Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)

Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)Báo cáo thực hành sinh hóa học ứng dụng (NLU)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC  BÁO CÁO THÍ NGHIỆM SINH HĨA HỌC ỨNG DỤNG Nhóm – Lớp: DH21SHB Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS Trần Thị Lệ Minh Sinh viên thực hiện: Nguyễn Lan Anh - 21126009 Nguyễn Thị Lan Anh - 21126014 Phạm Thị Mỹ Hạnh - 21126054 Lâm Ngọc Lan - 21126092 Đỗ Ngọc Bảo Chân - 21126287 Lê Trần Đại Hiệp – 21126341 TP.HCM, năm 2022 MỤC LỤC BẢNG PHÂN CÔNG CÔNG VIỆC BÀI 2: TÍNH CHẤT - ĐỊNH TÍNH – ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN I Thí nghiệm 1: Các phản ứng kết tủa thuận nghịch protein 1.1 Phương pháp kết tủa dung môi hữu II Thí nghiệm 2: Các phản ứng kết tủa khơng thuận nghịch (biến tính) protein 2.1 Phương pháp kết tủa nhiệt độ cao: III Thí nghiệm 3: Các phản ứng màu dùng để định tính protein 3.1 Phản ứng biure đặc trưng cho liên kết peptid (-CO-NH) phân tử protein 3.2 Phản ứng Xantoprotein với acid amin vòng IV Thí nghiệm 4: Phản ứng LOWRY 4.1 Xác định Albumin chuẩn 4.2 Xác định Albumin lòng trắng trứng 11 BÀI 3: XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG 12 I Thí nghiệm 1: Khảo sát tính khử monosaccharid 12 BÀI 4: QUY TRÌNH LÀM XÀ PHỊNG TỪ PHƯƠNG PHÁP NGUỘI 13 BẢNG PHÂN CÔNG CÔNG VIỆC Tên MSSV 1.1 Nguyễn - Làm báo Lan Anh cáo 21126009 - Làm ống số 2.1 Thí nghiệm 3.1 3.2 4.1 4.2 - Làm báo cáo - Pha Phenylal anin 0.02% - Làm ống số - Pha loãng ống số - Làm báo cáo - Làm phần tính tốn - Làm báo cáo - Pha dung dịch NaCl bão hịa - Chụp hình - Pha sữa - Pha Acid acetic 1% - Chuẩn bị dụng cụ - Làm báo cáo - Làm ống - Làm báo cáo - Pha sữa - Lấy HNO3 đặc - Làm ống - Pha Albumin 1% - Làm ống số Phạm Thị - Làm ống Mỹ Hạnh số 21126054 - Pha Acid acetic 10% - Làm ống số - Chuẩn bị dụng cụ - Chụp hình - Quan sát - Làm ống sơ - Lấy lòng trắng trứng Lâm - Chuẩn bị Ngọc Lan dụng cụ 21126092 - Pha NaOH 10% - Làm ống số - Chụp hình - Quan sát - Pha Gelatin 1% - Chụp hình - Quan sát - Pha NaOH 20% - Làm ống số - Làm ống số - Pha Glycine: 0.02% - Làm ống lòng trắng trứng Đỗ Ngọc - Pha dung Bảo Chân dịch NaCl 21126287 bão hòa - Làm ống số - Quan sát - Pha NaOH 10% - Chuẩn bị dụng cụ - Đun ống nghiệm - Pha dung dịch A - Làm ống số - Chụp hình - Quan sát Lê Trần - Pha dung Đại Hiệp dịch 21126341 Albumin (Nhóm trưởng) 1%: - Làm ống số - Pha Sữa - Làm ống số Nguyễn - Chụp Thị Lan hình Anh - Quan sát 21126014 - Chuẩn bị dụng cụ - Đo OD - Đo OD - Chuẩn bị dụng cụ Thí nghiệm - Làm báo cáo - Làm ống số Thí nghiệm - Làm báo cáo - Chụp hình - Quan sát - Pha dung - Chuẩn dịch bị dụng Glucose cụ 1% - Trang - Làm ống trí sản số phẩm - Pha dung - Cân dịch 18,4g Maltose xút với 1% 36,8g - Làm H20 dung dịch 100g dầu A dừa - Pha dung - Pha dịch dung Saccharose dịch 1% NaOH - Chuẩn bị - Đổ dụng cụ dung dịch vào khuôn - Đun - Cân ống 18,4g nghiệm xút với - Làm ống 36,8g H20 100g dầu dừa - Chụp - Khuấy hình hỗn hợp - Quan sát BÀI 2: TÍNH CHẤT - ĐỊNH TÍNH – ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN I Thí nghiệm 1: Các phản ứng kết tủa thuận nghịch protein 1.1 Phương pháp kết tủa dung môi hữu - Nguyên liệu: Dung dịch albumin 1% (pha nước cất), ethanol 96%, aceton, NaCl bão hòa - Cách tiến hành: Lấy hai ống nghiệm, cho vào ống nghiệm ml dung dịch albumin 1%, làm lạnh nước đá Thêm vào ống 1: 2ml etanol 96% lạnh, ống 2: 2ml aceton lạnh, quan sát Cho thêm vào hai ống nghiệm vài giọt dung dịch NaCl bão hòa, kết tủa lắng xuống đáy ống, gạn bỏ lớp dung môi, thêm nước vào, lắc đều, kết tủa tan - Pha đồ dùng: + Pha dung dịch NaCl bão hòa từ dd NaCl 0.9%: 100ml H2O 0.9g NaCl + Pha dung dịch Albumin 1%: 100ml H2O 1g Albumin Quan sát - Ống nghiệm 1: Dung dịch ống nghiệm thêm etanol 96% lạnh bắt đầu có màu đục không tạo kết tủa Nhưng thêm Nacl bão hịa xuất kết tủa trắng - Ống nghệm 2: Dung dịch ống nghiệm thêm aceton lạnh vào có màu đục đục so với ống xuất kết tủa nhiều Từ trái sang phải theo thứ tự 2-1 Giải thích - Các phân tử protein bị nước bền dung dịch ethanol aceton chất háo nước Chúng lấy nước protein - Khi cho Nacl bão hòa, chất điện giải mạnh, tạo ion Na+ Cl- Các ion trung hòa điện tử tiểu phân tử protein tạo kết tủa - Sở dĩ ống nghiệm có kết tủa nhiều aceton háo nước ethanol Nó lấy lớp nước protein cách dễ dàng nên tạo nhiều kết tủa Kết luận - Điều kiện tạo kết tủa protein phải trung tính hay có tính axit yếu tốt phải có chất điện giải mạnh II Thí nghiệm 2: Các phản ứng kết tủa khơng thuận nghịch (biến tính) protein 2.1 Phương pháp kết tủa nhiệt độ cao: - Nguyên liệu: Sữa tươi pha loãng lần, acid acetic 1% 10%, NaOH 10%, NaCl bão hoà - Cách tiến hành: Cho vào ống nghiệm ống ml dd sữa pha loãng + Ống 1: Khơng thêm hố chất Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch + Ống 2: Thêm giọt acid acetic 1% Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch + Ống 3: Thêm 0,5ml dung dịch acid acetic 10% Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch + Ống 4: Thêm 0,5 ml dd NaOH 10% Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch + Ống 5: Thêm 0,5ml dung dịch acid acetic 10% 3-4 giọt NaCl bão hòa Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch - Pha đồ dùng: + Sữa pha loãng lần: 6ml sữa tươi 24ml H2O + Acid acetic 1%: 10ml H2O 0.1g CH3COOH + Acid acetic 10%: 10ml H2O 1g CH3COOH + NaOH 10%: 10ml H2O 1g NaOH + NaCl bão hịa pha từ thí nghiệm 1.1 Quan sát - Ống nghiệm 1: Không có tượng xảy đun lửa đèn cồn - Ống nghiệm 2: Có xuất kết tủa nhiên nhanh chóng tan hết - Ống nghiệm 3: Có tượng kết tủa bắn sữa nhiệt độ lên cao - Ống nghiệm 4: Khơng kết tủa có đổi màu - Ống nghiệm 5: Có xuất kết tủa nhanh ống nghiệm thứ Từ trái sang phải thứ tự 5–1 Giải thích - Ống nghiệm 1: Dung dịch có màu trắng khơng kết tủa tiểu phân tử protein bị lớp nước bao bên ngồi cịn điện tích - Ống nghiệm 2: Có kết tủa đục cho giọt axit acetic 1% tạo nên môi trường axit yếu Nhóm -COO- bị ức chế phân ly nên tiểu phân tử protein điện tích pH mơi trường đạt gần tới điểm đẳng điện - Ống nghiệm 3: Khi cho 0,5ml dung dịch axit acetic 10% tạo nên mơi trường