BÁO cáo THỰC HÀNH SINH học PHÂN tử

ĐẠI HỌC THỦY LỢI KHOA HÓA VÀ MÔI TRƯỜNG Bộ môn Công nghệ sinh học BÁO CÁO THỰC HÀNH SINH HỌC PHÂN TỬ .

ĐẠI HỌC THỦY LỢI KHOA HĨA VÀ MƠI TRƯỜNG Bộ môn Công nghệ sinh học BÁO CÁO THỰC HÀNH SINH HỌC PHÂN TỬ Họ tên: Lê Thị Thảo Lớp:61SH MSV:1951193501 GVHD: TS.Lê Thị Ngọc Quỳnh Hà Nội, tháng 9, năm 2022 MỤC LỤC: Bài 1: Làm quen, hiểu nguyên lý thí nghiệm sinh học phân tử an tồn phịng thí nghiệm I-Mở đầu -Mục đích: Giúp sinh viên làm quen, hiểu nguyên lý thí nghiệm sinh học phân tử, cách sử dụng pipette an toàn phịng thí nghiệm II-Ngun liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị - Dụng cụ thiết bị + Máy khuấy từ + Cân phân tích + Máy đo pH + Nồi hấp khử trùng + Box cấy + Bể ổn nhiệt + Máy lắc ổn nhiệt + Máy spin down + Máy ly tâm + Máy PCR + Bể điện di + Máy soi gel + Bộ pipet cỡ III-Cách tiến hành -Tìm hiểu dụng cụ thiết bị cần thiết để thực hành sinh học phân tử *Thực hành sử dụng pipette: Cắt mẫu giấy parafilm sau sử dụng pipette hút lượng nhỏ dung dịch, tập nhả giấy parafilm lại hút vào nguyên lượng sử dụng thành thạo pipette Với pipette cỡ 100-1000ul sử dụng ống eppendorft để thực hành thay parafilm IV-Kết -Sinh viên thông thạo sử dụng pipette, làm quen với thiết bị thực hành sinh học phân tử -Hiểu ngun tắc an tồn phịng thí nghiệm V-Kết luận -Qua thực hành sinh viên làm quen, hiểu nguyên lý thí nghiệm sinh học phân tử an tồn phịng thí nghiệm -Tiếp thu thêm số kinh nghiệm làm việc phịng thí nghiệm VI-Tài liệu tham khảo -TS.Lê Thị Ngọc Quỳnh -Đề cương mơn học Thí nghiệm Sinh học phân tử (2022) - - Bài 2: Pha môi trường chuẩn bị dụng cụ I-Mở đầu - Mục đích: Sinh viên biết cách pha môi trường để chuẩn bị nuôi cấy vi sinh vật cách cấy ria đường zigzag II-Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị Nguyên liệu hóa chất + Peptone 4g + Cao nấm men 2g + NaCl 2g + Agar + Kháng sinh Dụng cụ thiết bị + Đĩa petri + Đầu tips cỡ + Ống falcol cỡ 15ml 50ml + Ống eppendorft 1.5ml + Bình tâm giác cỡ nhỏ + Ống penicillin Hình Chuẩn bị dụng cụ khử trùng III-Cách tiến hành Chuẩn bị môi trường LB môi trường LB có chứa kháng sinh cho chọn lọc Pha mơi trường LB Thành phần 400ml môi trường LB gồm có: + Peptone 4g + Cao nấm men 2g + NaCl 2g Với môi trường LB agar bổ sung thêm 3g agar vào 200ml môi trường trước khử trùng Với LB có bổ sung kháng sinh sau khử trùng, để mơi trường xuống khoảng 60oC tiến hành bổ sung kháng sinh theo yêu cầu 2 Cấy ria đường zigzag vi khuẩn E.Coli chứa vector tái tổ hợp mơi trường LB có chứa kháng sinh Kanamycin (50mg/l) -Vô trùng buồng nuôi cấy, chuyển dụng cụ gồm mơi trường LB lỏng, ống Fancol, đầu tip 20µl, que cấy, đèn