THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG

Microsoft Word THỰC HÀNH VSĐC docx TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC VÀ THỰC PHẨM THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG TÀI LIỆU THAM KHẢO THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG................

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG Biên soạn: Th.S Nguyễn Minh Hiền NỘI DUNG THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG GIỚI THIỆU CHUNG Giáo trình phục vụ mơn học SV sử dụng giáo trình Thực hành Vi sinh đại cương Nội dung học Các thiết bị PTN Vi sinh, chuẩn bị môi trường dinh dưỡng, phương pháp khử trùng Phân lập, cấy chuyền VSV Làm tiêu bản, quan sát tế bào VSV Đếm tế bào men buồng đếm hồng cầu Khảo sát số phản ứng sinh hoá vi khuẩn Yêu cầu GV với SV Yêu cầu kiến thức: Chuẩn bị trước đến phịng thí nghiệm GV kiểm tra bài, SV nhóm khơng chuẩn bị bài, nhóm bị nghỉ buổi học khơng dạy học lại Sau kết thúc mơn học, SV có -10 ngày để viết báo cáo Nộp cho bạn (có định) nhóm Bài báo cáo ghi rõ họ tên, nhóm, tổ Bài báo cáo SV đánh máy viết tay Yêu cầu kỹ năng: quan sát GV thực thao tác làm yêu cầu thực thao tác nuôi cấy VSV, làm tiêu bản, quan sát kính hiển vi (KHV) Yêu cầu thái độ: nghiêm túc, nhanh nhẹn, thực quy định PTN yêu cầu GV Tham gia tích cực trả lời câu hỏi GV đặt câu hỏi buổi học BÀI 1: MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG, PHƯƠNG PHÁP KHỬ TRÙNG 1.1 Các thiết bị PTN Vi sinh Sinh viên quan sát tìm hiểu Sau đó, liệt kê đầy đủ thơng tin vào Bảng Bảng Một số thiết bị PTN vi sinh STT Tên thiết bị Mục đích Tủ sấy Sấy khô, diệt khuẩn tiệt trùng dụng cụ dùng thí nghiệm Tủ ủ Tạo trì mức nhiệt độ độ ẩm thích hợp cho mơi trường theo u cầu người nghiên cứu Máy đồng mẫu Đồng hóa loại mẫu Máy ly tâm Tách hỗn hợp chất có tỉ trọng khác Bếp khuấy từ Làm nóng khuấy mơi trường lực từ trường Máy đếm khuẩn lạc Xác định đếm sinh vật sống mẫu nghiên cứu Nồi hấp tiệt trùng (Autoclave) Khử trùng vật dụng phịng thí nghiệm Tủ lạnh Đảm bảo điều kiện lưu trữ, bảo quản tối ưu vật phẩm nghiên cứu thời gian dài nhiệt độ ổn định Làm lỏng, nóng mơi trường Lị vi sóng Kính hiển vi 10 Dùng để phóng đại mẫu sinh học mà mắt thường khơng thể nhìn thấy được, tế bào động vật, thực vật, vi khuẩn có kích thước nhỏ 1.2 Mơi trường ni cấy VSV 1.2.1 Khái niệm: - Môi trường nuôi cấy vi sinh vật mơi trường có điều kiện thích hợp cho vi sinh vật phát triển, chứa nhiều chất dinh dưỡng cần thiết nồng độ pH phù hợp 1.2.2 Yêu cầu môi trường dinh dưỡng nuôi cấy VSV - Đủ chất dinh dưỡng cần thiết - Độ pH thích hợp - Độ nhớt định - Khơng chứa yếu tố độc hại - Hồn tồn vơ trùng 1.2.3 Phân loại 1.2.3.1 Phân loại môi trường theo thành phần - Môi trường nuôi cấy tự nhiên: không xác định mặt hóa học - Mơi trường ni cấy tổng hợp: xác định thành phần hóa học - Môi trường bán tổng hợp: Môi trường tự nhiên số thành