XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TANNINS TỔNG TRONGTHỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT ĐO QUANG

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ KỸ THUẬT HĨA HỌC XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TANNINS TỔNG TRONG THỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT ĐO QUANG Cán hướng dẫn : PGS TS NGUYỄN TIẾN ĐẠT TS TRẦN QUANG HẢI Sinh viên thực : PHẠM THỊ HOA Mã sinh viên : 1141120183 Lớp : ĐH CN HÓA HỌC - K11 Hà Nội - 2020 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc TS Trần Quang Hải - giảng viên khoa Hóa - Trường Đại học Công Nghiệp Hà Nội giúp đỡ em trình làm khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Nguyễn Tiến Đạt - Trung tâm Nghiên cứu Chuyển giao công nghệ, Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam hết lòng hướng dẫn, bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho em Cảm ơn gia đình, tất bạn bè ủng hộ, giúp đỡ chỗ dựa tinh thần, nguồn động viên cho em lúc khó khăn Trong q trình làm báo cáo giúp đỡ tận tình cố gắng trình độ thời gian nghiên cứu cịn hạn chế nên khơng thể tránh thiếu sót Vì vậy, em kính mong nhận ý kiến đóng góp bảo quý thầy cô Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2020 Sinh viên Phạm Thị Hoa MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TANIN 1.1.1 Khái niệm, tính chất .2 1.1.2 Phân loại 1.1.2.1 Tanin thủy phân 1.1.2.2 Tanin ngưng tụ .5 1.1.2 Hoạt tính sinh học tanin 1.1.2.1 Hoạt tính kháng khuẩn 1.1.2.2 Hoạt tính kháng vi-rút 1.1.2.3 Hoạt tính chống viêm 1.1.2.4 Hoạt tính chống oxy hóa .8 1.1.3 Một số phương pháp định lượng tanin 1.1.3.1 Phương pháp chuẩn độ 1.1.3.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 10 1.1.3.3 Phương pháp đo quang 11 1.2 CÁC THỰC VẬT CHỨA NHIỀU TANIN .12 1.3 PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV - VIS ĐỊNH LƯỢNG TANIN .14 1.3.1 Phương pháp phân tích đo quang 14 1.3.1.1 Nguyên tắc phép đo phổ UV - VIS .14 1.3.1.2 Cấu tạo nguyên lý hoạt động máy đo quang phổ 15 1.3.1.3 Phạm vi ứng dụng phép đo phổ UV-Vis .17 1.3.1.4 Phương pháp định lượng 18 1.3.2 Định lượng tổng hàm lượng tanin ngưng tụ thực vật phương pháp đo quang .21 1.4 GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 22 1.4.1 Giới hạn phát (LOD) 22 1.4.2 Giới hạn định lượng (LOQ) 24 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 26 2.1 DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 26 2.1.1 Hóa chất 26 2.1.2 Dụng cụ - thiết bị 26 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 29 2.3 CHUẨN BỊ DÃY DUNG DỊCH CHUẨN 30 2.4 CHUẨN BỊ MẪU PHÂN TÍCH .31 2.5 CHUẨN BỊ MẪU KHẢO SÁT GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP 31 2.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU 32 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .33 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN ĐO QUANG 33 3.2 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH KHOẢNG TUYẾN TÍNH VÀ XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN 34 3.3 KẾT QUẢ GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP 36 3.4 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG TỔNG TANIN NGƯNG TỤ TRONG MỘT SỐ MẪU CAO CHIẾT TRÀ HOA VÀNG 38 KẾT LUẬN 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT LOD: Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao (High - performance liquid chromatography) UV: Tử ngoại VIS: Khả kiến ACN: Acetonitril TFA: Trifluoroacetic AOAC: Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức (Association of Official Analytical Chemists) MeOH: Methanol DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Liên kết hidro tanin với protein .2 Hình 1.2: Cấu tạo axit gallic, axit m - digallic axit m - trigallic Hình 1.3: Cấu tạo axit ellagic corilagin .4 Hình 1.4: Cấu tạo flavanol Hình 1.5: Cấu tạo epigallocatechin gallate .6 Hình 1.6: Cấu tạo epicatechin gallate .7 Hình 1.7: Cấu tạo gallocatechin gallate Hình 1.8: Một số lồi thực vật chứa nhiều tanin 13 Hình 1.9: Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo máy đo quang phổ 17 Hình 1.10: Dạng đồ thị phương pháp đường chuẩn .19 Hình 1.11: Đồ thị đường chuẩn phương pháp thêm chuẩn .21 Hình 1.12: Nguyên lý phản ứng tanin ngưng tụ với thuốc thử .22 Hình 2.1: Hệ thống máy đo quang UV - Vis 27 Hình 2.2: Hệ thống máy cô quay chân không .27 Hình 2.3: Sơ đồ quy trình chiết mẫu trà hoa vàng .29 Hình 3.1: Phổ hấp thụ proanthocyanidin A2 33 Hình 3.2: Đường chuẩn proanthocyanidin A2 35 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Hàm lượng tanin số loài thưc vật 13 Bảng 1.2: Dãy dung dịch chuẩn phương pháp thêm chuẩn 20 Bảng 2: Bảng dãy đường chuẩn proanthocyanidin A2 30 Bảng 3.1: Kết khảo sát khoảng tuyến tính quy trình định lượng .35 Bảng 3.2: Kết xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 37 Bảng 3.3: Kết phân tích hàm lượng tanin tổng số mẫu cao chiết trà hoa vàng 38 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp MỞ ĐẦU Việt Nam nước có thảm thực vật đa dạng phong phú với nhiều loài thực vật, sử dụng phòng điều trị bệnh, bổ dưỡng nâng cao sức khỏe cho người Có nhiều lồi thực vật ví loại dược liệu dùng phổ biến y học dân gian làm thuốc Các nghiên cứu cho thấy, tanin có nhiều loài thực vật như: ổi, chè xanh, măng cụt Tanin có nhiều hoạt tính sinh học như: hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, chống khối u, kháng virut nên ứng dụng rộng rãi y học đại ngày Ngày nay, để xác định hàm lượng chất nhiều loài thực vật, nhiều kỹ thuật phân tích đại quang phổ UV - Vis, HPLC, quang phổ đạo hàm… áp dụng vào việc phân tích Trong đó, quang phổ UV - Vis phương pháp sử dụng rộng rãi có độ nhạy cao, phân tích thuận tiện Song song với việc tìm kĩ thuật việc kiểm tra lại giá trị phương pháp phân tích với mục đích đảm bảo độ xác, độ tin cậy số liệu phân tích tăng tính ứng dụng phương pháp thực tiễn quan trọng Vì vậy, chọn đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng thực vật kỹ thuật đo quang’’ Mục tiêu đề tài: Xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng số mẫu cao chiết từ thực vật phương pháp đo quang phổ Nội dung nghiên cứu: - Xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng thực vật phương pháp đo quang phổ Xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp - Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng tanin tổng số mẫu cao chiết trà hoa vàng SV: Phạm Thị Hoa MSV: 1141120183 Khoa Công nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TANIN 1.1.1 Khái niệm, tính chất [1] * Khái niệm: Tanin định nghĩa ‘‘những hợp chất polyphenol có thực vật, có vị chát phát dương tính với thí nghiệm thuộc da’’ định lượng dựa vào mức độ hấp phụ bột da sống chuẩn Cơ chế thuộc da giải thích tanin có nhiều nhóm OH phenol, tạo nhiều dây nối hydro với mạch polypeptid protein Nếu phân tử tanin lớn kết hợp với protein chặt Khối lượng phân tử dao động từ 5000 - 20000 đvc NH C O H O Hình 1.1: Liên kết hidro tanin với protein * Tính chất: Tanin thường chất phân cực, dễ tan dung môi phân cực cồn, aceton, methanol, propylene glycon, glycerin etylacetat … không tan dung môi phân cực như: hexan, benzen, dầu hỏa … 1.1.2 Phân loại Dựa vào cấu trúc hóa học chia tanin làm loại chính: tanin thủy phân tanin ngưng tụ 1.1.2.1 Tanin thủy phân [1] Tanin thủy phân được gọi tanin pyrogallic Loại có đặc điểm sau: Khi thủy phân axit enzym tanase giải phóng phần đường phần không đường Phần đường thường glucose, SV: Phạm Thị Hoa MSV: 1141120183 Khoa Công nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp đơi gặp đường đặc biệt ví dụ đường hamamelose Phần khơng phải đường axit Axit hay gặp axit gallic Các axit gallic nối với theo dây nối depsid để tạo thành axit m-digallic, m-trigallic v.v Phần đường phần đường nối với theo dây nối este (không phải dây nối acetal) COOH nên người ta coi tanin loại pseudo - glycosid O O HO HO O OH OH OH HO HO OH OH Axit gallic Axit m - digallic OH OH O O O O HO OH O OH OH OH OH Axit m - trigallic Hình 1.2: Cấu tạo axit gallic, axit m - digallic axit m - trigallic Tính chất đặc trưng tanin loại là: + Khi cất khô 180 - 200°C thu pyrogallol chủ yếu + Khi đun nóng với HCl cho axit gallic axit ellargic + Cho kết tủa bơng với chì axetat 10 % SV: Phạm Thị Hoa MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Các mẫu Trà hoa vàng sử dụng nghiên cứu xác định tên khoa học (Camellia chrysantha), mẫu mua thị trường Quy trình chiết mẫu: Mẫu trà hoa vàng (phần lá) Rửa sạch, thái nhỏ, sấy khô mẫu to = 60oC Nghiền nguyên liệu thành dạng bột + Ngâm với EtOH 90% theo tỷ lệ 1/20 + Siêu âm (t = 15 phút) Lọc Thu lấy bã, loại bỏ dịch lọc Sấy bã nguyên liệu to = 60oC Chiết bã với dung môi MeOH theo tỷ lệ 1/20, t = 90 phút Loại bỏ bã, thu lấy dịch chiết Dịch chiết tanin Thu hồi dung môi máy cô quay chân không Cao MeOH (trà hoa vàng) Hình 2.15: Sơ đồ quy trình chiết mẫu trà hoa vàng SV: Phạm Thị Hoa 29 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp 2.3 CHUẨN BỊ DÃY DUNG DỊCH CHUẨN Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn gồm nồng độ 0, 20, 60, 100, 150, 200, 300, 400,500 µg/ml Tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn làm việc từ dung dịch chuẩn 500 g/ml: Hút xác V (l) MeOH vào ống nghiệm chịu nhiệt, tiếp thêm vào tiếp xác V (l) dung dịch chuẩn tương ứng với nồng độ C (g/ml) Mẫu trắng chuẩn bị song song với dãy mẫu chuẩn Cụ thể cách pha loãng bảng sau: Bảng 2: Bảng dãy đường chuẩn proanthocyanidin A2 STT C0 (g/ml) C (g/ml) V0 (l) VMeOH (l) Vtổng (l) 500 0 500 500 500 20 20 480 500 500 60 60 440 500 500 100 100 400 500 500 150 150 350 500 500 200 200 300 500 500 300 300 200 500 500 400 400 100 500 500 Trong đó: 500 500 500 Co : Nồng độ dung dịch proanthocyanidin A2 chuẩn (g/ml); C : Nồng độ dung dịch proanthocyanidin A2 chuẩn làm việc (g/ml); V0 : Thể tích dung dịch proanthocyanidin A2 gốc pha vào (l); VMeOH : Thể tích methanol (l); SV: Phạm Thị Hoa 30 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp V: Tổng thể tích cần pha (l) Thêm vào 500 l dung dịch 3000 l thuốc thử BuOH - HCl trộn thêm tiếp 100 l thuốc thử sắt Trộn thật ủ dung dịch 90oC thời gian 60 phút 2.4 CHUẨN BỊ MẪU PHÂN TÍCH Năm mẫu cao chiết methanol mẫu Trà hoa vàng (Camellia chrysantha) phòng Nghiên cứu Ứng dụng Hóa sinh, trung tâm Nghiên cứu Chuyển giao công nghệ, viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam cân xác khối lượng hịa tan hoàn toàn methanol tới nồng độ mg/ml Cân - 10 mg cao chiết mẫu trà hoa vàng pha V (µl) MeOH thu mẫu có nồng độ mg/ml Hút xác 500 µl mẫu trên, sau thêm 3000 µl thuốc thử BuOH-HCl, trộn thêm tiếp 100 µl thuốc thử sắt Các dung dịch ủ thời gian nhiệt độ giống dung dịch chuẩn 2.5 CHUẨN BỊ MẪU KHẢO SÁT GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP Tiến hành đo 10 lần song song với proanthocyanidin A2 (20 g/ml) Hút xác 480 µl MeOH cho vào ống nghiệm chịu nhiệt, thêm tiếp vào 20 µl dung dịch làm việc proanthocyanidin A2 (500 g/ml) Thêm 3000 µl thuốc thử BuOH-HCl, trộn thêm tiếp 100 µl thuốc thử sắt Dung dịch ủ thời gian 60 phút nhiệt độ 90 oC, tiến hành đo độ hấp thụ quang 10 mẫu Xác định giới hạn phát LOD sau: Tính giá trị trung bình độ lệch chuẩn SD LOD = SD = Cơng thức tính LOQ: SV: Phạm Thị Hoa 31 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp LOD = SD = 2.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU Kết đo độ hấp thụ quang dung dịch chuẩn xử lý phần mềm Excel Từ giá trị nồng độ độ hấp thụ quang dãy dung dịch proanthocyanidin A2, xây dựng đường chuẩn có dạng y = a.x+b, đó: x,y nồng độ độ hấp thụ quang dung dịch proanthocyanidin A2, a độ dốc đường chuẩn, b hệ số chặn Dựa vào phương trình đường chuẩn độ hấp thụ quang dung dịch mẫu thử, xác định hàm lượng tanin tổng tương đương proanthocyanidin A2 mẫu đo theo công thức: TC = Trong đó: Ai độ hấp thụ quang mẫu thử i a, b hệ số độ dốc hệ số chặn đường chuẩn y = a.x + b C nồng độ mẫu thử (mg/ml) TC: hàm lượng tanin tổng tương đương proanthocyanidin A2, mg ProA2E /g mẫu cao chiết SV: Phạm Thị Hoa 32 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN ĐO QUANG Dựa tài liệu tham khảo [27] thực nghiệm sử dụng thể tích thuốc thử phản ứng, lượng chất phân tích, nhiệt độ thời gian phản ứng, pha loãng MeOH, để lựa chọn điều kiện phản ứng tạo sản phẩm có khả hấp thụ quang cao Điều kiện cụ thể sau: + Chuẩn bị thuốc thử mục 2.3.1 dung dịch chuẩn gốc, dung dịch chuẩn mục 2.3.2 + Phản ứng tạo màu định lượng tanin tổng: Lấy 500 l dung dịch mẫu, sau thêm vào 3000 µl thuốc thử BuOH-HCl, trộn thêm tiếp 100 µl thuốc thử sắt Tiến hành ủ nhiệt độ 90 oC thời gian 60 phút, để nguội nhiệt độ phòng Quét phổ hấp thụ khoảng 400 - 800 nm với mẫu trắng MeOH (được làm phản ứng tương tự mẫu thử) Phổ hấp thụ proanthocyanidin A2 thu hình 3.1 Hình 3.16: Phổ hấp thụ proanthocyanidin A2 SV: Phạm Thị Hoa 33 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Kết khảo sát bước sóng cho thấy phổ UV-VIS tanin có hấp thụ cực đại bước sóng λ = 550 nm, pic thu cân đối Vì chọn điều kiện đo quang xác định tanin là: - Lượng chất phân tích: 500 µl - Thể tích thuốc thử: 3000 µl thuốc thử BuOH - HCl, 100 µl thuốc thử sắt - Nhiệt độ phản ứng: to = 90oC - Thời gian phản ứng: t = 60 phút - Bước sóng đo độ hấp thụ:  = 550 nm 3.2 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH KHOẢNG TUYẾN TÍNH VÀ XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN Tiến hành khảo sát phụ thuộc tuyến tính nồng độ với độ hấp thụ quang proanthocyanidin A2 chuẩn Sau tiến hành pha dãy dung dịch tiêu chuẩn để xây dựng đường chuẩn ta tiến hành đo độ hấp thụ quang điều kiện chọn Kết trình bày bảng 3.1 hình 3.2: SV: Phạm Thị Hoa 34 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.3: Kết khảo sát khoảng tuyến tính quy trình định lượng STT C (µg/ml) 20 60 100 150 200 300 400 500 Khoảng định lượng R2 Độ hấp thụ quang (A) 0,0949 0,1933 0,3335 0,4566 0,5561 0,7726 0,9637 1,1967 20 - 500 (µg/ml) 0,9952 1.4 Độ hấp thụ quang (A) 1.2 f(x) = 0x + 0.09 R² = 0.8 0.6 0.4 0.2 0 100 200 300 400 500 600 Nồng độ C (g/ml) Hình 3.17: Đường chuẩn proanthocyanidin A2 SV: Phạm Thị Hoa 35 MSV: 1141120183 Khoa Công nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Mối quan hệ độ hấp thụ quang (A) nồng độ proanthocyanidin A2 (C) thể qua phương trình: y = 0,0022 x + 0,0853 Trong : y độ hấp thụ quang dung dịch, x nồng độ proanthocyanidin A2 chuẩn Hệ số tương quan : R2 = 0,9952 Nhận xét: Dựa đồ thị ta thấy khoảng nồng độ từ 20 - 500 g/ml có tuyến tính nồng độ độ hấp thụ quang đảm bảo Đồng thời so sánh hệ số tương quan R đồ thị với giới hạn chấp nhận hệ số tương quan theo tài liệu tham khảo [4], ta thấy R2 = 0,9952 0,995 đạt yêu cầu Vậy khoảng tuyến tính phương pháp nằm khoảng từ 20 - 500 g/ml 3.3 KẾT QUẢ GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP Kết xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương pháp trình bày theo bảng 3.2: SV: Phạm Thị Hoa 36 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.4: Kết xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) STT Nồng độ (µg/ml) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 10 20 Độ lệch chuẩn (SD) LOD (µg/ml) LOQ (µg/ml) * Tính kết quả: Độ hấp thụ quang (A) 0,0949 0,0939 0,1011 0,0896 0,1002 0,0903 0,1015 0,1006 0,0983 0,1001 0,0043 6,45 19,54 Độ lệch chuẩn: SD = = = 0,09705 (n = 10)  SD = 0,0043 Giới hạn phát (LOD): LOD = = = 6,45 (µg/ml) Giới hạn định lượng (LOQ): LOQ = = = 19,54 (µg/ml) Nhận xét: SV: Phạm Thị Hoa 37 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Vậy khoảng giới hạn phát (LOD) phép đo 6,45 µg/ml giới hạn định lượng (LOQ) phép đo 19,54 µg/ml điều phù hợp với khoảng giá trị nồng độ mà thực nghiệm tiến hành 3.4 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG TỔNG TANIN NGƯNG TỤ TRONG MỘT SỐ MẪU CAO CHIẾT TRÀ HOA VÀNG Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng hàm lượng tổng tanin ngưng tụ có số mẫu cao chiết trà hoa vàng Tiến hành chuẩn bị mẫu mục 3.2.3 phân tích mẫu chuẩn Kết xác định hàm lượng tổng tanin ngưng tụ trà hoa vàng trình bày theo bảng 3.3: Bảng 3.5: Kết phân tích hàm lượng tanin tổng số mẫu cao chiết trà hoa vàng Ký hiệu Nồng độ (mg/ml) Độ hấp thụ (A) mẫu Nồng độ Hàm lượng tanin mẫu đo tổng mẫu cao từ đường chiết (mg ProA2E/g) chuẩn TV1 1,00 0,3371 (µg/ml) 114,45 TV2 1,00 0,1892 47,23 47,23 TV3 1,00 0,1378 23,86 23,86 TV4 1,00 0,0975 5,55 5,55 TV5 1,00 0,2517 75,64 75,64 114,45 Nhận xét: Từ kết bảng 3.3, ta thấy mẫu trà hoa vàng (TV1) có hàm lượng tanin tổng cao 114,45 (mg ProA2E/g) mẫu trà hoa vàng (TV4) có hàm lượng tanin tổng thấp 5,55 (mg ProA2E/g) Hàm lượng mẫu trà hoa vàng (TV1) cao gấp 108,9 lần so với mẫu trà hoa vàng (TV4) Điều phản ánh chất lượng mẫu không giống nhau, không đồng đều, mẫu sản phẩm mua thị