cồn,… vào box cấy, bật đèn tím 15 phút để vô khuẩn buồng cấy sinh học -Vệ sinh tay cồn 70oC, đĩa petri có mơi trường đặc LB có chứa kanamycin (50mg/l) -Dùng que cấy (hoặc tăm cấy vô khuẩn) lấy E.Coli từ ống gốc lưu trữ tủ -30oC thực cấy ria đường zigzag đĩa môi trường thạch -Nắp đĩa Falcon, ghi tên mẫu tên nhóm ngày thực đĩa -Chuyển ống nuôi cấy vào máy nuôi cấy, bật chế độ 37oC 15 IV-Kết -Đã khử trùng đầy đủ môi trường, dụng cụ cần thiết -Đổ thành cơng đĩa mơi trường đặc LB có chứa kanamycin (50mg/l) -Mỗi sinh viên thực cấy ria đường zigzag vi khuẩn E.Coli chứa vector tái tổ hợp mơi trường LB có chứa kháng sinh Kanamycin (50mg/l) -Thực ghi tên mẫu, tên người thực hiện, ngày thực đầy đủ đĩa đem bảo quản Hình Mơi trường LBagar khử trùng Hình Đĩa petri cấy E.Coli sau tuần V-Kết luận -Qua thực hành sinh viên biết cách pha môi trường chuẩn bị dụng cụ để chuẩn bị ni cấy vi sinh vật -Ngồi ra, sinh viên biết thực hành cấy ria đường zigzag môi trường đĩa thạch -Tiếp thu thêm số kinh nghiệm làm việc phịng thí nghiệm *Thảo luận -Thao tác đổ môi trường cấy vi sinh vật phải thực box cấy -Trước sử dụng, lau box cấy cồn 70o, bật UV 20 phút -Cho môi trường khử trùng vào box cấy bật UV đĩa cấy vi sinh vật khơng cho vào box cấy bật UV UV có tác dụng diệt khuẩn nên cho mơi trường vào đèn UV ngăn chặn tối đa việc mơi trường nhiễm khuẩn, có khả ngăn gây đột biến khuẩn; cho đĩa cấy vi sinh vật vào giết chết vi sinh vật cần phân lập VI-Tài liệu tham khảo -TS.Lê Thị Ngọc Quỳnh -Đề cương mơn học Thí nghiệm Sinh học phân tử (2022) - - Bài 3: Nuôi cấy vi khuẩn cho tách chiết plasmid I-Mở đầu -Mục đích: • Giúp sinh viên tự xây dựng kế hoạch thí nghiệm mình, thiết kế thí nghiệm, trình bày kế hoạch thí nghiệm sở Khung • thực hành giáo viên hướng dẫn Sinh viên biết cách chuẩn bị pha hóa chất nồng độ, pH để • tiến hành thí nghiệm Sinh viên nhớ vai trị hóa chất sử dụng tách chiết để có • thể áp dụng vào qui trình khác Sinh viên nắm nguyên lý nuôi cấy vi sinh vật phịng thí nghiệm, tránh tạp nhiễm -Ý nghĩa: • Qua thực hành sinh viên chủ động thiết kế, lập kế hoạch cho thí nghiệm mình, biết cách ni cấy vi khuẩn cho mở đầu tách chiết DNA II-Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị 1.Nguyên liệu ST Tên Đơn vị T Chủng E.Coli tái tổ hợp mang plasmid Chủng 2.Hóa chất ST T Tên Cao nấm men Pepton NaCl Ampicillin Cồn đốt Cồn sát khuẩn 3.Dụng cụ ST Tên Đơn vị Số lượng g g g mg ml ml 5 Đơn vị Số lượng Ghi Giáo viên cung cấp Đơn vị Quy Ghi hóa chất hóa chất chuẩn chuẩn g g g mg ml ml Số lượng Ghi T Pipet 20µl Pipet 1000µl Bình tam giác Đèn cồn Que cấy Ống Fancol 15ml Ống Fancol 50ml Đầu tip 20µl Đầu tip 1ml 10 Găng