Khóa luận tốt nghiệp Công nghệ kỹ thuật hóa học: Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang

Nội dung nghiên cứu của khóa luận là xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng trong thực vật bằng phương pháp đo quang phổ. Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp. Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để định lượng tanin tổng trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng.

BỘ CƠNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP HÀ NỘI ­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ KỸ THUẬT HĨA  HỌC   XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TANNINS TỔNG TRONG  THỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT ĐO QUANG                                     Cán bộ hướng dẫn  : PGS. TS. NGUYỄN TIẾN ĐẠT                                                       TS. TRẦN QUANG HẢI                   Sinh viên thực hiện : PHẠM THỊ HOA                   Mã sinh viên            : 1141120183                   Lớp                           : ĐH CN HĨA HỌC 3 ­ K11 Hà Nội ­ 2020 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sự tri ân sâu sắc đối   với  TS. Trần Quang Hải ­ giảng viên khoa Hóa ­ Trường Đại học Cơng  Nghiệp Hà Nội đã giúp đỡ em trong q trình làm khóa luận Em xin  gửi lời cảm  ơn  sâu sắc đến  PGS. TS. Nguyễn Tiến Đạt  ­  Trung tâm Nghiên cứu và Chuyển giao cơng nghệ, Viện Hàn Lâm Khoa học  và Cơng nghệ  Việt Nam đã hết lịng hướng dẫn, chỉ  bảo, truyền đạt kiến  thức kinh nghiệm q báu cho em Cảm  ơn gia đình, tất cả  bạn bè đã ln  ủng hộ, giúp đỡ  và là chỗ  dựa tinh thần, nguồn động viên cho em trong những lúc khó khăn Trong q trình làm báo cáo này mặc dù đã được sự giúp đỡ tận tình   và hết sức cố gắng nhưng do trình độ và thời gian nghiên cứu cịn hạn chế  nên khơng thể  tránh được những thiếu sót. Vì vậy, em kính mong nhận   được ý kiến đóng góp chỉ bảo của các q thầy cơ                                                                   Em xin chân thành cảm ơn!                                                                Hà Nội, ngày 28 tháng 5 năm 2020                                                                                    Sinh viên                                                                                Phạm Thị Hoa MỤC LỤC                                             LOD:  Giới hạn phát hiện (Limit of detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) HPLC:   Sắc   ký   lỏng   hiệu     cao   (High   ­   performance   liquid  chromatography) UV: Tử ngoại VIS: Khả kiến ACN: Acetonitril TFA: Trifluoroacetic AOAC:  Hiệp  hội   các  nhà  hóa học  phân tích  chính thức  (Association  of   Official Analytical Chemists) MeOH: Methanol DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp MỞ ĐẦU Việt Nam là một nước có thảm thực vật đa dạng và phong phú với   nhiều lồi thực vật, được sử  dụng trong phịng và điều trị  bệnh, cũng như  bổ  dưỡng nâng cao sức khỏe cho con người. Có nhiều lồi thực vật được  ví như là một loại dược liệu được dùng phổ biến trong y học dân gian làm  thuốc. Các nghiên cứu cho thấy, tanin có trong nhiều lồi thực vật như: ổi,  chè xanh, măng cụt  Tanin có nhiều hoạt tính sinh học như: hoạt tính  kháng khuẩn, kháng nấm, chống khối u, kháng virut  nên nó được  ứng  dụng khá rộng rãi