trường SV: Phạm Thị Hoa 38 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa SV: Phạm Thị Hoa Khóa luận tốt nghiệp 39 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp KẾT LUẬN Qua thời gian nghiên cứu thực đề tài khóa luận tốt nghiệp “Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng thực vật kỹ thuật đo quang’’, em thu số kết sau: Xác định khoảng tuyến tính phương pháp phân tích với lượng proanthocyanidin A2 chuẩn nằm khoảng từ 20 - 500 g/ml Xây dựng đường chuẩn proanthocyanidin A2: y = 0,0022 x + 0,0853 với R² = 0,9952 Xác định giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp phân tích: LOD = 6,45 g/ml, LOQ = 19,54 g/ml Xác định hàm lượng tanin tổng mẫu cao chiết trà hoa vàng Kết cho thấy hàm lượng tanin tổng mẫu nghiên cứu nằm khoảng từ 5,55 - 114,45 (mg ProA2E/g) SV: Phạm Thị Hoa 40 MSV: 1141120183 Khoa Công nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1]: Trần Công Luận (2016), Giáo trình Dược liệu học, Trường Đại học Tây Đơ, tr 109 -112 [2]: Phạm Luận (2014), Phương pháp phân tích phổ phân tử, Nhà xuất Bách khoa Hà Nội, tr 57 - 108 [3]: Bộ Y tế - Vụ khoa học đào tạo (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, tr 104 - 110 [4]: Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội, tr 32 - 39 [5]: Viện dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Tài liệu tiếng Anh [6]: A Scalbert, (1991), “Antimicrobial properties of tannins”, Phytochemistry, 30, pp 3875-3883 [7]: X.L Liu, Y.Q Hao, L Jin, Z.J Xu, T.A McAllister, Y Wang, (2013), Anti-Escherichia coli O157: H7 properties of purple prairie clover and sainfoin condensed tannins, Molecules, 18, pp 2183-2199 [8]: T.A Mcallister, T Martinez, H.D Bae, A.D Muir, L.J Yanke, G.A Jones, (2005), “Characterization of condensed tannins purified from legume forages: chromophore production, protein precipitation, and inhibitory effects on cellulose digestion”, J Chem Ecol, 31 (9), p 2049 [9]: F Uchiumi, T Hatano, H Ito, T Yoshida, S Tanuma, (2003), “Transcriptional suppression of the HIV promoter by natural compounds”, Antivir Res, 58 (1), pp 89-98 [10]: G.T Tan, J.M Pezzuto, A.D Kinghorn, S.H Hughes, (1991), “Evaluation of natural products as inhibitors of human immunodeficiency virus type (hiv-1) reverse transcriptase”, J Nat Prod, 54 (1), p 143 SV: Phạm Thị Hoa 41 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp [11]: S Ciesek, T von Hahn, C.C Colpitts, L.M Schang, M Friesland, J Steinmann, et al, (2011), “The green tea polyphenol, epigallocatechin-3gallate, inhibits hepatitis C virus entry”, Hepatology, 54, pp 1947-1955 [12]: X Terra, J Valls, X Vitrac, J.M Mérrillon, L Arola, A Ardèvol, et al, (2007), “Grape-seed procyanidins act as antiinflammatory agents in endotoxin-stimulated RAW 264.7 macrophages by inhibiting NFkB signaling pathway”, J Agric Food Chem, 55, pp 4357-4365 [13]: M Park, H Cho, H Jung, H Lee, K.T Hwang, (2014), “Antioxidant and anti-inflammatory activities of tannin fraction of the extract from black raspberry seeds compared to grape seeds”, J Food Biochem, 38 (3), pp 259-270 [14]: C.A Rice-Evans, N.J Miller, G Paganga, (1996), “Structureantioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids”, Free Radic Bio Med, 20 (7), pp 933-956 [15]: W.F Hodnick, E.B Milosavljevic, J.H Nelson, R.S Pardini, (1988), “Electrochemistry