tay 4.Thiết bị ST T Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Đôi 2 1 2 Tên Đơn vị Số lượng Máy quang phổ Cân phân tích Nồi hấp tiệt trùng Box cấy an toàn cấp 1-2 Tủ lắc điều nhiệt Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc 1 1 Ghi III-Cách tiến hành 1.Chuẩn bị dụng cụ Bình tam giác, que cấy, ống Fancol, môi trường khử trùng 121oC, 1atm 30 phút 2.Chuẩn bị hóa chất -Pha môi trường LB: 1% NaCl, 1% tryptone, 0,5% yeast extract Khử trùng môi trường 121oC, 1atm 30 phút Thao tác thực thí nghiệm -Vơ trùng buồng nuôi cấy, chuyển dụng cụ gồm môi trường LB lỏng, ống Fancol, đầu tip 20µl, que cấy, đèn cồn, vào box cấy, bật đèn tím 15 phút để vơ khuẩn buồng cấy sinh học -Vệ sinh tay cồn 70oC, chuyển 5ml mơi trường lỏng LB có chứa kanamycin (50mg/l) sang ống fancol 15ml -Dùng que cấy ( tăm cấy vô khuẩn) lấy khuẩn lạc E.Coli chuyển sang ống Fancol có chứa mơi trường -Nắp kín ống fancol, ghi tên ống -Chuyển ống nuôi cấy vào máy nuôi cấy, bật chế độ lắc 150-200 vòng/phút, 37oC 15 IV-Kết -Mỗi sinh viên cấy ống fancol môi trường LB lỏng chứa khuẩn lạc E.Coli từ đĩa thạch petri -Đưa ống fancol nuôi cấy vào máy nuôi cấy, bật chế độ lắc 150-200 vòng/phút, 37oC 15 thu ống fancol chứa khuẩn E.Coli phát triển thành quần thể Hình Ống fancol đối hứng ống fancol nuôi cấy khuẩn lạc E.coli V-Kết luận -Qua thực hành, sinh viên nắm nguyên lý nuôi cấy vi sinh vật phịng thí nghiệm, tránh tạp nhiễm -Biết cách ni cấy vi khuẩn cho mục đích tách chiết DNA -Tiếp thu thêm số kinh nghiệm làm việc phịng thí nghiệm *Thảo luận: -Trong q trình ni cấy khuẩn E.Coli mơi trường LB lỏng, bước chọn khuẩn lạc từ đĩa petri chuyển sang ống fancol cần chọn khuẩn lạc riêng rẽ màu trắng trong( đĩa cấy xuất loại khuẩn: màu vàng màu trắng trong) để đảm bảo khuẩn lạc từ dịng tế bào Ngồi ra, không chọn khuẩn lạc đường cấy dày đường có nhiều dòng tế bào chồng lên VI-Tài liệu tham khảo -TS.Lê Thị Ngọc Quỳnh -Đề cương mơn học Thí nghiệm Sinh học phân tử (2022) - - Bài 4: Tách chiết ADN plasmid xác định nồng độ ADN I-Mở đầu -Mục đích: Giúp sinh viên biết cách chuẩn bị dung dịch hóa chất cho sinh học phân tử, hiểu nguyên lý thực hành tách chiết ADN plasmid E coli tái tổ hợp - Ý nghĩa: Qua thực hành sinh viên chủ động tách chiết mẫu ADN plasmid từ vi khuẩn gram âm II-Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị Nguyên liệu ST T Tên Đơn vị Chủng E.Coli mang plasmid nuôi lắc 200v/p qua đêm 10ml môi trường LB lỏng 37oC Hóa chất STT Tên Đơn vị Số lượng Số lượng Chủng Ghi g 0.2422 Pha Tris-HCl 2M, pH8 Pha Tris-HCl 2M, pH8 g 0.2422 HCl ml 0.9 ml 0.9 ml g 0.5 (C10H16N2O8) Glucose ml g 0.36 NaOH ml g 0.08 Sodium dodecyl