trong y học hiện đại ngày nay Ngày nay, để xác định hàm lượng của các chất trong nhiều lồi thực  vật, nhiều kỹ  thuật phân tích mới và hiện đại như  quang phổ  UV ­ Vis,  HPLC, quang phổ  đạo hàm… đã được áp dụng vào việc phân tích. Trong  đó, quang phổ UV ­ Vis là phương pháp được sử dụng rộng rãi vì nó có độ  nhạy cao, phân tích thuận tiện Song song với việc tìm ra các kĩ thuật mới thì việc kiểm tra lại giá trị  của phương pháp phân tích với mục đích đảm bảo độ chính xác, độ tin cậy   của số liệu phân tích và tăng tính ứng dụng của phương pháp đó trong thực  tiễn cũng rất quan trọng. Vì vậy, tơi chọn đề tài “Xây dựng phương pháp   định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang’’ Mục tiêu của đề tài: Xây dựng phương pháp và định lượng tanin tổng  trong một số mẫu cao chiết từ thực vật bằng phương pháp đo quang phổ  Nội dung nghiên cứu: ­ Xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng trong thực vật bằng   phương pháp đo quang phổ. Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và   giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp ­ Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để  định lượng tanin tổng  trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TANIN 1.1.1 Khái niệm, tính chất [1] * Khái niệm: Tanin được định nghĩa là ‘‘những hợp chất polyphenol có trong thực   vật, có vị  chát được phát hiện dương tính với thí nghiệm thuộc da’’ và   được định lượng dựa vào mức độ hấp phụ trên bột da sống chuẩn. Cơ chế  thuộc da được giải thích do tanin có nhiều nhóm OH phenol, tạo nhiều dây   nối hydro với các mạch polypeptid của protein. Nếu phân tử tanin càng lớn   thì sự kết hợp với protein càng chặt. Khối lượng phân tử dao động từ 5000  ­ 20000 đvc Hình 1.: Liên kết hidro giữa tanin với protein * Tính chất: Tanin thường là những chất rất phân cực, dễ tan trong dung mơi phân  cực     cồn,   aceton,   methanol,   propylene   glycon,   glycerin   etylacetat   …   không tan trong các dung môi kém phân cực như: hexan, benzen, dầu hỏa …  1.1.2 Phân loại  Dựa vào cấu trúc hóa học có thể  chia tanin làm 2 loại chính: tanin   thủy phân và tanin ngưng tụ SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp 1.1.2.1 Tanin thủy phân [1] Tanin thủy phân được cịn được gọi là tanin pyrogallic. Loại này có  những đặc điểm sau: Khi thủy phân bằng axit hoặc bằng enzym tanase thì  giải phóng ra phần đường và phần khơng đường. Phần đường thường là   glucose, đơi khi gặp đường đặc biệt ví dụ đường hamamelose. Phần khơng  phải đường là các axit. Axit hay gặp là axit gallic. Các axit gallic nối với  nhau theo dây nối depsid để tạo thành axit m­digallic, m­trigallic v.v  Phần   đường và phần không phải đường nối với nhau theo dây nối este (không   phải   dây   nối   acetal)   nên   người   ta  coi   tanin   loại   này    những  pseudo   ­  glycosid.                                                                                                       