Xác định giá trị sử dụng của phương pháp xét nghiệm elisa định lượng nồng độ kháng thể chống sars cov 2 trên máy miễn dịch bán tự động tại trường đại học y tế công cộng năm 2022

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG H P BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN TÊN ĐỀ TÀI U XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM ELISA ĐỊNH LƯỢNG NỒNG ĐỘ KHÁNG THỂ CHỐNG SARS-COV-2 TRÊN MÁY MIỄN DỊCH BÁN TỰ ĐỘNG TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NĂM 2022 H MÃ SỐ: SV 21.22-04 Thuộc nhóm ngành khoa học: Khoa học Y dược khác Hà Nội, 2022 Hà Nội, tháng/năm BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN H P TÊN ĐỀ TÀI XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM ELISA ĐỊNH LƯỢNG NỒNG ĐỘ KHÁNG THỂ CHỐNG SARS-COV-2 TRÊN MÁY MIỄN DỊCH BÁN TỰ ĐỘNG TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NĂM 2022 U H MÃ SỐ: SV 21.22-04 Thuộc nhóm ngành khoa học: Khoa học Y dược khác Sinh viên thực hiện: Trần Xuân Thắng Giới tính: Nam Dân tộc: Kinh Lớp, khoa: CNCQXNYH5-1A1 Năm thứ: /Số năm đào tạo: Ngành học: Kỹ thuật xét nghiệm y học Người hướng dẫn: TS Bùi Thị Ngọc Hà ThS Nguyễn Thị Thu Hà i MỤC LỤC THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI .1 ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 11 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .12 1.1 Một số khái niệm, phương pháp sử dụng nghiên cứu 12 1.1.1 1.2 Một số khái niệm quản lí chất lượng 12 Tổng quan nội dung mục tiêu 16 1.2.1 Độ chụm 16 1.2.2 Độ .21 1.2.3 Khoảng tuyến tính .23 H P 1.3 Tổng quan nội dung mục tiêu 24 1.4 Khung lý thuyết 26 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 U 2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 27 2.3 Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm ứng dụng 27 2.4 Cỡ mẫu: 27 2.5 Trình bày phương pháp chọn mẫu 28 2.6 Trình bày phương pháp thu thập số liệu 28 2.7 Các biến số nghiên cứu 28 2.8 Phương pháp phân tích số liệu 29 2.9 Quyết định hội đồng đạo đức: 29 H CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .30 3.1 Đánh giá độ chụm 30 3.2 Đánh giá độ 31 3.3 Đánh giá khoảng tuyến tính (Linearity range) 32 3.4 Xác nhận khoảng tham chiếu (Verifying Reference Intervals) .33 CHƯƠNG BÀN LUẬN 37 CHƯƠNG KẾT LUẬN .40 ii CHƯƠNG KHUYẾN NGHỊ .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO .42 PHỤ LỤC 46 PHỤ LỤC 47 PHỤ LỤC 48 PHỤ LỤC 4: BẢN THẢO BÀI BÁO 49 H P H U iii DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm mức nồng độ mức nồng độ 2……………………………………………………………………………………….30 Bảng Kết thực nghiệm đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động………………………………………………………………………… ………30 Bảng Kết thực nghiệm đánh giá độ xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động………………………………………………………………………… …….…31 H P Bảng Bảng đánh giá độ tuyến tính phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động…………… ….32 Bảng Kết đánh giá khoảng tham chiếu xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động…………………33 Bảng Kiểm định Shapiro-Wilk cho 20/20 người có giá trị nồng độ kháng thể nằm U khoảng tham chiếu hãng công bố (>22U/ml)……….…………… ……34 H iv DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT Cal CDC CLSI CV CMIA Calibrator (mẫu chuẩn có nồng độ biết trước) Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm ngăn ngừa kiểm soát bệnh) Clinical and Laboratory Standards Institute (Viện tiêu chuẩn Lâm sàng Cận lâm sàng) Coefficient of Variation (Hệ số biến thiên) H P Chemiluminescent Microparticle Immunoassay (Miễn dịch vi hạt hóa phát quang) EQA ITA IFCC NGSP NSX SD PXN QC External Quality Assessment (mẫu ngoại kiểm tra chất lượng) U Immunoturbidimetric assay (Miễn dịch đo độ đục) International Federation of Clinical Chemistry (Liên đồn Hóa Sinh H Lâm sàng Quốc tế) National Glycohemoglobin Standardization Program (Chương trình chuẩn hóa glycohemoglobin quốc gia) Nhà sản xuất Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) Phòng xét nghiệm Quality control (Kiểm tra chất lượng) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động trường Đại học Y tế công cộng năm 2022 - Sinh viên thực hiện: Trần Xuân Thắng - Lớp: CNCQXNYH5 1A1 - Khoa: Kỹ thuật xét nghiệm y học - Năm thứ: Số năm đào tạo: - Người hướng dẫn: TS Bùi Thị Ngọc Hà H P ThS Nguyễn Thị Thu Hà Mục tiêu đề tài: U - Mục tiêu 1: Đánh giá độ chụm, đánh giá độ đúng, đánh giá khoảng tuyến tính phương pháp ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 - Mục tiêu 2: Xác định khoảng tham chiếu phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-COV-2 máy miễn dịch bán tự động H Tính sáng tạo: Tính mới: Các kỹ thuật sử dụng phổ biến để phát kháng thể kháng SARS-CoV-2 gồm có miễn dịch gắn enzym (ELISA), sắc ký miễn dịch, miễn dịch hóa phát quang, miễn dịch điện hóa phát quang Trong xét nghiệm miễn dịch gắn enzym (ELISA) thực hệ thống máy bán tự động đơn giản Đây xét nghiệm thông dụng với ưu điểm dễ dàng triển khai, không cần hệ thống máy móc phức tạp giúp tiết kiệm kinh phí sở nghiên cứu, phòng khám nhỏ lẻ Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu đánh giá giá trị sử dụng phương pháp Phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động cần phải xác nhận giá trị sử dụng trước đưa vào sử dụng nhằm bước đầu đánh giá đặc tính phương pháp xét nghiệm so với công bố nhà sản xuất Tính sáng tạo: Hiện nghiên cứu giới định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 sử dụng phương pháp điện hóa phát quang máy miễn dịch tự động có độ xác cao Tuy nhiên sở nghiên cứu, bệnh viện triển khai xét nghiệm cần đầu tư hệ thống máy móc đại Kĩ thuật xét nghiệm ELISA có khả định lượng nồng độ kháng thể có mẫu huyết bệnh nhân với kĩ thuật hệ thống máy đơn giản nhiên chưa có nghiên cứu nước đánh giá giá trị sử dụng phương pháp Vì vậy, nghiên cứu với mục đích xác nhận giá trị sử dụng máy xét nghiệm miễn dịch ELISA bán tự động với KIT xét nghiệm kháng thể chống virus SARS-CoV-2 phương pháp ELISA bán tự động theo hướng dẫn CLSI/EP15A3 EP28A-3C EP17A xác định thêm công cụ giúp xét nghiệm định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 phục vụ cho mục đích nghiên cứu khả theo dõi điều trị bệnh nhân nhiễm SARS-CoV-2 sở y tế địa phương tài liệu tham khảo thực đánh giá ISO phòng xét nghiệm H P Kết nghiên cứu: Từ kết nghiên cứu “Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động trường Đại học Y tế công cộng năm 2022” cho thấy: Độ đúng, khoảng tuyến tính, khoảng tham chiếu phương pháp phù hợp với công bố nhà sản xuất, độ chụm chưa U phù hợp với công bố nhà sản xuất Trung tâm Xét nghiệm Trường Đại học y tế công cộng Nhóm nghiên cứu đưa số giải pháp để nâng cao kĩ thực hành xét H nghiệm ELISA hệ thống máy bán tự động quy trình xác nhận giá trị sử dụng có giá trị tham khảo cho nghiên cứu sau Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Nghiên cứu đưa số giải pháp để nâng cao kĩ thực hành xét nghiệm ELISA hệ thống máy bán tự động, quy trình xác nhận giá trị sử dụng có giá trị tham khảo cho nơi triển khai hệ thống ELISA bán tự động với quy trình rút gọn phù hợp với chi phí nguồn kinh phí có hạn Cơng bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài (ghi rõ tên tạp chí có) nhận xét, đánh giá sở áp dụng kết nghiên cứu (nếu có): Hà Nội ngày 06 tháng 07 năm 2022 