phần hóa học xác định rõ 1.2.3.2 Phân loại môi trường theo trạng thái vật lý - Môi trường rắn: chứa thạch với nồng độ 1,5-2% số khác => Công dụng: phân lập nhân giống - Môi trường bán rắn: chứa thạch với nồng độ 0.5% => Cơng dụng: kiểm tra khả di động vi sinh vật, phù hợp cho việc nuôi cấy vi khuẩn Microaerophilic - Môi trường lỏng: khong chứa gelatin agar => Công dụng: nhân giống, nghiên cứu lên men thử nghiệm khác 1.2.3.3 Phân loại môi trường theo công dụng Môi trường (General purpose media) - Phù hợp với hầu hết vi sinh vật Chúng thường chứa nguồn carbon, lượng (thường glucose), muối, axit amin vitamin Các nguyên liệu thô phức tạp khác (chẳng hạn peptone, chiết xuất thịt, chiết xuất nấm men- Yeast) sử dụng việc chuẩn bị môi trường Môi trường tăng sinh (Enrich media) - Dành cho vi sinh vật khó mọc.Mơi trường tăng sinh cung cấp tác nhân hóa học vật lý để tăng số lượng vi sinh vật Khơng có tác nhân ức chế sử dụng để ngăn chặn phát triển vi sinh vật không mong muốn Môi trường phân biệt (Differential media) - Chúng chứa chất làm cho màu sắc cụm khuẩn lạc Nhờ mơi trường mà ta phân biệt chủng chủng đĩa nuôi cấy Môi trường chọn lọc (Selective media) - Chúng cho phép số loại vi sinh vật phát triển khơng có số chất dinh dưỡng quan trọng mơi trường khiến khơng thuận lợi cho hầu hết vi sinh vật, chất ức chế môi trường ngăn chặn phát triển vi sinh vật không mong muốn cung cấp chất hỗ trợ phân lập nhận dạng nhanh chóng cho vi sinh vật cách ức chế phát triển vi sinh vật không mong muốn 1.2.4 Cơng thức mơi trường Ví dụ: Mơi trường P.D.A (Potato Dextrose Agar): dùng để nuôi cấy men, mốc Khoai tây: 200 g H2O: L Dextrose: 40 g pH: 4.5-5 Agar: 20 g 121 C /15’/ 0.1 Mpa Các thông tin có cơng thức mơi trường (GV định loại môi trường) Môi trường PCA (Plate Count Agar): xác định tổng số lượng vi khuẩn hiếu khí sống mẫu Casein peptone: gms/l Agar: 9-18 gms/l Yeast Extract: 2.5 gms/l pH cuối 7.0 ± 0.2 25°C Glucose: gms/l Môi trường SCA (Starch Casein Agar): xác định vi khuẩn biến phân giải đường để tạo lượng (saccharolytic) chủ yếu xạ khuẩn Actinomycetes Soloble Starch: 10 gms/l CaCO3: 0.02 gms/l Casein (Vitamin free): 0.3 gms/l FeSO4.7H2O: 0.01 gms/l KNO3: gms/l Agar: 18 gms/l MgSO4.7H2O: 0.05 gms/l Nước biển/Nước cất = 1000 ml K2HPO4: 2gms/l pH (ở 25°C) 7.0 ± 0.1 NaCl: 2gms/l Môi trường KIA (Kligler Iron Agar): giúp phân biệt loài bacillus đường ruột Peptone: 15 gms/l Sodium Thiosulfate: 0.3 gms/l Lactose: 10 gms/l Ferrous Sulfate: 0.2 gms/l Proteose Peptone: gms/l Phenol Red: 0.024 gms/l Sodium Chloride: gms/l Agar: 12 gms/l Chiết thịt bò: gms/l Chiết nấm: gms/l Dextrose: gms/l pH 7.4 +/- 0.2 25ºC 1.2.5 Các bước để nấu môi trường (GV hướng dẫn cách làm) Chuẩn bị môi trường Bước 1: Cân, đong ( ống đong ) môi trường theo công thức Bước 2: Đun ( cần ), kiểm tra pH Bước 3: Phân phối môi trường vào dụng cụ vô trùng Bước 4: Khử trùng