axit mạnh Do tính háo nước axit mơi trường axit mạnh có nhiều ion H+ nên protein bị khử nước Các nhóm -COO- trung hịa nên nhóm NH3 + khơng trung hịa Phân tử protein điện tích dương Do xuất hiện tượng kết tủa nhanh chóng tan hết - Ống nghiệm 4: Khi thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% gây môi trường kiềm Nhóm NH3+ trung hịa Vì ta đun sôi điện tử âm tiểu phân tử protein cịn nên protein mang điện tích âm tạo kết tủa - Ống nghiệm 5: Khi cho dung dịch acid acetic 10% 3-4 giọt NaCl bão hịa NaCl bão hịa tạo nên mơi trường trung hịa điện đồng thời NaCl chất điện ly mạnh nên tạo phản ứng nhanh Kết luận - Phần lớn protein bị đơng tụ đun nóng mơi trường trung tính hay axit yếu Cịn mơi trường kiềm mạnh hay axit mạnh, protein cịn mang điện tích khơng thể tạo kết tủa Đồng thời protein tạo kết tủa pH môi trường trạng thái đạt đẳng điện Không nồng độ muối độ pH môi trường đóng vai trị vơ quan trọng việc tạo nên kết tủa protein III Thí nghiệm 3: Các phản ứng màu dùng để định tính protein 3.1 Phản ứng biure đặc trưng cho liên kết peptid (-CO-NH) phân tử protein - Nguyên liệu: Dung dịch sữa pha loãng 10 lần, ure tinh thể, NaOH 10%, CuSO4 - Cách tiến hành: + Phản ứng với biure: Cho vào ống nghiệm 1, tinh thể ure Đun ure nóng chảy, đến bắt đầu cứng lại ngừng lại Để ống nguội, thêm vào 2ml dung dịch NaOH 10% lắc tan Thêm vài giọt CuSO4 1% Quan sát màu + Phản ứng với protein: Cho vào ống nghiệm 2, ml dung dịch sữa pha loãng, ml NaOH 10% – giọt dung dịch CuSO4 1% Lắc kỹ, quan sát màu - Pha đồ dùng: + Sữa pha loãng 10 lần: 0.5ml sữa tươi 4.5ml H2O + NaOH 10%: 10ml H2O 1g NaOH Quan sát - Ống nghiệm 1: Dung dịch ống có màu tím hồng - Ống nghiệm 2: Dung dịch có màu tím xanh Theo thứ tự từ phải sang trái 1-2 Giải thích - Ống 1: Khi đun nóng, hai phân tử ure kết hợp lại với tạo thành biure, làm xuất liên kết peptit: -CO-NH- Trong mơi trường kiềm biure kết hợp với CuSO4 cho phức hợp muối Cu có màu tím hồng - Ống 2: Trong dung dịch protein sữa có liên kết peptit: -CO-NH- nên cho phản ứng biure tạo phức hợp muối Cu với polypeptit có màu tím xanh Kết luận - Phản ứng biure phản ứng màu đặc trưng để phát liên kết peptit Và độ tím phản ứng khác tùy theo độ dài mạch polypeptit lượng muối CuSO4 3.2 Phản ứng Xantoprotein với acid amin vòng - Nguyên liệu: sữa pha loãng lần, albumin 1%, gelatin 1%, NaOH 20%, HNO3 đặc - Cách tiến hành: Lấy ống nghiệm + Ống nghiệm 1: ml sữa pha loãng + Ống nghiệm 2: ml dung dịch gelatin 1% + Ống nghiệm 3: 2ml dung dịch albumin 1% Thêm vào ống ml HNO3 đậm đặc Đun nhẹ hỗn hợp, màu vàng xuất cuối trầm tan hết dung dịch màu vàng Để nguội, thêm giọt dung dịch NaOH 20%, màu trở nên vàng cam - Pha đồ dùng: + Sữa pha loãng lần: 1ml sữa tươi 4ml H2O + Albumin 1%: 10ml H2O 0.1g Albumin + Gelatin 1%: 10ml H2O 0.1g Gelatin + NaOH 20%: 10ml H2O 2g NaOH Quan sát - Ống nghiệm 1: Xuất kết tủa vàng - Ống nghiệm 2: Không đổi màu chứng tỏ phản ứng không xảy - Ống nghiệm 3: Khi đun dung dịch có màu vàng dẫn xuất nitro Khi thêm kiềm vào, sản phẩm chuyển thành muối có màu vàng da cam