Phân lập, nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của nấm đối kháng trichoderma trên đất trồng vú sữa tỉnh tiền giang

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “PHÂN LẬP, NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA NẤM ĐỐI KHÁNG Trichoderma TRÊN ĐẤT TRỒNG VÚ SỮA TỈNH TIỀN GIANG” Sinh viên thực : Đỗ Thị Hồng Thơm Khóa : 62 Ngành : Cơng nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Đức Thành TS Nguyễn Thanh Hảo HÀ NỘI -THÁNG 09/2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu trình bày khóa luận trung thực, khách quan chưa dùng bảo vệ để lấy học vị Tôi xin cam đoan thơng tin trích dẫn sử dụng khóa luận ghi rõ nguồn gốc, đảm bảo trích dẫn theo quy định Hà Nội, ngày 15 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Đỗ Thị Hồng Thơm i LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Đức Thành – Bộ môn Công nghệ vi sinh, Viện Di truyền Nông nghiệp TS Nguyễn Thanh Hảo – Bộ môn Sinh học, khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình hướng dẫn giúp đỡ động viên tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành khố luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ban lãnh đạo Viện Di truyền Nông nghiệp thầy, cô giáo trường Học viện Nơng nghiệp Việt Nam nói chung Khoa Cơng nghệ sinh học nói riêng giảng dạy trang bị cho tơi kiến thức bổ ích suốt quãng thời gian học tập rèn luyện trường đại học Tơi xin chân thành cảm ơn tới tập thể cán Bộ môn Công nghệ Vi sinh - Viện Di truyền Nông nghiệp nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian tơi thực khố luận Tơi muốn gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè người bên cạnh, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập làm việc Hà Nội, ngày 15 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Đỗ Thị Hồng Thơm ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii TÓM TẮT viii PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cây vú sữa 2.1.1 Nguồn gốc phân bố 2.1.2 Tình hình sản xuất vú sữa giới 2.1.3 Tình hình sản xuất vú sữa Việt Nam 2.2 Nấm đối kháng Trichoderma 2.2.1 Phân loại nấm 2.2.2 Đặc điểm hình thái nấm đối kháng Trichoderma 2.2.3 Đặc điểm sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma 2.3.4 Yếu tố môi trường ảnh hưởng đến nấm đối kháng Trichoderma 2.3.5 Cơ chế tác động lên nấm bệnh nấm đối kháng Trichoderma Cơ chế đối kháng nấm đối kháng Trichoderma: có chế 2.3.6 Sản xuất chế phẩm sinh học từ nấm đối kháng Trichoderma 10 2.4 Nấm Fusarium 11 2.4.1.Triệu chứng bệnh thối rễ vú sữa nấm Fusarium gây 12 2.4.2 Biện pháp phòng trừ bệnh thối rễ nấm Fusarium gây 12 iii PHẦN NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Vật liệu nghiên cứu 14 3.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 15 3.3 Nội dung nghiên cứu 16 3.4 Phương pháp nghiên cứu 16 3.4.1 Phương pháp phân lập, định danhnấm đối kháng Trichoderma 16 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến sinh trưởng phát triển nấm đối kháng Trichoderma tuyển chọn 17 3.4.3 Phương pháp đánh giá hiệu lựcđối kháng với nấm bệnh gây bệnh 20 3.5 Phương pháp xử lý số liệu thí nghiệm 20 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 4.1 Phân lập, định danh nấm đối kháng Trichoderma 21 4.1.1 Phân lập nấm đối kháng Trichoderma 21 4.1.2 Định danh nấm đối kháng Trichoderma 23 4.2 Một số đặc điểm sinh học nấm đối khángTrichoderma tuyển chọn 25 4.2.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 25 4.2.2 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy 26 4.3.3 Ảnh hưởng ngưỡng pH 28 4.2.4 Ảnh hưởng muối NaCl 30 4.2.5 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma 32 4.2.6 Ảnh hưởng nguồn nitơ 34 4.3 Hiệu lực đối kháng nấm Trichodermaspp TGVS07 với nấm gây bệnh 36 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 5.1.Kết luận 38 5.2 Kiến nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC XỬ LÝ THỐNG KÊ 43 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Chữ viết tắt Diễn giải chữ viết tắt BVTV Bảo vệ thực vật CT Công thức Ctv Cộng tác viên ĐBSCL Đồng sông Cửu Long F solani Fusarium