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký họ tên) H P U H Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi): Hà Nội ngày tháng Người hướng dẫn (ký họ tên) Xác nhận trường đại học (ký tên đóng dấu) năm H P U H Respiratory Syndrome Coronavirus Infection J Infect Dis 2021 Feb 3;223(2):197– 205 31 Decline of Humoral Responses against SARS-CoV-2 Spike in Convalescent Individuals | mBio [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://journals.asm.org/doi/10.1128/mBio.02590-20 32 Gudbjartsson DF, Norddahl GL, Melsted P, Gunnarsdottir K, Holm H, Eythorsson E, et al Humoral Immune Response to SARS-CoV-2 in Iceland - PubMed [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32871063/ H P U H 45 PHỤ LỤC BẢNG PHÂN BỐ CHI – BÌNH PHƯƠNG, P = 0,05 A B C D Phân bố Chi - bình phương p = 0,05 df nồng độ nồng độ nồng độ 9,35 10,24 10,86 11,14 12,09 10,86 12,83 13,84 14,54 14,45 15,51 16,24 16,01 17,12 17,88 17,53 18,68 19,48 19,02 20,12 21,03 10 20,48 21,71 22,56 11 21,92 23,18 24,06 12 23,34 24,63 25,53 13 24,74 26,06 26,98 14 26,12 27,48 28,42 15 27,49 29,84 30,27 31,25 31,64 32,64 31,53 33,01 34,03 32,85 34,36 35,40 20 H 28,88 34,17 35,70 36,76 21 35,48 37,04 38,11 22 36,78 38,37 39,46 23 38,08 39,68 40,79 24 39,36 41,00 42,12 25 40,65 42,30 43,35 16 17 18 19 28,85 30,19 U H P 46 PHỤ LỤC BẢNG GIỚI HẠN T HAI PHÍA A B t-table C D Two-sided intervals or tests df p=0,10 p=0,05 p=0,01 2,920 4,303 9,925 2,353 3,182 5,841 2,132 2,776 4,604 2,015 2,571 4,032 1,943 2,447 3,707 1,895 2,365 3,499 1,860 2,306 3,355 1,833 2,262 3,250 10 1,812 2,228 3,169 12 1,782 2,179 3,055 14 1,761 2,145 2,977 2,120 2,921 1,734 2,101 2,878 1,725 2,086 2,845 1,711 2,064 2,797 30 1,697 2,042 2,750 40 1,684 2,021 2,704 60 1,671 2,000 2,660 100 1,660 1,984 2,626 ∞ 1,645 1,960 2,576 16 18 20 24 U H 1,746 H P 47 PHỤ LỤC PHIẾU THÔNG TIN ĐỐI TƯỢNG THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG I Thông tin đối tượng tham gia nghiên cứu 1.1 Họ tên: …………………………….…………………….Giới tính:……………………… 1.2 Ngày, tháng, năm sinh:………… …………………………………………………………… 1.3 Số hộ chiếu/ CMND:………………………………….… Ngày cấp:………….… ……… Nơi cấp:………………………………………………………………………………………… 1.4 Số điện thoại liên hệ:…………………………………………………………………………… 1.5 Bạn tiêm …… mũi vaccine ngừa SARS CoV H P 1.6 Tên loại vaccine bạn tiêm  AstraZeneca Gam-COVID-Vac (SputnikV) COVID-19 vaccine Janssen (Johnson & Johnson)  Spikevax (COVID-19 vaccine Moderna)  Comirnaty (Pfizer – BioNTech)  Vero Cell (China National Biotec Group (CNBG)/ Sinopharm)  Hayat-Vax  Abdala U H   II Thông tin tiền sử mắc bệnh truyền nhiễm 2.1 Bạn mắc/ nhiễm SARS CoV chưa?  Đã mắc  Chưa mắc 2.2 Tiền sử mắc bệnh truyền nhiễm:……………………………………………………………… Hà Nội, ngày… tháng… năm 2022 (kí ghi rõ họ tên) TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG Ngày/ lấy mẫu:………………………………… Người lấy mẫu:………………………………… Ngày/ nhận mẫu:……………………………… Người nhận mẫu:……………………………… Tình trạng mẫu: ………………………………………………………………………………………… Từ chối mẫu:……………………………………… Chấp nhận mã bệnh phẩm………………… … Ghi chú:…………………………………………………………………………………………………… 48 PHỤ LỤC 4: BẢN THẢO BÀI BÁO XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM ELISA ĐỊNH LƯỢNG NỒNG ĐỘ KHÁNG THỂ CHỐNG SARS-COV-2 TRÊN MÁY MIỄN DỊCH BÁN TỰ ĐỘNG TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NĂM 2022 Trần Xuân Thắng, Vũ Mai Anh, Nguyễn Đức Trung, Phạm Thúy Ngân Giảng viên hướng dẫn: TS Bùi Thị Ngọc Hà, ThS Nguyễn Thị Thu Hà Trường Đại học Y tế cơng cộng TĨM TẮT Hiện nước phát triển có nhiều phương pháp để định lượng kháng thể chống SARS-CoV- H P có phương pháp ELISA chưa có nghiên cứu nước đánh giá