sulfate (SDS) ml CH3COOK ml g 0.5 ml ml (potassium acetate) Acetic acid 100% Giáo viên cung cấp Đơn vị Quy hóa chất hóa chất chuẩn chuẩn Tris-base EDTA Ghi g 0.02 Chloroform ml ml 10 Isoamylalcohol ml ml 10 Ethanol 96% tinh khiết ml ml Dụng cụ ST Tên T Pipet 20µl Pipet 1000µl Eppendoft 15mL Khay đá Ống Fancol 15mL Ống Fancol 50mL Đầu tip 20µL Đầu tip 1mL Găng tay Thiết bị Đơn vị Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Đôi Số lượng Ghi 2 10 2 STT Tên Đơn vị Số lượng Ghi Máy ly tâm Eppendorf Chiếc Tủ hút mùi Chiếc Tủ lạnh trữ mẫu Chiếc IV-Cách tiến hành Chuẩn bị dụng cụ Ông Fancol, đầu tip, Eppendorf khử trùng 121oC, atm 30 phút, sấy khô Nước cất lần nước deion khử trùng, giữ nhiệt độ phòng Chuẩn bị hóa chất -Dung dịch I (50 mM Tris-HCl, pH 8; 10 mM EDTA, pH 8; 50 mM glucose): Hịa 50 µl Tris -HCl 2M, pH8; 20 µl EDTA 1M, pH8; 100 µl glucose 1M và 1830 µl nước cất vô trùng, lắc đều, để đá giữ 4oC -Dung dịch II (0,2 M NaOH; 1% SDS) pha trước sử dụng: Trộn 2000 µl SDS 2%, 800 µl NaOH 1M, 1200 µl nước cất vô trùng, lắc đều, để nhiệt độ thường -Dung dịch III (3 M potassium acetate; 11,5% acetic acid): Hòa 600 µl potassium acetate 5M, 285 µl nước, 115 µl acetic acid đậm đặc, lắc đều, để đá giữ 4oC RNAse 10 mg/mL: Hòa mg RNAse vào 0,1 mL nước, lắc Thao tác thực thí nghiệm -Bước 1: Cấy chuyển khuẩn lạc đơn vi khuẩn vào ml mơi trường LB có bổ sung kháng sinh nuôi lắc qua đêm nhiệt độ 37oC -Bước 2: Chuyển dịch nuôi cấy vào ống effendorf 1.5 ml ly tâm 5000 vòng/phút 10 phút nhiệt độ phòng Loại bỏ dịch (Chuyển 2ml dịch nuôi vào ống effendoft 1,5ml qua lần lần 1ml: chuyển 1ml dịch nuôi vào ống effendoft 1,5ml đem ly tâm loại dịch tiếp tục chuyển 1ml dịch nuôi vào ống effendoft đem lý tâm lần 2) -Bước 3: Hòa tan tế bào 200 µl dung dịch I, voltex mạnh để tế bào trộn dung dịch Để nhiệt độ phòng phút Dung dịch I: (phá vỡ màng tế bào): GTE solution: 50 mM glucose, 25 mM Tris-base, 10 mM EDTA pH 8,0, khử trùng bảo quản 4oC -Bước 4: Bổ sung 200 µl dung dịch II, lắc nhanh vài lần, ủ hỗn hợp đá phút (ủ lạnh hỗn hợp đá để giảm thiểu tối đa kha hoạt hóa enzyme nội sinh tế bào) Dung dịch II: (làm biến tính DNA nhiễm sắc thể) : 0.2 N NaOH, 1% SDS -Bước 5: Bổ sung 300 µl dung dịch III để lạnh, voltex nhẹ (dung pipette đảo lắc tay), ủ hỗn hợp đá 10 phút Dung dịch III: (tủa hỗn hợp SDS-protein, RNA DNA nhiễm sắc thể) 5M CH3COOK, M CH3COOH Bảo quản nhiệt độ phòng - Bước 6: Ly tâm 14000 vòng/phút, 10 phút oC -Bước 7: Hút phần dịch sang ống effendorf mới, bổ sung 0,5 ml isopropanol ethanol 100% lạnh (để tủa DNA), voltex -Bước 8: Ly tâm 15000 vòng/phút phút 4oC, loại bỏ dịch (sẽ thấy DNA màu trắng đục lắng