Nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây dây lửa ít gân (rourea oligophlebia mer )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO UBND TỈNH THANH HÓA TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC ĐỖ VĂN DỤC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LÁ CÂY DÂY LỬA ÍT GÂN (ROUREA OLIGOPHLEBIA MERR.) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC THANH HÓA, NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO UBND TỈNH THANH HÓA TRƢỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC ĐỖ VĂN DỤC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY DÂY LỬA ÍT GÂN (ROUREA OLIGOPHLEBIA MERR.) LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA HỌC Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 84.40.114 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Đinh Ngọc Thức THANH HÓA, NĂM 2019 Danh sách Hội đồng chấm luận văn Thạc sĩ khoa học theo Quyết định số1366/QĐĐHHĐ ngày 29 tháng năm 2019 Hiệu trưởng Trường Đại học Hồng Đức: Học hàm, học vị, Họ tên PGS.TS Ngô Xuân Lƣơng Cơ quan Chức danh Công tác Hội đồng Trƣờng Đại học Hồng Đức TS Phạm Minh Quân Chủ tịch Viện HL&KHCN Việt Nam Phản biện Trƣờng Đại học Hồng Đức Phản biện PGS.TS Nguyễn Hữu Đĩnh Trƣờng ĐHSP Hà Nội Ủy viên TS Hòang Thị Hƣơng Thủy Trƣờng Đại học Hồng Đức Thƣ ký TS Trịnh Thị Huấn Xác nhận Ngƣời hƣớng dẫn Học viên chỉnh sửa theo ý kiến Hội đồng Ngày tháng năm (Ký ghi rò họ tên ) i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu độc lập cá nhân tôi, không chép ngƣời khác Đề tài nghiên cứu dƣới nỗ lực cá nhân học tập trƣờng Đại học Hồng Đức dƣới hƣớng dẫn khoa học TS Đinh Ngọc Thức Các số liệu, kết luận nghiên cứu đƣợc trình bày luận văn hồn tồn trung thực, có dẫn tài liệu tham khảo cụ thể Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tác giả Đỗ Văn Dục ii LỜI CẢM ƠN Sau thời gian làm việc nghiêm túc miệt mài phịng thí nghiệm Hóa-Sinh, Trƣờng Đại học Hồng Đức, Trung tâm Ngiên cứu Phát triển thuốc, Viện Hóa Sinh Biển - Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Với lịng chân thành, kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cám ơn: TS Đinh Ngọc Thức giao đề tài, nhiệt tình hƣớng dẫn, ln động viên tạo điều kiện tốt suốt trình thực luận văn Đồng thời tơi xin chân thành cảm ơn tài trợ từ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 104.01-2018.08 Qua gửi lời cám ơn đến thầy cô Trƣờng Đại học Hồng Đức nhiệt tình, chu đáo, tận tâm giảng dạy, quan tâm sát đạo Phòng Quản lý Đào tạo sau đại học - Trƣờng Đại học Hồng Đức, bạn bè đồng nghiệp, học viên lớp cao học K10 - Hóa hữu cơ, gia đình ngƣời thân ln bên tơi để chia khó khăn, vất vả nhiệt tình giúp đỡ Do thời gian kinh nghiệm hạn chế nên khơng thể tránh khỏi sai sót q trình nghiên cứu Kính mong nhận đƣợc góp ý chân thành quý thầy cô, bạn đồng nghiệp để đề tài luận văn đƣợc hoàn thiện Chúc ngƣời sức khỏe, may mắn thành cơng Tơi xin chân thành cảm ơn! Thanh Hố, tháng năm 2019 Tác giả Đỗ Văn Dục iii MỤC LỤC MỤC LỤC iii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi DANH SÁCH SƠ ĐỒ vii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu đề tài Đối tƣợng nghiên cứu đề tài Cách tiếp cận, phƣơng pháp nghiên cứu CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung chi Dây khế Rourea 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Dây khế Rourea 1.1.2 Một số ứng dụng chi Dây khế Rourea 1.1.3 Phân bố chi Dây khế Rourea 1.1.4 Thành phần hóa học số lồi chi Dây khế Rourea 1.2 Cây Dây lửa gân Rourea oligophlebia Merr 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố Rourea oligophlebia Merr 1.2.2 Công dụng 1.2.3 Sơ lƣợc tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 10 CHƢƠNG II PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 12 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 12 2.1.1 Phƣơng