Đang tải... (xem toàn văn)
Nội dung nghiên cứu của khóa luận là xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng trong thực vật bằng phương pháp đo quang phổ. Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp. Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để định lượng tanin tổng trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng.
BỘ CƠNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP HÀ NỘI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ KỸ THUẬT HĨA HỌC XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TANNINS TỔNG TRONG THỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT ĐO QUANG Cán bộ hướng dẫn : PGS. TS. NGUYỄN TIẾN ĐẠT TS. TRẦN QUANG HẢI Sinh viên thực hiện : PHẠM THỊ HOA Mã sinh viên : 1141120183 Lớp : ĐH CN HĨA HỌC 3 K11 Hà Nội 2020 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sự tri ân sâu sắc đối với TS. Trần Quang Hải giảng viên khoa Hóa Trường Đại học Cơng Nghiệp Hà Nội đã giúp đỡ em trong q trình làm khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS. TS. Nguyễn Tiến Đạt Trung tâm Nghiên cứu và Chuyển giao cơng nghệ, Viện Hàn Lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam đã hết lịng hướng dẫn, chỉ bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu cho em Cảm ơn gia đình, tất cả bạn bè đã ln ủng hộ, giúp đỡ và là chỗ dựa tinh thần, nguồn động viên cho em trong những lúc khó khăn Trong q trình làm báo cáo này mặc dù đã được sự giúp đỡ tận tình và hết sức cố gắng nhưng do trình độ và thời gian nghiên cứu cịn hạn chế nên khơng thể tránh được những thiếu sót. Vì vậy, em kính mong nhận được ý kiến đóng góp chỉ bảo của các q thầy cơ Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 28 tháng 5 năm 2020 Sinh viên Phạm Thị Hoa MỤC LỤC LOD: Giới hạn phát hiện (Limit of detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) UV: Tử ngoại VIS: Khả kiến ACN: Acetonitril TFA: Trifluoroacetic AOAC: Hiệp hội các nhà hóa học phân tích chính thức (Association of Official Analytical Chemists) MeOH: Methanol DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp MỞ ĐẦU Việt Nam là một nước có thảm thực vật đa dạng và phong phú với nhiều lồi thực vật, được sử dụng trong phịng và điều trị bệnh, cũng như bổ dưỡng nâng cao sức khỏe cho con người. Có nhiều lồi thực vật được ví như là một loại dược liệu được dùng phổ biến trong y học dân gian làm thuốc. Các nghiên cứu cho thấy, tanin có trong nhiều lồi thực vật như: ổi, chè xanh, măng cụt Tanin có nhiều hoạt tính sinh học như: hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, chống khối u, kháng virut nên nó được ứng dụng khá rộng rãi trong y học hiện đại ngày nay Ngày nay, để xác định hàm lượng của các chất trong nhiều lồi thực vật, nhiều kỹ thuật phân tích mới và hiện đại như quang phổ UV Vis, HPLC, quang phổ đạo hàm… đã được áp dụng vào việc phân tích. Trong đó, quang phổ UV Vis là phương pháp được sử dụng rộng rãi vì nó có độ nhạy cao, phân tích thuận tiện Song song với việc tìm ra các kĩ thuật mới thì việc kiểm tra lại giá trị của phương pháp phân tích với mục đích đảm bảo độ chính xác, độ tin cậy của số liệu phân tích và tăng tính ứng dụng của phương pháp đó trong thực tiễn cũng rất quan trọng. Vì vậy, tơi chọn đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang’’ Mục tiêu của đề tài: Xây dựng phương pháp và định lượng tanin tổng trong một số mẫu cao chiết từ thực vật bằng phương pháp đo quang phổ Nội dung nghiên cứu: Xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng trong thực vật bằng phương pháp đo quang phổ. Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để định lượng tanin tổng trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TANIN 1.1.1 Khái niệm, tính chất [1] * Khái niệm: Tanin được định nghĩa là ‘‘những hợp chất polyphenol có trong thực vật, có vị chát được phát hiện dương tính với thí nghiệm thuộc da’’ và được định lượng dựa vào mức độ hấp phụ trên bột da sống chuẩn. Cơ chế thuộc da được giải thích do tanin có nhiều nhóm OH phenol, tạo nhiều dây nối hydro với các mạch polypeptid của protein. Nếu phân tử tanin càng lớn thì sự kết hợp với protein càng chặt. Khối lượng phân tử dao động từ 5000 20000 đvc Hình 1.: Liên kết hidro giữa tanin với protein * Tính chất: Tanin thường là những chất rất phân cực, dễ tan trong dung mơi phân cực cồn, aceton, methanol, propylene glycon, glycerin etylacetat … không tan trong các dung môi kém phân cực như: hexan, benzen, dầu hỏa … 1.1.2 Phân loại Dựa vào cấu trúc hóa học có thể chia tanin làm 2 loại chính: tanin thủy phân và tanin ngưng tụ SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp 1.1.2.1 Tanin thủy phân [1] Tanin thủy phân được cịn được gọi là tanin pyrogallic. Loại này có những đặc điểm sau: Khi thủy phân bằng axit hoặc bằng enzym tanase thì giải phóng ra phần đường và phần khơng đường. Phần đường thường là glucose, đơi khi gặp đường đặc biệt ví dụ đường hamamelose. Phần khơng phải đường là các axit. Axit hay gặp là axit gallic. Các axit gallic nối với nhau theo dây nối depsid để tạo thành axit mdigallic, mtrigallic v.v Phần đường và phần không phải đường nối với nhau theo dây nối este (không phải dây nối acetal) nên người ta coi tanin loại này những pseudo glycosid. Axit gallic Axit m digallic SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 10 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp V0 : Thể tích dung dịch proanthocyanidin A2 gốc được pha vào ( l); VMeOH : Thể tích methanol ( l); V: Tổng thể tích cần pha ( l) Thêm vào 500 l mỗi dung dịch 3000 l thuốc thử BuOH HCl trộn đều rồi thêm tiếp 100 l thuốc thử sắt. Trộn thật đều rồi ủ các dung dịch ở 90oC trong thời gian 60 phút 2.4 CHUẨN BỊ MẪU PHÂN TÍCH Năm mẫu cao chiết methanol của các mẫu Trà hoa vàng (Camellia chrysantha) tại phịng Nghiên cứu và Ứng dụng Hóa sinh, trung tâm Nghiên cứu và Chuyển giao cơng nghệ, viện Hàn Lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam cân xác khối lượng hòa tan hồn tồn trong methanol tới nồng độ 1 mg/ml. Cân 5 10 mg cao chiết của 5 mẫu trà hoa vàng rồi pha trong V (µl) MeOH thu được mẫu có nồng độ 1 mg/ml. Hút chính xác 500 µl của mỗi mẫu trên, sau đó thêm 3000 µl thuốc thử BuOHHCl, trộn đều rồi thêm tiếp 100 µl thuốc thử sắt. Các dung dịch cũng được ủ trong thời gian và nhiệt độ giống như các dung dịch chuẩn 2.5 CHUẨN BỊ MẪU KHẢO SÁT GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP Tiến hành đo 10 lần song song với proanthocyanidin A2 (20 g/ml). Hút chính xác 480 µl MeOH lần lượt cho vào các ống nghiệm chịu nhiệt, rồi thêm tiếp vào 20 µl dung dịch làm việc của proanthocyanidin A2 (500 g/ml). Thêm 3000 µl thuốc thử BuOHHCl, trộn đều rồi thêm tiếp 100 µl thuốc thử sắt. Dung dịch cũng được ủ trong thời gian 60 phút và ở nhiệt độ 90oC, rồi tiến hành đo độ hấp thụ quang của 10 mẫu SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 42 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Xác định giới hạn phát hiện LOD như sau: Tính giá trị trung bình và độ lệch chuẩn SD LOD = SD = Cơng thức tính LOQ: LOD = SD = 2.