(Luận văn) xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HẰNG lu an n va XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÁC PHƯƠNG KIỂM NGHIỆM THỊT ĐÔNG LẠNH NHẬP KHẨU p ie gh tn to PHÁP XÉT NGHIỆM VI SINH VẬT ỨNG DỤNG TRONG d oa nl w lu Thú y Mã số: 60 64 01 01 nf va an Chuyên ngành: PGS.TS Phạm Hồng Ngân oi lm ul Người hướng dẫn khoa học: z at nh z m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN ĐẠO HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn lu an n va to p ie gh tn Nguyễn Thị Hằng d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Phạm Hồng Ngân tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài lu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám Đốc, Ban quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y Cộng đồng, Khoa Thú y- Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình an giúp đỡ tơi trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn va n Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể ban lãnh đạo, cán viên chức quan Thú y vùng giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài ie gh tn to Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành p luận văn nl w Hà Nội, ngày tháng năm 2017 d oa Tác giả luận văn nf va an lu oi lm ul Nguyễn Thị Hằng z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix lu an Thesis abstract xi n va Phần Mở đầu Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài p ie gh tn to 1.1 2.1 Một số khái niệm oa Các thông số kỹ thuật thẩm định, xác nhận giá trị sử dụng d lu 2.1.2 nl 2.1.1 Xác định giá trị sử dụng phương pháp w Phần Tổng quan tài liệu Một số cách tiếp cận để xác định giá trị sử dụng phương pháp từ nf va 2.2 an phương pháp 2.3 oi lm ul tổ chức có uy tín Luật an toàn thực phẩm quy phạm pháp luật qui định giới hạn mức độ ô nhiễm vi sinh vật thịt, sản phẩm thịt z at nh Trên giới 2.3.2 Tại Việt Nam 11 2.4 Hệ vi sinh vật gây vệ sinh, an toàn thịt sản phẩm thịt 12 2.4.1 Tổng số Vi sinh vật hiếu khí 12 2.4.2 E.coli 13 2.4.3 Salmonella 14 2.5 Ngộ độc thức ăn thịt nhiễm khuẩn 15 2.5.1 Ngộ độc nhiễm bệnh vi khuẩn 15 z 2.3.1 m co l gm @ an Lu n va ac th iii si 2.5.2 Ngộ độc độc tính vi khuẩn 17 2.6 Các phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật thịt sản phẩm thịt 18 2.6.1 Một số phương pháp định lượng tổng số VSVHK 18 2.6.2 Một số phương pháp định lượng E.coli 19 2.6.3 Phương pháp phát Salmonella 20 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 21 lu an n va Đối tượng, địa điểm nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 21 3.2 Nội dung nghiên cứu 21 3.2.1 Xác định giá trị sử dụng phương pháp 21 3.2.2 Ứng dụng Kiểm nghiệm số mẫu thịt đông lạnh nhập 21 3.3 Nguyên liệu 21 3.3.1 Chủng chuẩn vi sinh vật 21 3.3.2 Các mâũ thịt đông lạnh: 22 3.3.3 Các thiết bị phịng thí nghiệm 23 3.3.4 Mơi trường ni cấy vi sinh vật 22 p ie gh tn to 3.1 nl w Phương pháp nghiên cứu 23 d oa 3.4 Phương pháp thẩm định tiêu chuẩn 23 3.4.2 Phương pháp kiểm nghiệm số tiêu vi sinh vật thịt 27 3.4.3 Phương pháp phân tích số liệu 27 nf va an lu 3.4.1 oi lm ul Phần Kết thảo luận 30 Kết thẩm định phương pháp 30 4.1.1 Kết đánh giá hiệu suất môi trường sử dụng thẩm định phương pháp 30 4.1.2 Kết kiểm tra mẫu đánh giá 30 4.1.3 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa, đặc tính ni cấy chủng chuẩn 31 4.1.4 Kết xác định nồng độ vi khuẩn gây nhiễm 34 4.1.5 Kết thẩm định TCVN 9977:2013 35 4.1.6 Kết thẩm định TCVN 9975: 2013 38 4.1.7 Kết xác nhận giá trị sử dụng TCCS 03: 2016/TYV2-CĐ 39 4.2 Kết kiểm nghiệm số mẫu thịt đông lạnh nhập 44 4.2.1 Kết kiểm nghiệm mẫu thịt bị đơng lạnh 46 z at nh 4.1 z m co l gm @ an Lu n va ac th iv si 4.2.2 Kết kiểm nghiệm mẫu đùi gà 47 4.2.3 Kết kiểm nghiệm mẫu thịt gà nguyên 47 Phần Kết luận kiến nghị 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Kiến nghị 51 Tài liệu tham khảo 52 Phụ lục 57 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AOAC (Association of Official Analytical Chemists) : Hiệp hội phân tích hố phân tích thức lu an n va ATCC (American Type Culture Collection) : Hệ thống chủng chuẩn Hoa Kỳ ATTP : An toàn thực phẩm BYT : Bộ Y Tế CFU (Colony Forming Unit) : Đơn vị hình thành khuẩn lạc E coli : Escherichia coli FAO (Food and Agriculture Organization of the : Tổ chức nông lương quốc tế tn to United Nations) : Cục Thực phẩm Dược Hoa Kỳ HACCP(Hazard Analysis and Critical Control Point) : Phân tích mối nguy điểm kiểm p ie gh FDA (The United States Food and Drug Administration) soát tới hạn : Hội thảo quốc tế đồng hoá nl w ICH (International Conference for Harmonization) :Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế KĐBĐ : Khơng đảm bảo đo d oa ISO (International Organization for Standarlization) lu : Giới hạn phát NMKL (Nordisk metodikkomite for levnedsmidler) : Ủy ban phân tích thực phẩm Bắc Âu OIE (World Organisation for Animal Health) : Tổ chức Thú y giới QCVN : Quy chuẩn Việt Nam TCCS oi lm ul nf va an LOD ( Limit of Detection) z at nh TCVN : Tiêu chuẩn sở TPP (Trans-Pacific Partnership Agreement) : Tiêu chuẩn Việt Nam : Hiệp định đối tác xuyên z Thái Bình Dương @ : Tổng số vi sinh vật hiếu khí gm TSVSVHK : Tổ chức Y tế giới VSATTP : Vệ sinh an toàn thực phẩm WTO (World Trade Organization) : Tổ chức thương mại giới m co l WHO (World Health Organization) an Lu n va ac th vi si DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Qui định chung Châu âu (EC) số 2073/2005 tiêu chuẩn vi sinh đối thịt sản phẩm thịt 10 Bảng 2.2 Giới hạn vi sinh vật thịt sản phẩm thịt theo QCVN 8-3/BYT 11 Bảng 3.1 Mơi trường dùng để thẩm định phương pháp phân tích tiêu VSV 22 an n va Bảng 4.2 Kết xét nghiệm mẫu đánh giá 31 Bảng 4.3 Kết kiểm tra, so sánh đặc tính sinh hóa vi khuẩn 32 Bảng 4.4 Kết dò nồng độ vi khuẩn E.coli, Salmonella .34 Bảng 4.5 Kết độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9977:2013, TCVN 4884-2:2015 35 Bảng 4.6 Kết tính độ khơng đảm bảo đo TCVN 9977:2013 .37 Bảng 4.7 Kết độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9975:2013, TCVN 7429-2:2008 38 Bảng 4.8 Kết xác định độ không đảm bảo đo TCVN 9975:2013 39 Bảng 4.9 Kết xác định nồng độ gây nhiễm 40 ie gh tn to Kết đánh giá hiệu suất môi trường 30 p lu Bảng 4.1 nl w oa Bảng 4.10 Kết Tỉ lệ Salmonella dương tính 41 d Bảng 4.11 Kết xác định giới hạn phát phương pháp 41 lu an Bảng 4.12 Kết phát Salmonella 42 va Bảng 4.13 Kết so sánh tương đồng TCCS03:2016; TCVN 4884:2005 43 oi lm ul nf Bảng 4.14 Kết thực thử nghiệm thành thạo 44 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Khuẩn lạc vi khuẩn môi trường chọn lọc đặc trưng 34 Hình 4.2 Tỉ lệ % lơ mẫu kiểm nghiệm, 45 Hình 4.3 Kết định lượng tổng số VSVHK mẫu thịt bò 46 Hình 4.4 Kết định lượng tổng số VSVHK lơ mẫu đùi gà 47 Hình 4.5 Kết định lượng tổng số VSVHK lô gà nguyên .48 Hình 4.6 Tỉ lệ nhiễm tổng số VSVHK mẫu kiểm nghiệm 49 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Hằng Tên luận văn: “ Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu” Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu lu - Đảm bảo kết thử nghiệm an - Cung cấp số liệu cho hoạt động đánh giá công nhận phép thử va n - Ứng dụng kiểm nghiệm, xét nghiệm mẫu thịt đông lạnh Phương pháp thẩm định gh tn to Phương pháp nghiên cứu p ie Thẩm định phương pháp theo Trần Cao Sơn 2010, Tiêu chuẩn Việt nam 9332:2012 nl w Phương pháp kiểm nghiệm mẫu thịt d oa + Định lượng tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013 lu + Định lượng E.coli theo TCVN 9975:2013 va an + Định tính Salmonella theo TCCS 03-2016/TYV2-CĐ nf Kết kết luận oi lm ul Kết thẩm định phương pháp định lượng Tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013: Các thông số: Độ lặp lại Sr: có giá trị 0,045-0,047 , Độ tái lặp S R có giá trị z at nh 0,033-0,038, giá trị độ không đảm bảo đo phương pháp Ue : 0,126 Kết thẩm định phương pháp định lượng E.coli theo TCVN 9975: 2013 Các thông số đạt độ lặp lại Sr nằm khoảng 0,029-0,033, Độ tái lặp S R có giá trị z @ 0,032- 0,039, giá trị độ không đảm bảo đo phương pháp Ue: 0,098 gm Kết xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phát hiên Salmonella :các thông l số giới hạn