theo yêu cầu 1.3 Phương pháp khử trùng 1.3.1 Khử trùng môi trường Bảng Khử trùng môi trường phương pháp…………………………………………… Phương pháp Nhiệt độ/ thời gian Nguyên lý tiêu diệt VSV Nhiệt ẩm Nhiệt độ: 121 Thời gian: khoảng 10-15 phút Dựa vào nước bão hòa nhiệt độ cao, áp suất cao Pasteur Nhiệt độ: 60-75 Thời gian: giữ 15-30 phút Dựa vào nhiệt độ để bất hoạt vi sinh vật Nhiệt độ: 180 Thời gian: 30 phút Dựa vào nhiệt độ để bất hoạt vi sinh vật Nhiệt khô 1.3.2 Khử trùng dụng cụ Dụng cụ thuỷ tinh: sử dụng nhiệt ẩm ( nồi hấp tiệt trùng ), nhiệt khô ( tủ sấy ) Dụng cụ nhựa: sử dụng nhiệt ẩm ( nồi hấp tiệt trùng ) 1.3.3 Khử trùng PTN: phun độc, đèn UV 2.1 Kết thực hành (hình ảnh minh chứng) (hình ảnh minh chứng) (hình ảnh minh chứng) Mơi trường………………… Mơi trường………………… Mơi trường………………… * Hình ảnh em xin để cuối * BÀI 2: PHÂN LẬP VÀ CẤY CHUYỀN VI SINH VẬT 2.1 Phân lập 2.1.1 Khái niệm - Là q trình tách riêng lồi vi sinh vật từ quần thể ban đầu đưa dạng khiế t ………………………………………………………………………………………………………… 2.1.2 Mục đích phân lập - Tạo dịng ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… 2.1.3 Phương pháp phân lập (GV hướng dẫn thao tác) VSV Dụng cụ Môi trường Phương pháp Vi khuẩn Đĩa peptri, PCA + agar nồi hấp tiệt + Nấm men trùng, lọ tam giác, cân điện tử, lị vi sóng, que cấy vịng ………………………… ………………………… ………………………… ………………………… ………………………… ………………………… VSV Dụng cụ Môi trường Nấm mốc mẫu Czapek – pectin chuẩn bị (g/L) sẵn,đèn cồn ,dao lưỡi lam ,nhíp gắp,lọ nước cồn,đĩa petri, lọ tam giác, que cấy móc 2.2 Cấy chuyền 2.2.1 Khái niệm - Truyền vi sinh vật từ môi trường sang mơi trường khác 2.2.2 Mục đích - Giúp bảo quản, nhân giống khảo sát sinh hóa Phương pháp ………………………… ………………………… ………………………… ………………………… ………………………… ………………………… 2.2.3 Phương pháp cấy chuyền (GV hướng dẫn thao tác) VSV Dụng cụ Phương pháp Nấm men Que cấy vòng, que B1: Hơ que cấy kỹ lửa đèn cồn, hơ miệng ống cấy thẳng nghiệm qua lửa đèn cồn B2: Chạm nhẹ que cấy quanh thành ống nghiệm để làm nguội Nhúng thẳng que cấy vào môi trường lỏng Rút hơ lại miệng ống nghiệm đóng nắp - Lưu ý: giữ que cấy miệng ống nghiệm mơi Nấm mốc Que cấy móc trường vơ trùng (cách lửa tầm 5cm) Thạch đứng: dùng que cấy thẳng, đưa que cấy vng góc cách đáy 1cm Thạch nghiêng sâu: dùng que cấy thẳng, đưa que cấy xuống cách đáy 1cm, cấy ziczac phần nghiêng Vi khuẩn Que cấy vòng, que Thạch nghiêng: dùng que cấy vòng, cấy ziczac phần nghiêng cấy thẳng Đĩa: dùng que cấy vòng, chia đáy thành phần B1: Hơ que cấy, cấy ziczac phần B2: Hơ que cấy, gióng từ phần cấy đường song song qua phần B3: Hơ que cấy, gióng cấy đường song song từ phần qua phần B4: Hơ que cấy, gióng từ phần cấy đường ziczac - Lưu ý: Làm đến đâu mở nắp đến đường cấy phần không chạm 2.3 Kết thực hành (hình ảnh minh chứng) (hình ảnh minh chứng) (hình ảnh minh chứng) Cấy phân lập……………… Cấy chuyền………………… Cấy chuyền………………… …………………………… …………………………… …………………………… * Hình