Kết quả xét nghiệm kháng thể kháng nhân bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang gián tiếp và phổ tự kháng thể đặc hiệu xác định bằng immunoblot ở một số bệnh tự miễn hệ thống tại bệnh viện vinmec times city

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CƠNG CỘNG NGUYỄN THỊ HỒI PHƯƠNG H P KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP VÀ PHỔ TỰ KHÁNG THỂ ĐẶC HIỆU XÁC ĐỊNH BẰNG IMMUNOBLOT Ở MỘT SỐ BỆNH TỰ MIỄN HỆ U THỐNG TẠI BỆNH VIỆN VINMEC TIMES CITY H LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 HÀ NỘI, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CƠNG CỘNG NGUYỄN THỊ HỒI PHƯƠNG KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN H P BẰNG PHƯƠNG PHÁP MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP VÀ PHỔ TỰ KHÁNG THỂ ĐẶC HIỆU XÁC ĐỊNH BẰNG IMMUNOBLOT Ở MỘT SỐ BỆNH TỰ MIỄN HỆ THỐNG TẠI BỆNH VIỆN VINMEC TIMES CITY U H LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC 1.TS TRƯƠNG CÔNG DUẨN 2.TS NGUYỄN VĂN ĐĨNH HÀ NỘI, 2022 i MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chương .4 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan kháng thể kháng nhân 1.2 Các tự kháng thể đặc hiệu bệnh lý tự miễn hệ thống 1.3 Tình hình nghiên cứu kháng thể kháng nhân giới Việt Nam 16 1.4 Giới thiệu Bệnh viện Vinmec Times City 18 H P Chương 20 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu .20 2.2 Thời gian thu thập số liệu địa điểm nghiên cứu 20 2.3 Thiết kế nghiên cứu 20 U 2.4 Cỡ mẫu .22 2.5 Phương pháp thu thập số liệu .22 2.6 Các nhóm biến số nghiên cứu 23 H 2.7 Phân tích số liệu 24 2.8 Đạo đức nghiên cứu 24 Chương 25 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .25 3.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu .25 3.2 Xác định tỉ lệ dương tính kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp .27 3.3 Phân tích phổ tự kháng thể đặc hiệu số bệnh tự miễn hệ thống 31 Chương 37 BÀN LUẬN 37 4.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu .37 ii 4.2 Xác định tỉ lệ dương tính kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp .40 4.3 Phân tích phổ tự kháng thể đặc hiệu số bệnh tự miễn hệ thống 45 KẾT LUẬN .52 KHUYẾN NGHỊ .53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC 66 Phụ lục 1: Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh Lupus ban đỏ hệ thống Hiệp hội lâm sàng quốc tế Lupus ban đỏ hệ thống kết hợp với tiêu chí Hội khớp học Hoa Kỳ (ACR) đưa năm 2015 (12) .66 H P Phụ lục 2: Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh xơ cứng bì hệ thống Hội khớp học Hoa Kỳ (ACR) kết hợp với Liên đoàn chống bệnh thấp khớp Châu Âu (EULAR) đưa năm 2013 (70) 68 Phụ lục 3: Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh viêm tự phát Hội khớp học Hoa Kỳ (ACR) kết hợp với Liên đoàn chống bệnh thấp khớp Châu Âu (EULAR) đưa năm U 2017 (88) 69 Phụ lục 4: Tiêu chuẩn chẩn đốn hội chứng Sjưgren Hội khớp học Hoa Kỳ (ACR) kết hợp với Liên đoàn chống bệnh thấp khớp Châu Âu (EULAR) đưa năm H 2016 (62) 73 Phụ lục 5: Bệnh mơ liên kết khơng biệt hóa .75 Phụ lục 6: Phiếu thu thập thông tin từ hồ sơ bệnh án .76 Phụ lục 7: Các nhóm biến số nghiên cứu……………………………… 79 iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACR : American College of Rheumatology (Hội khớp học Hoa Kỳ) ANA : Antinuclear antibody (Kháng thể kháng nhân) Anti ds-DNA : Kháng thể kháng chuỗi kép Anti-Sm : Kháng thể kháng Smith DFS : Dense fine speakle DM/PM : Dermatomyositis and polymyositis H P (Viêm da cơ/viêm đa cơ) ELISA : Enzym linked immunosorbent assay (Xét nghiệm miễn dịch gắn enzym) EULAR : European League Against Rheumatism (Liên đoàn chống bệnh thấp khớp Châu Âu) U HEp-2 : Human Epithelial cell IIF : Indirect immunofluorescence (Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp) SLE H : Systemic lupus erythematosus (Lupus ban đỏ hệ thống) SS : Sjögren Syndrome (Hội chứng Sjögren) SSA : Kháng thể kháng Ro SSB : Kháng thể kháng La SSc : Systemic Sclerosis (Xơ cứng bì hệ thống) UCTD : Undifferentiated connective tissue disease (Bệnh mơ liên kết khơng biệt hóa) iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tỉ lệ ANA dương tính bệnh lý tự miễn Bảng 1.2 Kiểu lắng đọng nhân tế bào Bảng 3.1 Đặc điểm giới .27 Bảng 3.2 Mức độ lắng đọng huỳnh quang .28 Bảng 3.3 Tỉ lệ dương tính kháng thể đặc hiệu immunoblot theo mức độ lắng đọng huỳnh quang .31 Bảng 3.4 Tần suất xuất kháng thể đặc hiệu viêm bệnh viêm da cơ/viêm đa 35 H P H U v DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Tuổi trung bình .25 Biểu đồ 3.2 Phân bố nhóm tuổi 25 Biểu đồ 3.3: Tỉ lệ dương tính kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp 28 Biểu đồ 3.4 Tỉ lệ xuất kiểu lắng đọng huỳnh quang bệnh .29 Biểu đồ 3.5 Tỉ lệ phân bố bệnh theo kiểu lắng đọng huỳnh quang 30 Biểu đồ 3.6 Tỉ lệ xuất kháng thể đặc hiệu immunoblot theo kiểu lắng đọng huỳnh quang 32 Biểu đồ 3.7 Tần suất xuất kháng thể đặc hiệu bệnh tự miễn hệ thống H P .33 Biểu đồ 3.8 Sự có mặt tự kháng thể đặc hiệu bệnh tự miễn hệ thống 34 H U vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Kết âm tính Hình 1.2 Kiểu đồng Hình 1.3 Kiểu lốm đốm Hình 1.4 Kiểu tâm động .7 Hình 1.5 Kiểu hạt nhân Hình 1.6 Kiểu chấm hạt nhân .7 Hình 1.7 Kiểu tế bào chất Hình 1.8 Kiểu lắng đọng kép .8 H P Hình 1.9.Thanh giấy sử dụng xét nghiệm 23 kháng thể nhân ……………… 15 Hình 1.10 Nguyên lý xét nghiệm immunoblot 15 H U vii TÓM TẮT NGHIÊN CỨU Bệnh tự miễn ảnh hưởng đến khoảng 3-5% dân số có 100 bệnh tự miễn phát (1) Kháng thể kháng nhân dấu ấn sinh học quan trọng cho bệnh tự miễn (2) Phương pháp IIF đánh giá