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU Kết quả đo độ hấp thụ quang của các dung dịch chuẩn được xử lý trên phần mềm Excel. Từ các giá trị nồng độ và độ hấp thụ quang của dãy dung dịch proanthocyanidin A2, xây dựng được đường chuẩn có dạng y = a.x+b, trong đó: x,y lần lượt là nồng độ và độ hấp thụ quang của dung dịch proanthocyanidin A2, a là độ dốc của đường chuẩn, b là hệ số chặn Dựa vào phương trình đường chuẩn và độ hấp thụ quang của các dung dịch mẫu thử, có thể xác định hàm lượng tanin tổng tương đương proanthocyanidin A2 trong mẫu đo theo cơng thức: TC = Trong đó: Ai là độ hấp thụ quang của mẫu thử i a, b là hệ số độ dốc và hệ số chặn của đường chuẩn y = a.x + b C là nồng độ mẫu thử (mg/ml) TC: hàm lượng tanin tổng tương đương proanthocyanidin A2, mg ProA2E /g mẫu cao chiết SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 43 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN ĐO QUANG Dựa trên tài liệu tham khảo [27] và thực nghiệm sử dụng về thể tích thuốc thử phản ứng, lượng chất phân tích, nhiệt độ và thời gian phản ứng, pha lỗng bằng MeOH, để lựa chọn điều kiện phản ứng tạo sản phẩm có khả năng hấp thụ quang cao nhất. Điều kiện cụ thể như sau: + Chuẩn bị thuốc thử như mục 2.3.1 và dung dịch chuẩn gốc, dung dịch chuẩn như mục 2.3.2 + Phản ứng tạo màu định lượng tanin tổng: Lấy 500 l dung dịch mẫu, sau đó thêm vào 3000 µl thuốc thử BuOHHCl, trộn đều rồi thêm tiếp 100 µl thuốc thử sắt. Tiến hành ủ ở nhiệt độ 90oC trong thời gian 60 phút, để nguội ở nhiệt độ phịng Qt phổ hấp thụ khoảng 400 800 nm với mẫu tr ắng MeOH (được làm phản ứng tương tự như mẫu thử). Phổ hấp thụ của proanthocyanidin A2 thu được ở hình 3.1 SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 44 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.: Phổ hấp thụ của proanthocyanidin A2 Kết quả khảo sát bước sóng cho thấy phổ UVVIS của tanin có hấp thụ cực đại tại bước sóng λ = 550 nm, pic thu được khá cân đối. Vì vậy chọn điều kiện đo quang xác định tanin là: Lượng chất phân tích: 500 µl Thể tích thuốc thử: 3000 µl thuốc thử BuOH HCl, 100 µl thuốc thử sắt Nhiệt độ phản ứng: to = 90oC Thời gian phản ứng: t = 60 phút Bước sóng đo độ hấp thụ: = 550 nm 3.2 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH KHOẢNG TUYẾN TÍNH VÀ XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN Tiến hành khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ với độ hấp thụ quang của proanthocyanidin A2 chuẩn SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 45 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Sau khi tiến hành pha một dãy các dung dịch tiêu chuẩn để xây dựng đường chuẩn ta tiến hành đo độ hấp thụ quang các điều kiện đã chọn Kết quả được trình bày trong bảng 3.1 và hình 3.2: SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 46 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.: Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính của quy trình định lượng STT C (µg/ml) Khoảng định lượng 20 60 100 150 200 300 400 500 Độ hấp thụ quang (A) 0,0949 0,1933 0,3335 0,4566 0,5561 0,7726 0,9637 1,1967 20 500 (µg/ml) R2 0,9952 Hình 3.: Đường chuẩn của proanthocyanidin A2 SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 47 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Mối quan hệ giữa độ hấp thụ quang (A) và nồng độ của proanthocyanidin A2 (C) được thể hiện qua phương trình: y = 0,0022 x + 0,0853 Trong đó : y là độ hấp thụ quang của dung dịch, x là nồng độ của proanthocyanidin A2 chuẩn Hệ số tương quan : R2 = 0,9952 Nhận xét: Dựa trên đồ thị ta thấy khoảng nồng độ từ 20 500 g/ml có sự tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ quang là đảm bảo. Đồng thời so sánh hệ số tương quan R của đồ thị với giới hạn chấp nhận hệ số tương quan theo tài liệu tham khảo [4], ta thấy R 2 = 0,9952 0,995 đạt yêu cầu. Vậy khoảng tuyến tính của phương pháp nằm trong khoảng từ 20 500 g/ml 3.3. KẾT QUẢ GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP Kết xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương pháp được trình bày theo bảng 3.2: SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 48 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.: Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) STT Nồng độ (µg/ml) Độ hấp thụ quang (A) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 0,0949 0,0939 0,1011 0,0896 0,1002 0,0903 0,1015 0,1006 0,0983 0,1001 10 Độ lệch chuẩn (SD) 0,0043 LOD (µg/ml) 6,45 LOQ (µg/ml) 19,54 * Tính kết quả: Độ lệch chuẩn: SD = = = 0,09705 (n = 10) SD = 0,0043 Giới hạn phát hiện (LOD): LOD = = = 6,45 (µg/ml) Giới hạn định lượng (LOQ): LOQ = = = 19,54 (µg/ml) SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 49 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Nhận xét: Vậy khoảng giới hạn phát hiện (LOD) của phép đo là 6,45 µg/ml và giới hạn định lượng (LOQ) của phép đo là 19,54 µg/ml điều này phù hợp với khoảng giá trị nồng độ mà thực nghiệm đã tiến hành 3.4 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG TỔNG TANIN NGƯNG TỤ TRONG MỘT SỐ MẪU CAO CHIẾT TRÀ HOA VÀNG Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để định lượng hàm lượng tổng tanin ngưng tụ có trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng. Tiến hành chuẩn bị mẫu như mục 3.2.3 và phân tích như các mẫu chuẩn. Kết quả xác định hàm lượng tổng tanin ngưng tụ trong trà hoa vàng được trình bày theo bảng 3.3: Bảng 3.: Kết quả phân tích hàm lượng tanin tổng trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng Ký hiệu Nồng độ của Hàm lượng tanin mẫu đo tổng trong mẫu cao từ đường chiết (mg chuẩn ProA2E/g) (µg/ml) Nồng độ (mg/ml) Độ hấp thụ (A) TV1 1,00 0,3371 114,45 114,45 TV2 1,00 0,1892 47,23 47,23 TV3 1,00 0,1378 23,86 23,86 TV4 1,00 0,0975 5,55 5,55 TV5 1,00 0,2517 75,64 75,64 mẫu Nhận xét: Từ kết quả trong bảng 3.3, ta thấy mẫu trà hoa vàng (TV1) có hàm lượng tanin tổng cao nhất 114,45 (mg ProA2E/g) và mẫu trà hoa vàng (TV4) có hàm lượng tanin tổng thấp nhất 5,55 (mg ProA2E/g). Hàm lượng mẫu SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 50 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp trà hoa vàng (TV1) cao gấp 108,9 lần so với mẫu trà hoa vàng (TV4). Điều này phản ánh chất lượng của các mẫu khơng giống nhau, khơng đồng đều, mặc dù các mẫu này đều là sản phẩm mua trên thị trường. SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 51 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp KẾT LUẬN Qua thời gian nghiên cứu và thực hiện đề tài khóa luận tốt nghiệp “Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang’’, em đã thu được một số kết quả sau: 1. Xác định được khoảng tuyến tính của phương pháp phân tích với lượng proanthocyanidin A2 chuẩn nằm trong khoảng từ 20 500 g/ml. 2. Xây dựng đường chuẩn của proanthocyanidin A2: y = 0,0022 x + 0,0853 với R² = 0,9952 3. Xác định được giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp phân tích: LOD = 6,45 g/ml, LOQ = 19,54 g/ml 4. Xác định hàm lượng tanin tổng trong 5 mẫu cao chiết trà hoa vàng Kết quả cho thấy hàm lượng tanin tổng trong 5 mẫu nghiên cứu nằm trong khoảng từ 5,55 114,45 (mg ProA2E/g) SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 52 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1]: Trần Cơng Luận (2016), Giáo trình Dược liệu học, Trường Đại học Tây Đơ, tr. 109 112 [2]: Phạm Luận (2014), Phương pháp phân tích phổ phân tử, Nhà xuất bản Bách khoa Hà Nội, tr. 57 108 [3]: Bộ Y tế Vụ khoa học và đào tạo (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y học, tr. 104 110. [4]: Viện kiểm nghiệm an tồn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp trong phân tích hóa học và vi sinh vật, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật Hà Nội, tr. 32 39 [5]: Viện dược liệu (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập II, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật Tài liệu tiếng Anh [6]: A Scalbert, (1991), “Antimicrobial properties of tannins”, Phytochemistry, 30, pp. 38753883 [7]: X.L. Liu, Y.Q. Hao, L. Jin, Z.J. Xu, T.A. McAllister, Y. Wang, (2013), AntiEscherichia coli O157: H7 properties of purple prairie clover and sainfoin condensed tannins, Molecules, 18, pp. 21832199 [8]: T.A. Mcallister, T. Martinez, H.D. Bae, A.D. Muir, L.J. Yanke, G.A Jones, (2005), “Characterization of condensed tannins purified from legume forages: chromophore production, protein precipitation, and inhibitory effects on cellulose digestion”, J Chem Ecol, 31 (9), p. 2049 [9]: F. Uchiumi, T. Hatano, H. Ito, T. Yoshida, S. Tanuma, (2003), “Transcriptional suppression of the HIV promoter by natural compounds”, Antivir Res, 58 (1), pp. 8998 SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 53 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp [10]: G.T Tan, J.M Pezzuto, A.D Kinghorn, S.H Hughes, (1991), “Evaluation of natural products as inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 (hiv1) reverse transcriptase”, J Nat Prod, 54 (1), p. 143 [11]: S. Ciesek, T. von Hahn, C.C. Colpitts, L.M. Schang, M. Friesland, J. Steinmann, et al, (2011), “The green tea polyphenol, epigallocatechin3 gallate, inhibits hepatitis C virus entry”, Hepatology, 54, pp. 19471955 [12]: X. Terra, J. Valls, X. Vitrac, J.M. Mérrillon, L. Arola, A. Ardèvol, et al, (2007), “Grapeseed procyanidins act as antiinflammatory agents in endotoxinstimulated RAW 264.7 macrophages by inhibiting NFkB signaling pathway”, J Agric Food Chem, 55, pp. 43574365 [13]: M Park, H Cho, H Jung, H Lee, K.T Hwang, (2014), “Antioxidant and antiinflammatory activities of tannin fraction of the extract from black raspberry seeds compared to grape seeds”, J Food Biochem, 38 (3), pp. 259270 [14]: C.A. RiceEvans, N.J. Miller, G. Paganga, (1996), “Structure antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids”, Free Radic Bio Med, 20 (7), pp. 933956 [15]: W.F Hodnick, E.B Milosavljevic, J.H Nelson, R.S Pardini, (1988), “Electrochemistry of flavonoids”, Biochem Pharmacol, 37, pp. 2607 2611 [16]: P.C.H. Hollman, M.B. Katan, (1999), “Dietary flavonoids: intake, health effects and bioavailability”, Food Chem Toxicol, 37 (910), pp. 937 942 [17]: Masturah Markom, Masitah Hasana, Wan Ramli Wan Daudb, Harcharan Singh, Jamaliah Md Jahim, (2007), “Extraction of hydrolysable tannins from Phyllanthus niruri Linn.: Effects of solvents and extraction methods”, Separation and