xuống =>thu tủa) -Bước 9: Rửa tủa cách thêm từ từ 0.5 ml ethanol 70%, chắt bỏ cẩn thận, ko làm tủa -Bước 10: Làm khô tủa nhiệt độ phòng 10 – 15 phút (cho vào box cấy mở quạt box cấy bên ngồi) -Bước 11: Nhẹ nhàng hịa tan tủa 100 µl đệm TE 1X H2O khử ion, bổ sung thêm RNase đến nồng độ cuối 20 µg/ml ủ 37 oC 30’ Sau đó, plasmid bảo quản -20oC Xác định nồng độ ADN -Bước 1: Rửa cuvet nước, lần cồn, lau giấy -Bước 2: Thực trình blank chất chuẩn (nước deion), đo khoảng lần sau chất chuẩn để kiểm tra lại kết - Bước 3: Đo mẫu plasmid vừa tách (đo tỷ lệ DNA/protein) Chú ý: cuvet có mặt cho ánh sáng qua nên không chạm tay vào vào mặt - Bước 4: Ghi lại kết A260, A280, A260/A280 Trong độ tinh thể qua giá trị A260/A280 -Cơng thức tính nồng độ OD: [DNA] = 50 x số lần pha loãng x số đọc A260 (đơn vị: µg/ml) 50 lượng DNA có máy đo OD (Tùy thiết bị sử dụng) IV-Kết Hình Kết đo OD -Kết sau đo OD thể bảng sau: Nồng độ DNA (µg/ml) 430,9 OD bước sóng A260 1,185 OD bước sóng A260/A280 2,08 OD bước sóng A260/A230 1,88 -Nếu tỷ lệ A260/A280 nằm khoảng 1,8-2 DNA xem tinh Tỷ lệ thấp 1,8 chứng tỏ mẫu có lẫn tạp chất Đối với dung dịch DNA sợi đôi, tỷ lệ lớn chứng tỏ DNA có chứa mẫu bị biến tính hay bị phân hủy -Từ kết bảng ta thấy OD bước sóng A260/A280 2,08 Kết khơng nhỏ 1,8 không lớn so với khoảng tỷ lệ 1,8-2 nên DNA plasmid tách được xem tinh V-Kết luận -Qua thực hành, sinh viên biết cách chuẩn bị dung dịch hóa chất để thực hành tách chiết DNA plasmid -Hiểu nguyên lý thực hành tách chiết DNA plasmid E.coli tái tổ hợp -Tiếp thu thêm số kinh nghiệm làm việc phịng thí nghiệm *Thảo luận -Trong q trình tách chiết DNA plasmid, cần có bước bổ sung ethanol 100% 70%, bước cần thiết đẻ loại bỏ thành phần cịn sót lại màng protein, polysaccharide hay chí chất màu nhằm đạt hiệu suất tách chiết tinh DNA cao Muối cịn sót lại làm giảm q trình rửa giải acid nucleic đưa đến kết đọc OD bước sóng A230 cao tỷ lệ A260/230 thấp nên cần thực bước rửa DNA ethanol tới lần -Ngoài ra, sử dụng ethanol 100% lạnh để thu nhiều DNA tủa mà không bị nhiễm muối, sau cần rửa tủa với ethanol 70% để loại bỏ muối (muối dư hòa tan % nước ethanol 70%) -DNA plasmid sau tủa với ethanol 100% sau ly tâm có màu trắng, sau làm khơ khó quan sát tan hoàn toàn TE nước deion -Bước làm khơ tủa nhằm loại ethanol cịn sót lại ethanol, nucleic acid khơng thể bị hydrate hóa đầy đủ dẫn tới hiệu suất tách chiết DNA thấp  Ý nghĩa hóa chất tách chiết DNA plasmid:  Các muối chaotropic nồng độ cao làm tính bền vững liên kết hydro, lực Vander Waals tương tác kỵ nước Do đặc tính này, chất chaotropic có số tác dụng sau: ly giải màng tế bào; biến tính protein, DNA đại phân tử