tiêu chuẩn vàng để phát kháng thể kháng nhân (3) Xét nghiệm kháng thể kháng nhân IIF áp dụng số sở khám chữa bệnh, nhiên chưa có đánh giá đồng đầy đủ kháng thể lưu hành Chúng thực nghiên cứu “Kết xét nghiệm kháng thể kháng nhân phương pháp miễn dịch huỳnh quang gián tiếp phổ tự kháng thể đặc hiệu xác định immunoblot số bệnh tự miễn hệ thống bệnh viện Vinmec Times City” H P Thiết kế nghiên cứu mô tả hồi cứu, tiến hành thu thập hồ sơ bệnh án người bệnh chẩn đoán xác định mắc bệnh tự miễn hệ thống bệnh viện Vinmec Times City từ 1/2020 đến 6/2022 Tỉ lệ dương tính kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp cao nhóm bệnh tự miễn hệ thống với UCTD 82.3%, SSc 77.8%, SLE 70.6%, SS U 71.4%, PM/DM 53.3% Kiểu lắng đọng huỳnh quang thường gặp lốm đốm đồng Các mẫu huyết dương tính với kiểu lắng đọng đồng thường phát tự kháng thể đặc hiệu dsDNA, histone, nucleosomes Tự kháng thể H kháng scl-70, Ro-52 tìm thấy năm bệnh tự miễn hệ thống Tự kháng thể đặc hiệu viêm tìm thấy thường xuyên HMGCR, TIF1γ, Jo-1, SRP Tỉ lệ dương tính kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp cao nhóm bệnh tự miễn hệ thống Tỉ lệ xuất kiểu lắng đọng huỳnh quang bệnh không giống Từng kiểu lắng đọng có phổ tỉ lệ xuất tự kháng thể đặc hiệu tương ứng ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh tự miễn ảnh hưởng đến khoảng 3-5% dân số có 100 bệnh lý tự miễn phát bao gồm bệnh tự miễn đặc hiệu quan bệnh tự miễn hệ thống (1) Một số nghiên cứu tỉ lệ mắc bệnh tự miễn có gia tăng đáng kể giới có ảnh hưởng đến chất lượng sống, sức khỏe chí tính mạng người bệnh (4) Bệnh tự miễn tình trạng bệnh lý xảy hệ miễn dịch chống lại kháng nguyên thân thể, đặc trưng thể sản xuất tự kháng thể Kháng thể kháng nhân dấu ấn sinh học quan trọng cho bệnh tự miễn, tiêu chí phân loại phát triển để cung H P cấp sở chung cho việc dự đốn, tiên lượng bệnh, chẩn đốn xác, theo dõi bệnh (2) Kháng thể kháng nhân tự kháng thể công protein tự thân cấu trúc nhân tế bào Hiện có nhiều phương pháp phát kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp (IIF), hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym U (ELISA), miễn dịch giấy thấm Phương pháp IIF đánh giá tiêu chuẩn vàng để phát kháng thể kháng nhân (3) Với miễn dịch huỳnh quang tế bào HEp-2 phát 150 tự kháng thể kháng lại thành phần nhân, H phương pháp ELISA gây âm tính giả phát số tự kháng thể định (5) Phương pháp sử dụng rộng rãi xét nghiệm sàng lọc phổ tự kháng thể rộng phần quan trọng tiêu chí phân loại số bệnh tự miễn hệ thống Bên cạnh đó, kiểu lắng đọng huỳnh quang vị trí xuất huỳnh quang tế bào giúp định hướng cách trực tiếp tình trạng bệnh học, gợi ý loại tự kháng thể có khả xuất huyết người bệnh Khi xác định có mặt kháng thể kháng nhân phương pháp miễn dịch huỳnh quang, việc