Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)

Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC  BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH SINH HỌC VI SINH Môn học: Sinh học vi sinh Giảng viên hướng dẫn: Trương Phước Thiên Hồng Nhóm sinh viên thực hiện: Nhóm Năm học: 2021-2022 Tháng 10-2022 DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHÓM STT Họ Tên MSSV Nguyễn Đạt Tiến Khoa Lâm Ngọc Lan 21126376 21126092 Dương Võ Phương Ngân 21126413 Võ Hồng Phẩm 21126154 Bàng Đức Quân 21126476 Ký tên MỤC LỤC 1.Tuần 1: Gói đĩa 2.Tuần 2: Pha mơi trường đổ đĩa 3.Tuần 3: Nhuộm gram,quan sát nấm sợi cấy khuẩn tủ cấy TUẦN 1: GĨI ĐĨA Trải giấy báo lên bàn, sau đặt khoảng 10 đĩa petri lên trên.Dùng hai ngón lấy giấy báo đẩy lên 2/3 đĩa sau dùng ngón trỏ đẩy đĩa vơ cho đều.Kết hợp ngón ngón trỏ bẻ giấy báo xuống.Dùng cụm tay đẩy lên tí giữ chặt bên thực gấp bên lại.Vuốt nếp vừa tạo sau dùng ngón cái,ngón trỏ ngón gấp nếp giấy báo cho sát xuống vành đĩa.Ta thực tương tự cho phần lại đến hết tờ báo.Cuối ta gấp phần giấy dư nhét chúng xuống phần gấp để cố định Hình a Hình b Hình 1a,1b Đĩa sau gói hồn chỉnh TUẦN 2: PHA MÔI TRƯỜNG VÀ ĐỔ ĐĨA Pha chế mơi trường 1.1.Ngun liệu Mơi trường dịch trích giá đỗ +Giá đậu: 100g +Glucose: 5g +Trypton: 2.5g +Cao nấm men: 0.5g +Agar: 7.5g +H2O: đủ 500 ml 1.2 Cách thực Đun giá đậu với H2O để sôi 20 phút, lọc lấy dịch trong, sau bổ sung ngun liệu cịn lại Sau tiếp tục đun đến agar tan hồn tồn.Phân phối vào bình chứa sau đậy miệng bình cách xoay nút bơng gịn, đậy lên miếng giấy báo cố định dây thun.Cuối đem tiệt trùng 121°C 15 phút Hình 2: Bình chứa mơi trường sau pha chế 2.Cách đổ đĩa Đầu tiên cần rửa tay, sau xịt cồn lau tủ cấy theo chiều xịt cồn vào tay.Kế đến xoay nút bơng bình để kéo theo hết bám lại.Sau mở nút bơng cần khử khuẩn miệng bình cách hơ qua lửa đèn cồn.Hơ đĩa để khử khuẩn bề mặt xung quanh đĩa.Tiến hành đổ đĩa(chú ý đổ đĩa gần đèn cồn để hạn chế vi sinh vật xung quanh), ta đổ tầm 2/3 đĩa sau nghiêng qua phần chưa có mơi trường để mơi trường mặt đĩa.Cuối ta hơ nhẹ qua chỗ mở nắp đĩa TUẦN 3: NHUỘM GRAM, QUAN SÁT NẤM SỢI VÀ CẤY KHUẨN TRONG TỦ CẤY 1.Nhuộm gram 1.1.Cách thực Sử dụng vi sinh vật sau để thí nghiệm: Bacillus subtilis E.coli Staphylococcus sp -Chuẩn bị vết bôi cố định vi khuẩn đèn cồn từ 3-5 phút -Dùng dung dịch crystal violet phủ lên vết bôi sau trải để phút -Để nghiêng phiến kính 45°, rửa vịi nước cho trơi hết phần thuốc nhuộm dư (giọt cuối chảy khỏi phiến kính