ảnh em xin để cuối * BÀI 3: KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH SINH HỐ CỦA VSV 3.1 Mục đích - Định danh, xác định vi khuẩn 3.2 Yêu cầu thực phản ứng sinh hoá Yêu cầu VSV: Dịng thuần, khơng lẫn tạp nhiễm, u cầu thời gian đọc kết quả: 24g sau nuôi cấy 3.3 Một số phản ứng sinh hóa Mục đích Môi trường PCA (Plate Count Agar): xác định tổng số lượng vi khuẩn hiếu khí sống mẫu Thành phần môi trường Casein peptone: gms/l Yeast Extract: 2.5 gms/l Glucose: gms/l Agar: 9-18 gms/l pH cuối 7.0 ± 0.2 25°C Môi trường SCA (Starch Casein Soloble Starch: 10 gms/l Agar): xác định Casein (Vitamin free): 0.3 vi khuẩn biến gms/l phân giải đường KNO : gms/l để tạo MgSO4.7H2O: 0.05 gms/l lượng (saccharolytic) K2HPO4: 2gms/l chủ yếu xạ NaCl: 2gms/l khuẩn Actinomycetes CaCO3: 0.02 gms/l FeSO4.7H2O: 0.01 gms/l Kết - giải thích – hình minh chứng - Vi sinh vật phát triển có khác phần (phần thường dày đặc hơn, phần nhất) - Vì q trình ni cấy, lượng vi sinh vật que cấy phần thường nhiều giảm dần qua phần Cuối phần phần -Vi khuẩn đường ruột Lactobacillus: Thường không dẫn đến thay đổi màu sắc môi trường SCA Agar: 18 gms/l Nước biển/Nước cất = 1000 ml pH (ở 25°C) 7.0 ± 0.1 Mục đích Thành phần mơi trường Kết - giải thích – hình minh chứng Mơi trường KIA (Kligler Iron Agar): giúp phân biệt loài bacillus đường ruột Mơi trường KIA gồm glucose lactose (có thể lên men carbohydrat), đỏ phenol Lactose: 10 gms/l (chỉ thị pH), pepton (nguồn carbon/nitrogen) muối sắt cộng với Proteose Peptone: gms/l thiosulfate natri Có hình thái lên men Sodium Chloride: gms/l carbohydrat xảy là: Chiết thịt bò: gms/l - Acid (màu vàng) phần gốc kiềm (màu đỏ) phần nghiêng môi trường, Chiết nấm: gms/l cho thấy vi sinh vật lên men đường glucose Dextrose: gms/l không lên men đường lactose Sodium Thiosulfate: 0.3 gms/l - Acid (màu vàng) phần gốc acid (màu vàng) phần nghiêng mơi trường, Ferrous Sulfate: 0.2 gms/l cho thấy vi sinh vật lên men đường Phenol Red: 0.024 gms/l glucose đường lactose Agar: 12 gms/l - Kiềm (màu đỏ) phần gốc kiềm (màu pH 7.4 +/- 0.2 25ºC đỏ) phần nghiêng môi trường, cho thấy vi sinh vật khơng thể lên men đường glucose đường lactose Các sản phẩm sinh sản phẩm acid Peptone: 15 gms/l BÀI 4: LÀM TIÊU BẢN VÀ QUAN SÁT TẾ BÀO VI SINH VẬT 4.1 Quan sát đại thể Quan sát khuẩn lạc mắt để thấy đặc điểm khuẩn lạc màu sắc, hình dạng, đường kính, độ vun, bóng, nhăn, có sợi Việc quan sát đại thể khuẩn lạc điển hình mơi trường phân lập chọn lọc giúp dự đốn VSV (phụ thuộc nhiều vào kinh nghiệm người quan sát) Mô tả khuẩn lạc VSV phân lập Bài 2: (hình ảnh minh chứng) * Hình ảnh em xin để cuối * Khuẩn lạc nấm men Trên mơi trường PCA Hình dạng trịn Bờ, mép khuẩn lạc trịn Đường kính 2mm Màu sắc trắng đục 4.2 Quan sát vi thể Làm tiêu quan sát tiêu kính hiển vi (KHV) để thấy được: hình dạng, cách xếp, kích thước tế bào 4.2.1 Làm tiêu phương