solani Sp Species (loài) TSM Trichoderma selective medium v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết phân lập nấm Trichoderma sp phương pháp pha loãng đất môi trường TSM 21 Bảng 4.2 Kết định danh mẫu nấm đối kháng TGVS07 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển nấm Trichoderma spp.TGVS07 25 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 27 Bảng 4.5 Ảnh hưởng ngưỡng pH đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma spp.TGVS07 môi trường PDA 29 Bảng 4.6 Ảnh hưởng muối NaCl đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 31 Bảng 4.7 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 33 Bảng 4.8 Ảnh hưởng nguồn nito đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 35 Bảng 4.9 Hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp TGVS07 với nấm bệnh F.solani môi trường PDA sau ngày 37 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình thái nấm đối kháng Trichoderma asperellum Hình 4.1.Phân lập nấm đối kháng Trichoderma phương pháp pha lỗng mẫu đất mơi trường TSM 22 Hình 4.2 Đặc điểm hình thái mẫunấm đối kháng TGVS07 24 Hình 4.3 Ảnh hưởng mơi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển nấm Trichoderma spp.TGVS07 26 Hình 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ ni cấy đến sinh trưởng phát triển nấm Trichoderma spp.TGVS07 28 Hình 4.5 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 môi trường PDA 30 Hình 4.6 Ảnh hưởng muối NaCl đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 32 Hình 4.7 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 mơi trường PDA 34 Hình 4.8 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 môi trường PDA 36 Hình 4.9 Đánh giá hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp.TGVS07 với nấm bệnh F solani mơi trường PDA 37 vii TĨM TẮT Với đề tài: “Phân lập, nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm đối kháng Trichodermatrên đất trồng vú sữa tỉnh Tiền Giang”, tiến hành phân lập tuyển chọn chủng nấm Trichoderma phương pháp pha lỗng mẫu đất, phân lập mơi trường chọn lọc TSM Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến khả sinh trưởng phát triển đồng thời đánh giá khả đối kháng với nấm gây bệnh F solani nấm Trichoderma tuyển chọn Đánh giá hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp TGVS07 tuyển chọn với nấm bệnh F solani phương pháp đồng nuôi cấy cho thấy, nấm Trichoderma spp TGVS07 có hiệu lực ức chế nấm F solani đạt 66,9% Đánh giá số đặc điểm sinh học nấm Trichoderma spp TGVS07 cho thấy: nấm sinh trưởng, phát triển tốt môi trường PDA, nhiệt độ 25-30oC, ngưỡng pH 4, chịu mặn với nồng độ - 5% NaCl, nấm sử dụng tốt nguồn cacbon mật rỉ đường, nguồn nitơ cao thịt bò viii PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Tiền Giang tỉnh có diện tích trồng ăn lớn nước, nhiều loại có thương hiệu thị trường như: xồi cát Hịa Lộc, sầu riêng, dứa, long,…đặc biệt khơng thể khơng kể đến vú sữa Lị Rèn Diện tích ăn tỉnh Tiền Giang đạt 80.000 ha, tăng khoảng 10.000 so với năm 2015, sản lượng khoảng 1,5 triệu Trong đó, có khoảng 3.174 vú sữa Lò Rèn, với sản lượng hàng năm 63.764 tấn/năm, suất bình quân 20 tấn/ha Vùng chuyên canh vú sữa tập trung xã: Vĩnh Kim, Phú Phong, Kim Sơn, Bàng Long thuộc huyện Châu Thành Trong năm gần đây, khu vườn vú sữa Lò Rèn Vĩnh Kim đối mặt với nguy suy thối nghiêm trọng bị bệnh khơ cành, thối rễ… Bệnh thối rễ đối tượng dịch hại nguy hiểm gây thiệt hại nghiêm trọng kinh tế cho vùng trồng vú sữa tập trung tỉnh Tiền Giang Bệnh thường xuất gây hại nặng vườn vú sữa già cỗi, kể vườn giai đoạn kiến thiết làm sụt giảm đáng kể suất chí gây chết Triệu chứng phổ biến điển hình bệnh thối rễ vú sữa cịi cọc, kích thước bị thu nhỏ lại hay cịn gọi “lá me”, tán thưa, có màu xanh xám, số cành bị rụng dẫn đến tượng bị trơ cành trái dễ bị héo xanh Hệ thống rễ tơ (rễ mềm) hay kể rễ thứ cấp bị thối nhũn, sau khơ hóa nâu Ngồi ra, bệnh cịn cơng vị trí cổ rễ hay số vị trí cục rễ (nằm gần mặt đất) từ làm cho tồn hệ thống rễ bị thối khơ hóa nâu, phát muộn khó phịng trị Thối rễ nhiều tác nhân gây nấm Fusarium solani, F.oxysporium, Pythium helicoides(Nguyễn Minh Châu ctv., 2013) Các tác nhân có nguồn gốc phát sinh từ đất nên việc phịng trừ nhóm nấm bệnh biện pháp hóa học khó khăn đặc tính sinh học, sinh thái nhóm nấm này, chúng có khả tồn lâu dài thích Bảng 4.8 Ảnh hưởng nguồn nito đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 Công thức thí nghiệm Đường kính tản nấm (mm) sau ni cấy Ngày xuất thể 3ngày (NH4)2SO4 26,0c 63,0c 90,0 Sau ngày nuôi cấy Cao thịt bị 31,0a 68,0a 90,0 Sau 2ngày ni cấy NaNO3 26,0c 65,0b 90,0 Sau 2ngày nuôi cấy KNO3 27,0b 63,0c 90,0 Sau ngày nuôi cấy LSD0,05 1,63 2,31 - - Ghi chú: Giá trị trung bình cột mang chữ khác sai khác có ý nghĩa thống kê mức a = 0,05 xác suất p < 0,05 Kết thí nghiệm cho thấy, nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 có khả sinh trưởng, phát triển mơi trường PDA có bổ sung nguồn nitơ khác Với nguồn nitơ cao thịt bị, sợi nấm mọc dày kín đĩa, thể xuất nhiều bề mặt môi trường sau ngày nuôi cấy Với nguồn nito (NH4)2SO4, NaNO3, KNO3 sợi nấm Trichoderma spp TGVS07 mọc thưa thể xuất bề mặt môi trường so với cao thịt bò Như vậy, nguồn nito cao thịt bị thích hợp cho sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 35 Hình 4.8 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng, phát triển nấm đối kháng Trichoderma spp.TGVS07 môi trường PDA Ghi : a) mặt đĩa petri; b) mặt đĩa petri 4.3 Hiệu lực đối kháng nấm Trichoderma spp TGVS07 với nấm gây bệnh Trong thí nghiệm này, chúng tơi áp dụng phương pháp đồng nuôi cấy để đánh giá sơ hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp TGVS07 với nấm bệnh F solani môi trường PDA, đĩa petri cấy điểm vị trí cách mép đĩa 1cm Sau cấy, đặt đĩa petri tủ định ôn điều kiện nhiệt độ 30 oC Kết thí nghiệm trình bày bảng 4.9 36 Bảng 4.9 Hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp TGVS07 với nấm bệnh F.solani môi trường PDA sau ngày Đường kính tản nấm đối Đường kính tản nấm gây Hiệu lực đối kháng (mm) bệnh (mm) kháng(%) Nấm đối kháng Trichodermaspp.TGVS07 90,0 - - Trichodermaspp.TGVS07+ F.solani 60,2 29,8 66,9 Nấm bệnhF.solani - 90,0 - Công thức thí nghiệm Kết thí nghiệm cho thấy, mẫu nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 có khả ức chế đường kính tản nấm F solani với hiệu lực đối kháng 66,9% môi trường PDA sau ngày ni cấy Hình 4.9 Đánh giá hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp.TGVS07 với nấm bệnh F solani môi trường PDA Ghi : a) mặt đĩa petri; b) mặt đĩa petri 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1.Kết luận Trong trình thực đề tài nghiên cứu: “Phân lập, nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm đối kháng Trichoderma đất trồng vú sữa tỉnh Tiền Giang” dựa vào kết nghiên cứu, kết luận sau: 1) Đã phân lập, tuyển chọn 01 mẫu nấm Trichoderma từ mẫu đất trồng vú sữa tỉnh Tiền Giang 2) Đánh giá số đặc điểm sinh học nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 cho thấy: - Nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 phát triển tối ưu môi trường PDA nhiệt độ 25oC - 30oC ngưỡng pH - Nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 sử dụng tốt với nguồn nitơ cao thịt bò, nguồn cacbon mật rỉ đường, chịu mặn nồng độ muối NaCl 5%, nhiên khuẩn lạc nấm phát triển tốt nồng độ muối NaCl 1% môi trường PDA 3) Đánh giá hiệu lực đối kháng mẫu nấm Trichoderma spp TGVS07 tuyển chọn với nấm bệnh F solani phương pháp đồng nuôi cấy cho thấy, nấm Trichoderma spp TGVS07 có hiệu lực ức chế nấm F solani đạt 66,9% 5.2 Kiến nghị Nghiên cứu kỹ thuật nhân sinh khối từ nấm đối kháng Trichoderma spp TGVS07 nhằm mục đích tạo chế phẩm sinh học ứng dụng phòng trừ bệnh hại vú sữa 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng Việt “Nấm đối kháng Trichoderma”: Cơ chế hoạt động ứng dụng trồng trọt”OBIO Đài Phát - Truyền hình Tiền Giang (2019) Tiền Giang đánh giá tình hình sản xuất, tiêu thụ, xuất trái vú sữa Truy cập từ http://www.thtg.vn/tien-giang-danh-gia-tinhhinh-san-xuat-tieu-thu-xuat-khau-trai-vu-sua/ ngày 07/11/2020 Hồ Đình Hải (2013), Nấm đối kháng Trichoderma, Phịng trừ sinh học Hồng Nam (2021) Tiền Giang đốn bỏ vú sữa Lò Rèn sau nhiều năm bệnh, thối hóa Truy cập từ: https://vnexpress.net/don-bo-vu-sua-lo-ren-4292347.html ngày 24/08/2021 https://www.slideshare.net/pjgeon1990/trichodermar-v-ng-dng-trong-ptsh Trường Đại học Cần Thơ Khoa Nông học mơn bảo vệ thực vật phịng trừ sinh học bệnh trồng nấm Trichoderma sp… Nguyễn Đức Huy, Phạm Quang Nguyên, Nguyễn Thị Thanh Hồng, Hà Giang, Nguyễn Văn Viên Nguyễn Tất Cảnh (2017) Phân lập đánh giá khả đối kháng Trichoderma asperellum tác nhân gây bệnh có nguồn gốc đất Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 15(12) tr 1593 - 1604 Nguyễn Đức Huy1*, Phạm Quang Nguyên2, Nguyễn Thị Thanh Hồng1, Hà Giang3, Nguyễn Văn Viên1, Nguyễn Tất Cảnh11Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 2Học viên cao học, Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 3Trung tâm Bệnh nhiệt đới, Học viện Nông nghiệp Việt Nam “Phân lập đánh giá khả đối kháng Trichoderma asperellum tác nhân gây bệnh có nguồn gốc đất” Nguyễn Minh Châu, Nguyễn Văn Hòa Nguyễn Thành Hiếu (2013) Bệnh thối rễ, khô cành vú sữa biện pháp quản lý tổng hợp Truy cập từ: http://www.baoapbac.vn/khoahoc-doi-song/201308/benh-thoi-re-kho-canh-vu-sua-va-bien-phap-quan-ly-tong-hop328759/ ngày 24/08/2021 Nguyễn Văn Viên, Nguyễn Thị Tú Bùi Văn Công (2012) Nghiên cứu sản xuất chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma viride phòng trừ số bệnh nấm hại củ khoai tây, lạc, đậu tương Tạp chí Khoa học Phát triển 10 (1) tr 95 - 102 10 Phạm Thị Thùy (2004) Công nghệ sinh học bảo vệ thực vật Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội 335 tr 11 Trần Thị Thu Hà 1,2, Phạm Thanh Hòa1 1Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế Viện Tài Nguyên Môi Trường Công Nghệ Sinh học, Đại học Huế Khả đối kháng nấm Trichoderma với nấm bệnh hại trồng Sclerotium rolfsii Sacc ddiieuf kiện invitro 12 TS Hồ Thị Nhung, Viện Nông Nghiệp Tài Nguyên , trường Đại học Vinh “Ứng dụng chế phẩm sinh học từ nấm đối kháng Trichoderma phòng trừ bệnh hại trồng” 13 Võ Thị Thu Oanh1, Lưu TừĐoan Trang2 1Trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 2Sở Khoa học Cơng nghệ tỉnh Khánh Hịa Đánh giá khả đối kháng số dòng Trichoderma Phytopythium helicoides điều kiện phịng thí nghiệm invitro antagonistic properties of selected Trichoderma stranins against Phytopythium helicoides 39 14 Vũ Xuân Tảo Trần Văn Tuấn (2020) Phân lập tuyển chọn chủng Trichodermacó khả đối kháng vi nấm gây bệnh cam Tạp chí Khoa học Công nghệ 36 (3) tr 98-104 B Tài liệu tiếng Anh A Das, D I B B Nordin, and A Bhaumik, “A brief review on Chrysophyllum cainito,” IJPI’s Journal of Pharmacognosy and Herbal Formulations, vol 1, no 1, p 7, 2010.View at: Arauz, L.F., (2000) “Mango Anthracnose: Economic Impact and Current Options for Integrated Management.” American Journal of Plant Sciences, United States Begoude B A D., Lahlali, R., Friel, D., Tondje, P R., and Jijakli, M H (2007) Response surface methodology study of the combined effects of temperature, pH, and aw on the growth rate of Trichoderma asperellum Journal of Applied Microbiology Vol 103 (4) pp 845-854 Bissett J., Szakacs, G., Nolan, C A., Druzhinina, I., Gradinger, C., and Kubicek, C P (2003) New species of Trichoderma from Asia Canadian Journal of Botany Vol 81 (6) pp 570-586 Bunbury-Blanchette A L., and Walker, A K (2019) Trichoderma species show biocontrol potential in dual culture and greenhouse bioassays against Fusarium basal rot of onion Biological Control Vol 130 pp 127-135 Burgess, L W., Summerell, B A., Bullock, S., Gott, K P., and Backhouse, D (1994) Laboratory manual for Fusarium research Cornejo, H A C et al Trichoderma virens, a Plant Beneficial Fungus, Enhances Biomass Production and Promotes Lateral Root Growth through an Auxin-Dependent Mechanism in Arabidopsis Plant Physiol 2009 Mar; 149(3): 1579–1592 fungi, Trichoderma spp.: Panoply of biological control” 28.J.Webster, NormaLomas “Does Trichoderma viride produce gliotoxin and viridin?” Elad Y., Chet, I., and Henis, Y (1981) A selective medium for improving