Purification Technology, 52, pp. 48749 SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 54 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp [18]: Jyotismita Khasnabis, Chandan Rai, Arindam Roy, (2015), “Determination of tannin content by titrimetric method from different types of tea”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 7 (6), pp. 238 241 [19]: Trupti P. Durgawale, Pratik P. Durgawale, Chitra C. Khanwelkar, (2016), “Quantitative estimation of tannins by HPLC”, Scholars Research Library, 8 (3), pp. 123 126 [20]: PhilipEdouard Shay, J. A. Trofymow, C. Peter Constabel, (2017), An improved butanolHCl assay for quantification of watersoluble, acetone: methanolsoluble, and insoluble proanthocyanidins (condensed tannins), (63), pp. 1 11 [21]: OiWah Lau, ShiuFai Luk, HsiaoLan Huang, (1989), “Spectrophotometric determination of tannins in tea and beer samples with iron (III) and 1,10phenanthroline as reagents”, (5), Analyst, pp. 631 633 [22]: Tushar Dhanani, Sonal Shah, Satyanshu Kumar, (2015), “A validated highperformance liquid chromatography method for determination of tanninrelated marker constituents gallic acid, corilagin, chebulagic acid, ellagic acid and chebulinic Acid in four Terminalia species from India”, Journal of Chromatographic Science, 53 (4), pp. 625 632 [23]: AOAC (1980), Official Methods of Analysis Association of Analytical Chemists, Arlington, USA. [24]: J H Kang, S T Chung, J H Go, K H Row, (2000), “Separation of epigallocatechin gallate from Korean green tea by RPHPLC”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, (23), pp. 2739 2749 [25]: XueLi Cao, Yu Tian, TianYou Zhang, Yoichiro Ito, (2001), “Separation and purification of three individual catechins from tea polyphenol SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 55 MSV: Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp mixture by CCC”, Journal of Liquid Chromatography & RelatedTechnologies, (24), pp.1723 1732 [26]: Maria Atanassova, Valentina ChristovaBagdassarian, (2009), “Determination of tannins content by titrimetric method for comparison of different plant species”, Journal of the University of Chemical Technology and Metallurgy,44 (4), pp. 413 415 [27]: Porter, L.J., Hrstich, L.N., Chan, B.G., (1986), “The conversion of procyanidins and prodelphinidins to cyanidin and delphinidin”, Phytochemistry (25), pp.223 230 SV: Phạm Thị Hoa 1141120183 56 MSV: ... tiễn cũng rất quan trọng. Vì vậy, tơi chọn đề tài ? ?Xây? ?dựng? ?phương? ?pháp định? ?lượng? ?tannins? ?tổng? ?trong? ?thực? ?vật? ?bằng? ?kỹ? ?thuật? ?đo? ?quang? ??’ Mục tiêu của đề tài:? ?Xây? ?dựng? ?phương? ?pháp? ?và? ?định? ?lượng? ?tanin? ?tổng? ? trong? ?một số mẫu cao chiết từ? ?thực? ?vật? ?bằng? ?phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ... trong? ?một số mẫu cao chiết từ? ?thực? ?vật? ?bằng? ?phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ Nội dung nghiên cứu: Xây? ?dựng? ?phương? ?pháp? ?định? ?lượng? ?tanin? ?tổng? ?trong? ?thực? ?vật? ?bằng phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ. Xác? ?định? ?giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn? ?định? ?lượng? ?(LOQ) của? ?phương? ?pháp. .. 1.3.1.4? ?Phương? ?pháp? ?định? ?lượng Trong? ?phương? ?pháp? ?đo? ?quang? ?phổ,? ?phương? ?pháp? ?thường dùng để? ?định? ? lượng? ?là:? ?phương? ?pháp? ?đường chuẩn và? ?phương? ?pháp? ?thêm chuẩn a) Phương? ?pháp? ?đường chuẩn: * Cơ sở? ?định? ?lượng? ?của? ?phương? ?pháp:
