867 0.878 0.733 0.856 0.944 0.878 0.922 0.856 0.767 0.778 0.789 0.789 0.833 0.833 0.878 0.844 0.7 0.844 0.844 0.822 0.867 0.711 0.767 0.733 0.778 0.8 0.822 0.844 0.856 0.644 0.889 0.889 0.889 0.778 0.789 0.8 0.8 0.867 0.867 0.911 0.833 0.733 0.844 0.867 0.733 0.767 0.778 0.733 0.8 0.844 0.844 0.833 0.644 0.889 0.778 0.811 0.822 0.778 0.822 0.844 0.867 0.878 0.733 0.756 0.833 0.822 0.733 0.844 0.867 0.889 0.878 0.689 0.7 0.711 0.778 0.711 0.756 0.778 0.722 0.689 0.9 0.656 0.744 0.744 0.744 0.711 0.611 0.667 0.756 0.733 0.733 0.722 0.6 0.778 0.778 0.8 0.789 0.711 35 28 29 30 31 32 0.889 0.933 0.956 0.856 0.878 0.9 0.733 0.711 0.733 0.744 Hình Sơ đồ quan hệ di truyền 32 mẫu bình vơi dựa thị RAPD Hệ số tƣơng đồng di truyền phản ánh mối quan hệ đa dạng di truyền 32 mẫu bình vơi nghiên cứu Hai mẫu bình vơi gần thơng tin di truyền hệ số tƣơng đồng chúng lớn ngƣợc lại, hai mẫu có hệ số tƣơng đồng di truyền thấp mối quan hệ di truyền chúng xa Bảng 4.5 thể hệ số tƣơng đồng di truyền cặp mẫu Kết cho thấy, hệ số tƣơng đồng 32 mẫu giống bình vơi biến động từ 0,478 – 0,956, trung bình 0,752 Trong đó, cặp mẫu giống 29 30 có hệ số tƣơng đồng cao 0,956 Trong đó, cặp mẫu 13 có hệ số tƣơng đồng di truyền thấp 0,478 Những giá trị cho thấy có khác biệt mặt di truyền giống bình vơi Ở mức khoảng cách di truyền trung bình (0,752), 32 mẫu bình vơi nghiên cứu đƣợc phân bố vào nhóm (Hình 4.5) Nhóm I gồm 19 mẫu giống bình vơi thu thập đƣợc tỉnh Hồ Bình, giống đƣợc xếp chung vào nhóm phụ lớn là: nhóm phụ Ia gồm giống 1, 2, 3, 4, 5, 11, 12; mẫu giống 36 16, 17,18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31 đƣợc xếp vào nhóm phụ Ib Nhóm II chứa mẫu giống 14 (thu thập Lƣơng Sơn, Hồ ình) riêng biệt Nhóm III gồm mẫu giống 13 15 đƣợc thu thập Lƣơng Sơn, Hồ ình Nhóm IV có mẫu giống 24 thu thập Mƣờng Nhé (Điện Biên) mẫu giống 27 Tân Uyên (Lai Châu) Nhóm V gồm mẫu giống 25, 26 đƣợc thu thập Mƣờng Thín, Tuần Giáo, Điện Biên Nhóm VI có mẫu giống 32 Thanh Hố riêng biệt Nhóm VII chứa mẫu giống bình vơi đƣợc thu thập Vị Xuyên, Hà Giang Nhóm VII chia thành nhóm phụ gồm nhóm phụ VIIa chứa mẫu giống 6, 7, 9, 10 mẫu giống đƣợc xếp riêng biệt nhóm VIIb Nhìn chung, mẫu giống bình vơi thu thập tỉnh Hịa ình đƣợc xếp chung vào nhóm gồm nhóm I, II III; mẫu giống thu Lai Châu đƣợc phân bố vào nhóm IV; mẫu giống thu thập Điện Biên (25, 26) thuộc nhóm V; mẫu giống 32 thu thập từ Thanh Hóa phân bố vào nhóm VI riêng biệt; mẫu giống thu thập Hà Giang thuộc nhóm VII Trong nhóm I, mẫu giống 29 30 trùng khớp với cho thấy có trùng khớp đặc điểm di truyền hai mẫu giống Nhóm II (mẫu 14, thu thập Lƣơng Sơn, Hồ ình) nhóm VI (mẫu 32, thu thập Thanh Hố) nhánh riêng có khác biệt di truyền lớn so với nhánh lại Từ phân nhóm theo sơ đồ quan hệ di truyền trên, giả định mẫu giống bình vơi có khác biệt rõ rệt di truyền mẫu giống đƣợc thu thập địa phƣơng có vị trí địa lý khác Những kết thu đƣợc tƣơng quan di truyền mẫu bình vơi sở liệu cung cấp cho nhà chọn tạo giống tham khảo trƣớc định sử dụng vào mục tiêu nghiên cứu: thu thập, phân loại, bảo tồn nguồn gen sử dụng cho chƣơng trình chọn tạo giống 37 4.4.Thảo luận Đánh giá đa dạng di truyền dƣợc liệu thị RAPD đƣợc nhiều nghiên cứu sử dụng Khuất Hữu