of flavonoids”, Biochem Pharmacol, 37, pp 26072611 [16]: P.C.H Hollman, M.B Katan, (1999), “Dietary flavonoids: intake, health effects and bioavailability”, Food Chem Toxicol, 37 (9-10), pp 937942 [17]: Masturah Markom, Masitah Hasana, Wan Ramli Wan Daudb, Harcharan Singh, Jamaliah Md Jahim, (2007), “Extraction of hydrolysable tannins from Phyllanthus niruri Linn.: Effects of solvents and extraction methods”, Separation and Purification Technology, 52, pp 487-49 [18]: Jyotismita Khasnabis, Chandan Rai, Arindam Roy, (2015), “Determination of tannin content by titrimetric method from different types of tea”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, (6), pp 238 - 241 [19]: Trupti P Durgawale, Pratik P Durgawale, Chitra C Khanwelkar, (2016), “Quantitative estimation of tannins by HPLC”, Scholars Research Library, (3), pp 123 - 126 SV: Phạm Thị Hoa 42 MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp [20]: Philip-Edouard Shay, J A Trofymow, C Peter Constabel, (2017), An improved butanol-HCl assay for quantification of water-soluble, acetone: methanol-soluble, and insoluble proanthocyanidins (condensed tannins), (63), pp - 11 [21]: Oi-Wah Lau, Shiu-Fai Luk, Hsiao-Lan Huang, (1989), “Spectrophotometric determination of tannins in tea and beer samples with iron (III) and 1,10-phenanthroline as reagents”, (5), Analyst, pp 631 - 633 [22]: Tushar Dhanani, Sonal Shah, Satyanshu Kumar, (2015), “A validated high-performance liquid chromatography method for determination of tannin-related marker constituents gallic acid, corilagin, chebulagic acid, ellagic acid and chebulinic Acid in four Terminalia species from India”, Journal of Chromatographic Science, 53 (4), pp 625 - 632 [23]: AOAC (1980), Official Methods of Analysis Association of Analytical Chemists, Arlington, USA [24]: J H Kang, S T Chung, J H Go, K H Row, (2000), “Separation of epigallocatechin gallate from Korean green tea by RP-HPLC”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, (23), pp 2739 - 2749 [25]: Xue-Li Cao, Yu Tian, Tian-You Zhang, Yoichiro Ito, (2001), “Separation and purification of three individual catechins from tea polyphenol mixture by CCC”, Journal of Liquid Chromatography & RelatedTechnologies, (24), pp.1723 - 1732 [26]: Maria Atanassova, Valentina Christova-Bagdassarian, (2009), “Determination of tannins content by titrimetric method for comparison of different plant species”, Journal of the University of Chemical Technology and Metallurgy,44 (4), pp 413 - 415 [27]: Porter, L.J., Hrstich, L.N., Chan, B.G., (1986), “The conversion of procyanidins and prodelphinidins to cyanidin and delphinidin”, Phytochemistry (25), pp.223 - 230 SV: Phạm Thị Hoa 43 MSV: 1141120183 ... 1.1.2 Phân loại Dựa vào cấu trúc hóa học chia tanin làm loại chính: tanin thủy phân tanin ngưng tụ 1.1.2.1 Tanin thủy phân [1] Tanin thủy phân được gọi tanin pyrogallic Loại có đặc điểm sau: Khi... MSV: 1141120183 Khoa Cơng nghệ Hóa Khóa luận tốt nghiệp Hình 1.3: Cấu tạo axit ellagic corilagin 1.1.2.2 Tanin ngưng tụ [1] Tanin ngưng tụ hay cịn gọi tanin khơng thuỷ phân được, tanin pyrocatechic... sinh học tanin Theo nghiên cứu khoa học nước ngồi tanin hợp chất có nhiều hoạt tính sinh học 1.1.2.1 Hoạt tính kháng khuẩn Các hoạt tính kháng khuẩn tanin cơng nhận từ trước độc tính tanin vi