phát LOD: 2CFU/25g, độ nhạy Se: 95,56%, độ đặc hiệu Sp: 100%, độ m co xác Ac: 97,33%) Kết kiểm nghiệm mẫu thịt an Lu 94 lơ (470) mẫu thịt bị, 64 lô (320 mẫu) thịt đùi gà, 15 lô (75 mẫu) thịt gà nguyên đông lạnh nhập xét nghiệm tiêu Tổng số vi sinh vật hiếu n va ac th ix si PHỤ LỤC 3:SỐ LIỆU THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 3.1 Kết đếm tổng số VSVHK Kết đếm tổng số VSVHK (CFU/g) Nền mẫu thịt bò PP thay PP Tham chiếu PP thay PP Tham chiếu lu an n va Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày L1 670 610 590 570 590 510 570 450 L2 600 550 520 540 620 560 620 470 L3 640 540 550 720 650 650 650 540 L4 530 650 580 500 480 480 480 480 660 650 450 460 520 480 520 460 670 550 620 490 590 540 670 540 L7 670 550 450 550 510 580 580 L8 490 470 510 520 630 630 630 540 L9 610 590 550 530 630 610 680 560 L10 680 580 440 520 550 520 430 p ie gh tn to Ngày oa Lần lặp Nền mẫu thịt gà nl L6 w L5 d 640 ul nf va an lu oi lm 420 z at nh Ghi chú: PP thay thế: TCVN 9977:2013 PP tham chiếu: TCVN 4884-1:2015 z m co l gm @ an Lu n va ac th 63 si Nền mẫu thịt gà TCVN 9977:2013 TCVN 4884-1:2015 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 xtb Sr2 Sr Srpp= SR2 SR 590 2.770852 510 2.7076 0.0109 0.0001193 -0.032 0.001027 0.0633 0.004 570 2.7559 450 2.6532 -0.014 0.00019 -0.047945 0.0023 0.1026623 0.01054 620 2.792392 560 2.7482 0.0325 0.0010538 0.0086 7.35E-05 0.0442 0.00195 620 2.7924 470 2.6721 0.0228 0.00052 -0.02906 0.0008 0.1202938 0.01447 650 2.812913 650 2.8129 0.053 0.0028072 0.0733 0.005373 0 650 2.8129 540 2.7324 0.0433 0.00188 0.031236 480 2.681241 480 2.6812 -0.079 0.0061919 -0.058 0.003408 0 480 2.6812 480 2.6812 -0.088 520 2.716003 480 2.6812 -0.044 0.0019296 -0.058 0.003408 0.0348 0.00121 520 2.716 460 2.6628 -0.054 0.00287 -0.0384 590 2.770852 540 2.7324 0.0109 0.0001193 -0.007 5.21E-05 0.0385 0.00148 670 2.8261 540 2.7324 0.0565 0.00319 0.031236 0.001 550 2.740363 510 2.7076 580 2.7634 580 2.7634 -0.006 3.8E-05 0.06227 0.0039 630 2.799341 630 2.7993 0.0394 0.0015532 0.0597 0.003567 630 2.799341 610 2.7853 0.0394 0.0015532 0.0457 520 2.716003 550 2.7404 -0.044 0.0019296 0.0007 5.59E-07 -0.024 0.00059 2.7599 -0.02 0.0003829 -0.032 0.001027 0.0328 0.00108 0.00209 0.001 0.0805196 0.00648 0.0004 0 0.0015 0.0532455 0.00284 0.093681 0.00878 0 0 630 2.7993 540 2.7324 0.0298 0.00089 0.031236 0.001 0.0669468 0.00448 0.014 0.0002 680 2.8325 560 2.7482 0.0629 0.00396 0.047031 0.0022 0.0843209 0.00711 520 430 2.6335 -0.054 0.00287 -0.067689 0.0046 0.0825349 0.00681 2.74 0.00196 0.04427 0.0078 -0.019916 2.716 xtb 2.77 Sr2 Sr Srpp= 5E-04 SR2 0.023 SR 0.0022 0.0472 0.0457 2.7 0.003 0.052 0.002 0.045 0.049 0.003 0.055 lu Kiểm định phương sai PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9977:2013 2.77 2.7924 2.8 2.68 2.72 2.77085 2.74 2.7993 2.8 2.716 2.7 2.75 2.8 2.68 2.68 2.732 2.7076 2.799 2.78533 2.74 TCVN4884-1:2015 2.76 2.7924 2.8 2.68 2.72 2.82607 2.76 2.7993 2.83 2.716 2.7 2.67 2.7 2.68 2.66 2.732 2.7634 2.732 2.74819 2.633 an va Anova: Single Factor n SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9977:2013 20 55 2.75 TCVN4884-1:2015 20 55 2.74 gh tn to p ie ANOVA Source of Variation SS df MS Between 0.0021 Groups Within Groups 0.106 38 Total 0.108 F P-value F crit 0.74 0.39373 4.1 39 w 670 2.826075 610 2.7853 0.0366 0.0013413 0.0197 0.000386 0.0407 0.00166 590 2.7709 570 2.7559 0.0461 0.00212 0.042428 600 2.778151 550 2.7404 -0.011 0.0001277 -0.025 0.000641 0.0378 0.00143 520 2.716 540 2.7324 -0.009 7.7E-05 0.018947 0.0004 -0.01639 0.00027 640 2.80618 540 2.7324 0.0167 0.0002798 -0.033 0.001107 0.0738 0.00544 550 2.7404 720 2.8573 0.0156 0.00024 0.143886 0.0207 -0.11697 0.01368 530 2.724276 650 2.8129 -0.065 0.0042479 0.0472 0.002232 -0.089 0.00786 580 2.7634 500 2.699 0.0386 0.00149 -0.014477 0.0002 0.064458 0.00415 660 2.819544 650 2.8129 0.0301 0.0009056 0.0472 0.002232 0.0066 4.4E-05 450 2.6532 460 2.6628 -0.072 0.00512 -0.050689 0.0026 -0.009545 9.1E-05 670 2.826075 550 2.7404 0.0366 0.0013413 -0.025 0.000641 0.0857 0.00735 620 2.7924 490 2.6902 0.0676 0.00457 -0.023251 0.0005 0.1021956 0.01044 640 670 2.8261 0.0167 0.0002798 0.0604 0.003648 0.0004 550 2.7404 450 2.6532 0.0156 0.00024 -0.060234 0.0036 0.0871502 490 2.690196 470 2.6721 -0.099 0.0098516 -0.094 0.008756 0.0181 0.00033 510 2.7076 520 2.716 -0.017 0.0003 0.002556 7E-06 -0.008433 7.1E-05 610 590 2.7709 -0.004 1.699E-05 0.0052 2.68E-05 0.0145 0.00021 550 2.7404 530 2.7243 0.0156 0.00024 0.010829 0.0001 0.0160868 0.00026 580 2.7634 0.0431 0.0018539 -0.002 5.04E-06 0.0691 0.00477 420 2.6232 440 2.6435 -0.102 0.01031 -0.069994 0.0049 -0.020203 0.00041 2.77 0.00225 0.04743 0.04709 oi lm ul 2.7895 -0.02 nf va an 2.78533 680 2.832509 lu 2.80618 d 0.0022 0.0468 xtb 2.72 Sr2 Sr Srpp= 0.001 SR2 0.038 SR 0.0018 0.0149772 0.00022 0.0076 2.71 0.003 0.052 0.004 0.062 0.06 0.002 0.043 z at nh L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 xtb Sr2 Sr Srpp= SR2 SR oa nl Nền mẫu thịt bò TCVN 9977:2013 TCVN 4884-1:2015 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) z Kiểm định phương sai PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9977:2013 2.83 2.7782 2.8 2.72 2.82 2.82607 2.81 2.6902 2.79 2.833 2.8 2.74 2.7 2.81 2.81 2.74 2.8261 2.672 2.77085 2.763 TCVN4884-1:2015 2.77 2.716 2.7 2.76 2.65 2.79239 2.74 2.7076 2.74 2.623 2.8 2.73 2.9 2.7 2.66 2.69 2.6532 2.716 2.72428 2.643 @ Anova: Single Factor gm 0.1371 F P-value F crit 12.6 0.00104 4.1 an Lu Total m co ANOVA Source of Variation SS df MS Between 0.0342 Groups 0.03 Within Groups 0.1029 38 l SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9977:2013 20 56 2.78 TCVN4884-1:2015 20 54 2.72 39 n va ac th 64 si 3.2 Kết đếm E.coli tổng số Kết đếm tổng số E.coli (CFU/g) Nền mẫu thịt bò PP thay Lần lặp Ngày Nền mẫu thịt gà PP Tham chiếu Ngày Ngày Ngày PP thay Ngày PP Tham chiếu Ngày Ngày Ngày an n va 1520 1550 1300 1470 1620 1470 1380 L2 1690 1370 1690 1380 1600 1660 1630 1500 L3 1820 1710 1820 1560 1670 1480 1670 1510 L4 1590 1410 1590 1450 1650 1460 1800 1460 1700 1690 1700 1700 1650 1360 1650 1690 1540 1610 1630 1480 1620 1480 1490 1470 1680 1680 1730 1380 1730 1560 1510 1390 1690 1570 1690 1560 1690 1500 1490 1520 1480 1400 1420 1620 1400 1650 1500 p ie gh tn to 1550 oi lm lu L1 1610 d oa L6 nl w L5 1620 L8 1510 L9 1610 1710 L10 1590 1370 an lu L7 ul nf va 1360 1590 z at nh Ghi chú: PP thay thế: TCVN 9975:2013 PP tham chiếu: TCVN 7429-2:2008 z m co l gm @ an Lu n va ac th 65 si Nền mẫu thịt gà TCVN 9975:2013 TCVN 7429-2:2008 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) 1470 3.167317 1620 3.2095 -0.037 0.0014051 0.0324 0.00105 -0.042 0.00178 1470 3.1673 1380 3.1399 -0.043 0.00181 -0.037005 0.0014 0.0274382 0.00075 L1 1600 3.20412 1660 3.2201 -7E-04 4.648E-07 0.043 0.001849 -0.016 0.00026 1630 3.2122 1500 3.1761 0.0023 5.3E-06 -0.000793 6E-07 0.0360963 0.0013 L2 1670 3.222716 1480 3.1703 0.0179 0.0003209 -0.007 4.68E-05 0.0525 0.00275 1670 3.2227 1510 3.179 0.0128 0.00016 0.002093 4E-06 0.0437395 0.00191 L3 1650 3.217484 1460 3.1644 0.0127 0.0001608 -0.013 0.000163 0.0531 0.00282 1800 3.2553 1460 3.1644 0.0454 0.00206 -0.012531 0.0002 0.0909196 0.00827 L4 L5 1650 3.217484 1360 3.1335 0.0127 0.0001608 -0.044 0.001898 0.0839 0.00705 1650 3.2175 1690 3.2279 0.0076 5.8E-05 0.051003 0.0026 -0.010403 0.00011 1480 3.170262 1620 3.2095 -0.035 0.001193 0.0324 0.00105 -0.039 0.00154 1480 3.1703 1490 3.1732 -0.04 0.00157 -0.003698 1E-05 -0.002925 8.6E-06 L6 L7 1730 3.238046 1380 3.1399 0.0332 0.0011052 -0.037 0.001386 0.0982 0.00964 1730 3.238 1560 3.1931 0.0282 0.00079 0.01624 0.0003 0.0449215 0.00202 1690 3.227887 1570 3.1959 0.0231 0.0005329 0.0188 0.000353 0.032 0.00102 1690 3.2279 1560 3.1931 0.018 0.00032 0.01624 0.0003 0.0347621 0.00121 L8 1490 3.173186 1520 3.1818 -0.032 0.0009995 0.0047 2.25E-05 -0.009 7.5E-05 1480 3.1703 1400 3.1461 -0.04 0.00157 -0.030756 0.0009 0.0241337 0.00058 L9 L10 1620 3.209515 1400 3.1461 0.0047 2.221E-05 -0.031 0.00096 0.0634 0.00402 1650 3.2175 1500 3.1761 0.0076 5.8E-05 -0.000793 6E-07 0.0413927 