quantitative isolation of Trichoderma spp from soil Phytoparasitica Vol (1) pp 59-67 El-Mohamedy, R S R (2009) Efficiency of different application methods of biocontrol agents and biocides in control of Fusarium root rot on some citrus rootstocks Archives of Phytopathology and Plant Protection, 42(9), pp 819-828 10 Hall T (2004 ) BioEdit Biological sequence alignment editor for Win95/98/NT/2K/XP 192 pp 11 Infante, D.; Martínez, B.; González, N y Reyes, Y (2009) “Mecanismos deacción de Trichoderma frente a hongos fitopatógenos” Protección Vegetal.24:14-21 Scientific Reports volume 8, Article number: 1252 (2018) 12 Klein D., Eveleigh, D E (1998) Ecology of Trichoderma In: Kubicek, C.P., Harman, G.E (dds.):Trichoderma and Gliocladium Basic Biology, Taxonomy and Genetics, vol Taylor and Francis, London, pp 57_73 13 Kubicek C P., Herrera-Estrella, A., Seidl-Seiboth, V., Martinez, D A., Druzhinina, I S., Thon, M., and Grigoriev, I V (2011) Comparative genome sequence analysis 40 underscores mycoparasitism as the ancestral life style of Trichoderma Genome biology Vol 12 (4) pp 1-15 14 Kumar, K., Amaresan, N., Bhagat, S., Madhuri, K., and Srivastava, R C (2012) Isolation and characterization of Trichoderma spp for antagonistic activity against root rot and foliar pathogens Indian journal of microbiology Vol 52 (2) pp 137-144 15 Macena, A.M.F., Kobori, N.N., Mascarin, G.M et al Antagonism of Trichoderma-based biofungicides against Brazilian and North American isolates of Sclerotinia sclerotiorum and growth promotion of soybean BioControl 65, 235–246 (2020) 16 Molecular characterization of Trichoderma isolates by ISSR Marker K S Ghutukade, C D Deokar, N.S Gore, V P Chimote and S G Kamble Department of Plant Pathology and Agricultural Microbiology, Mahatma Phule Krishi Vidyapeeth, Rahuri-413 722, Dist Ahmednagar, Maharashtra State (India) 17 Ortiz, A., Orduz, S In vitro evaluation of Trichoderma and Gliocladium antagonism against the symbiotic fungus of the leaf-cutting ant Atta cephalotes Mycopathologia 150, 53–60 (2001) 18 Priscila Chaverri1 and Gary J Samuels – “Hypocrea/Trichoderma (Ascomycota,Hypocreales, Hypocreaceae): species with green ascospores” 19 Saba H., Vibhash, D., Manisha, M., Prashant, K S., Farhan, H., and Tauseef, A (2012) Trichoderma - a promising plant growth stimulator and biocontrol agent Mycosphere Vol (4) pp 524-531 20 Saba H., Vibhash, D., Manisha, M., Prashant, K S., Farhan, H., and Tauseef, A (2012) Trichoderma - a promising plant growth stimulator and biocontrol agent Mycosphere Vol (4) pp 524-531 21 Samuels G J (2006) Trichoderma: systematics, ecology Phytopathology Vol 96 (2) pp 195-206 the sexual state, and 22 Seibel C., Gremel, G., Nascimento Silva, R., Schuster, A., Kubicek, C P., and Schmoll, M (2009) Light-dependent roles of the G-protein α subunit GNA1 of Hypocrea jecorina (anamorph Trichoderma reesei) BMC biology Vol (1) pp 1-15 23 Sergio de los Santos-Villalobos, Luis Ernesto Hernández-Rodríguez, FranciscoVillasorOrtega, Juan José Peña-Cabriales “Production of Trichoderam asperellum T8a spores by a "Home-Made" solid-state fermentation of mango industrial wastes” 24 Shah S., Nasreen, S., and Sheikh, P A (2012) Cultural and morphological characterization of Trichoderma spp associated with green mold disease of Pleurotus spp in Kashmir Research Journal of Microbiology Vol (2) pp 139-145 25 Shahid M., Singh, A., Srivastava, M., Mishra, R P., and Biswas, S K (2011) Effect of temperature, pH and media for growth and sporulation of Trichoderma longibrachiatum and self life study in carrier based formulations Ann Pl Protec Sci Vol 19 (1) pp 147149 26 Singh A., Shahid, M., Srivastava, M., Pandey, S., Sharma, A., and Kumar, V (2014) Optimal physical parameters for growth of Trichoderma species at varying pH, temperature and agitation Virol Mycol Vol (127) pp 2161-0517 27 The ‘forma specialis’ issue in Fusarium: A case study in Fusarium solani f sp Pisi Adnan Šišić, Jelena Baćanović-Šišić, […]Maria R Finckh 41 28 Timmer, L W., Garnsey, S