khơng cịn màu) -Phủ lên vết bơi dung dịch lugol trải Để yên phút - Để nghiêng phiến kính 45°, tẩy màu dung dịch alcohol 95% giọt cuối chảy khỏi phiến kính khơng cịn màu (thơng thường khoảng 10 – 20 giây) Đây bước quan trọng Nếu bị tẩy màu mức, số vi khuẩn Gram dương bị màu tím trở thành Gram âm sau nhuộm màu lần thứ -Ngay rửa phiến kính vịi nước -Phủ lên vết bôi dung dịch Safranin trải Để yên phút -Rửa vòi nước -Thấm nhẹ giấy thấm Hơ khơ phiến kính trước quan sát kính hiển vi -Sử dụng dầu soi kính vật kính dầu để quan sát 1.2 Quan sát vi sinh vật vừa nhuộm kính hiển vi Hình Quan sát vi khuẩn Bacillus subtilis hính hiển vi Khuẩn Bacillus subtilis trực khuẩn nhỏ, bắt màu tím Gram dương, dạng đơn lẻ kết thành chuỗi ngắn Hình Quan sát vi khuẩn E.coli hính hiển vi E.coli có dạng hình cầu cầu khuẩn Gram âm nên nhuộm màu bắt màu hồng nhạt Hình Quan sát vi khuẩn Staphylococcus sp hính hiển vi Staphylococcus sp hay gọi tụ cầu khuẩn khuẩn Gram dương nên nhuộm bắt màu tím, khơng tạo nha bào khơng di động xếp theo hướng thường tạo thành cụm có dạng trơng giống chùm nho 2.Quan sát nấm sợi Hình Quan sát nấm Trichoderma hính hiển vi Sau quan sát ta thấy đặc điểm nấm Bào tử nấm có dạng hình elip, màu xanh lục đính sợi nấm.Sợi nấm có khả phân nhánh nhiều.Bào tử đính khối tròn mọc đầu cuống sinh bào tử Hình Quan sát nấm Aspergillus sp hính hiển vi Sau quan sát ta thấy đặc điểm nấm Bộ phận sinh bào tử Aspergillus sp có cấu trúc gồm đính bào đài mọc từ tế bào chân, đính bào đài, tiểu bào đài tiểu bào đài sinh bào tử có kích thước nhỏ Cấy khuẩn tủ cấy 3.1 Cách thực -Cấy móc mơi trường Potato Dextrose Agar(PDA) +Vệ sinh tủ cấy cồn 70° theo chiều +Lau vật dụng: đĩa petri, đèn cồn, bút, bật lửa, hũ đựng que cấy,… +Chuẩn bị mẫu cấy, đĩa petri có chứa mơi trường ni cấy hấp khử khuẩn +Hơ que cấy móc đến đỏ đầu giây, để kiểm tra xem qua cấy có nóng khơng ta để que cấy chạm vào nơi khơng có nấm khơng có khuẩn +Hơ bề mặt đĩa mẫu sau mở ta cào nhẹ lên phần có nấm,đóng nắp lại hơ qua lần để khử khuẩn +Lấy đĩa chứa môi trường hơ để khử khuẩn đĩa, sau ta cấy điểm bề mặt đĩa +Cuối ta hơ đĩa que cấy để khử khuẩn Hình b Hình a Hình 8a,8b Mẫu sau cấy móc Đối với hình 8a khuẩn lạc xuất tương đối đều,đẹp Đối với hình 8b khuẩn khơng xuất Ngun nhân trình thao tác ta hơ que cấy q nóng mà khơng để nguội nên làm chết khuẩn.Ta khắc phục cách sau hơ que cấy móc đợi que đỏ đầu giây, để kiểm tra xem qua cấy có nóng khơng ta để que cấy chạm vào nơi khơng có nấm khơng có khuẩn