pháp lấy mẫu xử lý mẫu 12 2.1.2 Phƣơng pháp tách, phân lập chất 12 2.1.3 Phƣơng pháp khảo sát cấu trúc hợp chất 12 2.2 Hoá chất thiết bị 13 2.2.1 Hoá chất 13 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 13 iv 2.3 Thực nghiệm 14 2.3.1 Thu mẫu xử lý mẫu 14 2.3.2 Xử lý cao chiết tách chất 15 CHƢƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất D1 18 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất D2 23 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất D3 33 KẾT LUẬN 44 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN VĂN 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 v DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Giá trị phổ 1H-NMR 13C-NMR chất D1 so với tài liệu tham khảo ……………………………………………………… 19 Bảng 3.2 Giá trị phổ 1H-NMR 13C-NMR chất D2 so với tài liệu tham khảo ……………………………………………………… 24 Bảng 3.3 Giá trị phổ 1H-NMR 13C-NMR chất D3 so với tài liệu tham khảo ……………………………………………………… 34 vi DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1 Lá, vỏ bột vỏ Chị nƣớc………………………………… Hình 3.1 Phổ khối lƣợng (ESI-MS) hợp chất D1 20 Hình 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất D1…………………………………… 21 Hình 3.3 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất D1………………………… 21 Hình 3.4 Phổ 13C-NMR hợp chất D1………………………………… 22 Hình 3.5 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất D1……………………… 22 Hình 3.6 Phổ HSQC hợp chất D1……………………………………… 23 Hình 3.7 Phổ HSQC giãn rộng hợp chất D1…………………………… 26 Hình 3.8 Phổ HMBC hợp chất D1……………………………………… 27 Hình 3.9 Phổ HMBC hợp chất D1……………………………………… 27 Hình 3.10 Phổ khối lƣợng (ESI-MS) hợp chất D2……………………… 28 Hình 3.11 Phổ 1H-NMR hợp chất D2………………………………… 29 Hình 3.12 Phổ 13C-NMR hợp chất D2………………………………… 30 Hình 3.13 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất D2……………………… 31 Hình 3.14 Phổ DEPT hợp chất D2……………………………………… 32 Hình 3.15 Phổ DEPT giãn rộng hợp chất D2…………………………… 35 Hình 3.16 Phổ MS hợp chất D3………………………………………… 36 Hình 3.17 Phổ 1H-NMR hợp chất D3………………………………… 37 Hình 3.18 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất D3……………………… 37 Hình 3.19 Phổ 13C-NMR hợp chất D3………………………………… 38 Hình 3.20 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất D3……………………… 38 Hình 3.21 Phổ DEPT hợp chất D3……………………………………… 39 Hình 3.22 Phổ COSY hợp chất D3……………………………………….40 Hình 3.23 Phổ HMBS hợp chất D3……………………………………….41 Hình 3.24 Phổ HSQC hợp chất D3……………………………………….42 Hình 3.25 Phổ HSQC giãn rộng hợp chất D3…………………………….43 vii DANH SÁCH SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Chiết phân đoạn từ Dây lửa gân ………………… 15 Sơ đồ 2.2 Phân lập hợp chất từ Dây lửa gân …………………17 34 Bảng 3.3 Giá trị phổ 1H-NMR 13C-NMR chất D3 so với tài liệu tham khảo Vị trí H-NMR δH (ppm) C-NMR δC(ppm) Chất D3 Tài liệu [9]a 33.1 34.5 25.3 26.3 73.8 76.8 36.8 38.1 48.2 50.0 19.7 21.1 42.0 43.2 44.1 45.8 56.2 58.0 10 37.1 40.3 11 17.9 19.3 12 25.9 27.3 13 44.8 46.4 14 38.7 38.2 15 53.1 54.0 16 80.5 82.8 Chất D3 3.16 (1H, br s) Tài liệu [9]a 13 3.32 (1H, br s) 17 3.84 (2H, s) 3.69 (2H, s) 65.3 66.7 18 0.73 (3H, s) 0.83 (3H, s) 22.0 22.6 19 0.80 (3H, s) 0.90 (3H, s) 28.8 29.1 20 0.94 (3H, s) 1.06 (3H, s) 17.5 18.3 35 a: Đo phổ CD3OD, 500 MHz Căn vào sở liệu thu đƣợc, đồng thời so sánh với tài liệu tham khảo, xác định đƣợc công thức cấu tạo D3 3β,16α,17-trihydroxy-entkauran có cơng thức cấu tạo nhƣ sau: Các giá trị phổ thu đƣợc hình sau đây: Hình 3.15 Phổ MS hợp chất D3 36 Hình 3.16 Phổ 1H-NMR hợp chất D3 37 Hình 3.17 Phổ 13C-NMR hợp chất D3 Hình 3.18 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất D3 38 Hình 3.19 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất D3 Hình 3.20 Phổ DEPT hợp chất D3 39 Hình 3.20 Phổ DEPT giãn rộng hợp chất D3 Hình 3.21 Phổ COSY hợp chất D3 40 Hình 3.22 Phổ COSY hợp chất D3 41 Hình 3.23 Phổ HMBS hợp chất D3 42 Hình 3.24 Phổ HSQC hợp chất D3 43 Hình 3.25 Phổ HSQC giãn rộng hợp chất D3 44 KẾT LUẬN Quá trình nghiên cứu thành phần hóa học hợp chất tách chiết từ dịch chiết dịch chiết etyl axetat Dây lửa gân Rourea oligophlebia Merr Thu mẫu từ Vƣờn Quốc gia Bến En, tỉnh Thanh Hóa, chúng tơi thu đƣợc kết sau: Đã thực trình tách chiết chất từ Dây lửa gân b ng dung môi khác n-hexan etyl axetat Từ phần cặn chiết thu đƣợc, b ng phƣơng pháp tinh chế khác tách đƣợc ba hợp chất B ng phƣơng pháp phân tích lý hóa đại nhƣ: Phổ khối lƣợng ion hóa điện cực (ESI-MS), phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT phổ hai chiều HMBC, HSQC, đo nhiệt độ nóng chảy, xác định đƣợc là: Phytol, 3β -hydroxystigmast-5-en-7-on 3β,16α, 17-trihydroxy-ent-kaurane Các kết nghiên cứu luận văn đƣợc công bố tạp ch Dƣợc học, thuộc Bộ Y tế7 45 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Đinh Ngọc Thức, Đỗ Văn Dục, Lê Nguyễn Thành Một số hợp chất phân lập từ dây lửa gân (Rourea oligophlebia Merr.) Tạp chí Dược học 2019, 520 (59), 33-36 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Phạm Hồng Ban, Đỗ Ngọc Đài (2015), Những dẫn liệu loài Mú từn (Rourea oligophlebia) phân bố Nghệ An, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nghệ An Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên) (2003), “Danh lục loài thực vật Việt Nam”, Tập 2, tr 864-865 Bộ y tế, (1997), “Dƣợc điển Việt Nam”, tr 123 – 135 Đỗ Ngọc Đài, Tăng Văn Tân, Phạm Hồng Ban, Trần Đình Thắng (2015), Thành phần hóa học tinh dầu lồi dây lửa gân (rourea oligophlebia merr.) họ Dây khế (connaraceae), Nghệ An Phạm Hoàng Hộ (2000), “Cây cỏ Việt Nam”, Quyển 3- tr 212 – 223 Nguyễn Nghĩa Thìn (2007), “Các phƣơng pháp nghiên cứu thực vật” tr 233 – 240 Đinh Ngọc Thức, Đỗ Văn Dục, Lê Nguyễn Thành (2019), Một số hợp chất phân lập từ dây lửa gân (Rourea oligophlebia Merr.) Tạp chí Dược học 520 (59), 33-36 Viện Khoa học công nghệ Việt Nam – IUCN, (2007), “Sách đỏ Việt Nam năm” tr 302 Phạm Thị Thu H ng (2018), Bƣớc đầu nghiên cứu phân loại chi dây khế (Rourea aubl.1775), tr 23-25, khóa luận tốt nghiệp đại học, Đại học Sƣ phạm Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH 10 Arciniegas A, P rez-Castorena AL, Nieto-Camacho A, Villase or JL, Romo de Vivar A, (2016) Terpenoids from Melampodium perfoliatum Journal of Natural Products, 79 (11), 2780-2787 11 B Verlag, Hamburg 47 12 Joulain D, Koenig WA, (1998) “The Atlas of Spectral Data of Sesquiterpene Hydrocarbons”, pp 320-330 13 Lee W, Woo ER, Lee DG, (2016), Phytol has antibacterial property by inducing oxidative stress response in Pseudomonas aeruginosa Free radical research, 50 (12), 1309-1318 14 R van Crevel, (1958), “Flora Malesiana”, vol 5: p 511 15 Stenhagen E, Abrahamsson S, McLafferty FW, (1974), Registry of Mass Spectral Data, Wiley, New York 16 Swigar A and Siverstein RM, (1981), “Monoterpenens, Aldrich, Milwauke”, pp 178-183 17 Zhao CC, Shao JH, Li X, Xu J, Zhang P (2005), Antimicrobial constituents from fruits of Ailanthus altissima SWINGLE Archives of Pharmacal Research, 28 (10), 1147-1151 18 Oliveira et al., (2010) Revista Veterinaria, 21 (Suppl 1): 802-804 19 Thomas Denk, Maria V Tekleva, (2006), Comparative pollen morphology and ultrastructure of Platanus: Implications for phylogeny and evaluation of the fossil record Grana, 45, 195–221 20 Patrícia V de Oliveira, Rosangela P L Lemos, Lucia M Conserva (2012), Chemical constituents of Rourea doniana Brazilian Journal of Pharmacognosy (22)1,pp 451-454 21 Zhen-Dan He, Cui-Ying Ma, Ghee Teng Tan, Kongmany Sydara, Pamela Tamez, Bounhoong Southavong, Somsanith Bouamanivong, D Doel Soejarto, John M Pezzuto, Harry H.S Fong, Hong-Jie Zhang, (2006), Rourinoside and rouremin, antimalarial constituents from Rourea minor Phytochemistry., 67, 1378–1384 48