M., & Broadbent, P (2003) Diseases of citrus In: Diseases of Tropical Fruits Crops CABI Publishing, CABI International, Wallingford, UK, pp 163-195 29 Tomah A A., Abd Alamer, I S., Li, B., and Zhang, J Z (2020) A new species of Trichoderma and gliotoxin role: A new observation in enhancing biocontrol potential of T virens against Phytophthora capsici on chili pepper Biological Control Vol 145 pp 104-116 30 Troian R F., Steindorff, A S., Ramada, M H S., Arruda, W., and Ulhoa, C J (2014) Mycoparasitism studies of Trichoderma harzianum against Sclerotinia sclerotiorum: evaluation of antagonism and expression of cell wall-degrading enzymes genes Biotechnology letters Vol 36 (10) pp 2095-2101 31 Wu Q., Sun, R., Ni, M., Yu, J., Li, Y., Yu, C., and Chen, J (2017) Identification of a novel fungus, Trichoderma asperellum GDFS1009, and comprehensive evaluation of its biocontrol efficacy PloS One Vol 12 (6) pp e0179957 32 Wu Q., Sun, R., Ni, M., Yu, J., Li, Y., Yu, C., and Chen, J (2017) Identification of a novel fungus, Trichoderma asperellum GDFS1009, and comprehensive evaluation of its biocontrol efficacy PloS One Vol 12 (6) pp e0179957 42 PHỤ LỤC XỬ LÝ THỐNG KÊ 1) Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma sp.TGVS07 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2_NSC FILE MT 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongmoitruongnuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma VARIATE V003 2_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3302.00 1651.00 ****** 0.000 * RESIDUAL 3.99946 666577 * TOTAL (CORRECTED) 3306.00 413.250 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 4_NSC FILE MT 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongmoitruongnuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma VARIATE V004 4_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4050.00 2025.00 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.00000 333334 * TOTAL (CORRECTED) 4052.00 506.500 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 6_NSC FILE MT 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongmoitruongnuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma VARIATE V005 6_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 0.000000 0.000000 0.00 1.000 * RESIDUAL 0.000000 0.000000 * TOTAL (CORRECTED) 0.000000 0.000000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongmoitruongnuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ PDA PCA CMA NOS 3 2_NSC 64.0000 49.0000 18.0000 4_NSC 90.0000 90.0000 45.0000 6_NSC 90.0000 90.0000 90.0000 SE(N= 3) 0.471373 0.333333 0.000000 5%LSD 6DF 1.63055 1.15305 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongmoitruongnuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma 43 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 2_NSC 4_NSC 6_NSC GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 43.667 75.000 90.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 20.329 0.81644 1.9 0.0000 22.506 0.57735 0.8 0.0000 0.00000 0.00000 0.0 1.0000 | | | | 2) Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma sp.TGVS07 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2_NSC FILENHIET DO 15/ 9/** 10:13 PAGE Anhhuongnhiet nuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma s VARIATE V003 2_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4266.00 2133.00 ****** 0.000 * RESIDUAL 4.00003 666671 * TOTAL (CORRECTED) 4270.00 533.750 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 4_NSC FILENHIET DO 15/ 9/** 10:13 PAGE Anhhuongnhiet nuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma s VARIATE V004 4_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3930.89 1965.44 ****** 0.000 * RESIDUAL 667275 111212 * TOTAL (CORRECTED) 3931.56 491.444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 6_NSC FILENHIET DO 15/ 9/** 10:13 PAGE Anhhuongnhiet nuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma s VARIATE V005 6_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 0.000000 0.000000 0.00 1.000 * RESIDUAL 0.000000 0.000000 * TOTAL (CORRECTED) 0.000000 0.000000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILENHIET DO 15/ 9/** 10:13 PAGE Anhhuongnhiet nuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma s MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 2_NSC 4_NSC 44 6_NSC 25°C 30°C 35°C 3 68.0000 56.0000 17.0000 90.0000 90.0000 45.6667 90.0000 90.0000 90.0000 SE(N= 3) 0.471406 0.192538 0.000000 5%LSD 6DF 1.63067 0.666019 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILENHIET DO 15/ 9/** 10:13 PAGE Anhhuongnhiet nuoi cay den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma s F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 2_NSC 4_NSC 6_NSC GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 47.000 75.222 90.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 23.103 0.81650 1.7 0.0000 22.169 0.33349 0.4 0.0000 0.00000 0.00000 0.0 1.0000 | | | | 3) Ảnh hưởng nồng độ pH đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma sp.TGVS07 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2_NSC FILEpH 15/ 9/** 10:16 PAGE Anhhuong pH den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V003 2_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 18.5000 9.25000 13.87 0.004 * RESIDUAL 4.00000 666667 * TOTAL (CORRECTED) 22.5000 2.81250 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 4_NSC FILE pH 15/ 9/** 10:16 PAGE Anhhuong pH den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V004 4_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1088.72 544.361 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.66675 444458 * TOTAL (CORRECTED) 1091.39 136.424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 6_NSC FILE pH 15/ 9/** 10:16 PAGE Anhhuong pH den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TQVS01 VARIATE V005 6_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 0.000000 0.000000 0.00 1.000 * RESIDUAL 0.000000 0.000000 - 45 * TOTAL (CORRECTED) 0.000000 0.000000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE pH 15/ 9/** 10:16 PAGE Anhhuong pH den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ pH4 pH6 pH8 NOS 3 2_NSC 18.0000 16.5000 14.5000 4_NSC 90.0000 74.5000 63.1667 6_NSC 90.0000 90.0000 90.0000 SE(N= 3) 0.471405 0.384906 0.000000 5%LSD 6DF 1.63066 1.33145 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE pH 15/ 9/** 10:16 PAGE Anhhuong pH den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp.TGVS07 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 2_NSC 4_NSC 6_NSC GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 16.333 75.889 90.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.6771 0.81650 5.0 0.0062 11.680 0.66668 0.9 0.0000 0.00000 0.00000 0.0 1.0000 | | | | 4) Ảnh hưởng nồng độ muối đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma sp.TGVS07 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2_NSC FILEMUOI 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongnong muoi den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V003 2_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1176.00 588.000 881.99 0.000 * RESIDUAL 4.00006 666676 * TOTAL (CORRECTED) 1180.00 147.500 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 4_NSC FILE MUOI 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongnong muoi den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V004 4_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3471.06 1735.53 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.66647 444412 * TOTAL (CORRECTED) 3473.72 434.215 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 6_NSC FILE MUOI 15/ 9/** 10: 46 PAGE Anhhuongnong muoi den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V005 6_NSC LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 288.000 144.000 ****** 0.000 * RESIDUAL 260422 434037 * TOTAL (CORRECTED) 288.000 36.0000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MUOI 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongnong muoi den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NaCl 1% NaCl 3% NaCl 5% NOS 3 DF 2_NSC 46.0000 32.0000 18.0000 4_NSC 90.0000 72.8333 42.5000 6_NSC 90.0000 90.0000 78.0000 SE(N= 3) 0.471408 0.384886 0.120283 5%LSD 6DF 1.63068 1.33138 0.416077 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MUOI 15/ 9/** 10: PAGE Anhhuongnong muoi den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 2_NSC 4_NSC 6_NSC GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 32.000 68.444 86.