xác định lưu hành kháng thể tự miễn đặc hiệu bắt buộc để làm sở phân loại nhóm bệnh tự miễn đặc hiệu quan hệ thống Tuy vậy, Việt Nam xét nghiệm kháng thể kháng nhân phương pháp IIF áp dụng số sở khám chữa bệnh, nhiên chưa có đánh giá đồng 74 Bệnh u hạt Amyloidosis Bệnh ghép chống chủ Bệnh liên quan đến IgG4 H P H U 75 Phụ lục 5: Bệnh mô liên kết không biệt hóa Người bệnh phân loại UCTD họ đáp ứng tiêu chí sau (93): - Các dấu hiệu triệu chứng gợi ý bệnh mô liên kết khơng đáp ứng tiêu chí cho bệnh mô liên kết xác định - Kháng thể kháng nhân dương tính hai phương pháp riêng biệt đối chứng - Thời gian mắc bệnh năm H P H U 76 Phụ lục 6: Phiếu thu thập thông tin từ hồ sơ bệnh án Họ tên: Tuổi: Địa chỉ: Dân tộc: Mã bệnh án: Khoa phịng: Chẩn đốn xác định: Kết xét nghiệm: 8.1 Kết xét nghiệm kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp Âm tính/Dương tính H P Kiểu lắng đọng Mức huỳnh quang huỳnh quang Đồng 1+ Lốm đốm lắng đọng 2+ Tâm động 3+ U Hạt nhân độ 4+ Chấm hạt nhân Tế bào chất H 8.2 Kết xét nghiệm 23 kháng thể kháng nhân immunoblot Tên kháng thể Kết Âm tính dsDNA Nucleosomes Histones SS-A Ro-52 SS-B nRNP/Sm Mi-2α Số lượng (%) Dương tính Dương tính mạnh 77 Mi-2β Ku CENP A CENP B Sp100 PML Scl-70 PM-Scl 100 PM-Scl75 RP11 H P RP155 gp210 PCNA DFS70 TIF1γ U MDA5 NXP2 SAE1 Jo-1 SRP PL-7 PL-12 EJ OJ cN-1A HMGCR H 78 Phụ lục 7: Các nhóm biến số nghiên cứu Mục tiêu Biến số Phân loại Định nghĩa biến Đặc điểm Tuổi biến Tuổi trung bình theo Liên tục Phương pháp thu thập Hồ sơ bệnh án bệnh chung nhóm Giới Giới tính người bệnh gồm: Nhị phân Hồ sơ bệnh án Nam/Nữ/Khác nghiên cứu Mục tiêu Kết ANA IIF Kết phân theo: Âm Nhị phân dương H P tính/dương tính 1: Xác định tỉ lệ Hồ sơ bệnh án Kiểu lắng đọng huỳnh Các kiểu lắng đọng: Đồng Định tính Hồ sơ bệnh án / lốm đốm / hạt nhân quang / chấm hạt nhân / tâm động tính / tế bào chất U Mức độ lắng đọng huỳnh Kết dương tính phân Thứ hạng Hồ sơ bệnh án theo mức độ lắng đọng: quang H 1+/2+/3+/4+ Phân Tần suất xuất kháng Tần suất xuất kháng Định tính tích phổ thể đặc hiệu theo mức độ thể đặc hiệu phân theo kháng thể lắng đọng huỳnh quang mức độ đặc hiệu 1+/2+/3+/4+ lắng Hồ sơ bệnh án đọng: Tần suất xuất kháng Các kiểu lắng đọng: Đồng Định tính Hồ sơ bệnh án thể đặc hiệu theo kiểu / lốm đốm / hạt nhân lắng đọng huỳnh quang / chấm hạt nhân / tâm động / tế bào chất Tần suất xuất kháng Các kháng thể đặc hiệu Định tính thể đặc hiệu tìm thấy bệnh tự miễn hệ thống bệnh (SLE, SS, SSc, Hồ sơ bệnh án 79 MCTD, viêm da cơ, viêm đa cơ) H P H U 80 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG Biểu mẫu BIÊN BẢN GIẢI TRÌNH CHỈNH SỬA CÁC GĨP Ý ĐỀ CƯƠNG/LUẬN VĂN/LUẬN ÁN/CHUYÊN ĐỀ LUẬN ÁN Họ tên học viên: Nguyễn Thị Hoài Phương Tên đề tài: Kết xét nghiệm kháng thể kháng nhân phương pháp