đặc trưng Theo thứ tự từ phải sang trái ống 1-3 Giải thích - Ống nghiệm 1: Khi cho HNO3 vào protein, axit amin nhân thơm có protein bị nitro hóa nhân thơm tạo nên dẫn xuất nitro có màu vàng Sản phẩm nitro hóa tác dụng với kiềm tạo muối có màu da cam đặc trưng - Ống nghiệm 2: Do Gelatin khơng có axit amin nhân thơm nên phản ứng xảy - Ống nghiệm 3: Nhóm -OH số gốc amino axit protein phản ứng với HNO3 cho hợp chất mang nhóm NO2 có màu vàng, đồng thời protein bị đông tụ HNO3 thành kết tủa Kết luận - Phản ứng Xanto protein phản ứng đặc trưng để phát axit amin nhân thơm IV Thí nghiệm 4: Phản ứng LOWRY 4.1 Xác định Albumin chuẩn - Nguyên liệu hóa chất: Phenylalanin 0,02%; glycine 0,02%; albumin 1% Dung dịch A: Na2CO3 2% NaOH 0.1N Dung dịch B: CuSO4.5H2O 0,5% natri citrat 1% Dung dịch C: hỗn hợp dung dịch A B theo tỷ lệ 49/1; dùng ngày Thuốc thử Folin - Cách tiến hành: Lấy ống nghiệm, cho ống 1: 1ml albumin 1%, ống 2: 1ml phenylalanin 0,02%, ống 3: 1ml glycine 0,02%, ống 4: 1ml nước cất Thêm vào ống 2ml dung dịch C, để yên 10 phút Sau thêm vài giọt (3-5 giọt) thuốc thử Folin Quan sát xuất màu ống 2, so sánh với ống 3, giải thích kết - Pha lỗng ống với dãy nồng độ 0,1 ; 0,2 ; 0,3 ; 0,4 ; 0,5 % Đọc quang phổ bước sóng 595nm - Pha đồ dùng: + Phenylalanin 0.02%: 50ml H2O 0.01g phenylalanin + Glycine: 0.02%: 50ml H2O 0.01g glycine + Albumin 1%: 10ml H2O 0.1g albumin + Dung dịch A: 0.4g NaOH 100ml H2O khuấy đều, sau thêm 2g Na2CO3 + Dung dịch B: Nhóm khác pha + Dung dịch C: tỉ lệ 49/1: 98ml dd A 2ml dd B Quan sát - Ống 1: Có phức chất màu xanh da trời - Ống 2: Có màu vàng chanh - Ống 3:Có màu vàng chanh - Ống 4: Có màu vàng chanh Theo thứ tự từ phải sang trái 4-1 Giải thích - Do protein liên kết với ion đồng môi trường kiềm nên phức chất đồng-protein (chủ yếu protein chứa amino acid nhóm tryptophan tyrosine) khử hỗn hợp phosphomolipden – phosphovonphramat (thuốc thử Folin – ciocalteu) tạo phức chất mầu xanh da trời Lập đồ thị đường chuẩn Blank Albumin 0,5 1,5 2,5 3,5 4,5 H2 O H2 O 4,5 3,5 2,5 1.5 0,5 DDC DDC 2 2 2 2 2 1 1 Folin Folin 1 1 1 giọt giọt giọt giọt giọt giọt giọt giọt giọt giọt Dựng đường chuẩn Nồng độ Albumin 0,5 1,5 OD595nm 0,086 0,182 0,266 0,37 Ta dựng đường chuẩn y = ax+b sau: 10 2,5 3,5 4,5 0,459 0,561 0.655 0,753 0,811 Ta có: Phương trình đường chuẩn BSA (phương pháp Lowry): y = 0,1861x + 0,0048 Trong đó: x: nồng độ Albumin (μg/ml) y: giá trị OD595nm (A) 4.2 Xác định Albumin lòng trắng trứng Nguyên liệu: 0,3g lòng trắng trứng 20ml nước cất Cách tiến hành: Cho 0,3g lòng trắng trứng vào 20ml nước cất hút 0,6ml dung dịch thêm 2,4ml dung dịch C để 10 phút bỏ thêm giọt Folin Nếu xuất màu xanh lam bắt đầu tiến hành OD595nm Lập đồ thị dựng đường chuẩn Blank Albumin lòng trắng trứng Nước cốt Nước cốt 0,6ml Dung dịch C Dung dịch C 2,4ml Folin Folin giọt Dựng đường chuẩn Nồng độ Albumin lòng trắng trứng OD595nm 0,185 Ta dựng đường chuẩn y = ax+b sau: 11 Dựa vào phương trình đường tuyến tính nồng độ đường khử (mg/ml) với mật độ quang OD595nm ta tính hàm lượng đường khử P mẫu phân tích