giá trị sử dụng phương pháp Vì vậy, nghiên cứu “Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động trường Đại học Y tế cơng cộng năm 2022” mục đích xác nhận giá trị sử dụng phương pháp ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 phục vụ cho mục đích nghiên cứu khả theo dõi điều trị bệnh nhân nhiễm SARS-CoV-2 sở y tế địa phương Chúng tiến hành xác nhận giá trị sử dụng phương pháp theo hướng dẫn CLSI/EP15A3, EP17-A EP28A-3C Kết cho thấy độ chụm chưa phù hợp với công bố nhà sản xuất, độ xác nhận phù hợp với công bố nhà U sản xuất với giá trị ấn định mẫu QC 20 mức 80 mức 2; hai giá trị ấn định vật liệu tham chiếu nằm khoảng giới hạn xác nhận (9,22 – 32,06 49,418 – 138,922) Khoảng tuyến tính có hệ số tương quan r2 = 0,956 nằm khoảng 0,95 đến có tương quan tuyến tính giá trị đo giá trị thực mẫu Với cỡ mẫu 20 sử dụng kiểm định phân phối chuẩn Shapiro-Wilk có giá trị sig=0.075(>0.05) chứng tỏ phân H phối giá trị kháng thể chống SARS-CoV-2 20 người tình nguyện tham gia (có độ tuổi từ 18-25) tạo nên phân phối chuẩn khoảng tham chiếu nghiên cứu 117,64 – 11243,15U/ml Từ khóa: COVID-19, SARS-CoV-2, xác nhận phương pháp ĐẶT VẤN ĐỀ cần thiết thực nghiên cứu dịch tễ học liên quan đến miễn dịch cộng đồng, khả miễn dịch Ngay sau ca mắc bệnh người tiêm vaccine theo dõi trình điều báo cáo, COVID-19 nhanh chóng bùng phát thành trị bệnh nhân nhiễm bệnh [11][12][13] Các dịch Trung Quốc lan rộng tồn nghiên cứu thực xét nghiệm định lượng kháng giới Tính đến thời điểm tại, dịch COVID-19 thể máy miễn dịch tự động theo ngun lí điện hóa giới diễn biến phức tạp SARS-CoV-2 phát quang, với ưu điểm có độ xác cao nhiên betacoronavirus với vật chất di truyền RNA chuỗi đơn cần đầu tư hệ thống máy móc đắt tiền đáp ứng tiêu với protein cấu trúc bao gồm protein gai (S), vỏ chuẩn phòng xét nghiệm Hiện nước (E), màng (M) nucleocapsid (N) Sau nhiễm virus, phát triển có nhiều phương pháp để định lượng hệ miễn dịch thể đáp ứng cách sinh kháng thể chống SARS-CoV-2 có phương pháp kháng thể chống lại thành phần kháng nguyên ELISA, điểm mạnh phương pháp dễ dàng virus[3][7] việc định lượng kháng thể chống SARS-CoV- triển khai nhiên cần xác định giá trị sử dụng trước 49 đưa vào thực đại trà sở nghiên cứu, điều 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu : Thí nghiệm thực trị bệnh đáp ứng nhu cầu nghiên cứu, điều tra dịch tễ Trung tâm xét nghiệm Trường Đại học Y tế công nước, đáp ứng nhu cầu trình cộng theo dõi, điều trị bệnh cho bệnh nhân nhiễm SARS-CoV- 2.1.4 Thời gian nghiên cứu: Từ 12/2021 đến 6/2022 (Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp nội 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU dung quan trọng việc quản lý chất lượng xét nghiệm Với định 2429 yêu cầu bắt buộc để 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu: Thực nghiệm ứng dụng phòng xét nghiệm đạt mức trở lên Đối với ISO 2.2.2 Thu thập xử lí số liệu: Số liệu lấy từ kết 15189 hồ sơ bắt buộc muốn công nhận đo nồng độ mẫu chuẩn đo đạt ISO) lần, mức nồng độ Cal đo lần nồng độ 20 mẫu ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU huyết thu thập từ đối tượng tham gia nghiên cứu lưu trữ phần mềm Excel, tính tốn theo hướng dẫn CLSI Excel phần mềm SPSS 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 20 Giá trị sử dụng KIT ELISA định lượng nồng H P 2.2.3 Phương pháp phân tích số liệu độ kháng thể chống SARS-CoV-2 hãng Testline máy ELISA bán tự động Trường Đại học Y tế công cộng 2.1.1 Đối tượng đánh giá độ chụm, độ đúng, khoảng Đánh giá độ chụm phương pháp theo hướng dẫn EP15-A3 CLSI đưa Tính SD PXN: Tính SD ngắn hạn (Sr), CV ngắn hạn (CVr), SD dài hạn (Sb), CV dài hạn (CVb) Từ tính độ lệch chuẩn phịng xét tuyến tính KIT xét nghiệm ELISA định lượng kháng thể IgG hãng Testline gồm mẫu QC mẫu chuẩn có nghiệm sau so sánh với giá trị nhà sản xuất Đánh giá độ theo hướng dẫn EP15-A3 U CLSI Nếu giá trị ấn định mẫu QC nằm khoảng nồng độ biết trước kèm theo tin cậy khoảng xác nhận độ phương pháp kiểm tra phù hợp với công bố nhà sản xuất H 2.1.2 Đối tượng đánh giá khoảng tham chiếu: 20 mẫu huyết người từ 18 đến 25 tuổi tiêm đủ mũi vaccine kháng SARS-CoV-2 cộng với tiền sử mắc SARS-CoV-2 sống làm việc Hà Nội Mẫu máu bệnh nhân khám đủ tiêu chuẩn lưu trữ tách huyêt thực xét nghiệm phương pháp ELISA Đánh giá khoảng tuyến tính phương pháp ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV2 theo hướng dẫn EP17-A CLSI Lập phương trình tương quan y = (𝐴 − 𝐷)/(1 + (𝑥/𝐶)^𝐵 ) + 𝐷 hệ số tương quan r2 Xác nhận khoảng tham chiếu phương pháp ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV2 theo hướng dẫn EP28A-3C CLSI Nếu có hai hai kết nằm giới hạn khoảng tham chiếu tuyên bố khoảng tham chiếu nhà sản xuất xác nhận KẾT QUẢ 3.1 ĐÁNH GIÁ ĐỘ CHỤM Bảng Số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm mức nồng độ mức nồng độ Nội dung Mức nồng độ Mức nồng độ Lần Lần Lần Lần Lần Trung bình Ngày 21,09 17,14 16,83 30,08 22,75 21,58 Ngày 22,56 17,14 17,3 23,7 21,18 20,38 Ngày 23,31 21,09 23,7 21,09 17,22 21,28 Ngày 15,47 15,92 14,89 15,99 17,46 15,95 Ngày 20,73 23,31 21,09 Ngày 90,71 84,84 64,04 Ngày 65,71 88,88 117,3 Ngày 86,17 96,1 99,49 Ngày 129,37 129,66 117,3 Ngày 86,17 96,1 H P U 99,49 27,88 27,03 24,01 111,15 75,91 85,33 96,58 79,87 89,67 93,26 93,26 93,66 96,58 79,87 110,56 96,58 79,87 91,64 Bảng Kết thực nghiệm đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động CVr CVb % % Mức 16,31 14,28 Mức 16,78 10,69 H SDPXN CV%PXN Giá trị T C CV%NSX xác nhận 4,42 21,41 3.82 9,35 7,31 11,43 18,24 19,37 24 39,36 7,31 9,36 CV% phòng xét nghiệm mức nồng độ 21.41 19.37 Cả hai giá trị CV% cao giá trị xác nhận mức nồng độ 7.31 mức nồng độ 7.31 3.2 ĐÁNH GIÁ ĐỘ ĐÚNG Bảng Kết thực nghiệm đánh giá độ xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động Kết Mức Mức Trung bình thực nghiệm_𝑥̅ 20.64 94.17 Độ lệch chuẩn thực nghiệm_SD 4,08 16,91 Sai số trung bình_𝑆𝐸𝑥̅ 0,82 3,38 Giá trị 𝑡 2,797 2,797 SD vật liệu tham chiếu_𝑆𝐷ấ𝑛 đị𝑛ℎ 4,00 16,00 Độ không đảm bảo đo U 4,083 16,35 Khoảng tin cậy 18,34 – 22,93 84,71 – 103,62 Khoảng xác nhận 9,22 – 32,06 49,418 – 138,922 20 80 H P Giá trị ấn định vật liệu U Kết thu giá trị ấn định mẫu QC 20 mức 80 mức 2; hai giá trị ấn định vật liệu tham chiếu nằm khoảng giới hạn xác nhận (9,22 – 32,06 49,418 – 138,922) Vậy thực nghiệm cho thấy độ phương pháp phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với công bố nhà sản xuất Tuy nhiên H giá trị ấn định mức có nồng độ 80 U/ml không nằm khoảng tin cậy (84,71 – 103,62) 3.3 ĐÁNH GIÁ KHOẢNG TUYẾN TÍNH Bảng Bảng đánh giá độ tuyến tính phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động Số thứ tự mẫu Cal Giá trị mẫu Cal (U/ml) Độ hấp thụ sau trừ (đo bước sóng 450nm) Mẫu 0,035 Mẫu 20 0,420 Mẫu 80 1,059 Mẫu 320 1,321 Mẫu 640 1,769 Mẫu 1000 2,567 Hệ số tương quan r2 = 0.956 nằm khoảng 0.95 đến 1.Vì có tương quan tuyến tính giá trị đo giá trị thực mẫu Biểu đồ cho thấy đường biểu diễn tuyến tính xét nghiệm phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động đường cong có phương trình y = (A-D)/(1+(x/C)^B)+D Trong đó: A: -0,261; B: 0,54; C: 16668417857,105; D: 939,352 Khoảng tuyến tính kiểm tra từ U/ml đến 1000 U/ml H P Biểu đồ 1: Biểu đồ biểu diễn tuyến tính xét nghiệm phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động