miễn dịch huỳnh quang gián tiếp phổ tự kháng thể đặc hiệu xác định immunoblot số bệnh tự miễn hệ thống bệnh viện Vinmec Times City TT Nội dung góp ý Phần giải trình học viên (Liệt kê nội dung góp ý theo thứ tự phần đề cương/luận văn/luận án/chuyên đề) (Nêu rõ chỉnh sửa nào, phần nào, trang Nếu khơng chỉnh sửa,giải thích lý không chỉnh sửa) Định hướng chuyên ngành luận văn/luận án Tên đề tài luận văn/luận án/chuyên đề U Điều chỉnh lại tên đề tài Tóm tắt H Không cần tiêu đề, không để khuyến nghị phần tóm tắt Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Mục tiêu cần bổ sung thêm thời gian H P Khung lý thuyết/cây vấn đề Học viên điều chỉnh lại tên đề tài thành “Kết xét nghiệm kháng thể kháng nhân phương pháp miễn dịch huỳnh quang gián tiếp phổ tự kháng thể đặc hiệu xác định immunoblot số bệnh tự miễn hệ thống bệnh viện Vinmec Times City” Học viên chỉnh sửa phần tóm tắt: bỏ đề mục phần khuyến nghị (Trang vii) Học viên bổ sung thời gian vào mục tiêu (Trang 3) 81 Đối tượng phương pháp nghiên cứu -Làm rõ thời gian thực đề tài, thời gian thu thập số liệu, thời gian hồ sơ bệnh án Học viên chỉnh sửa thời gian, thiết kế nghiên cứu biến số (Trang 20, 23) -Thiết kế nghiên cứu: thiết kế cắt ngang -Nhóm biến số: nêu nhóm biến số chính, đưa bảng biến số chi tiết vào phụ lục Kết nghiên cứu -Có dẫn dắt trước bảng biểu -Chú thích rõ nội dung bảng, biểu đồ H P Học viên chỉnh sửa, bổ sung thông tin chỉnh lại phần kết -Không để khoảng trống lớn phần kết -Cân nhắc không sử dụng tỉ lệ % cỡ mẫu nhỏ U Bàn luận -Không cần thiết bàn luận thông tin chung H Học viên chỉnh sửa phần bàn luận -Khi so sánh với nghiên cứu khác, cần lựa chọn nghiên cứu có thiết kế, phương pháp tương đương 10 Kết luận 11 Khuyến nghị -Nên làm bệnh viện Vinmec dựa kết nghiên cứu -Định hướng nghiên cứu 12 Tài liệu tham khảo Học viên chỉnh sửa phần khuyến nghị 82 13 Cơng cụ nghiên cứu 14 Các góp ý khác Lưu ý: - Có dịng kẻ góp ý phần giải trình thẳng hàng với góp ý - Học viên/NCS giải trình theo thứ tự phần (nếu có) đề cương/luận văn/luận án/chun đề, khơng nêu tên chức danh người góp ý - Đối với giải trình Hội đồng bảo vệ luận án cấp sở cần có thêm xác nhận phản biện chủ tịch hội đồng - Đối với giải trình Hội đồng luận án cấp trường, cần có thêm xác nhận chủ tịch hội đồng Ngày 23 tháng 11 năm 2022 Học viên (ký ghi rõ họ tên) H P Nguyễn Thị Hoài Phương Xác nhận GV hướng dẫn Xác nhận GV hướng dẫn (nếu có) Xác nhận GV hỗ trợ (nếu có) (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) H U Ths Nguyễn Huy Đông Ý kiến thành viên HĐ/chủ tịch HĐ (Nếu phân công): ………………………………………………………………………………………… … ………………………………………………………………………………………… … Ngày 06 tháng 12 năm 2022 Đại diện hội đồng (ký ghi rõ họ tên) 83 H P H U 84 H P H U 85 H P H U 86 H P H U 87 H P H U 88 H P H U