pháp nhuộm đơn Mục đích: - Thường áp dụng với nấm men - Quan sát đo kích thước tế bào - Cho phép quan sát rõ hình dạng, cấu tạo tế bào đếm số lượng tế bào Cách tiến hành: B1: Ghi tên VSV Tạo vết bôi - Hơ kỹ que cấy lửa đèn cồn, mở nắp ống nghiệm hơ qua lửa đèn cồn - Chạm nhẹ que cấy vào thành ống nghiệm để làm nguội que cấy Nhúng que cấy vào môi trường lỏng khuấy nhẹ để lấy mẫu - Khi lấy que cấy ra, tránh chạm vào miệng ống nghiệm Hơ lại miệng ống nghiệm đậy nắp lại Lưu ý: Giữ que cấy miệng ống nghiệm môi trường vô trùng (cách lửa đèn cồn 5cm) B2: Cố định vết bôi cách hơ lửa đèn cồn vết bôi khô B3: Nhuộm màu (Sử dụng Gentian Violet, Fuchsin kiềm, Xanh metylen) - Đặt tiêu cố định giá nhỏ vài giot thuốc nhuộm phủ kín vết bơi - Sau 1-2 phút, đổ thuốc nhuộm rửa nhẹ nước đến nước chảy qua vết bơi khơng cịn màu - Thấm khô tiêu giấy thấm B4: Quan sát tiêu Kính hiển vi 4.2.2 Làm tiêu phương pháp nhuộm kép (GV hướng dẫn thao tác) Mục đích: - Quan sát hình dạng, kích thước cách xếp tế bào - Phân biệt vi khuẩn gram âm gram dương Cách tiến hành: B1: Ghi tên VSV Tạo vết bôi B2: Cố định vết bôi B3: Nhuộm màu ( VIAS) - Nhỏ thuốc nhuộm Crystal Violet vào tiêu để phút Rửa nước thấm khô giấy cho giữ vết bôi - Nhỏ Lugol để phút Rửa nước => Tẩy cồn => Rửa nước - Nhỏ thuốc nhuộm Saffranin, để 30s Rửa nước B4: Quan sát kính hiển vi vật kính 100X (nhỏ giọt dầu) 4.2.3 Làm tiêu phương pháp giọt ép Mục đích: - Đặc điểm sợi nấm - Đặc điểm quan sinh sản - Hình dạng, cấu tạo, cách xếp bào tử Cách tiến hành: B1: Dùng phiến kính khơ, nhỏ lên giọt nước cất B2: Dùng que cấy hay pipet lấy lên phiến kính giọt huyền phù VSV B3: Đặt kính mỏng lên giọt huyền phù VSV cho khơng tạo bọt khí B4: Thấm nhẹ lớp dịch trào ngồi kính B5: Tiến hành quan sát kính hiển vi 4.3 Kết thực hành Mỗi tiêu quan sát phải có đầy đủ thơng tin sau: + Tên VSV + Vật kính quan sát + Hình dạng tế bào + Cách xếp tế bào + Màu sắc tế bào (nếu vi khuẩn phải ghi rõ vi khuẩn Gram (+) hay Gram (-) (hình ảnh minh chứng) (hình ảnh minh chứng) (hình ảnh minh chứng) …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… …………………………… * Hình ảnh em xin để cuối * 4.4 Bài tập nhà 4.4.1 Tại phải nhỏ dầu xem kính lên tiêu quan sát kính hiển vi vật kính 100? Dầu soi cần thiết soi với vật kính 100 Nó làm tăng độ chiết quang cảu môi trường Nếu dầu soi bạn khơng thể soi Bởi khả phân giải vật kính phụ thuộc vào độ nó, điều phụ thuộc vào số khúc xạ môi trường mẫu thử vật kính 4.4.2 Giải thích chế bắt vi khuẩn Gram (+) Gram (-) - Vì cấu tạo vách tế bào khác nên nên tiến hành nhuộm vi khuẩn gram âm gram dương có chế bắt màu khác + Vi khuẩn Gram (+): màu tím Chúng có lớp vách tế bào peptidoglycan dày, dạng lưới có khả bắt màu tím thuốc nhuộm tím gentian tinh thể Cũng lớp vách dày nên việc tẩy cồn khó khăn vi khuẩn giữ màu tím thuốc nhuộm tím Gentian + Vi khuẩn Gram (-): màu xanh Lớp vách peptidoglycan