X y = 0,1861x + 0,0048 => 𝑥 = y−0,0048 0,1861 = 0,185−0,0048 0,1861  Tính hàm lượng đường nguyên liệu (mg/g)= C.n.V m = 0,9682 = 0,9682( 3 )20 0,6 = 32,27655 BÀI 3: XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG I Thí nghiệm 1: Khảo sát tính khử monosaccharid - Nguyên liệu: Glucose 1%, maltose 1%, saccharose 1% - Hóa chất: Thuốc thử Fehling gồm phần: Fehling A: 40g CuSO4.5H2O lít nước cất Fehling B: 20g natri kali tartrat (C4H4O6NaK.4H2O) 150 g NaOH lít nước cất => Trộn Fehling A B theo tỷ lệ 1:1 ta thuốc thử Fehling - Cách tiến hành: Lấy ống nghiệm cho vào ống 1: 1ml glucose 1%, ống 2: ml maltose 1%, ống 3: 1ml saccharose 1% Thêm vào ống 1ml thuốc thử Fehling, lắc đều, đun sôi phút Quan sát so sánh kết ống nghiệm, giải thích - Pha đồ dùng: + Glucose, Maltose, Saccharose 1%: 10ml H2O 0.1g + Fehling A: 0.4g CuSO4.5H2O 10ml H2O + Fehling B: 0.2g Natri kali tartrat 1.5g NaOH 10ml H2O + A+B tỉ lệ 1:1 => 20ml thuốc thử Fehling Quam sát - Ống nghiệm 1: Xuất kết tủa đỏ gạch - Ống nghiệm 2: Xuất kết tủa đỏ gạch - Ống nghiệm 3: Không xuất kết tủa đỏ gạch 12 Theo thứ tự từ trái sang phải ống 1-3 Giải Thích - Ống nghiệm 1: Do có Glucose monosaccarit có nhóm –CHO, -C=O mang tính khử nên đun với dung dịch Fehling cho tủa màu đỏ Cu2O - Ống nghiệm 2: Maltose đường đôi tạo thành từ nhóm -OH glucozit đường đơn thứ với nhóm -OH alcol đường đơn thứ Nên maltose mang tính khử nên tham gia phản ứng Fehling có gia nhiệt xuất kết tủa đỏ gạch Cu2O - Ống nghiệm 3: Saccarose đường đôi kết hợp từ nhóm -OH glucozit đường đơn thứ với nhóm -OH glucozit đường đơn thứ Nên khơng mang tính khử nên tham gia phản ứng Fehling có gia nhiệt khơng xuất kết tủa đỏ gạch Kết luận - Trong phân tử monosaccait có nhóm -CHO, -C mang tính khử - Khi phân tử monosaccarit kết hợp với tạo disaccarit, nhóm -OH glucozit đường đơn thứ kết hợp với nhóm -OH alcol đường đơn thứ hai đường đơi tạo thành cịn mang tính khử, cịn nhóm -OH glucozit đường đơn thứ kết hợp với nhóm -OH glucozit đường đơn thứ hai đường đơi tạo thành khơng cịn tính khử BÀI 4: QUY TRÌNH LÀM XÀ PHỊNG TỪ PHƯƠNG PHÁP NGUỘI - Nguyên liệu: Dầu dừa 100g, khuôn silicon, 18,4g xút - Cách tiến hành: Cân 18,4g xút với 36,8g H20 100g dầu dừa Cho xút chút vơ H2O Đợi nguội dung dịch Sau cho dung dịch xút pha vô dầu dừa Hỗn hợp sau trộn lẫn cho thêm hương liệu hỗn hợp đổ khuôn Khuôn silicon vệ sinh phải lấy khăn giấy xịt cồn để vệ sinh - Pha đồ dùng: Pha dung dịch NaOH: 18.4g NaOH với 36.8g H2O Quan sát - Sau khi hai hỗn hợp trộn lẫn để nguội thấy lớp chất rắn có màu trắng đục (xà phịng) 13 Giải thích - Phản ứng xà phịng hóa q trình thủy phân este mơi trường kiềm, tạo thành ancol muối cacboxylat Kết luận - Bản chất xà phòng phương pháp nguội hồn tồn tự nhiên, khơng chứa chất cồn, hương nước hoa hay thành phần có nguồn gốc hóa học khiến da bị dị ứng, mẫn cảm Xà phòng làm từ phương pháp không thêm vào chất tẩy rửa Với hỗn hợp tinh dầu nguyên chất thiên nhiên Glycerin, bánh xà phòng phương pháp nguội yêu chiều da nào, kể loại da nhạy cảm Video Nhóm ca chiều thứ 6.mp4 14