U 3.4 XÁC NHẬN KHOẢNG THAM CHIẾU Bảng Kiểm định Shapiro-Wilk cho 20/20 người có giá trị nồng độ kháng thể nằm khoảng tham H chiếu hãng công bố (>22U/ml) Kiểm định Kolmogorov-Smirnova Statistic Kết 0,196 df 20 Kiểm định Shapiro-Wilk Sig Statistic df Sig 0,043 0,914 20 0,075 Biểu đồ 1: Biểu diễn 18/20 mẫu tạo nên khoảng giá trị tham chiếu (117,64 – 11243,15 U/ml) H P Có 20/20 mẫu có kết nằm tạo thành phân phối chuẩn Với cỡ mẫu 20 (0.05) chứng tỏ phân phối giá trị kháng thể chống SARS-CoV-2 20 người tình nguyện tham gia (có độ tuổi từ 18-25) tạo nên phân phối chuẩn Khoảng tham chiếu nghiên cứu 117,64 – 11243,15U/ml Giá trị trung bình 20 mẫu 5260,5U/ml U H Khi thực nghiệm, nhóm nghiên cứu sử dụng BIỆN LUẬN đường chuẩn lập phần mềm tích hợp theo Độ chụm phương pháp xét nghiệm ELISA máy thay sử dụng đường chuẩn xây dựng định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 phần mềm khác với hiệu đo thấp Trong xây máy miễn dịch bán tự động nghiên cứu xác dựng đường chuẩn cần thực bước xét nghiệm nhận chưa phù hợp với giá trị công bố nhà sản theo thiết kế nhà sản xuất để đạt hiệu cao xuất Trong trình thực đo độ chụm phương Nhóm nghiên cứu thấy việc chạy mẫu trắng pháp ELISA, quy trình thực xét nghiệm quan trọng để việc xây dựng đường chuẩn xác nhiều điểm chưa đạt yêu cầu: Kĩ thuật người thực đặc thù kĩ thuật ELISA theo hướng dẫn nhà sản chưa ổn định (thao tác pipet, thao tác rửa,…), hệ xuất, loại bỏ sai số hệ thống, khiến kết đo thống đọc kết iMark microplate absorbance reader xác (khi không chạy mẫu trắng giá trị Cal chưa bảo trì thường xuyên dẫn đến sai số cho có độ hấp thụ cao chưa trừ giá trị dẫn đến kết đọc Qua thực tiễn ta thấy thực ủ giếng sai số kết đo), kiểm soát nhiễm chéo thực thực phản ứng, với giếng ủ lâu cho kết kĩ thuật nồng độ cao ngược lại, thực với nhiều mẫu cần đảm bảo thời gian nhỏ giếng, không thao tác Với cỡ mẫu 20 (0.05) chứng tỏ phân phối giá trị kháng thể chống SARSCoV-2 20 người tình nguyện tham gia (có độ tuổi từ 18-25) tạo nên phân phối chuẩn (Biểu đồ 1) Việc thu thập mẫu ngẫu nhiên giá trị tham chiếu có ý nghĩa tham khảo cho phương pháp xét nghiệm Lượng kháng thể trung bình quần thể có giá trị 5260,5 U/ml 100% đối tượng tham gia nghiên cứu có kháng thể SARS-CoV-2 tồn máu so sánh với kết Catharina Gerhardsa cộng đánh giá động lực học kháng thể chống SARS-CoV-2 đặc điểm Thực nghiệm cho thấy độ phương pháp phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với công bố nhà sản xuất Tuy nhiên giá trị ấn định mức KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu “Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ có nồng độ 80 U/ml không nằm khoảng tin cậy kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự (84,71 – 103,62) động trường Đại học Y tế công cộng năm 2022.” cho thấy: Độ đúng, khoảng tuyến tính, khoảng tham chiếu phương pháp phù hợp với công bố nhà sản xuất, độ chụm chưa phù hợp với công bố nhà sản xuất Health C for D and R FAQs on Testing for SARS-CoV2 FDA [Internet] 2022 Jan 22 [cited 2022 Jun 27]; Available from: https://www.fda.gov/medicaldevices/coronavirus-covid-19-and-medical-devices/faqstesting-sars-cov-2 Trung tâm Xét nghiệm Trường Đại học y tế công cộng KHUYẾN NGHỊ Trưa 11/10: Cả nước tiêm gần 55 triệu liều vaccine COVID-19; nhiều tỉnh ghi nhận thêm F0 - Tin tổng hợp - Cổng thông tin Bộ Y tế [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://moh.gov.vn/tin-tong-hop//asset_publisher/k206Q9qkZOqn/content/trua-11-10-canuoc-a-tiem-gan-55-trieu-lieu-vaccine-covid-19-nhieutinh-ghi-nhan-them-cac-f0 Khi thực xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm định lượng máy bán tự động từ thực tiễn nhóm nghiên cứu thấy rằng: Việc đào tạo cho người thực kĩ thuật mặt quy trình, thao tác thực quan trọng cần tập huấn kĩ thuật viên mặt kĩ thuật trước thực trình xác nhận giá trị sử dụng Việc tuân thủ quy trình, thiết kế xét nghiệm phải tuân thủ theo hướng dẫn nhà sản xuất nhằm đánh giá xác giá trị sử dụng KIT xét nghiệm, tuyệt đối khơng thay đổi quy trình xét nghiệm nhà sản xuất đưa ta phải đánh giá thơng số nhà H P sản xuất so sánh thơng số phịng xét nghiệm với thống số nhà sản xuất đưa theo quy trình CLSI Các cơng thức tính tốn độ chụm, độ đúng, khoảng tuyến tính, khoảng tham chiếu thay đổi có thay đổi số lượng mẫu, thiết kế, phương pháp xét nghiệm, nguồn kinh phí,… Vì vậy, thực xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm cần linh hoạt nghiên U cứu, áp dụng hướng dẫn CLSI để phù hợp điều kiện thực tế phòng xét nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO H Gorbalenya AE, Baker SC, Baric RS, Groot RJ de, Drosten C, Gulyaeva AA, et al Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus: The species and its viruses – a statement of the Coronavirus Study Group [Internet] bioRxiv; 2020 [cited 2022 Jun 27] p 2020.02.07.937862 Available from: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.02.07.937 862v1 Naming the coronavirus disease (COVID-19) and the virus that causes it [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://www.who.int/emergencies/diseases/novelcoronavirus-2019/technical-guidance/naming-thecoronavirus-disease-(covid-2019)-and-the-virus-thatcauses-it Immune-mediated approaches against COVID-19 PubMed [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32661375/ Kostoff RN, Briggs MB, Porter AL, Spandidos DA, Tsatsakis A [Comment] COVID‑19 vaccine safety Int J Mol Med 2020 Nov 1;46(5):1599–602 Nguyễn Thị Ngọc Lan, Tạ Thành Văn, Nguyễn Đình Lộc, Đánh giá phương pháp giá trị lâm sàng xét nghiệm Anti-Sars-Cov-2 hệ thống Roche Cobas e801 | Tạp chí Nghiên cứu Y học [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://tapchinghiencuuyhoc.vn/index.php/tcncyh/article/ view/56 Jieliang Wang, Ying Peng, Haiyue Xu, et al The COVID-19 Vaccine Race: Challenges and Opportunities in Vaccine Formulation - PubMed [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32761294/ WHO WHO health emergency dashboard 2021 Available from: https://covid19.who.int/ [Accessed 11 February 2021] 10 Figueiredo-Campos P, Blankenhaus B, Mota C, Gomes A, Serrano M, Ariotti S, et al Seroprevalence of anti-SARS-CoV-2 antibodies in COVID-19 patients and healthy volunteers up to months post disease onset Eur J Immunol 2020 Dec;50(12):2025–40 11 Sasisekharan V, Pentakota N, Jayaraman A, Tharakaraman K, Wogan GN, Narayanasami U, Orthogonal immunoassays for IgG antibodies to SARSCoV-2 antigens reveal that immune response lasts beyond mo post illness onset - PubMed [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33446512/ 12 Gerhards C, Thiaucourt M, Kittel M, Becker C, Ast V, Hetjens M, et al Longitudinal assessment of anti-SARSCoV-2 antibody dynamics and clinical features following convalescence from a COVID-19 infection Int J Infect Dis IJID Off Publ Int Soc Infect Dis 2021 Jun;107:221–7 13 Peter Chen, M.D., Ajay Ninula, M.D., PhD., Barry Heller, M.D., SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody LYCoV555 in Outpatients with Covid-19 - PMC [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7646625/ 14 Ngô Thu Hường, Chất lượng sinh phẩm Polyvac SARS-CoV-2 IgG/M ELISA chẩn đoán phát kháng thể SARS - COV-2 mẫu lâm sàng | Tạp chí Y học Dự phịng [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://vjpm.vn/index.php/vjpm/article/view/414 15 Westgard, J.O., et al (1999) Basic method validation: Training in analytical quality management for healthcare laboratories Westgard Quality Corporation 22 Clinical and Laboratory Standards Institute (2005) User verification of performance for precision and trueness; Approved guideline 2nd edition, CLSI document EP15-A2 Vol 25 No 17 16 Evaluation of Imprecision, Bias and Total Error of Clinical Chemistry Analysers - PMC [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4310841/ 23 International Organization for Standardization (2007) ISO 15189: 2007 Methods in clinical laboratory accredited Procedures for Validation of Diagnostic 17 Clinical and Laboratory Standards Institute (2005) User demonstration of performance for precision and accuracy; Approved guideline CLSI document EP15-A Vol 21 No 25 18 Thẩm Định Phương Pháp Trong Phân Tích Hóa Học & Vi Sinh Vật - Ds Trần Cao Sơn [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://123docz.net/document/5508742-tham-dinhphuong-phap-trong-phan-tich-hoa-hoc-vi-sinh-vat-dstran-cao-son.htm 24 Rahbar S (1986) An abnormal hemoglobin in red cells of diabetics,Clin Chim Acta, số 22 25 Chesher (2008) Evaluating assay precision 29(Suppl 1): p S23 26 Dr Xavier Fuentes-Arderiu, P.D., Ph.D Trueness and Uncertainty Westgard QC 19 Quyết định 2429/QĐ-BYT 2017 Tiêu chí đánh giá mức chất lượng phòng xét nghiệm y học [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://thuvienphapluat.vn/vanban/The-thao-Y-te/Quyet-dinh-2429-QD-BYT-2017-Tieuchi-danh-gia-muc-chat-luong-phong-xet-nghiem-y-hoc351985.aspx 27 Clinical and Laboratory Standards Institute (2010) Defining, Establishing and Verying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; approved guidline 3rd edition, CLSI document EP28-A3C 20 Linnet, K and J.C Boyd Selection and Analytical Evaluations of Methods-With Statistical Techniques, in Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics 2006 p 353-407 H P U 21 Clinical and Laboratory Standards Institute (2014) User verification of Precision and Estimation of Bias; approved guidline 3rd edition, CLSI document EP15-A3 Vol 34 No 12 H 28 Frontiers | SARS-CoV-2 Molecular Network Structure | Physiology [Internet] [cited 2022 Jun 27] Available from: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2020.0 0870/full 29 Krajewski R, Gołębiowska J, Makuch S, Mazur G, Agrawal S Update on serologic testing in COVID–19 Clin Chim Acta Int J Clin Chem 2020 Nov;510:746–50 30 Crawford KHD, Dingens AS, Eguia R, Wolf CR, Wilcox N, Logue JK, et al Dynamics of Neutralizing Antibody Titers in the Months After Severe Acute PHỤ LỤC BÁO CÁO KINH PHÍ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Tên đề tài: Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm ELISA định lượng nồng độ kháng thể chống SARS-CoV-2 máy miễn dịch bán tự động trường Đại học Y tế công cộng năm 2021 Đơn vị: đồng TT Hoạt động Số lượng Đơn giá Thành tiền Ghi Nội dung 1: KIT xét nghiệm 1.1 Đơn vị Chi phí KIT ELISA định lượng kháng thể SARSCoV-2 KIT ELISA 96 giếng 8,800,000 8,800,000 H P Nội dung 2: Chi in ấn, bồi dưỡng đối tương nghiên cứu 2.1 Chi phí in ấn đề cương Bản 2.2 Bồi dưỡng đối tượng nghiên cứu Người 20 2.3 In báo cáo nghiệm thu Bản 2.4 In nộp thư viện Bản 20,000 U H 60,000 20,000 400,000 20,000 60,000 150,000 150,000 Nội dung 3: Lệ phí đăng báo Chi phí đăng báo Bài 500,000 Tổng 500,000 9,970,000 Số tiền chữ: Chín triệu chín trăm bảy mươi nghìn đồng chẵn./ Ban Giám hiệu Phịng Tài Kế tốn Phịng QLKH&HTPT Chủ nhiệm đề tài PHỤ LỤC H P H U