khác; bất hoạt nuclease; thúc đẩy trình gắn acid nucleic vào silic  Một số chất tẩy rửa enzyme sử dụng nhằm tăng hiệu hịa tan protein q trình ly giải  Ethanol có tác dụng rửa tủa  Với ADN, đặc tính ổn định mơi trường pH kiềm nhẹ tan nhanh đệm nên đệm Tris HCl 10mM pH nằm khoảng 8-9 thường sử dụng làm đệm rửa giải VI-Tài liệu tham khảo -TS.Lê Thị Ngọc Quỳnh -Đề cương mơn học Thí nghiệm Sinh học phân tử (2022) - - Bài 5: Điện di kiểm tra chất lượng adn plasmid I- Mở đầu -Mục đích: Giúp sinh viên hiểu nguyên lý điện di, phương pháp chọn nồng độ gel thích hợp, cách điện di quan sát, phân tích kết sau điện di ADN -Ý nghĩa: Qua thực hành sinh viên chủ động lựa chọn gel thích hợp cho phân tích ADN nói chung II- Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị Nguyên liệu ST T Tên DNA hệ gen DNAplasmid tách chiết 50(ng/µl) Hóa chất STT Tên Đơn vị Số lượng Đơn vị Số lượng Ghi Mẫu Giáo viên cung cấp Đơn vị Quy hóa chất hóa chất chuẩn chuẩn Tris base g 24.22 g 24.22 Ghi Cho 100ml TAE 50x Axit acetic ml 6.05 g Cho 100ml TAE 6.05 50x C10H14N2Na2O8 (muối EDTA disodium) g Agarose mg mg Ethidium bromide 10 mg/ml ml ml Đệm tra mẫu (loading dye 6x) ml 0,3 ml 0,3 DNA marker Kb ml 10 ml 10 Nước cất lần ml 200 ml 200 1.86 g Cho 100ml TAE 1.86 50x 3.Dụng cụ ST T 4.Thiết bị ST T Tên Đơn vị Số lượng Pipet 20µl Eppendoft 0,5ml Đầu tip 20µl Găng tay Hộp lồng nhựa Mi đảo có lỗ Chiếc Chiếc Chiếc Đôi Chiếc Chiếc 2 1 Tên Đơn vị Số lượng Bể điện di Máy soi gel DNA Hệ thống chụp ảnh mẫu Lò vi sóng Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc 1 1 Ghi Ghi III-Cách tiến hành Chuẩn bị dụng cụ Đầu tip, Eppendorf khử trùng 121oC, atm 30 phút, sấy khô Nước cất lần nước deion khử trùng, giữ nhiệt độ phòng Bể điện di, khay điện di rửa sạch, để khơ tự nhiên Chuẩn bị hóa chất -Đệm TBE: Giáo viên chuẩn bị -Pha gel agarose 0,8%: Cân 0,2 g agarose, hòa vào 20 mL TBE, đun sơi nhẹ lị vi sóng Lắc để agarose tan hồn tồn, sau cho vào lị vi sóng đun nhẹ, để nguội tự nhiên đến 50oC -Pha dung dịch ethidium bromide để nhuộm gel: Giáo viên chuẩn bị Thao tác thực thí nghiệm -Lắp đặt lược vào khn đổ gel -Đổ gel agarose 0,8% có nhiệt độ khoảng 50oC vào khn có đặt sẵn lược với độ dày thích hợp Để thạch đơng ổn định hoàn toàn -Nhẹ nhàng gỡ lược gel cho giếng gọn, sạch, sau bỏ gel thừa vướng phía trên, phía khay -Chuyển khay gel sang bể điện di Từ từ đổ ngập mặt gel đệm TBE, tránh không để gel bị động trôi khỏi khay -Trộn mẫu DNA: Dùng pipet hút mL nước chuyển vào Eppendorf, sau bổ sung mL mẫu DNA hệ gen mL DNA plasmid có nồng độ khoảng 50 mg/mL vào mẫu Bổ sung thêm mL đệm tra mẫu 6x, đảo đều, bỏ đầu tip -Tra mẫu: Hút toàn DNA