Trung cs (2016) đánh giá khoảng cách di truyền 32 mẫu giống quế Thanh Hoá 22 thị RAPD Ở hệ số tƣơng đồng (), 32 mẫu giống quế đƣợc xếp vào nhóm lớn với hệ số di truyền dao động từ 0,67 – 0,97 Tƣơng tự, thơng qua phân tích 17 mồi RAPD, Lƣu Thuý Hoà cs (2017) phân tích đa dạng di truyền 22 mẫu giống Hoàng liên thuộc chi Mahonia Nutt Và xếp chúng vào mức tƣơng đồng di truyền 63% Nhƣ vậy, thấy thị RAPD phƣơng pháp hữu hiệu đáng tin cậy để đánh giá nguồn gen dƣợc liệu Trong nghiên cứu này, sở phân tích 14 thị RAPD, chúng tơi đánh giá đƣợc mức độ đa dạng di truyền 32 mẫu giống bình vơi thu thập từ địa phƣơng khác Việt Nam Có thể nói nghiên cứu sử dụng thị phân tử để đánh giá nguồn gen bình vơi Do vậy, kết đề tài thông tin đáng tin cậy phục vụ cho phân loại, bảo tồn lai tạo bình vơi 38 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1.Kết luận - Kết tách chiết DNA 32 mẫu giống bình vơi sử dụng quy trình CTA thu đƣợc đáp ứng tốt cho mục đích sử dụng làm khn cho phản ứng RAPD – PCR với số độ tinh DNA (OD260/280) dao động từ 1,71 – 2,07; nồng độ DNA đạt dao động 117 – 1054 ng/µl - Kết phân tích 14 mồi RAPD 32 mẫu giống bình vơi nhân đƣợc tổng số 91 locus, trung bình 6,5 locus/mồi, 2,84 locus/mẫu giống 1346 vạch băng, trung bình 96,14 băng/mồi, 42,06 băng/mẫu giống Chỉ số PIC đạt trung bình 0,2 số sai khác cặp mồi Rp đạt trung bình 0,76 - Khoảng cách di truyền 32 mẫu giống bình vơi dao động từ 0,478 – 0,956 Ở hệ số tƣơng đồng di truyền 0,752, mẫu giống bình vơi đƣợc chia thành nhóm Nhóm I gồm 19 mẫu giống thu thập Hịa Bình (1, 2, 3, 4, 5, 11, 12, 16, 17,18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31) Nhóm II gồm mẫu 14 nhóm III gồm mẫu 13,15 đƣợc thu thập Cao Sơn, Lƣơng Sơn, Hịa Bình Nhóm IV gồm mẫu giống 24 thu thập Mƣờng Nhé, Điện Biên mẫu giống 27 thu thập Tân Uyên, Lai Châu Nhóm V gồm mẫu giống 25, 26 thu thập Mƣờng Thín, Tuần Giáo, Điện Biên Nhóm VI có mẫu 32 thu thập Thanh Hóa Nhóm VII có giống mẫu thu thập từ Hà Giang gồm mẫu 6, 7, 8, 9, 10 5.2.Kiến nghị Cần tiếp tục thu thập nguồn gen mở rộng nghiên cứu nguồn gen giống bình vơi kỹ thuật phân tích DNA để phục vụ định hƣớng cho cơng tác bảo tồn, chọn tạo giống bình vơi có chất lƣợng tốt hơn, mang lại hiệu dƣợc liệu, kinh tế cho ngƣời dân 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc Bộ Giáo dục Đào tạo, Bộ Y tế, Viện Dƣợc liệu (2005) Nghiên cứu thuốc từ thảo dược – Giáo trình Sau đại học, Nxb Khoa học Kỹ Thuật, Hà Nội Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam, Nxb Nơng Nghiệp, Hà Nội Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Th Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Bùi Thị Bằng (2006), Các phương pháp hố lí ứng dụng phân tích kiểm nghiệm dược liệu, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Trần Hùng Ngô Vân Thu, “Khảo sát mang tên ình Vơi”, Tạo chí Dƣợc học, Tập 26, số 1, 1986, – Trần Hùng Ngô Vân Thu, “ ƣớc đầu nghiên cứu Bình vơi biển”, Thơng tin Dược học, số 5, 1988, 65 – 67 Phan Thanh Kỳ, Nguyễn Thị Tâm, Trần Văn Thanh (1997), Bài giảng Dược liệu, tập 2, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Đỗ Tất Lợi (1991), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật Đỗ Tất Lợi (2009), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học 10 Trần Thị Lệ, Trƣơng Thị ích Phƣợng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Cơng nghệ sinh học Thực vật, Nxb Nơng Nghiệp, Hà Nội 11 Ngô Đại Quang (1999), “Sản xuất thuốc giảm đau từ củ bình vơi”, Viện Hố học cơng nghiệp Hà Nội 12 Sách đỏ Việt Nam (2007), Nxb Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội 13 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005), Giáo trình sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội 14 Trần Trung Thành, Lê Thị Thu Hiền (2013), “Xây dựng phát sinh loại số lồi thuộc chi bình vôi (Stephania) vƣờn Quốc gia Cúc Phƣơng dựa trình tự nucleotide vùng ITS, trnL matK”, Tạp 40 chí Cơng nghệ sinh học, T 11, S.3 (2013) 15 Nguyễn Quang Thạch (2009), Cơ sở Công nghệ sinh học, Tập 3, Nxb Giáo dục 16 Viện Dƣợc liệu, Tài nguyên thuốc Việt Nam (1993), Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 17 Viện Dƣợc liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập II, Nxb Khoa học Kỹ thuật 18 Dƣợc điển Việt Nam, tập III Tr 321 – 322 Tài liệu nƣớc 19 Kozuka, M., Miyaji, K., Sawada, T & Tomita, M A major alkaloid of the leaves and stems of stephania rotunda J Nat Prod 48, 341–342 (1985) 20 Soulange, J G., Ranghoo-Sanmukhiya, V M & Seeburrun, S D Tissue culture and RAPD analysis of Cinnamomum camphora and Cinnamomum verum Biotechnology 6, 239–244 (2007) 21 Tripathi, N., Devendra, •, Chouhan, S., Saini, N & Tiwari, S Assessment of genetic variations among highly endangered medicinal plant Bacopa monnieri (L.) from Central India using RAPD and ISSR analysis Biotech 2012 24 2, 327–336 (2012) 22 Uzbekistana, F S.-M Z & 1962, undefined On the pharmacology of the alkaloid Roemerin and its derivatives europepmc.org Tài liệu internet 23 https://vietbooks.info/threads/bai-giang-duoc-lieu-tap-2-nxb-ha-noi1998-pham-thanh-ky-257-trang.70415/ 24 https://vjst.vn/Images/Tapchi/2017/2B/Bai8_page_39-44.pdf (2015) 25 https://tapchi.vaas.vn/sites/tapchi.vaas.vn/files/tapchi/2021-08/tc52017_2.pdf (2017) 26 https://sti.vista.gov.vn/tw/Lists/TaiLieuKHCN/Attachments/275378/C Vv201S072018071.pdf (2018) 27 http://vienloci.org.vn/ky-thuat-ly-trich-dna-rna-lich-su-phat-trien-vahien-tai/ 41 PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐIỆN DI SẢN PHẨM PCR VỚI MỒI RAPD Hình 1: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPA01 Hình 2: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPA02 42 Hình 3: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPB01 Hình 4: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPB04 43 Hình 5: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPC03 Hình 6: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPC08 44 Hình 7: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPD01 Hình 8: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPE04 45 Hình 9: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPE07 Hình 10: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPN03 46 Hình 11: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPO01 Hình 12: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPO02 47 Hình 13: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPR12 Hình 14: Kết điện di sản phẩm PCR với mồi OPS05 48