agar khơng chảy có nghĩa que hết nóng -Cấy ria mơi trường giá đậu(GĐ) +Vệ sinh tủ cấy cồn 70° theo chiều +Lau vật dụng: đĩa petri, đèn cồn, bút, bật lửa, hũ đựng que cấy,… + Chuẩn bị mẫu cấy, đĩa petri có chứa mơi trường ni cấy hấp khử khuẩn +Hơ que cấy móc đến đỏ đầu giây, để kiểm tra xem qua cấy có nóng khơng ta để que cấy chạm vào nơi khơng có nấm khơng có khuẩn 10 +Hơ đĩa mẫu sau mở ta cào nhẹ lên phần có nấm, đóng nắp lại hơ qua lần để khử khuẩn +Lấy đĩa chứa môi trường hơ để khử khuẩn đĩa, đường thứ tạo sinh khối dày 1/3 đĩa từ ngoài, sau xoay đĩa lần chạm đường thứ qua đường thứ hai thưa tí, đường cuối bắt từ đường thứ hai cấy theo hình zíc zắc + Cuối ta hơ đĩa que cấy qua đèn cồn để khử khuẩn Hình a Hình b Hình 9a,9b Mẫu sau cấy ria Đối với hình 9a thao tác ba đường đường cấy thứ cấy ít, dù khuẩn lạc lên ta lấy sinh khối nhiều khơng lên khuẩn lạc đơn.Vì ta khơng thể xác định khuẩn lạc gì.Ta khắc phục cách cấy đường thứ dày lên tí phải tập luyện thêm Đối với hình 9b cấy thao tác,cấy khuẩn lạc đơn bị nhiễm Ngun nhân nhiễm mơi trường khơng khí xung quanh, lúc ta làm việc đông người nên môi trường bị ảnh hưởng; thao tác thực chưa kĩ nên tạp nhiễm số vi sinh vật xung quanh.Ta khắc phục thao tác kĩ thực gần đèn cồn để hạn chế vi sinh vật xung quanh -Cấy trang môi trường giá đậu(GĐ) +Vệ sinh tủ cấy cồn 70° theo chiều +Lau vật dụng: đĩa petri, đèn cồn, bút, bật lửa, hũ đựng que cấy,… 11 + Chuẩn bị mẫu cấy, đĩa petri có chứa mơi trường nuôi cấy hấp khử khuẩn +Lắc mẫu hơ đầu ống nghiệm qua đèn cồn +Dùng pipet hút lên xuống vài lần sau hút 100 µL +Xoay đĩa đèn cồn để khử khuẩn bề mặt sau bơm mẫu vào hơ nhẹ chỗ vừa mở nắp +Lấy que cấy gạt bớt cồn sau hơ qua lửa đèn cồn +Để tránh que cấy nóng ta tận dụng cách gạt bớt nước nắp đĩa mục đích để nước không nhỏ xuống đĩa +Ta cấy cho thật tay, phải cấy vô vành đĩa cấy cho thật khô Cách để nhận biết mẫu khô ta cảm nhận độ rít +Cuối ta hơ đĩa que cấy qua đèn cồn để khử khuẩn Hình a Hình b Hình 10a,10b Mẫu sau cấy trang Đối với hình 10a đáp ứng hai yêu cầu cấy tay mẫu khô.Tuy nhiên thiếu xót việc cấy vơ vành đĩa nên dẫn đến sai kết quả.Ta khắc phục cách cấy vô vành đĩa Đối với hình 10b cấy chưa tay, cấy chưa vành đĩa đĩa bị nhiễm Nguyên nhân nhiễm mơi trường khơng khí xung quanh, lúc ta làm 12 việc đông người nên môi trường bị ảnh hưởng; thao tác thực chưa kĩ nên tạp nhiễm số vi sinh vật xung quanh.Ta khắc phục cách cấy tay để nhận biết mẫu khô cách cảm nhận độ rít 13 14 15 16 17 18 19 20