mỏng có thêm lớp màng lipopolysaccharide phía ngồi, tẩy cồn cồn hịa tan lớp màng lớp vách mỏng bị cồn tẩy dễ dàng nên khơng giữ màu tím thuốc nhuộm mà bắt màu thuốc nhuộm sau dung dịch Fushin kiềm 4.4.3 So sánh phương pháp nhuộm đơn nhuộm kép Nhuộm đơn Nhuộm kép - Đều cố định vết bôi nhuộm trước thực quan sát kính hiển vi Giống - Thực nhuộm màu lần Chọn số loại thuốc nhuộm để thực Khác quy trình - Thực nhuộm màu lần Chọn loại thuốc nhuộm để thực Có thể theo phương pháp V.I.A.S Với thứ tự sau + Crystal Violet: phút + Lugol: phút + Alcohol (cồn): nhúng nhanh qua + Saffarnin: 30 giây Quan sát hình dạng, kích thước, cách Phân biệt loại vi khuẩn Gram ( + ) xếp tế bào Gram ( - ) Khác mục đích BÀI 5: ĐẾM SỐ LƯỢNG TẾ BÀO BẰNG BUỒNG ĐẾM HỒNG CẦU 5.1 Giới thiệu buồng đếm hồng cầu Mục đích: - Xác định nồng độ tế bào mẫu chất lỏng BĐHC phiến kính thuỷ tinh hình chữ nhật, có khắc lưới đếm Hình 5.1 Buồng đếm hồng cầu Hình 5.2 Lưới đếm Lưới đếm hình vng, có độ dài cạnh 1mm gồm 25 ô vuông lớn ô vuông lớn có 16 ô vuông nhỏ Các ô vuông lớn chia cắt đường kẻ song song Chiều cao/độ sâu đường khắc lưới đếm 0,1mm S lưới đếm= mm2 S ô vuông nhỏ= 2,5x10-3mm2 S ô vuông lớn = 0,04 mm2 V ô vuông nhỏ = 2,5x10-4mm2 Khi đếm, ta thực ô đếm lớn vị trí góc Và ô đếm lớn, ta cần chọn đồng cạnh kề ô đếm để lấy tế bào nằm cạnh Cơng thức tính số lượng nấm men mẫu BĐHC: (tế bào/ml) Trong đó: A: Tổng số lượng tế bào ô đếm nhỏ V: Thể tích vng nhỏ Tổng thể tích vuông nhỏ: 16 5= 80 ô => V= mm3 10n: nồng độ pha loãng đếm 1000: Hệ số chuyển từ mm³ thành ml 5.2 Quy trình đếm nấm men (GV hướng dẫn quy trình) B1: Pha lỗng mẫu cần đếm cho ô nhỏ buồng đếm có khoảng 5- 10 tế bào (khơng lớn 10 tế bào nhỏ 2,5 tế bào) Ô lớn từ 10-50 tế bào B2: Lắc ống nghiệm pha loãng mẫu Dùng Pipet nhỏ giọt dung dịch mẫu vào buồng đếm, tráng cho đầy khoang đếm B3: Dùng phiến kính đậy lại, tránh tạo bọt khí B4: Thực soi kính hiển vi điều chỉnh cho phù hợp để đếm số lượng tế bào Tùy vào số lượng tế bào mà người dùng đếm tất tế bào có đếm tế tế bào có số ô vuông lớn đại diện B5: Bắt đầu đếm tế bào sau nhỏ giọt dung dịch từ - phút 5.3 Tính kết A: Số lượng tế bào đếm ô vuông lớn - Ô1: 24 tế bào - Ô2: 34 tế bào - Ô3: 30 tế bào => A= 24+34+30+20+21= 129 tế bào - Ô4: 20 tế bào - Ô5: 21 tế bào ( tế bào/ ml) 5.4 Bài tập nhà 5.4.1 Ưu điểm phương pháp đếm trực tiếp tế bào buồng đếm hồng cầu - Đếm dễ dàng, nhanh, tiết kiệm thời gian - Quan sát nhanh chóng mật độ vi sinh vật có mẫu 5.4.2 Nhược điểm phương pháp đếm trực tiếp tế bào buồng đếm hồng cầu - Không phân biệt tế bào sống tế bào chết - Khó đạt xác cao - Dễ nhầm lẫn tế bào vi sinh vật với vật thể khác - Không thích hợp với huyền phù sinh vật có mật độ thấp 5.4.3 Ứng dụng phương pháp đếm trực tiếp tế bào buồng đếm hồng cầu - Cho phép ta đếm số lượng vi sinh vật có kích thước lớn nấm men, tảo, bào tử vi nấm - Vẽ đường cong sinh trưởng