Eppendoft, nhẹ nhàng tra vào giếng điện di Tra mL DNA chuẩn vào giếng đầu (Giếng đầu Ladder- Generuler kb dna ladder, 3gieengs sau mẫu DNA nhóm) -Chạy điện di dòng điện chiều với hiệu điện 100V khoảng 30 phút, quan sát vạch mầu chạy 2/3 chiều dài gel dừng điện di -Nhẹ nhàng nhấc khay gel khỏi bể điện di, dùng tay đẩy nhẹ gel để gel trượt khỏi khay điện di xuống khay nhuộm gel cho không chạm khay vào gel nhuộm -Gel nhuộm phút, sau dùng mi đảo có lỗ nhẹ nhàng lấy gel chuyển lên máy soi gel, soi gel đèn tử ngoại có kích thước lọc cho bước sóng 254nm -Chụp ảnh gel phân tích kết IV- Kết Hình Hình ảnh soi gel điện di tia UV -Từ hình ảnh kết quan sát ta thấy giếng đầu tiên-tra marker, thang rõ nét với 14 băng tách rời chứng tỏ đổ gel điện di tốt điện di thời gian -Tuy nhiên, giếng đổ mẫu nhóm khơng tạo thành thang rõ nét với băng tách rời mà tạo thành vệt dài bị đứt gãy plasmid -Vì khơng quan sát băng rõ ràng nên dựa vào marker để đốn kích thước V-Kết luận -Qua thực hành, sinh viên hiểu nguyên lý điện di, phương pháp lựa chọn nồng độ gel thích hợp, cách điện di quan sát, phân tích kết sau điện di DNA -Tiếp thu thêm số kinh nghiệm làm việc phịng thí nghiệm *Thảo luận -Sử dụng đệm tra mẫu Gel Loading Dye, Blue (6X) chất đánh dấu có chứa glycerol để kéo mẫu DNA xuống đáy giếng điện di, tránh khuếch tán bên -Dung dịch nhuộm ethidium bromide thuốc nhuộm DNA/RNA phổ biến nhất, có khả tự chèn vào base nito sợi xoắn kép DNA; phát sáng tia UV bị phân hủy tác động ánh sáng nên tiến hành nhuộm cần cho vào thùng xốp kín tránh ánh sáng Ngồi ra, chất độc gây đột biến mạnh nên cần cận thận đeo găng tay thực hành -Khi đổ gel vào khuôn cần cẩn thận tránh bụi chạy điện di bụi giữ lại DNA -Trong thực hành sử dụng đệm TBE với mục đích dẫn điện ổn định pH Có loại đệm TAE TBE TBE phù hợp để chạy DNA có kích thước nhỏ, cịn TAE phù hợp để chạy DNA có kích thước lớn VI-Tài liệu tham khảo -TS.Lê Thị Ngọc Quỳnh -Đề cương mơn học Thí nghiệm Sinh học phân tử (2022) - - Hà Nội, ngày 3, tháng 10, năm 2022 Sinh viên thực báo cáo Lê Thị Thảo ... để thực hành thay parafilm IV-Kết -Sinh viên thơng thạo sử dụng pipette, làm quen với thiết bị thực hành sinh học phân tử -Hiểu nguyên tắc an tồn phịng thí nghiệm V-Kết luận -Qua thực hành sinh. .. thiết để thực hành sinh học phân tử *Thực hành sử dụng pipette: Cắt mẫu giấy parafilm sau sử dụng pipette hút lượng nhỏ dung dịch, tập nhả giấy parafilm lại hút vào nguyên lượng sử dụng thành thạo... quen, hiểu nguyên lý thí nghiệm sinh học phân tử an tồn phịng thí nghiệm I-Mở đầu -Mục đích: Giúp sinh viên làm quen, hiểu nguyên lý thí nghiệm sinh học phân tử, cách sử dụng pipette an tồn phịng