Đang tải... (xem toàn văn)
PowerPoint Presentation 1 PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN, ĐỊNH DANH VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS SINH ENZYME PROTEASE TỪ NGUỒN CƠ CHẤT KHÁC NHAU HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM KHÓA LUẬN TỐ[.]
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN, ĐỊNH DANH VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS SINH ENZYME PROTEASE TỪ NGUỒN CƠ CHẤT KHÁC NHAU Bố cục trình bày Mở đầu Vật liệu, nội dung & phương pháp Kết nghiên cứu & thảo luận Kết luận & kiến nghị MỞ ĐẦU ĐẶT VẤN ĐỀ Vi sinh vật sử dụng vào ngành công nghiệp, nông nghiệp, y học… để phục vụ đời sống nhờ phản ứng hóa sinh gắn chặt với có mặt enzyme để chuyển hóa vật chất Protease nhóm enzyme sử dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực Enzyme protease thu nhận từ nhiều nguồn khác động vật, thực vật vi sinh vật Enzyme sinh từ vi sinh vật có khả chuyển hóa chất, sinh sản nhanh, nguồn nguyên liệu nuôi cấy vi sinh vật thường rẻ tiền… Vi khuẩn có khả tổng hợp mạnh protease kể đến B.subtilis Enzyme protease sinh từ loại vi khuẩn khác lại có đặc tính khác PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN, ĐỊNH DANH VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS SINH ENZYME PROTEASE TỪ NGUỒN CƠ CHẤT KHÁC NHAU MỤC ĐÍCH YÊU CẦU Phân lập, tuyển chọn định danh chủng vi khuẩn B.subtilis có khả sinh enzyme protease từ nguồn chất khác nghiên cứu đặc tính sinh enzyme Phân lập, tuyển chọn, định danh chủng vi khuẩn B.subtilis có khả sinh enzyme protease Nghiên cứu đặc tính sinh trưởng, mức độ sinh enzyme protease chủng phân lập Xác định số đặc tính enzyme protease sinh chủng B.subtilis tuyển chọn VẬT LIỆU, NỘI DUNG & PHƯƠNG PHÁP VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU Chao (CH) Sữa tươi lên men ngẫu nhiên (ST) Tương Đậu (TD) Pho mai (PM) Bã đậu (BD) Sữa chua truyền thống (SC) Nem chua (NC) MƠI TRƯỜNG NGHIÊN CỨU Mơi trường ni cấy vi khuẩn: môi trường giá đậu - pepton (g/l) : giá đậu (200), D-glucose (50), pepton (10), nước cất (1 lít) Mơi trường CAP (Catabolite Activator Protein: protein hoạt hóa dị hóa) định tính enzyme protease (g/l): casein (10), agar (15), pepton (1,5), cao nấm men (1,5), cao thịt (1,5), NaCl (5), bromocresol green (BCG) (0,0015%), nước cất(1 lít) Môi trường nuôi dịch lỏng vi khuẩn để tạo enzyme protease (g/l): giá đậu (200), glucose (20), casein (10), nước cất (1 lít) NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Phân lập, tuyển chọn định danh chủng B.subtilis có khả sinh enzyme protease Nghiên cứu đặc tính sinh trưởng, mức độ sinh enzyme protease chủng phân lập Xác định số đặc tính enzyme protease sinh chủng B.subtilis tuyển chọn +pH nuôi cấy: 3, 4, 5, 6, 7, thời gian từ 48h nhiệt độ 37℃; +Độ bền nhiệt: 50℃, 55℃, thời gian từ 0,5-2h với bước nhảy 0,5h PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Phân lập vi khuẩn B.subtilis theo phương pháp phân lập Bùi Xuân Đồng (2004); Khảo sát đặc điểm hình thái (hình dạng, kích thước, màu sắc khuẩn lạc) đặc tính sinh hóa (Gram, Catalase khả di động) theo Bùi Xuân Đồng (2004); Phương pháp xác định ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng phát triển vi khuẩn B.subtilis theo Lê Thị Huệ (2016) Phương pháp định tính khả sinh enzyme protease theo phương pháp định tính enzyme protease Ponnuswamy (2013) Phương pháp định lượng enzyme protease theo phương pháp định lượng Nguyễn Hoàng Anh cs., (2017) Phương pháp xác định bền nhiệt enzyme protease từ B.subtilis theo Nguyễn Hoàng Anh cs., (2017) PHƯƠNG PHÁP XỬ LÍ SỐ LIỆU Số liệu xử lí theo phần mềm Microsoft Excel 2016 10 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU & THẢO LUẬN 11 PHÂN LẬP VI KHUẨN B.SUBTILIS Bảng Số loại khuẩn lạc phân lập đặc tính sinh hóa Tên khuẩn lạc Kích thước (mm) CH1.1, TD1.1, SC1.2, SC1.3, ST1.7 CH1.2, CH1.6, TD1.2, ST1.3, ST.1.6, NC1.5 6-10 CH1.4, TD1.3, PM1.3, SC1.6, NC1.2, NC1.4 11-15 CH1.3, CH1.5, TD1.4, PM1.1, PM1.4, PM1.5, PM1.6, SC1.4, SC1.9, SC1.11, ST1.1 16-20 TD1.5, BD1.2, SC1.1 21-25 SC1.5, SC1.7, NC1.1, NC1.3 26-30 SC1.10, ST1.4, ST1.5, ST1.8 31-35 BD1.1, PM1.2, SC1.8, ST1.2 36-40 Gram Catalase Khả di động Thu 43 loại khuẩn lạc khác Gram dương Catalase dương 12 Có khả di dộng Nhận xét: Chủng vi khuẩn PM1.2, SC1.8, ST1.2 có kích thước khuẩn lạc lớn (40 mm), chủng vi khuẩn SC1.2, TD1.1, CH1.1, ST1.7 có kích thước khuẩn lạc nhỏ (5mm) ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ ĐẶC TÍNH SINH HĨA Bảng Đặc diểm hình thái tế bào Tên khuẩn lạc Đặc điểm hình thái tế bào CH1.1, CH1.2, CH1.3, CH1.4, CH1.5, CH1.6, TD1.2, TD1.4, BD1.1, BD1.2, PM1.1, PM1.2, PM1.5, PM1.6, SC1.1, SC1.2, SC1.3, SC1.4, SC1.5, SC1.6, SC1.7, SC1.8, SC1.9, SC1.10, ST1.1, ST1.2, ST1.3, ST1.5, ST1.6, ST1.7, NC1.1, NC1.2, NC1.4, NC1.5 TD.1, TD1.3, TD1.5, PM1.3, PM1.4, SC1.11, ST1.4, ST1.8, NC1.3 Vi khuẩn hình que, đầu trịn, di chuyển theo cụm Vi khuẩn hình que, đầu trịn, di chuyển theo cụm, dính tạo thành chuỗi 2, tế bào Kết hợp với đặc điểm hình thái khuẩn lạc đặc tính sinh hóa, kết luận dịng vi khuẩn phân lập từ mẫu chọn ban đầu thuộc có đặc tính hình thái giống B.subtilis 13 Đặc tính sinh trưởng sinh enzyme protease chủng vi khuẩn phân lập Bảng Đường kính vịng phân giải hoạt độ enzyme protease sinh từ chủng phân lập STT Tên chủng Đường kính vịng phân giải (mm) Hoạt độ (u/l) CH1.1 9,41 Hình Vịng phân giải mơi trường định tính CH1.2 9,5 14,33 casein enzyme protease sinh từ TD1.2 10,5 11,64 SC1.1 16 32,69 chủng vi khuẩn phân lập SC1.5 14,5 28,66 SC1.6 12 21,50 ST1.3 13 25,97 ST1.6 10,5 12,09 ST1.8 4,47 10 PM1.6 13 25,08 Nhận xét: Đường kính vịng thủy phân mang tính chất định tính 14 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển chủng tuyển chọn Nhận xét: sinh trưởng phát triển chủng lựa chọn phát triển mạnh pH7 Hình Đường cong sinh trưởng chủng lựa trọn môi trường pH khác 15 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển chủng tuyển chọn Hình Mối liên hệ sinh trưởng phát triển hoạt độ enzyme protease Nhận xét: Mật độ sinh trưởng phát triển vi khuẩn không ảnh hưởng nhiều đến hoạt độ enzyme chủng sinh 16 Đặc tính enzyme protease sinh từ chủng vi khuẩn tuyển chọn Nhận xét: 55℃ hoạt độ enzyme giảm nhiều so với 50℃ chủng thí nghiệm Hình Sự bền nhiệt enzyme protease sinh từ chủng lựa chọn 17 chọn Hình Độ bền nhiệt chủng 50℃ sau 2h Nhật xét: Sau 2h 50℃, chủng SC1.5 chủng có độ bền nhiệt cao (71,87%) chủng có độ bền nhiệt thấp SC1.1 (62,07%) Các chủng có độ bền nhiệt cao 60% 18 KẾT LUẬN Từ loại chất ban đầu phân lập 43 chủng vi khuẩn có đặc điểm tương tự B.subtilis Trong có 10 chủng có khả sinh enzyme protease cao dựa đường kính vịng phân giải xếp lần lượ t : SC1.1, SC1.5, ST1.3,PM1.6, SC1.6, CH1.2, ST1.6, TD1.2, CH1.1, ST1.8 Xác định chủng có hoạt độ enzyme protease cao chủng: SC1.1 (32,69u/l), SC1.5 (28,66u/l), SC1.6 (21,49u/l) , ST1.3 (25,97u/l), PM1.6 (25,07u/l) 19 KẾT LUẬN Tuyển chọn chủng sinh enzyme protease xác định khả sinh trưởng phất triển chúng điều kiện sinh trưởng khác sinh trưởng phát triển chúng điều kiện pH khác đó: + pH thích hợp cho phát triển vi khuẩn B.subtilis pH7 đạt đỉnh sinh trưởng sau 24 nuôi cấy + Mật độ sinh trưởng phát triển vi sinh vật không ảnh hưởng nhiều đến hoạt độ enzyme protease + Enzyme protease sinh từ vi khuẩn B.subtilis, bền nhiệt nhiệt độ 50℃ tốt 55℃ 2h 20