Axit gallic                                                    Axit m ­ digallic                                                       SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 10 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp V0 : Thể tích dung dịch proanthocyanidin A2 gốc được pha vào ( l); VMeOH : Thể tích methanol ( l); V: Tổng thể tích cần pha ( l) Thêm vào 500  l mỗi dung dịch 3000  l thuốc thử BuOH ­ HCl trộn  đều rồi thêm tiếp 100  l thuốc thử sắt. Trộn thật đều rồi ủ các dung dịch ở  90oC trong thời gian 60 phút 2.4 CHUẨN BỊ MẪU PHÂN TÍCH Năm mẫu cao chiết methanol của các mẫu Trà hoa vàng (Camellia   chrysantha) tại phịng Nghiên cứu và Ứng dụng Hóa sinh, trung tâm Nghiên  cứu và Chuyển giao cơng nghệ, viện Hàn Lâm Khoa học và Cơng nghệ  Việt   Nam     cân     xác   khối   lượng     hòa   tan   hồn   tồn   trong  methanol tới nồng độ 1 mg/ml.  Cân 5 ­ 10 mg cao chiết của 5 mẫu trà hoa vàng rồi pha trong V (µl)  MeOH thu được mẫu có nồng độ  1 mg/ml. Hút chính xác 500 µl của mỗi  mẫu trên, sau đó thêm   3000 µl thuốc thử  BuOH­HCl, trộn đều rồi thêm  tiếp 100 µl thuốc thử  sắt. Các dung dịch cũng được  ủ  trong thời gian và   nhiệt độ giống như các dung dịch chuẩn 2.5 CHUẨN BỊ MẪU KHẢO SÁT GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN  ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP Tiến hành đo 10 lần song song với proanthocyanidin A2 (20  g/ml).  Hút chính xác 480 µl MeOH lần lượt cho vào các  ống nghiệm chịu nhiệt,   rồi thêm tiếp vào 20 µl dung dịch làm việc của proanthocyanidin A2 (500   g/ml). Thêm 3000 µl thuốc thử  BuOH­HCl, trộn đều rồi thêm tiếp 100 µl   thuốc thử sắt. Dung dịch cũng được ủ trong thời gian 60 phút và ở nhiệt độ  90oC, rồi tiến hành đo độ hấp thụ quang của 10 mẫu SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 42 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Xác định giới hạn phát hiện LOD như sau: Tính giá trị trung bình  và  độ lệch chuẩn SD LOD =  SD =  Cơng thức tính LOQ: LOD =  SD =  2.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU Kết quả  đo độ  hấp thụ  quang của các dung dịch chuẩn được xử  lý  trên phần mềm Excel. Từ các giá trị nồng độ và độ   hấp thụ  quang của dãy  dung dịch proanthocyanidin A2, xây dựng được đường chuẩn có dạng y =  a.x+b, trong đó: x,y lần lượt là nồng độ và độ hấp thụ quang của dung dịch  proanthocyanidin A2, a là độ dốc của đường chuẩn, b là hệ số chặn Dựa vào phương trình đường chuẩn và độ  hấp thụ  quang của các  dung dịch mẫu thử, có thể  xác định hàm lượng  tanin tổng  tương đương  proanthocyanidin A2 trong mẫu đo theo cơng thức: TC =  Trong đó:  Ai là độ hấp thụ quang của mẫu thử i a, b là hệ số độ dốc và hệ số chặn của đường chuẩn y = a.x + b C là nồng độ mẫu thử (mg/ml) TC: hàm lượng tanin tổng tương đương proanthocyanidin A2, mg  ProA2E /g mẫu cao chiết SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 43 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN ĐO QUANG Dựa trên tài liệu tham khảo [27] và thực nghiệm sử dụng về thể tích   thuốc thử phản ứng, lượng chất phân tích, nhiệt độ và thời gian phản ứng,   pha lỗng bằng MeOH, để lựa chọn điều kiện phản ứng tạo sản phẩm có   khả năng hấp thụ quang cao nhất. Điều kiện cụ thể như sau: + Chuẩn bị  thuốc thử  như  mục 2.3.1 và dung dịch chuẩn gốc, dung   dịch chuẩn như mục 2.3.2 + Phản  ứng tạo màu định lượng tanin tổng: Lấy 500   l dung dịch  mẫu, sau đó thêm vào 3000 µl thuốc thử BuOH­HCl, trộn đều rồi thêm tiếp  100 µl thuốc thử sắt. Tiến hành ủ ở  nhiệt độ  90oC trong thời gian 60 phút,  để nguội ở nhiệt độ phịng Qt   phổ   hấp   thụ     khoảng   400   ­   800   nm   với   mẫu   tr ắng     