0.00171 xtb 3.2048 3.18 xtb 3.21 3.18 Sr2 0.00066 0.001 Sr2 0.008 0.006 Sr 0.02561 0.0312 Sr 0.092 0.075 0.0286 Srpp= Srpp= 0.0838 SR2 0.002 SR2 9E-04 SR 0.039 SR 0.03 lu an Kiểm định phương sai PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9975:2013 3.17 3.2041 3.2 3.22 3.22 3.17026 3.24 3.2279 3.17 3.21 3.2 3.22 3.2 3.16 3.13 3.21 3.1399 3.196 3.18184 3.146 TCVN7429-2:2008 3.17 3.2122 3.2 3.26 3.22 3.17026 3.24 3.2279 3.17 3.217 3.1 3.18 3.2 3.16 3.23 3.173 3.1931 3.193 3.14613 3.176 va n Anova: Single Factor p ie gh tn to SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9975:2013 20 64 3.19 TCVN7429-2:2008 20 64 3.19 F P-value F crit 0.06 0.80892 4.1 0.0381 39 oa Total nl w ANOVA Source of Variation SS df MS Between6E-05 Groups Within Groups 0.038 38 d Nền mẫu thịt Bò TCVN 9975:2013 TCVN 7429-2:2008 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) lu 3.190332 1520 3.1818 -0.021 0.0004425 0.0032 1E-05 0.0085 7.2E-05 1550 3.1903 1300 3.1139 -0.025 0.00061 -0.060822 0.0037 0.0763883 0.00584 3.227887 1370 3.1367 0.0165 0.0002729 -0.042 0.00176 0.0912 0.00831 1690 3.2279 1380 3.1399 0.0128 0.00016 -0.034886 0.0012 0.0880076 0.00775 3.233 0.0487 0.0023721 0.0543 0.002951 0.0271 0.00073 1820 3.2601 1560 3.1931 3.201397 1410 3.1492 va 3.260071 1710 an 0.045 0.00203 0.018359 0.0003 0.0669468 0.00448 -0.01 9.941E-05 -0.029 0.000868 0.0522 0.00272 1590 3.2014 1450 3.1614 -0.014 0.00019 -0.013398 0.0002 0.0400291 nf 3.230449 1690 3.2279 0.0191 0.0003641 0.0492 0.002422 0.0026 6.6E-06 1700 3.2304 1700 3.2304 0.0154 0.00024 0.055683 0.0031 3.206826 1540 3.1875 -0.005 2.063E-05 0.0088 7.82E-05 0.0193 0.00037 1610 3.2068 1630 3.2122 -0.008 ul 3.178977 1360 3.1335 -0.032 0.0010492 -0.045 0.002037 0.0454 0.00206 1510 3.206826 1710 3.233 -0.005 2.063E-05 0.0543 0.002951 -0.026 0.00068 1690 3.2279 1500 3.1761 0.0128 0.00016 0.001326 2E-06 0.0517954 0.00268 3.18 0.00053 0.02296 0.00176 0.0647 0.00418 1590 3.2014 1420 3.1523 -0.014 0.00019 -0.022477 0.0005 0.0491088 0.00241 0.0017 0.0408 0.03 3.22 z at nh 3.2114 0.001 0.0359621 0.00129 -0.01 9.941E-05 -0.042 3.143 -0.036 6.8E-05 0.037422 0.0014 -0.005362 2.9E-05 0.0013 -0.031751 3.201397 1370 3.1367 3.179 1390 0.0016 3.209515 1470 3.1673 -0.002 3.432E-06 -0.011 0.000129 0.0422 0.00178 1680 3.2253 1680 3.2253 0.0103 0.00011 0.050544 0.0026 oi lm 0.001 0.032 3.17 6E-04 0.024 0.002 0.039 0.0325 0.001 0.036 z 1550 L1 1690 L2 1820 L3 1590 L4 1700 L5 1610 L6 1620 L7 1510 L8 1610 L9 L10 1590 xtb Sr2 Sr Srpp= SR2 SR gm @ PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9975:2013 3.19 3.2279 3.3 3.2 3.23 3.20683 3.21 3.179 3.21 3.201 3.2 3.14 3.2 3.15 3.23 3.188 3.1673 3.134 3.233 3.137 TCVN7429-2:2008 3.19 3.2279 3.3 3.2 3.23 3.20683 3.23 3.179 3.23 3.201 3.1 3.14 3.2 3.16 3.23 3.212 3.2253 3.143 3.17609 3.152 l Anova: Single Factor P-value F crit 0.9924 4.1 n 39 66 ac th 0.0522 va Total F an Lu ANOVA Source of Variation SS df MS Between1E-07 Groups Within Groups 0.0522 38 m co SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9975:2013 20 64 3.2 TCVN7429-2:2008 20 64 3.19 si lu an 3.3 kết phát Salmonella enteritidic TCVN 4829:2005 Nồng độ vi khuẩn gây nhiễm/25g Nồng độ vi khuẩn gây nhiễm/25g n va TCCS 03:2016/TYV2-CĐ to Lần 2CFU lặp KH KQ gh tn 4CFU p ie KH 9CFU KQ KH KQ 18 CFU 32 CFU 2CFU KH KH KH KQ KQ 4CFU KQ KH 9CFU KQ KH KQ 18 CFU 32 CFU KH KH KQ KQ Nền mẫu thịt bò B11 + B21 + B31 + B41 + IB1 - IB11 + IB21 + IB31 + IB41 + B12 + B22 + B32 + B42 + IB2 + IB12 + IB22 + IB32 + IB42 + B23 + B33 + B43 + IB3 - IB13 + IB23 + IB33 + IB43 + va B34 + B44 + IB4 - IB14 + IB24 + IB34 + IB44 + B35 + B45 + IB5 + IB15 + IB25 + IB35 + IB45 + B36 + B46 + IB6 + IB16 + IB26 + IB36 + IB46 + B27 + B37 + B47 + IB7 + IB17 + IB27 + IB37 + IB47 + B18 + B28 + B38 + @ B2 - B3 + B13 + B4 + B14 + B24 + B5 + B15 + B25 + B6 + B16 + B26 + B7 + B17 + B8 + B48 + IB8 + IB18 + IB28 + IB38 + IB48 + B9 + B19 + B29 + B39 + B49 + IB9 + IB19 + IB29 + IB39 + IB49 + 10 B10 + B20 + B30 + B40 + B50 + IB10 + IB20 + IB30 + IB40 + IB50 + d - oa nl w B1 an lu oi lm ul nf z at nh z m o l.c gm an Lu Nền mẫu thịt gà n va ac th 67 si KQ KH - G11 + G21 + G31 + G2 + G12 + G22 + G3 + G13 + G4 - G14 + G5 - G15 - G6 - G16 - G26 + G7 + G17 + G27 + G8 + G18 + G28 + G9 + G19 + 10 G10 + G20 + n va to p ie gh tn G1 5CFU KQ 10CFU 20 CFU 1CFU KH KH KH KQ KH G41 + IG1 - IG11 - IG21 + IG31 + IG41 + G32 + G42 + IG2 + IG12 + IG22 + IG32 + IG42 + G23 + G33 + G43 + IG3 + IG13 + IG23 + IG33 + IG43 + G24 + G34 + G44 + IG4 - IG14 - IG24 + IG34 + IG44 + G25 + G35 + G45 + IG5 - IG15 + IG25 + IG35 + IG45 + va KH an 3CFU oa nl w lu CFU G36 + G46 + IG6 - IG16 + IG26 + IG36 + IG46 + G37 + G47 + IG7 + IG17 + IG27 + IG37 + IG47 + G38 + G48 + IG8 - IG18 + IG28 + IG38 + IG48 + G29 + G39 + G49 + IG9 + IG19 + IG29 + IG39 + IG49 + G30 + G40 + IG10 + IG20 + IG30 + IG40 + IG50 + KH KQ KQ KQ 3CFU 5CFU KQ KH KQ 10CFU 20CFU KH KH KQ KQ d an lu oi lm ul nf z at nh z o l.c gm @ G50 + m Ghi chú: KH: Kí hiệu mẫu KQ: Kết (+): kết dương tính (-): kết âm tính an Lu 30 mẫu âm tính bổ sung chủng Escherichia coli ATCC® 11303™ Vibrio parahaemolyticus ATCC® 17802TM Staphylococus aureus subsp aureus ATCC® 29213TM D1 D2 D3 xét nghiệm theo phương pháp cho kết âm tính n va ac th 68 si PHỤ LỤC KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY, ĐỘ ĐẶC HIỆU, ĐỘ ĐÚNG, CHỈ SỐ TƯƠNG ĐỒNG PP ĐỊNH TÍNH SALMONELLA 4.1 Nền mẫu thịt bị (PP thay thế) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation lu Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 48 48 Negative 30 32 50 30 80 an n va Lower - Upper 95% CIs Sensitivity 96% (86.54, 98.9¹ ) 100% (88.65, 100¹ ) oa 100% (92.59, 100¹ ) Negative Predictive Value 93.75% (79.85, 98.27¹ ) va 97.5% (91.34, 99.31¹ ) to Estimate p ie gh tn Parameter nl w Specificity Positive Predictive Value d an lu Diagnostic Accuracy Method nf Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score oi lm ul Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.04 (0.01501 - 0.1066) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9474 (0.7285 - 1.166) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a 42.78% Negative Test Bias Index -0.025 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 69 si 4.2 Nền mẫu thịt bò (PP Tham chiếu) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation lu Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 47 47 Negative 30 33 50 30 80 an va n Parameter Lower - Upper 95% CIs 94% (83.78, 97.94¹ ) 100% (88.65, 100¹ ) 100% (92.44, 100¹ ) 90.91% (76.43, 96.86¹ ) 96.25% (89.55, 98.72¹ ) Sensitivity p ie gh tn to Estimate w Specificity oa nl Positive Predictive Value d Negative Predictive Value lu va an Diagnostic Accuracy Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score oi lm ul nf Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.06 (0.03122 - 0.1153) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9216 (0.7031 - 1.14) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 35.69% Test Bias Index -0.0375 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 70 si 4.3 Nền mẫu thịt gà (PP Thay thế, tham chiếu) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation lu Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 38 38 Negative 30 32 40 30 70 an va n Parameter Lower - Upper 95% CIs 95% (83.5, 98.62¹ ) 100% (88.65, 100¹ ) 100% (90.82, 100¹ ) 93.75% (79.85, 98.27¹ ) 97.14% (90.17, 99.21¹ ) Sensitivity p ie gh tn to Estimate w Specificity oa nl Positive Predictive Value d Negative Predictive Value lu va an Diagnostic Accuracy Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score oi lm ul nf Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.05 (0.01877 - 0.1332) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9421 (0.7083 - 1.176) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 44.91% Test Bias Index -0.02857 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 71 si 4.4 Kết phân tích mẫu (PPthay thế) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation lu Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 86 86 Negative 60 64 90 60 150 an va n Parameter Lower - Upper 95% CIs 95.56% (89.12, 98.26¹ ) 100% (93.98, 100¹ ) 100% (95.72, 100¹ ) 93.75% (85, 97.54¹ ) 97.33% (93.34, 98.96¹ ) Sensitivity p ie gh tn to Estimate w Specificity oa nl Positive Predictive Value d Negative Predictive Value lu va an Diagnostic Accuracy Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score oi lm ul nf Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.04444 (0.02723 - 0.07255) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9451 (0.7853 - 1.105) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 43.92% Test Bias Index -0.02667 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 72 si 4.5 Kết phân tích mẫu (PPtham chiếu) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation lu Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 85 85 Negative 60 65 90 60 150 an va n Parameter Lower - Upper 95% CIs 94.44% (87.65, 97.6¹ ) 100% (93.98, 100¹ ) 100% (95.68, 100¹ ) 92.31% (83.22, 96.67¹ ) 96.67% (92.43, 98.57¹ ) Sensitivity p ie gh tn to Estimate w Specificity oa nl Positive Predictive Value d Negative Predictive Value lu va an Diagnostic Accuracy Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score oi lm ul nf Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.05556 (0.03754 - 0.08222) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9315 (0.7718 - 1.091) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 40.18% Test Bias Index -0.03333 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 73 si PHỤ LỤC 5: KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM THÀNH THẠO TCCS 03:2016/TYV2-CĐ Phiếu kết thử nghiệm QPT 02/17 - Beef 17A17 & 17B17 03 Mã số PTN (1) Tên mẫu lu Beef 17A17 Phương pháp thử Tên tiêu Định tính an Salmonella spp TCCS 03:2016/TYV2 -CĐ Kết Đơn vị Không phát hiện/Not detected /25 g Phát hiện/Detected n va to Định tính Salmonella spp TCCS 03:2016/TYV2 -CĐ Không phát hiện/Not detected /25 g Phát hiện/Detected p ie gh tn Beef 17B17 d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 74 si PHỤ LỤC Tóm tắt tiêu chuẩn TCVN 9977:2013 Phương pháp sử dụng đĩa cấy chứa môi trường dinh dưỡng khô chất tạo đông tan nước lạnh Cho ml dịch huyền phù nồng độ pha loãng vào đĩa Dàn dung dịch huyền phù diện tích khoảng 20cm2 Chất tạo đơng có thành phần đĩa làm môi trường dinh dưỡng đĩa đông lại Đĩa ủ ấm 35oC ± 1oC 48 ± 3h đếm khuẩn lạc Nước dùng để pha loãng (dung dịch nước đệm phosphat) lu Hòa tan 34g kali dihydro phosphat (KH2PO4) vào 500ml nước đựng bình định mức 1lít chỉnh pH đến 7.2 khoảng 175ml dung dịch natri hydroxit M an n va thêm nước đến vạch Pha loãng 1.25ml dung dịch đến lít nước đun sôi để nguội hấp áp lực 15 phút 121oC ức chế phát triển vi sinh vật gh tn to Nước dùng để pha lỗng khơng chứa xitrat bisulfit thiosulfat gây Cách tiến hành: p ie Đặt đĩa đếm vi sinh vật hiếu khí PetrifilmTM lên bề mặt phẳng Nhấc màng nl w mỏng phía nhỏ 1ml huyền phù mẫu thử vào màng Đậy cẩn thận màng mỏng phía xuống chất cấy Dàn huyền phù diện tích 20cm2 d oa cách ấn nhẹ xuống tâm dụng cụ dàn mẫu (mặt gờ dụng cụ dàn mẫu hướng xuống dưới) Lấy dụng cụ dàn mẫu để yên đĩa phút cho gel đông đặc lại lu va an Đặt đĩa vào tủ ấm theo phương nằm ngang với nắp hướng lên không chồng cao 20 đĩa ủ ấm đĩa nhiệt độ 35oC ± 1oC 48 h ± 3h Sau ủ xong ul nf bảo quản đơng lạnh nhiệt độ nhỏ - 15oC đến ngày cần oi lm Đếm khuẩn lạc đĩa sau giai đoạn ủ sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc Có thể sử dụng khuếch đại rọi sáng để thuận tiện cho việc đếm Đếm tất Tính kết quả: z at nh khuẩn lạc có màu đỏ đĩa chứa từ 30 khuẩn lạc đến 300 khuẩn lạc z Để tính số lượng vi sinh vật hiếu khí nhân tổng số lượng khuẩn lạc đĩa gm @ (hoặc số lượng trung bình khuẩn lạc đĩa đếm đĩa kép độ pha loãng) với số nghịch đảo độ pha loãng tương ứng Khi đếm khuẩn lạc m co l đĩa kép độ pha loãng tính số lượng trung bình khuẩn lạc cho độ pha lỗng trước xác định trung bình số đếm tổng vi sinh vật hiếu khí an Lu Nếu khơng có đĩa có số đếm lớn 30 khuẩn lạc có màu đỏ ghi lại số đếm xác đĩa có độ pha lỗng thấp (tương ứng với dung dịch pha lỗng nhất) n va Nếu tất đĩa có số đếm lớn 300 xác định số đếm ước tính cách ac th 75 si đếm số khuẩn lạc nhiều vng đại diện tính số đếm trung bình vng nhân số đếm với 20 (diện tích vùng sinh trưởng khoảng 20 cm2) Trong trường hợp phải báo cáo số ước tính Nếu đĩa có mật độ khuẩn lạc q lớn để ước tính số đếm kết báo cáo "quá nhiều để đếm" Tóm tắt phương pháp TCVN 9975: 2013 Nguyên lý: Phương pháp sử dụng đĩa cấy chứa môi trường dinh dưỡng khô chất lu tạo đông tan nước lạnh Cho dung dịch huyền phù mẫu thử chưa pha loãng pha loãng vào đĩa với lượng ml đĩa Dàn dung dịch huyền an phù diện tích khoảng 20 cm2 Chất tạo đơng có thành phần đĩa làm môi trường dinh dưỡng đĩa đông lạnh Đĩa ủ ấm 35 °C ± °C thời gian va n thích hợp đếm khuẩn lạc Đặt đĩa đếm E coli/Coliform PetrifilmTM lên bề mặt phẳng Nhấc màng mỏng phía nhỏ 1ml huyền phù mẫu thử vào màng Đậy cẩn p ie gh tn to Cách tiến hành: nl w thận màng mỏng phía xuống chất cấy Dàn huyền phù diện tích 20cm2 cách ấn nhẹ xuống tâm dụng cụ dàn mẫu (mặt láng dụng cụ dàn mẫu hướng d oa xuống dưới) Lấy dụng cụ dàn mẫu để yên đĩa phút cho gel đông đặc lại Đặt đĩa vào tủ ấm theo phương nằm ngang với nắp hướng lên không chồng cao 20 đĩa ủ ấm đĩa nhiệt độ 35°C ± 1°C 48h ± 4h Sau ủ xong bảo an lu va quản đông lạnh nhiệt độ nhỏ -15°C đến ngày cần oi lm ul nf Đếm khuẩn lạc đĩa sau giai đoạn ủ sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc Có thể sử dụng khuếch đại rọi sáng để thuận tiện cho việc đếm Các khuẩn lạc z at nh E coli có màu xanh kèm theo bọt khí Đếm tất khuẩn lạc có màu xanh kèm theo nhiều bọt khí (trong vịng đường kính khuẩn lạc) đĩa chứa từ 15 khuẩn lạc đến 150 khuẩn lạc Không đếm khuẩn lạc phát triển ngồi vịng trịn giới hạn môi trường chọn lọc không đếm bọt khí giả tạo thao tác chưa z trình cấy mẫu lên đĩa @ gm Tính kết quả: l Để tính số lượng E coli nhân tổng số lượng khuẩn lạc đĩa (hoặc số m co lượng trung bình khuẩn lạc đĩa đếm đĩa kép độ pha loãng) với số nghịch đảo độ pha loãng tương ứng Khi đếm khuẩn lạc đĩa an Lu kép độ pha lỗng tính số lượng trung bình khuẩn lạc cho độ pha loãng trước xác định trung bình số đếm E coli n va ac th 76 si Nếu khơng có đĩa có số đếm lớn 15 khuẩn lạc với màu đặc trưng kèm bọt khí trở lên ghi lại số đếm xác đĩa có độ pha lỗng thấp (tương ứng với dung dịch pha lỗng nhất) Nếu tất đĩa có số đếm lớn 150 xác định số đếm ước tính cách đếm số khuẩn lạc nhiều ô vuông đại diện tính số đếm trung bình vng nhân số đếm với 20 (diện tích vùng sinh trưởng khoảng 20 cm2) Trong trường hợp phải báo cáo số ước tính Nếu đĩa có mật độ khuẩn lạc lớn để ước tính số đếm kết báo cáo “quá nhiều để đếm” lu Tóm tắt TCCS 03:2016/TYV2-CĐ an n va Quá trình phát Salmonella thực phẩm theo TCCS 03:2016/TYV2-CĐ cần qua giai đoạn nhau: mẫu đồng vừa đảm bảo phát lượng Salmonella bị suy giảm hoạt tính đồng thời ức chế phát triển số lồi vi sinh vật khác có mẫu p ie gh tn to Giai đoạn 1: giai đoạn cộng gộp tăng sinh sơ với tăng sinh chọn lọc Giai đoạn 2: Phân lập nhằm tách nhận dạng Salmonella khỏi quần thể vi w sinh vật khác mẫu oa nl Giai đoạn 3: Khẳng định test thử phản ứng huyết học → kết luận Cách tiến hành: d va an lu - Tăng sinh bước 1: Cân 25g mẫu trung bình cắt nhỏ vào túi PE vô trùng chuyên dụng bổ sung thêm 225ml dung dịch đệm peptone đơn vị chất bổ sung ul nf đồng máy dập mẫu Stomacher tốc độ 260 vòng/phút phút thu huyễn dịch có nồng độ 10-1.Ủ huyễn dịch mẫu đồng độ pha loãng 10-1 tủ ấm oi lm 41.5°C/18±2h - Phân lập môi trường đặc chọn lọc nhận dạng: z at nh Sau ủ chuyển 10µl tương đương vòng que cấy dịch tăng sinh ria cấy lên bề mặt đĩa thạch Iris agar Lật úp đĩa đặt tủ ấm 37°C/24h z - Khẳng định: @ gm Trên môi trường Iris agar khuẩn lạc Salmonella có màu tím hồng đến hồng m co l môi trường giữ màu trắng Đánh dấu khuẩn lạc đặc trưng tiến hành khảng định test comfirm cung cấp từ nhà sản xuất Bản chất test comfirm an Lu phản ứng ngưng kết huyết học gồm thành phần: R1: dùng để test mẫu R2: test kiểm sốt dương tính R3: test kiểm sốt âm tính n va ac th 77 si