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 12.145 0.81650 2.6 0.0000 20.838 0.66664 1.0 0.0000 6.0000 0.20834 0.0 0.0000 | | | | 5) Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma sp.TGVS07 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 1_NSC FILECACBON 15/ 9/** 10:21 PAGE Anhhuongnguoncacbon den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V003 1_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.00000 2.00000 2.67 0.118 * RESIDUAL 6.00000 750000 * TOTAL (CORRECTED) 11 12.0000 1.09091 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2_NSC FILE CACBON 15/ 9/** 10:21 PAGE Anhhuongnguoncacbon den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V004 2_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES 47 MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 30.0000 10.0000 5.71 0.022 * RESIDUAL 14.0000 1.75000 * TOTAL (CORRECTED) 11 44.0000 4.00000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 3_NSC FILE CACBON 15/ 9/** 10:21 PAGE Anhhuongnguoncacbon den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 VARIATE V005 3_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 0.000000 0.000000 0.00 1.000 * RESIDUAL 0.000000 0.000000 * TOTAL (CORRECTED) 11 0.000000 0.000000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CACBON 15/ 9/** 10:21 PAGE Anhhuongnguoncacbon den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ Glucose Mannitol Saccharose Mat ri duong NOS 3 3 1_NSC 26.0000 27.0000 26.0000 25.0000 2_NSC 62.0000 65.0000 64.0000 61.0000 3_NSC 90.0000 90.0000 90.0000 90.0000 SE(N= 3) 0.500000 0.763763 0.000000 5%LSD 8DF 1.63045 2.49055 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CACBON 15/ 9/** 10:21 PAGE Anhhuongnguoncacbon den susinhtruong, phattriencuanamTrichoderma sp TGVS07 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 1_NSC 2_NSC 3_NSC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 26.000 12 63.000 12 90.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0445 0.86603 3.3 0.1185 2.0000 1.3229 2.1 0.0221 0.00000 0.00000 0.0 1.0000 | | | | 6) Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng, phát triển nấm Trichoderma sp.TGVS07 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 1_NSC FILENITO 15/ 9/** 10:27 PAGE VARIATE V003 1_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.00000 2.00000 2.67 0.118 * RESIDUAL 6.00000 750000 * TOTAL (CORRECTED) 11 12.0000 1.09091 48 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2_NSC FILENITO 15/ 9/** 10:27 PAGE VARIATE V004 2_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 16.9167 5.63889 3.76 0.060 * RESIDUAL 12.0000 1.50000 * TOTAL (CORRECTED) 11 28.9167 2.62879 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 3_NSC FILENITO 15/ 9/** 10:27 PAGE VARIATE V005 3_NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 0.000000 0.000000 0.00 1.000 * RESIDUAL 0.000000 0.000000 * TOTAL (CORRECTED) 11 0.000000 0.000000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILENITO 15/ 9/** 10:27 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ (NH4)2SO4 Cao thitbo NaNO3 KNO3 NOS 3 3 1_NSC 26.0000 25.0000 26.0000 27.0000 2_NSC 61.6667 62.0000 63.3333 64.6667 3_NSC 90.0000 90.0000 90.0000 90.0000 SE(N= 3) 0.500000 0.707107 0.000000 5%LSD 8DF 1.63045 2.30580 0.000000 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILENITO 15/ 9/** 10:27 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 1_NSC 2_NSC 3_NSC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 26.000 12 62.917 12 90.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0445 0.86603 3.3 0.1185 1.6214 1.2247 1.9 0.0595 0.00000 0.00000 0.0 1.0000 49 | | | |