MeOH (được làm phản  ứng tương tự  như  mẫu thử). Phổ  hấp thụ  của  proanthocyanidin A2 thu được ở hình 3.1 SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 44 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Hình 3.: Phổ hấp thụ của proanthocyanidin A2 Kết quả khảo sát bước sóng cho thấy phổ UV­VIS của tanin có hấp  thụ  cực đại tại bước sóng  λ  = 550 nm, pic thu được khá cân đối. Vì vậy  chọn điều kiện đo quang xác định tanin là: ­ Lượng chất phân tích: 500 µl ­ Thể tích thuốc thử: 3000 µl thuốc thử BuOH ­ HCl, 100 µl thuốc thử  sắt ­ Nhiệt độ phản ứng: to = 90oC ­ Thời gian phản ứng: t = 60 phút ­ Bước sóng đo độ hấp thụ:   = 550 nm 3.2 KẾT QUẢ  XÁC   ĐỊNH KHOẢNG TUYẾN  TÍNH VÀ  XÂY DỰNG  ĐƯỜNG  CHUẨN Tiến hành khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ với độ hấp  thụ quang của proanthocyanidin A2 chuẩn SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 45 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Sau khi tiến hành pha một dãy các dung dịch tiêu chuẩn để xây dựng  đường chuẩn ta tiến hành đo độ  hấp thụ  quang   các điều kiện đã chọn   Kết quả được trình bày trong bảng 3.1 và hình 3.2: SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 46 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Bảng 3.: Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính của quy trình định lượng STT C (µg/ml) Khoảng định lượng 20 60 100 150 200 300 400 500 Độ hấp thụ quang  (A) 0,0949 0,1933 0,3335 0,4566 0,5561 0,7726 0,9637 1,1967 20 ­ 500 (µg/ml) R2 0,9952 Hình 3.: Đường chuẩn của proanthocyanidin A2 SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 47 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Mối quan hệ giữa độ  hấp thụ  quang (A) và nồng độ  của proanthocyanidin   A2 (C) được thể hiện qua phương trình:  y = 0,0022 x + 0,0853 Trong đó :  y là độ hấp thụ quang của dung dịch, x là nồng độ của proanthocyanidin A2 chuẩn Hệ số tương quan : R2 = 0,9952 Nhận xét:  Dựa trên đồ  thị  ta thấy khoảng nồng độ  từ  20 ­ 500   g/ml có sự  tuyến tính giữa nồng độ  và độ  hấp thụ  quang là đảm bảo. Đồng thời so  sánh hệ  số tương quan R của đồ  thị  với giới hạn chấp nhận hệ số tương   quan theo tài liệu tham khảo [4], ta thấy R 2  = 0,9952   0,995 đạt yêu cầu.  Vậy khoảng tuyến tính của phương pháp nằm trong khoảng từ  20 ­ 500   g/ml 3.3. KẾT QUẢ  GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG  (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP Kết     xác   định   giới   hạn   phát   hiện,   giới   hạn   định   lượng     phương pháp được trình bày theo bảng 3.2:  SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 48 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Bảng 3.: Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định   lượng (LOQ) STT Nồng độ (µg/ml) Độ hấp thụ quang  (A) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 0,0949 0,0939 0,1011 0,0896 0,1002 0,0903 0,1015 0,1006 0,0983 0,1001 10 Độ lệch chuẩn (SD) 0,0043 LOD (µg/ml) 6,45 LOQ (µg/ml) 19,54    * Tính kết quả:   Độ lệch chuẩn:                                                    SD =                                      =  = 0,09705 (n = 10)                                               SD = 0,0043 Giới hạn phát hiện (LOD):                                               LOD =  =  = 6,45 (µg/ml)  Giới hạn định lượng (LOQ):                                              LOQ =  =  = 19,54 (µg/ml) SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 49 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Nhận xét: Vậy khoảng giới hạn phát hiện (LOD) của phép đo là 6,45  µg/ml và  giới hạn định lượng (LOQ) của phép đo là 19,54 µg/ml điều này phù hợp  với khoảng giá trị nồng độ mà thực nghiệm đã tiến hành 3.4   KẾT   QUẢ   ĐỊNH   LƯỢNG   TỔNG   TANIN   NGƯNG   TỤ   TRONG   MỘT   SỐ  MẪU CAO CHIẾT TRÀ HOA VÀNG Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để  định lượng hàm lượng   tổng tanin ngưng tụ có trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng. Tiến hành  chuẩn bị mẫu như mục 3.2.3 và phân tích như các mẫu chuẩn. Kết quả xác   định hàm lượng tổng tanin ngưng tụ trong trà hoa vàng được trình bày theo  bảng 3.3: Bảng 3.: Kết quả phân tích hàm lượng tanin tổng trong một số mẫu cao   chiết trà hoa vàng Ký  hiệu Nồng độ của  Hàm lượng tanin    mẫu   đo  tổng trong mẫu cao  từ   đường  chiết (mg  chuẩn  ProA2E/g) (µg/ml) Nồng độ  (mg/ml) Độ hấp  thụ (A) TV1 1,00 0,3371 114,45 114,45 TV2 1,00 0,1892 47,23 47,23 TV3 1,00 0,1378 23,86 23,86 TV4 1,00 0,0975 5,55 5,55 TV5 1,00 0,2517 75,64 75,64 mẫu Nhận xét:  Từ  kết quả  trong bảng 3.3, ta thấy mẫu trà hoa vàng (TV1) có hàm  lượng tanin tổng cao nhất 114,45 (mg ProA2E/g) và mẫu trà hoa vàng (TV4)  có hàm lượng tanin tổng thấp nhất 5,55 (mg ProA2E/g). Hàm lượng mẫu  SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 50 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp trà hoa vàng (TV1) cao gấp 108,9 lần so với mẫu trà hoa vàng (TV4). Điều   này phản ánh chất lượng của các mẫu khơng giống nhau, khơng đồng đều,  mặc dù các mẫu này đều là sản phẩm mua trên thị trường.  SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 51 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp KẾT LUẬN Qua thời gian nghiên cứu và thực hiện đề  tài khóa luận tốt nghiệp  “Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng trong thực vật bằng   kỹ thuật đo quang’’, em đã thu được một số kết quả sau: 1. Xác định được khoảng tuyến tính của phương pháp phân tích với   lượng proanthocyanidin A2 chuẩn nằm trong khoảng từ 20 ­ 500  g/ml.  2. Xây dựng đường chuẩn của proanthocyanidin A2: y = 0,0022 x +  0,0853 với R² = 0,9952 3. Xác định được giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của  phương pháp phân tích:  LOD = 6,45  g/ml,  LOQ = 19,54  g/ml  4. Xác định hàm lượng tanin tổng trong 5 mẫu cao chiết trà hoa vàng   Kết quả cho thấy hàm lượng tanin tổng trong 5 mẫu nghiên cứu nằm trong   khoảng từ 5,55 ­ 114,45 (mg ProA2E/g) SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 52 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1]: Trần Cơng Luận (2016), Giáo trình Dược liệu học, Trường Đại  học Tây Đơ, tr. 109 ­112 [2]: Phạm Luận (2014),  Phương pháp phân tích phổ  phân tử, Nhà  xuất bản Bách khoa Hà Nội, tr. 57 ­ 108 [3]: Bộ  Y tế  ­ Vụ  khoa học và đào tạo (2005), Kiểm nghiệm dược   phẩm, Nhà xuất bản Y học, tr. 104 ­ 110.  [4]: Viện kiểm nghiệm an tồn vệ  sinh thực phẩm quốc gia (2010),   Thẩm định phương pháp trong phân tích hóa học và vi sinh vật, Nhà xuất  bản khoa học và kỹ thuật Hà Nội, tr. 32 ­ 39 [5]: Viện dược liệu (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt   Nam, tập II, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật Tài liệu tiếng Anh [6]:   A   Scalbert,   (1991),   “Antimicrobial   properties   of   tannins”,  Phytochemistry, 30, pp. 3875­3883 [7]:   X.L. Liu, Y.Q. Hao, L. Jin, Z.J. Xu, T.A. McAllister, Y. Wang,  (2013), Anti­Escherichia coli O157: H7 properties of purple prairie clover and  sainfoin condensed tannins, Molecules, 18, pp. 2183­2199 [8]:   T.A. Mcallister, T. Martinez, H.D. Bae, A.D. Muir, L.J. Yanke,  G.A   Jones,   (2005),   “Characterization   of   condensed   tannins   purified   from  legume forages: chromophore production, protein precipitation, and inhibitory  effects on cellulose digestion”, J Chem Ecol, 31 (9), p. 2049 [9]:   F. Uchiumi, T. Hatano, H. Ito, T. Yoshida, S. Tanuma,   (2003),  “Transcriptional suppression of the HIV promoter by natural compounds”,  Antivir Res, 58 (1), pp. 89­98 SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 53 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp [10]:   G.T   Tan,   J.M   Pezzuto,   A.D   Kinghorn,   S.H   Hughes,   (1991),  “Evaluation   of   natural   products   as   inhibitors   of   human   immunodeficiency  virus type 1 (hiv­1) reverse transcriptase”, J Nat Prod, 54 (1), p. 143 [11]: S. Ciesek, T. von Hahn, C.C. Colpitts, L.M. Schang, M. Friesland,  J. Steinmann, et al, (2011), “The green tea polyphenol, epigallocatechin­3­ gallate, inhibits hepatitis C virus entry”, Hepatology, 54, pp. 1947­1955 [12]: X. Terra, J. Valls, X. Vitrac, J.M. Mérrillon, L. Arola, A. Ardèvol,  et   al,   (2007),   “Grape­seed   procyanidins   act   as   antiinflammatory   agents   in  endotoxin­stimulated RAW 264.7 macrophages by inhibiting NFkB signaling  pathway”, J Agric Food Chem, 55, pp. 4357­4365 [13]:   M   Park,   H   Cho,   H   Jung,   H   Lee,   K.T   Hwang,   (2014),  “Antioxidant and anti­inflammatory activities of tannin fraction of the extract  from black raspberry seeds compared to grape seeds”,  J Food Biochem, 38  (3), pp. 259­270 [14]:   C.A. Rice­Evans, N.J. Miller, G. Paganga,   (1996),   “Structure­ antioxidant   activity   relationships   of   flavonoids   and   phenolic   acids”,  Free  Radic Bio Med, 20 (7), pp. 933­956 [15]:   W.F   Hodnick,   E.B   Milosavljevic,   J.H   Nelson,   R.S   Pardini,  (1988), “Electrochemistry of flavonoids”, Biochem Pharmacol, 37, pp. 2607­ 2611 [16]: P.C.H. Hollman, M.B. Katan, (1999), “Dietary flavonoids: intake,  health effects  and  bioavailability”,  Food Chem  Toxicol, 37 (9­10),  pp. 937­ 942 [17]:   Masturah   Markom,   Masitah   Hasana,   Wan   Ramli   Wan   Daudb,  Harcharan Singh, Jamaliah Md Jahim, (2007), “Extraction of hydrolysable  tannins   from   Phyllanthus   niruri   Linn.:   Effects   of   solvents   and   extraction  methods”, Separation and Purification Technology, 52, pp. 487­49 SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 54 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp [18]:   Jyotismita   Khasnabis,   Chandan   Rai,   Arindam   Roy,   (2015),  “Determination of tannin content by titrimetric method from different types of  tea”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 7 (6), pp. 238 ­ 241 [19]: Trupti P. Durgawale, Pratik P. Durgawale, Chitra C. Khanwelkar,  (2016),   “Quantitative   estimation   of   tannins   by   HPLC”,  Scholars   Research   Library, 8 (3), pp. 123 ­ 126 [20]: Philip­Edouard Shay, J. A. Trofymow, C. Peter Constabel, (2017),  An improved butanol­HCl assay for quantification of water­soluble, acetone:  methanol­soluble, and insoluble proanthocyanidins (condensed tannins), (63),  pp. 1 ­ 11 [21]:   Oi­Wah   Lau,   Shiu­Fai   Luk,   Hsiao­Lan   Huang,   (1989),  “Spectrophotometric determination of tannins in tea and beer samples with  iron (III) and 1,10­phenanthroline as reagents”, (5), Analyst, pp. 631 ­ 633 [22]:   Tushar   Dhanani,   Sonal   Shah,   Satyanshu   Kumar,   (2015),   “A  validated high­performance liquid chromatography method for determination  of tannin­related marker constituents gallic acid, corilagin, chebulagic acid,  ellagic   acid   and   chebulinic   Acid   in   four   Terminalia   species   from   India”,  Journal of Chromatographic Science, 53 (4), pp. 625 ­ 632 [23]:   AOAC   (1980),  Official   Methods   of   Analysis   Association   of   Analytical Chemists, Arlington, USA.  [24]:   J   H   Kang,   S   T   Chung,   J   H   Go,   K   H   Row,   (2000),  “Separation of epigallocatechin gallate from Korean green tea by RP­HPLC”,  Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, (23), pp. 2739 ­  2749 [25]:   Xue­Li Cao,   Yu Tian,   Tian­You Zhang, Yoichiro Ito,   (2001),  “Separation and purification of three individual catechins from tea polyphenol  SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 55 MSV:  Khoa Cơng nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp mixture   by   CCC”,  Journal   of   Liquid   Chromatography   &   RelatedTechnologies, (24), pp.1723 ­ 1732 [26]:   Maria   Atanassova,   Valentina   Christova­Bagdassarian,   (2009),  “Determination of tannins content by titrimetric method for comparison of  different   plant   species”,  Journal of the   University of Chemical   Technology   and Metallurgy,44 (4), pp. 413 ­ 415  [27]: Porter, L.J., Hrstich, L.N., Chan, B.G., (1986), “The conversion  of   procyanidins   and   prodelphinidins   to   cyanidin   and   delphinidin”,  Phytochemistry (25), pp.223 ­ 230 SV: Phạm Thị Hoa                  1141120183 56 MSV:  ... tiễn cũng rất quan trọng. Vì vậy, tơi chọn đề tài ? ?Xây? ?dựng? ?phương? ?pháp   định? ?lượng? ?tannins? ?tổng? ?trong? ?thực? ?vật? ?bằng? ?kỹ? ?thuật? ?đo? ?quang? ??’ Mục tiêu của đề tài:? ?Xây? ?dựng? ?phương? ?pháp? ?và? ?định? ?lượng? ?tanin? ?tổng? ? trong? ?một số mẫu cao chiết từ? ?thực? ?vật? ?bằng? ?phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ... trong? ?một số mẫu cao chiết từ? ?thực? ?vật? ?bằng? ?phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ  Nội dung nghiên cứu: ­ Xây? ?dựng? ?phương? ?pháp? ?định? ?lượng? ?tanin? ?tổng? ?trong? ?thực? ?vật? ?bằng   phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ. Xác? ?định? ?giới hạn phát hiện (LOD) và   giới hạn? ?định? ?lượng? ?(LOQ) của? ?phương? ?pháp. .. 1.3.1.4? ?Phương? ?pháp? ?định? ?lượng Trong? ?phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ,? ?phương? ?pháp? ?thường dùng để? ?định? ? lượng? ?là:? ?phương? ?pháp? ?đường chuẩn và? ?phương? ?pháp? ?thêm chuẩn a) Phương? ?pháp? ?đường chuẩn: * Cơ sở? ?định? ?lượng? ?của? ?phương? ?pháp: