Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, ứng dụng kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng do Trypanosoma evansi gây ra ở trâu, bò một số tỉnh miền núi phía Bắc và đề xuất biện pháp phòng trị

Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, ứng dụng kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng do Trypanosoma evansi gây ra ở trâu, bò một số tỉnh miền núi phía Bắc và đề xuất biện pháp phòng trị

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

ĐỖ THỊ VÂN GIANG

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, ỨNG DỤNG KIT CHẨN

ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG DO TRYPANOSOMA EVANSI GÂY RA Ở TRÂU, BÒ MỘT SỐ TỈNH MIỀN NÚI

PHÍA BẮC VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ

LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y

THÁI NGUYÊN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

ĐỖ THỊ VÂN GIANG

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, ỨNG DỤNG KIT CHẨN

ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG DO TRYPANOSOMA EVANSI GÂY RA Ở TRÂU, BÒ MỘT SỐ TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC

VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ

Chuyên ngành: Ký sinh trùng và vi sinh vật học thú y

Mã số: 62 64 01 04

LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y

Người hướng dẫn khoa học: 1 GS TS Nguyễn Thị Kim Lan

2 TS Nguyễn Quốc Doanh

THÁI NGUYÊN - 2014

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của chúng tôi Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận án này là hoàn toàn trung thực và chưa được công bố trong bất kỳ công trình nào khác Mọi thông tin trích dẫn trong luận án đều được chỉ

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành Luận án này, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới GS TS Nguyễn Thị Kim Lan - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên và TS Nguyễn Quốc Doanh - Viện Thú y Quốc gia đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tôi hết sức tận tình trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành Luận án

Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc, Ban Đào tạo Sau Đại học - Đại học Thái Nguyên; Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học, Khoa Chăn nuôi thú Y - Trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên và Viện Khoa học

sự sống đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi xin trân trọng cảm ơn các thầy cô trong nhóm thực hiện đề tài cấp Nhà nước: «Nghiên cứu sản xuất protein tái tổ hợp phục vụ chế tạo các bộ kit phát hiện

ký sinh trùng Trypanosoma evansi ký sinh trên gia súc ở Việt Nam» đã kết hợp với tôi trong quá trình triển khai đề tài

Tôi xin trân trọng cảm ơn Chi cục Thú y, các trạm Thú y thuộc các tỉnh Thái Nguyên, Hòa Bình, Lạng Sơn, Lai Châu và các hộ chăn nuôi trâu, bò trên địa bàn các tỉnh nghiên cứu đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi xin trân trọng cảm ơn: PGS TS Phan Địch Lân - nguyên Viện trưởng Viện Thú y Quốc gia, PGS TS Tô Long Thành - Giám đốc Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung Ương, TS Phạm Thị Tâm - Phó chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học - Viện Đại Học Mở đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi xin chân thành cảm ơn các em sinh viên Khóa 39, 40, 41 chuyên ngành Thú y và Chăn nuôi Thú y đã giúp tôi thực hiện đề tài

Xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa cùng các thầy,

cô Khoa Kỹ thuật Nông Lâm - trường CĐ Kinh tế - Kỹ thuật - ĐH Thái Nguyên đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ để tôi được theo học và hoàn thành chương trình đào tạo

Tôi vô cùng biết ơn các thành viên trong gia đình, bạn bè và đồng nghiệp đã luôn ở bên tôi, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành Luận án

Thái Nguyên, ngày tháng năm 2013

NGHIÊN CỨU SINH

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT

% : Tỷ lệ phần trăm

CS : Cộng sự Nxb : Nhà xuất bản TMT : Tiên mao trùng

ĐC : Đối chứng SGN : Sau gây nhiễm EPC : Kháng thể đối chứng dương ENC : Kháng thể đối chứng âm

mg : Miligam

kg TT : kg thể trọng

TP : Thành phố spp : species plural VSG : Variant Surface Glycoprotein SDS : Sodium Dodecyl Sulfate VSG : Variant Surface Glycoprotein SAT : Slide Agglutination Test

T evansi : Trypanosoma evansi

T rubidus : Tabanus rubidus

T kiangsuensis : Tabanus kiangsuensis

S calcitrans : Stomoxys calcitrans

DANH MỤC BẢNG BIỂU

Bảng 3.1 Kết quả định danh loài tiên mao trùng ở 4 tỉnh miền núi phía Bắc 61

Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu, bò tại 4 tỉnh miền núi phía Bắc 62

Bảng 3.3 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu, bò theo lứa tuổi 66

Bảng 3.4 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo mùa vụ 68

Bảng 3.5 Tỷ lệ phát bệnh tiên mao trùng ở trâu theo mùa vụ 69

Bảng 3.6 Kết quả định danh, sự phân bố và tần suất xuất hiện

các loài ruồi, mòng hút máu 71

Bảng 3.7 Tỷ lệ loài ruồi, mòng trong số mẫu thu thập

ở các địa phương nghiên cứu 78 Bảng 3.8 Quy luật hoạt động theo tháng của các loài ruồi, mòng hút máu 81

Bảng 3.9 Quy luật hoạt động của các loài ruồi, mòng hút máu 82

Bảng 3.10 Thời gian T evansi xuất hiện trong máu chuột bạch sau gây nhiễm 84

Bảng 3.11 Thời gian chết của chuột bạch sau gây nhiễm T evansi 86

Bảng 3.12 Tỷ lệ các triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chuột bạch gây nhiễm 87

Bảng 3.13 Bệnh tích đại thể ở chuột bạch bị bệnh tiên mao trùng do gây nhiễm 89

Bảng 3.14 So sánh khối lượng cơ thể và các nội quan của chuột đối chứng và

Bảng 3.15 Thời gian T evansi xuất hiện trong máu của thỏ sau gây nhiễm 92

Bảng 3.16 Tần suất xuất hiện T evansi trong máu thỏ gây nhiễm

và thời gian thỏ chết 93 Bảng 3.17 Thời gian xuất hiện và triệu chứng lâm sàng chủ yếu ở thỏ gây nhiễm 95

Bảng 3.18 Bệnh tích đại thể chủ yếu của thỏ bị bệnh TMT do gây nhiễm 96

Bảng 3.19 Thời gian T evansi bắt đầu xuất hiện và thời gian trâu gây nhiễm

có biểu hiện lâm sàng 97 Bảng 3.20 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu ở trâu gây nhiễm 101

Bảng 3.21 Sự thay đổi một số chỉ tiêu sinh lý máu trâu sau gây nhiễm 102

Bảng 3.22 Công thức bạch cầu của trâu đối chứng và gây nhiễm 104

Bảng 3.23 Bệnh tích đại thể chủ yếu của trâu bị bệnh TMT do gây nhiễm 106

Bảng 3.24 Tỷ lệ phát hiện của kit CATT trong số mẫu huyết thanh (+) 107

Bảng 3.25 Tỷ lệ phát hiện của kit ELISA trong số mẫu huyết thanh (+) 108

Bảng 3.26 Tỷ lệ trâu nhiễm tiên mao trùng ở Thái Nguyên

qua ứng dụng kit huyết thanh chẩn đoán 109

Bảng 3.27 Thời gian sạch T evansi trong chuột khi sử dụng thuốc trypanosoma 111

Bảng 3.28 Thời gian sạch T evansi trong chuột khi sử dụng thuốc azidin 112

Bảng 3.29 Thời gian sạch T evansi trong chuột

khi sử dụng thuốc trypamidium samorin 113

Bảng 3.30 Thời gian sạch T evansi trong chuột khi sử dụng thuốc diminavet 114

Bảng 3.31 Hiệu lực của 3 phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 116

DANH MỤC CÁC HÌNH, BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ

TT hình Nội dung hình Trang Hình 3.1 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm TMT ở trâu, bò tại 4 tỉnh miền núi phía Bắc 64

Hình 3.2 Đồ thị tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu, bò theo lứa tuổi 66

Hình 3.3 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo mùa vụ 68

Hình 3.4 Biểu đồ tỷ lệ phát bệnh tiên mao trùng ở trâu theo mùa vụ 70 Hình 3.5 Biểu đồ tỷ lệ loài ruồi, mòng hút máu trong số mẫu thu thập 79 Hình 3.6 Đồ thị diễn biến thân nhiệt của trâu đối chứng và gây nhiễm T evansi 99

Hình 3.7 Biểu đồ tỷ lệ các loại bạch cầu của trâu gây nhiễm T evansi

so với trâu đối chứng 105

Hình 3.8 Biểu đồ về hiệu lực của 3 phác đồ điều trị bệnh TMT cho trâu, bò 116

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU………1

1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục tiêu đề tài 3

3 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài 3

4 Những đóng góp mới của đề tài 3

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

1.1 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 4

1.1.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc và phân loại tiên mao trùng 4

1.1.2 Dịch tễ học bệnh tiên mao trùng 8

1.1.3 Đặc điểm bệnh lý và lâm sàng của bệnh 14

1.1.4 Chẩn đoán bệnh tiên mao trùng 17

1.1.5 Phòng, trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò, ngựa 22

1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG 27

1.2.1 Tình hình nghiên cứu trong nước 27

1.2.2 Tình hình nghiên cứu trên thế giới 31

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46

2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 46

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 46

2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 46

2.2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 47

2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 47

2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò tại 4 tỉnh miền núi phía Bắc 47

2.3.2 Khả năng gây bệnh của T evansi trên một số động vật gây nhiễm 48

2.3.3 Ứng dụng kit trong chẩn đoán bệnh tiên mao trùng ở các địa phương 49

2.3.4 Xác định khả năng mẫn cảm của T evansi với một số loại thuốc trên chuột bạch……….49

2.3.5 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng và đề xuất biện pháp phòng chống bệnh 49

2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 49

2.4.1 Phương pháp thu thập mẫu 49

2.4.2 Phương pháp phát hiện tiên mao trùng trong mẫu 51

2.4.3 Phương pháp định danh tiên mao trùng 51

2.4.4 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm bệnh lý, lâm sàng bệnh do T evansi gây ra trên động vật gây nhiễm 52

2.4.5 Phương pháp định loại ruồi, mòng hút máu - môi giới truyền bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 56

2.4.6 Phương pháp ứng dụng kit huyết thanh phát hiện trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng 56

2.4.7 Phương pháp nghiên cứu khả năng mẫn cảm của T evansi với một số loại thuốc trên chuột bạch 58

2.4.8 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 59

2.4.9 Một số quy định trong nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tiên mao trùng 60

2.5 Phương pháp xử lý số liệu 60

Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 61

3.1 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG Ở TRÂU, BÒ TẠI 4 TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC 61

3.1.1 Định danh loài tiên mao trùng phân lập từ trâu, bò ở 4 tỉnh miền núi phía Bắc 61

3.1.2 Tình hình nhiễm tiên mao trùng ở trâu, bò tại 4 tỉnh miền núi phía Bắc 62

3.1.3 Nghiên cứu về ruồi, mòng hút máu truyền bệnh tiên mao trùng 71

3.2 KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA T EVANSI TRÊN MỘT SỐ ĐỘNG VẬT GÂY NHIỄM 84

3.2.1 Khả năng gây bệnh của T evansi trên chuột bạch 84

3.2.2 Khả năng gây bệnh của T evansi trên thỏ 91

3.2.3 Khả năng gây bệnh của T evansi trên trâu 97

3.3 ỨNG DỤNG KIT TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG Ở CÁC ĐỊA PHƯƠNG 107

3.3.1 Tỷ lệ phát hiện của kit trong số mẫu huyết thanh dương tính 107

3.3.2 Ứng dụng kit trong chẩn đoán bệnh tiên mao trùng 109

3.4 XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG MẪN CẢM CỦA T EVANSI VỚI MỘT SỐ LOẠI THUỐC TRÊN CHUỘT BẠCH 110

3.4.1 Xác định khả năng mẫn cảm của T evansi với thuốc trypanosoma trên chuột

bạch ……… 114

3.5 XÂY DỰNG PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG VÀ ĐỀ

XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG CHỐNG BỆNH 115 3.5.1 Xác định phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng đạt hiệu quả cao 115

3.5.2 Đề xuất biện pháp phòng chống bệnh T evansi cho trâu, bò ở các tỉnh miền núi 117

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 12119 TÀI LIỆU THAM KHẢO 122

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Bệnh do Trypanosoma (Trypanosomosis) là bệnh do ký sinh trùng đơn bào (Protozoa) lớp trùng roi (Flagellata) gây ra Có nhiều loài thuộc giống

Trypanosoma: Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma evansi, Trypanosoma congolense, Trypanosoma gambiense, Trypanosoma vivax, Trypanosoma simiae…

Hồ Văn Nam (1963) [28] và Trịnh Văn Thịnh (1982) [41] cho biết: trâu bị bệnh cấp tính có triệu chứng sốt cao, bỏ ăn, điên loạn, chết nhanh Trâu nhiễm bệnh thể mãn tính thường sốt gián đoạn, gầy còm, thiếu máu kéo dài, viêm giác mạc, phù thũng ở bụng, liệt chân sau, chết do kiệt sức Đối với bệnh tiên mao trùng bò, những biểu hiện lâm sàng gần giống như ở trâu, ít thấy các trường hợp cấp tính, con vật có triệu chứng sốt gián đoạn, chậm chạp, hạch lâm ba trước đùi sưng, một số con thủy thũng ở vùng hàm, vùng cổ nhưng không đau, gần chết thì bại liệt

Theo số liệu của Phạm Sỹ Lăng (1982) [15], Phan Địch Lân (2004) [23], Phan Văn Chinh (2006) [1], bệnh tiên mao trùng xuất hiện ở nhiều vùng trên cả nước, với

tỷ lệ mắc khá cao: trên trâu là 13 - 30 %, trên bò là 7 - 14 %, trong đó tỷ lệ gia súc chết/gia súc mắc lên tới 6,3 - 20 %

Cũng theo báo cáo của các tác giả trên, tỷ lệ mắc Trypanosoma evansi ở gia

súc vùng núi và trung du cao hơn các vùng đồng bằng và ven biển Trong khi đó, ở nước ta, chăn nuôi gia súc nhai lại để cung cấp sức kéo, thịt, sữa lại tập trung chủ yếu ở các tỉnh miền núi và trung du - là các vùng có điều kiện tự nhiên thích hợp để chăn nuôi gia súc nhai lại, nhưng cơ sở hạ tầng phục vụ công tác chẩn đoán và điều trị tại địa phương còn yếu kém, dẫn tới hệ quả là bệnh tiên mao trùng trở nên phổ biến hơn, nghiêm trọng hơn và gây thiệt hại lớn hơn

Hiện nay, các phương pháp chẩn đoán bệnh tiên mao trùng được sử dụng ở nước ta gồm: phương pháp chẩn đoán lâm sàng, tiêm truyền động vật thí nghiệm, phương pháp chẩn đoán huyết thanh học, phương pháp chẩn đoán sinh học phân tử

Trong đó, phương pháp chẩn đoán huyết thanh học được đánh giá là có độ nhạy và

độ đặc hiệu cao, cho kết quả nhanh, có khả năng chẩn đoán với số lượng mẫu lớn trong thời gian ngắn

El Rayah I E và cs (1999) [75] đã thử nghiệm khả năng điều trị bệnh tiên mao trùng của suramin, một loại thuốc đã không được sử dụng ở Sudan kể từ năm

1975 Kết quả cho thấy khả năng điều trị bệnh tiên mao trùng của Suramin không cao Kết quả nghiên cứu của Payne R C và cs (1994) [138], Laha R và Sasmal N

K (2008) [101], Desquesnes M và cs (2011) [69]… đều thấy, có sự tái nhiễm bệnh sau khi sử dụng một số loại thuốc trị tiên mao trùng Có nhiều nguyên nhân dẫn đến hiệu quả điều trị của thuốc không cao, trong đó khả năng kháng thuốc của tiên mao trùng là điều mà nhiều tác giả trong và ngoài nước quan tâm

Khả năng phát sinh và phát triển bệnh tiên mao trùng phụ thuộc vào điều kiện thời tiết, khí hậu, tập quán chăn nuôi và chế độ làm việc của gia súc Sự thay đổi các điều kiện trên ảnh hưởng đến khả năng gây bệnh cũng như đặc điểm dịch tễ bệnh Hiện nay, việc mở cửa thương mại, phát triển du lịch cũng dẫn tới sự du nhập các tác nhân gây bệnh mới, hoặc có thể tạo nên các biến chủng gây bệnh mới làm cho tình hình bệnh ngày càng phức tạp hơn

Từ những năm 1964 - 2006 các tác giả Trịnh Văn Thịnh, Đoàn Văn Phúc, Phan Địch Lân, Phạm Sỹ Lăng, Lê Ngọc Mỹ, Lương Tố Thu, Vương Thị Lan Phương, Phan Văn Chinh… đã nghiên cứu về bệnh tiên mao trùng ở vùng đồng bằng và ven biển Tuy nhiên, những nghiên cứu về bệnh tiên mao trùng ở các tỉnh miền núi còn hạn chế

Qua những phân tích ở trên về mức độ phổ biến và những thiệt hại do bệnh tiên mao trùng gây ra trên gia súc ở Việt Nam, đặc biệt là trên trâu, bò miền núi,

những biến đổi về dịch tễ có thể tạo ra các biến chủng Trypanosoma spp gây bệnh

cho gia súc, những khó khăn trong công tác chẩn đoán và chủ động phòng ngừa

bệnh, chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, ứng dụng kit chẩn

đoán bệnh tiên mao trùng do Trypanosoma evansi gây ra ở trâu, bò một số tỉnh miền núi phía Bắc và đề xuất biện pháp phòng trị”

2 Mục tiêu đề tài

Xác định được các loài Trypanosoma gây bệnh tiên mao trùng trên trâu, bò,

đặc điểm dịch tễ và bệnh học; sử dụng kit chẩn đoán và đề xuất biện pháp phòng trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò

3 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài

3.1 Ý nghĩa khoa học

Kết quả của đề tài là những thông tin khoa học về đặc điểm dịch tễ, bệnh học,

hiệu quả của kit huyết thanh học trong chẩn đoán bệnh do T evansi và biện pháp

phòng chống bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò

4 Những đóng góp mới của đề tài

- Là công trình đầu tiên nghiên cứu có hệ thống về đặc điểm dịch tễ, bệnh học, chẩn đoán và biện pháp phòng trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò ở một số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam

- Xác định được khả năng mẫn cảm của T evansi với một số loại thuốc diệt

Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI

Bệnh tiên mao trùng được Blanchard (1888) phát hiện đầu tiên ở Việt Nam Sau

đó, bệnh được thấy phổ biến ở hầu hết các tỉnh thành trong cả nước Bệnh do loài tiên

mao trùng Trypanosoma evansi gây ra Trâu, bò, ngựa mắc bệnh bị thiếu máu, suy

nhược, giảm hoặc mất khả năng sinh sản và sức sản xuất, nếu mắc bệnh nặng súc vật

dễ chết

1.1.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc và phân loại tiên mao trùng

1.1.1.1 Phân loại tiên mao trùng ký sinh ở gia súc

Theo Levine (1980) (dẫn theo Lương Văn Huấn và Lê Hữu Khương, 1997) [9],

vị trí của tiên mao trùng trong hệ thống phân loại nguyên bào (Protozoa) như sau:

Ngành Sarcomastigophora

Phân ngành Mastigophora

Lớp Zoomastigophorasida

Bộ Kinetoplastorida Phân bộ Trypanosomatorina

Họ Trypanosomatidae Donein, 1901 Giống Trypanosoma Gruby, 1843 Giống phụ Megatrypanum Hoare, 1964

Loài Trypanosoma (M) theileria Giống phụ Herpetosoma Doflein, 1901

Loài Trypanosoma (H) lewisi Giống phụ Schizotrypanum Chagas, 1909

Loài Trypanosoma (S) cruzi Giống phụ Duttonella Chalmers, 1918

Loài Trypanosoma (D) vivax Loài Trvpanosoma (D) uniforme Giống phụ Nannomonas Hoare, 1964

Loài Trypanosoma (N) congolense

Loài Trypanosoma (N) simiae Loài Trypanosoma (N) vanhogi Giống phụ Trypanozoon Liihe, 1906

Loài Trypanosoma (T) brucei Loài Trypanosoma (T) gambiense Loài Trypanosoma (T) rhodesiense Loài Trypanosoma (T) equiperdum Loài Trypanosoma evansi (Steel, 1885) Giống phụ Pycnomonas Hoare, 1964

Loài Trypanosoma (P) suis Giống phụ Trypanosoma Gruby, 1843

Loài Trypanosoma rotatorium

Trong các loài tiên mao trùng trên, có 3 loài được tổ chức dịch tễ thế giới

(OIE) thông báo là có khả năng gây bệnh cho người và động vật có vú, đó là: T

rhodesiense, T cruzi, T gambiense

1.1.1.2 Đặc điểm hình thái, cấu tạo của tiên mao trùng Trypanosoma evansi

Theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs (1999) [11]: đặc điểm hình thái, cấu tạo của tiên mao trùng như sau: Cơ thể có hình thoi, dài 18 - 34 m Giữa có một nhân, phía cuối cơ thể có một roi, roi này chạy dọc theo thân và tạo thành nhiều màng rung động, cuối cùng roi lơ lửng ở phần đầu và thành roi tự do Tiên mao trùng di chuyển được là nhờ roi và màng rung động Trên tiêu bản máu tươi, tiên mao trùng di chuyển nhanh trong huyết tương Khi phết kính, nhuộm Giemsa thấy nguyên sinh chất của tiên mao trùng bắt màu xanh nhạt, nhân bắt màu hồng

Phạm Sỹ Lăng và Lê Văn Tạo (2002) [18] cho biết: tiên mao trùng có kích thước: 18 - 34 x 2,5 μm, có hình mũi khoan, di động được trong máu nhờ một roi tự

do xuất phát từ phía sau thân, chạy vòng quanh thân tạo thành một màng rung Khi rung động, roi tự do vung ra phía trước và màng rung chuyển động giúp cho tiên mao trùng di chuyển nhanh trong máu vật chủ

Cấu trúc cơ bản của T evansi cũng giống như cấu trúc của các loài tiên mao trùng khác thuộc họ Trypanosomatidae Cấu trúc từ ngoài vào trong được chia thành

3 phần chính:

Vỏ: Ngoài cùng là lớp vỏ dày 10 - 15 nm, vỏ được chia làm 3 lớp (lớp ngoài, lớp giữa và lớp trong; lớp ngoài và lớp trong tiếp giáp với nguyên sinh chất dày hơn lớp giữa) Lớp vỏ ngoài cùng được cấu tạo từ các phân tử glycoprotein luôn biến đổi (Variant Glycoprotein Surface -VGS) Tiếp giáp với lớp trong cùng là 9 cặp vi ống xếp song song dọc theo chiều dài thân tiên mao trùng Chính nhờ sự sắp xếp của các cặp vi ống nên tiên mao trùng có dạng hình suốt chỉ mảnh

Nguyên sinh chất (gồm lớp trong và lớp ngoài): trong nguyên sinh chất có chứa ribosome (có màu thẫm xen kẽ vùng không bào màu sáng), kinetoplast (thể cơ động), mitochrondno, reticulum (lưới nội bào) và mạng lưới golgi

Nhân: Nhân tiên mao trùng có chứa AND, hình bầu dục hoặc hình trứng Nhân thường nằm ở vị trí trung tâm hoặc gần vị trí trung tâm cơ thể Ngoài nhân, về phía cuối thân còn có thể kinetoplast chứa AND (KAND) Từ kinetoplast có một roi chạy vòng quanh thân lên đầu và ra phía ngoài cơ thể thành một roi tự do Roi của tiên mao trùng có lớp vỏ ngoài cùng giống lớp vỏ của thân Trong roi có 9 cặp vi ống ở xung quanh và một cặp ở trung tâm, xếp song song dọc chiều dài roi (Hoare,

1972 [90]; Nguyễn Quốc Doanh, 1999 [6])

1.1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên của tiên mao trùng Trypanosoma evansi

Kháng nguyên của T evansi gồm hai loại: kháng nguyên ổn định (kháng

nguyên không biến đổi) và kháng nguyên biến đổi (dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan,

2008 [12])

* Kháng nguyên ổn định (kháng nguyên không biến đổi)

Phần lớn các thành phần kháng nguyên tiên mao trùng không biến đổi trong quá trình sống ký sinh Bằng phương pháp điện di huyết thanh thỏ tối miễn dịch với

T evansi, Kageruka (1982) đã phát hiện 30 thành phần kháng nguyên khác nhau

Có ba loại kháng nguyên không biến đổi ở màng nguyên sinh chất tế bào (ISG: Invariant Surface Glycoprotein): ISG 65, ISG 75 và ISG 100 Do cấu trúc không gian ba chiều và đặc tính ưa nước, các loại này không kết hợp với kháng thể của vật chủ (Nolan, 1997)

* Kháng nguyên biến đổi

Về kháng nguyên biến đổi, cần đề cập đến sự biến đổi lớp vỏ bề mặt VSG (Variant Surface Glycoprotein), những quan điểm mới về sự xuất hiện kháng nguyên biến đổi của tiên mao trùng và cơ chế di truyền của kháng nguyên biến đổi

Nhờ kháng thể đặc hiệu được đánh dấu mà Vickerman và Luckins (1969) đã phát hiện ra sự biến đổi của lớp kháng nguyên bề mặt Cross (1975) đã mô tả lớp áo

bề mặt của tiên mao trùng có thành phần là glycoprotein bao phủ toàn bộ bề mặt tế bào bằng một lớp phân tử giống nhau (mỗi tiên mao trùng có 107 phân tử) Lớp áo

bề mặt này kích thích cơ thể vật chủ tạo ra kháng thể đặc hiệu với từng type kháng nguyên biến đổi VAT (Variable Antigen Type) Chỉ có kháng nguyên biến đổi mới

có khả năng kích thích vật chủ tạo miễn dịch chủ động Người ta ước lượng rằng, một con tiên mao trùng có ít nhất vài trăm hoặc vài nghìn VSG, nghĩa là 5 - 10% số gen của tiên mao trùng được biểu hiện ở kháng nguyên bề mặt này

- Cơ chế di truyền của kháng nguyên biến đổi

Khi kháng thể đặc hiệu kết hợp với phân tử của kháng nguyên bề mặt (VSG), làm tiêu tan tiên mao trùng thì đó cũng là nguyên nhân chính thúc đẩy sự hoạt hoá của gen Kết quả là các phân tử kháng nguyên VSG được thay đổi hoàn toàn bằng các phân tử VSG mới Lúc này, kháng thể đặc hiệu lúc trước đã không còn tác dụng đối với kháng nguyên mới này

Theo Barry J D và Tumer C M R (1991) [49], Vanhamme và cs (1995) [165], các VSG được mã hoá nhờ các gen chuyên biệt Mỗi gen VSG được hoạt hoá một cách chọn lọc, dẫn đến tổng hợp ra một loại kháng nguyên VSG Mỗi gen VSG mới tạo ra một loại kháng nguyên VSG mới Trong bộ gen của tiên mao trùng tồn tại một số lớn gen VSG, các gen này có nhiều cơ chế sắp xếp khác nhau, do vậy ở gia súc bị bệnh mãn tính tiên mao trùng có thể tạo ra nhiều VSG khác nhau Cơ chế biến đổi kháng nguyên theo 2 cách: cách thứ nhất là, sử dụng lần lượt các điểm biểu hiện khác nhau, không có sự sắp xếp của AND Các điểm biểu hiện khác nhau sẽ mang các gen VSG khác nhau, sự luân phiên này dẫn đến sự thay đổi type kháng nguyên

Cơ chế nói trên quan sát được chủ yếu ở giai đoạn đầu của quá trình cảm nhiễm Có

lẽ ở giai đoạn đầu chưa có đáp ứng miễn dịch của vật chủ đối với VSG, điều này không gây ra một cản trở hoạt hoá tự nhiên của các điểm biểu hiện gen này Cách thứ hai là, tập hợp các đoạn AND khác nhau để tái tổ hợp gen, mà việc tái tổ hợp này cho phép thay thế hoàn toàn hoặc từng phần gen, hoặc việc thay thế diễn ra dựa vào sự chuyển đổi gen chứ không phải dựa vào tái tổ hợp gen Trường hợp này được diễn giải như sau: Một gen hoạt hoá được thay thế bằng bản sao chép của một gen khác

Sự thay thế một phần của gen đã tạo ra loại gen phức hợp và đặc trưng

1.1.2 Dịch tễ học bệnh tiên mao trùng

1.1.2.1 Phân bố của bệnh

Bệnh tiên mao trùng phân bố rất rộng, từ phía Tây sang phía Đông bán cầu Phía Tây bán cầu thuộc châu Mỹ, phía Đông bán cầu trải dài từ châu Phi đến Philippine Theo Euzeby (1984), bệnh phổ biến ở trâu, bò, ngựa các nước nhiệt đới ở châu Phi, châu Á và Nam Mỹ

Ở châu Phi, bệnh trải dài từ Tây sang Đông, phía Bắc qua vùng sa mạc Sahara, dọc theo bờ biển Atlantique Địa trung hải

Bệnh tiên mao trùng xảy ra với tên gọi "bệnh Surra” ở Ả rập Saudi, Yêmen,

Sultanate, Ả Rập thống nhất, Thổ Nhĩ Kỳ, Israel, Syrie, Afganistan, Pakistan

Ở châu Á, bệnh xuất hiện ở Trung Á (thuộc Liên Xô cũ), Ấn Độ, Malaysia, bán đảo Đông Dương, Trung Quốc, Indonexia, Philippine

Ở châu Âu, bệnh xuất hiện ở Bungaria (nay đã được thanh toán), hiện chỉ còn

ở vùng Volga và Nam Capcase (Liên Xô cũ)

Ở châu Mỹ, bệnh xuất hiện ở Trung Mỹ, Nam Mỹ, đặc biệt phổ biến ở Brazil, Mexico, Venezuela, Colombia

Châu Úc cũng đã được xác định là có bệnh tiên mao trùng (Reid, 2002 [144]) Losos G T và Ikede B O 1972 [103] cho rằng, bệnh tiên mao trùng phổ biến nhất ở châu Á và châu Phi, từ Ấn Độ đến Srilanca, Trung Quốc, Indonexia, Thái Lan, Camphuchia, Lào, Iran, Philippines

Ở Philippine, bệnh tiên mao trùng đã xảy ra tại 13 khu vực Trong đó, loài trâu sống ở vùng đầm lầy có tỷ lệ nhiễm bệnh cao nhất, sau đó đến ngựa Tuy nhiên, tỷ

lệ chết cao nhất lại là ở ngựa và ít hơn ở trâu, bò (Manuel M F., 1998 [108])

Mekata H và cs (2009) [109] đã phân lập được 10 chủng T evansi gây bệnh

cho trâu tại Philippines và cho biết, độc lực của mỗi chủng là khác nhau khi gây

bệnh cho chuột thí nghiệm

Ở Việt Nam, bệnh tiên mao trùng thấy ở hầu hết các vùng sinh thái khác nhau: miền núi, trung du, đồng bằng và ven biển Theo Phạm Sỹ Lăng (1982) [15], bệnh tiên mao trùng có ở tất cả các tỉnh miền Bắc (Bắc Kạn, Lạng Sơn, Tuyên Quang, Thái Nguyên, Ninh Bình và Hà Tây) Trâu, bò nhiễm bệnh với tỷ lệ cao và khác nhau giữa các vùng khác nhau

1.1.2.2 Vật chủ và côn trùng môi giới truyền bệnh tiên mao trùng

* Vật chủ:

Trong tự nhiên, tiên mao trùng ký sinh ở hầu hết các loài thú nuôi và thú hoang, thấy nhiều hơn ở trâu, bò, ngựa, trâu rừng, bò rừng, hươu, nai, hổ, báo, sư tử, chó, mèo, lạc đà, voi, thỏ, chuột cống, chuột lang, chuột bạch Trâu, bò mọi lứa

tuổi đều nhiễm tiên mao trùng Theo tổ chức dịch tễ thế giới, tiên mao trùng T

evansi và một số loài khác còn ký sinh ở người (Phạm Sỹ Lăng và cs., 2008 [19])

Mặc dù đều là vật chủ của T evansi, song các loài có đặc điểm sinh học khác nhau

rất nhiều Sau đây là đặc điểm sinh học của một số loài vật chủ được nghiên cứu trong đề tài:

- Đặc điểm sinh học của trâu:

Trâu Việt Nam thuộc nhóm trâu đầm lầy Về cơ bản trâu nội thuộc một giống, nhưng tuỳ theo điều kiện nuôi dưỡng của từng nơi mà trâu được phân hoá thành hai loại hình và quen được gọi theo tầm vóc là trâu ngố (to) và trâu gié (nhỏ hơn) Tuy nhiên sự phân biệt này cũng không có ranh giới cụ thể

Trâu có ngoại hình vạm vỡ, đầu hơi nhỏ; trán và sống mũi thẳng, có con hơi võng; tai mọc ngang, hay ve vẫy; sừng dài, dẹt, hình cánh cung, hướng về phía sau và hơi vểnh lên trên Cổ con đực to tròn, con cái nhỏ và hẹp, không có yếm Trâu không

có u vai, lưng thẳng, mông xuôi, ngực nở Đuôi trâu dài đến kheo, tận cùng có chòm lông Đa số trâu có lông và da màu đen xám, dưới hầu và trước ức có khoang lông màu trắng Có một số trâu (5 - 10 %) có lông và da màu trắng (trâu bạc)

Tầm vóc trâu khá lớn: khối lượng sơ sinh khoảng 28 - 30 kg, trưởng thành đạt khối lượng 400 - 500 kg Khả năng sinh sản của trâu nói chung kém, hiện tượng động dục biểu hiện không rõ và mang tính mùa vụ Trâu cái thường đẻ 3 năm 2 lứa, sức sản xuất sữa thấp, chỉ đủ cho con bú, nhưng tỷ lệ mỡ sữa rất cao (9 - 12 %) Trâu Việt Nam có khả năng lao tác tốt

Trâu có khả năng thích nghi tốt, khả năng chống bệnh tật cao Tuy nhiên, trâu cũng dễ mắc các bệnh truyền nhiễm và bệnh ký sinh trùng nói chung, trong đó có bệnh tiên mao trùng

- Đặc điểm sinh học của bò:

Ở nước ta hiện nay có hai giống bò là bò nội và bò nhập nội Tuy nhiên, giống

bò được chăn nuôi chủ yếu tại các địa phương vẫn là bò nội Bò nội ở nước ta được

phân bố rộng và thường được gọi theo tên địa phương như bò Thanh Hoá, bò Nghệ

An, bò Lạng Sơn, bò Phú Yên… Mặc dù có sự khác nhau nhất định về một vài đặc điểm màu lông và thể vóc, nhưng chưa có cơ sở nào khẳng định đó là những giống

bò khác nhau, cho nên các loại bò nội của ta được gọi chung là bò Vàng Việt Nam

Bò nội thường có sắc lông màu vàng, vàng nhạt hoặc vàng cánh dán và không có thiên hướng sản xuất rõ rệt

Ngoại hình bò Vàng cân xứng: đầu con cái thanh, sừng ngắn; con đực đầu to, sừng dài chĩa về phía trước; mạch máu và gân mặt nổi rõ; mắt tinh, lanh lợi Cổ con cái thanh, cổ con đực to; lông cổ thường đen; yếm kéo dài từ hầu đến xương ức; da

có nhiều nếp nhăn U vai con đực cao, con cái không có; lưng và hông thẳng, hơi rộng; bắp thịt nở nang Bụng to, tròn nhưng không sệ Bốn chân thanh, cứng cáp; 2 chân trước thẳng, 2 chân sau đi thường chạm kheo

Bò nội có nhược điểm là tầm vóc nhỏ: khối lượng sơ sinh khoảng 14 - 15 kg, lúc trưởng thành con cái nặng 160 - 200 kg, con đực nặng 250 - 280 kg Tuổi phối giống lần đầu khoảng 20 - 24 tháng Tỉ lệ đẻ hàng năm khoảng 50 - 80 %, khả năng cho sữa thấp (chỉ đủ cho con bú) nhưng tỷ lệ mỡ sữa rất cao (5 - 5,5 %) Bò Vàng

có khả năng làm việc dẻo dai ở những chân đất nhẹ, có tốc độ đi khá nhanh

Bò Vàng có ưu điểm nổi bật là có khả năng thích nghi tốt, khả năng chống bệnh tật cao

- Đặc điểm sinh học của chuột bạch:

Chuột bạch thuộc loài chuột nâu Rattus norvegicus và thường có bộ lông màu

trắng Chuột bạch tính hiền, khả năng sinh sản rất tốt nên được nuôi và nhân đàn một cách dễ dàng Chuột bạch được sử dụng phổ biến trong các thí nghiệm khoa học về lĩnh vực y học, sinh học và thú y do đặc tính mẫn cảm với các mầm bệnh của loài này Chuột bạch còn được dùng để thử tác dụng bảo hộ và tác dụng phụ của vắc-xin, thử tác dụng chữa bệnh của thuốc, của các tia xạ, tác dụng và ảnh hưởng của một loại thức ăn…

- Đặc điểm sinh học của thỏ:

Thỏ là loài vật nhạy cảm với các tác nhân ngoại cảnh, ở nước ta nhiệt độ môi trường thích hợp nhất với thỏ là 20 - 29 0C Tần số hô hấp của thỏ là 60 - 90 lần/ phút Nhịp đập tim thỏ rất nhanh và yếu, trung bình từ 100 - 120 lần/ phút Thỏ ít tuyến mồ hôi dưới da, nếu nhiệt độ không khí cao, thỏ thải nhiệt chủ yếu qua đường

hô hấp Nếu nhiệt độ không khí tăng nhanh và nóng kéo dài trên 35 0C thì thỏ thở nhanh và nông để thải nhiệt, khi đó thỏ dễ bị cảm nóng

Cấu tạo khoang mũi của thỏ rất phức tạp, có nhiều vách ngăn chi chít, lẫn các rãnh xoang ngóc ngách, vì vậy khi hít thở phải bụi bẩn thì thỏ dễ bị viêm xoang mũi Thỏ rất thính và tinh, trong đêm tối thỏ vẫn có thể phát hiện được tiếng động nhỏ xung quanh, do thỏ rất nhát nên cần nuôi thỏ ở những nơi yên tĩnh, hạn chế tiếng ồn Thỏ là loài dạ đày đơn, có khả năng tiêu hóa chất sơ nhờ hệ vi sinh vật ở manh tràng Thỏ có thể ăn 100% thức ăn thô xanh nhưng không ăn được 100% thức ăn tinh trong khẩu phần

Thỏ thường được động dục lúc 2,5 - 3 tháng tuổi tuỳ thuộc vào giống và nuôi dưỡng Thời gian mang thai của thỏ là 28 - 32 ngày Trước khi đẻ thỏ mẹ thường cắp, nhặt cỏ

lá vào ổ và nhổ lông ở bụng tạo thành tổ ấm mềm mại, mỗi lứa thường đẻ 6 - 9 con Thỏ mẹ vừa có chức năng tiết sữa, vừa có khả năng dưỡng thai nên thỏ mẹ vừa đẻ được 1 - 3 ngày cũng có thể cho phối giống được và chửa đẻ bình thường

* Côn trùng môi giới truyền bệnh tiên mao trùng:

Sự lây truyền tiên mao trùng từ trâu, bò ốm sang trâu, bò khoẻ là nhờ các loài

ruồi hút máu (thuộc họ phụ Stomoxydinae) và các loài mòng hút máu (thuộc họ

Tabanidae) Ruồi và mòng hút máu gia súc bị bệnh, hút luôn cả tiên mao trùng vào

vòi hút, sau đó lại hút máu gia súc khoẻ, trong khi hút máu sẽ truyền tiên mao trùng

từ vòi hút vào máu con vật khoẻ Sự lây truyền này mang tính chất cơ học Như vậy, ruồi và mòng hút máu là những vật môi giới truyền bệnh tiên mao trùng quan trọng

Hình 1: Cơ chế lây truyền bệnh tiên mao trùng

- Vị trí của một số loài ruồi, mòng trong hệ thống phân loại động vật học

Loài Tabanus striatus Fabricius, 1787

Họ Muscidae Giống Stomoxys Loài Stomoxys calcitrans Linnaeus, 1758

- Chu kỳ phát triển của ruồi, mòng:

Theo Michael W DuPonte và Linda Burnham Larish (2003) [111]: ruồi, mòng nói chung và ruồi, mòng hút máu đều có chu kỳ phát triển trải qua 4 giai đoạn là trứng, ấu trùng (dòi), nhộng và trưởng thành Giai đoạn ấu trùng trải qua 3 thời kỳ rồi mới phát triển thành nhộng

Hình 2: Chu kỳ phát triển của ruồi, mòng

John B Campbell (2006) [95] cho rằng, họ Stomoxys phát sinh từ châu Phi, trên thế giới có 18 loài thuộc giống Stomoxys

Don Rutz và cs (2007) [74] cho biết, thời gian hoàn thành vòng đời của

Stomoxys calcitrans là 21 ngày, tuổi thọ khoảng 20 - 30 ngày

- Thành phần loài ruồi, mòng hút máu ở nước ta:

Theo Phan Địch Lân (1974) [20], (2004) [23], phần lớn các loài mòng tập trung

ở khu vực miền núi và trung du Trong 53 loài mòng thì có tới 44 loài phân bố ở vùng rừng núi có độ cao dưới 1.000 mét so với mặt nước biển, càng lên cao số loài càng ít dần (độ cao trên 1.000 mét chỉ có 26 loài) Ở vùng trung du (rừng thưa, độ cao không quá 500 mét so với mặt nước biển có 27 loài; vùng đồi trọc chỉ có 9 - 11 loài; vùng rừng núi ven biển chỉ phát hiện được 8 loài Những loài mòng phổ biến ở tất cả các

vùng là: Tabanus rubidus, T striatus, Chrysops dispar, Chrysozoma assamensis Những loài mòng chỉ gặp ở vùng núi là: Tabanus flavistriatus, Tabanus fumifer,

Chrysops vander

Miền Bắc nước ta có 4 loài ruồi hút máu, 2 loài phổ biến ở tất cả các vùng là

Stomoxys calcitrans và Liperosis exigua; 2 loài chỉ thấy ở những vùng sinh cảnh đặc

biệt: loài Bdellolarynx sanguinolentus (chỉ xuất hiện ở vùng có độ cao dưới 1.000 mét), loài Stomoxys indica (chỉ thấy ở vùng núi Cẩm Thuỷ - Thanh Hoá)

- Vai trò truyền bệnh tiên mao trùng của ruồi, mòng:

Phạm Sỹ Lăng (1982) [15] cho rằng, thời gian xâm nhập của tiên mao trùng càng lâu thì tỷ lệ gây bệnh càng giảm, điều này có thể do thời gian càng lâu thì số lượng và

độc lực của Trypanosoma evansi trong ruồi, mòng càng giảm dần

Phan Địch Lân (2004) [23] cho biết: hình thái tiên mao trùng khi ở trong vòi ruồi, mòng biến đổi theo thời gian: từ 1 - 34 giờ có hình thái, kích thước bình thường; 35 - 45 giờ: tiên mao trùng có hình dạng thay đổi, tăng kích thước chiều rộng và thô dần; 46 - 53 giờ: tiên mao trùng trương to, duỗi thẳng, mất khả năng di động và ngừng hẳn hoạt động

- Thời gian hoạt động của ruồi, mòng hút máu:

Theo Phan Văn Chinh (2006) [1]: ở các tỉnh miền Trung mòng hoạt động 9 tháng, ruồi hút máu hoạt động kéo dài suốt 12 tháng trong năm, nhưng đạt cao điểm vào tháng 5 - 8 Đây là thời gian nóng, ẩm nên ruồi, mòng hoạt động mạnh nhất

Ruồi Stomoxys calcitrans hoạt động quanh năm từ tháng 1 đến tháng 12, đạt cao

điểm từ tháng 5 đến tháng 8

Nguyễn Thị Kim Lan (2012) [14] cho biết: mùa phát sinh bệnh tiên mao trùng

có liên quan chặt chẽ với mùa côn trùng hoạt động Ruồi và mòng thường hoạt động mạnh từ tháng 5 đến tháng 9 hàng năm, sau đó giảm đi

1.1.3 Đặc điểm bệnh lý và lâm sàng của bệnh

1.1.3.1 Đặc điểm bệnh lý

Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [12] cho biết: khi ruồi, mòng đốt, hút máu

và truyền tiên mao trùng vào trâu, bò, ngựa, tiên mao trùng xâm nhập vào da, gây ra vết viêm trên mặt da Có thể quan sát được phản ứng viêm ở da của thỏ, cừu, dê và

bò gây nhiễm thực nghiệm tiên mao trùng, kích thước chỗ viêm phụ thuộc vào số lượng tiên mao trùng được tiêm truyền (ước chừng khoảng 108 tiên mao trùng có thể gây viêm da ở vị trí tiêm truyền), một số lượng lớn tiên mao trùng phát triển tại chỗ viêm này

Vào máu, tiên mao trùng nhân lên theo cấp số nhân trong máu, trong bạch huyết và các mô khác của cơ thể vật chủ theo cách phân chia theo chiều dọc Số lượng tiên mao trùng trong máu không phải lúc nào cũng như nhau Mật độ tiên mao trùng thay đổi theo ngày Biểu đồ sóng tiên mao trùng cho thấy, xen kẽ giữa những sóng tiên mao trùng mạnh là những đợt sóng yếu Mỗi đợt sóng tiên mao trùng bắt đầu bằng sự tăng số lượng tiên mao trùng trong máu, sau đó giảm và khó phát hiện thấy tiên mao trùng Mỗi đợt tiên mao trùng tăng lên trong máu là biểu hiện sự xuất hiện một quần thể tiên mao trùng có kháng nguyên bề mặt mới, quần thể này có thể tiếp tục sinh sản và tồn tại một thời gian cho đến khi cơ thể xuất hiện kháng thể đặc hiệu với chúng

Tiên mao trùng phát triển nhanh trong máu, tiêu thụ glucose và các chất đạm, chất béo và chất khoáng trong máu ký chủ bằng phương thức thẩm thấu qua bề mặt

cơ thể để duy trì hoạt động và sinh sản Ở gia súc bị bệnh, trong 1 ml máu có thể có 10.000 - 30.000 tiên mao trùng Với số lượng nhiều như vậy, tiên mao trùng chiếm đoạt dinh dưỡng nhiều, làm cho súc vật bệnh gầy còm, thiếu máu và mất dần khả năng sản xuất sữa, thịt, mất dần khả năng sinh sản và giảm sức đề kháng với các bệnh khác

Sống trong máu vật chủ, tiên mao trùng còn sản sinh ra độc tố Trypanotoxin,

độc tố này gồm: độc tố do tiên mao trùng tiết ra qua màng thân trong quá trình sống

và độc tố do xác chết của tiên mao trùng phân huỷ trong máu Độc tố của tiên mao trùng tác động lên hệ thần kinh trung ương làm rối loạn trung khu điều hoà thân nhiệt, gây sốt cao và gián đoạn (lúc sốt, lúc hết sốt xen kẽ nhau) Khi sốt cao thường có rối loạn về thần kinh (run rẩy, bại chân…) Độc tố phá huỷ hồng cầu, ức chế cơ quan tạo máu làm cho vật chủ thiếu máu và suy nhược dần Độc tố còn tác động tới bộ máy tiêu hoá, gây rối loạn tiêu hoá, làm con vật ỉa chảy Hội chứng tiêu chảy có thể xảy ra khi xuất hiện tiên mao trùng trong máu con vật bệnh

Khi tăng lên với số lượng lớn trong máu, tiên mao trùng còn làm tắc các mao mạch, gây ứ máu, làm tăng tính thấm thành mạch, dần dần tạo ra các ổ thuỷ thũng chất keo vàng dưới da

1.1.3.2 Triệu chứng lâm sàng của trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng

- Hội chứng thần kinh: một số trâu, bò khi lên cơn sốt còn thể hiện hội chứng thần kinh như điên loạn, mắt đỏ ngầu, húc đầu vào tường, chạy vòng quanh, kêu rống lên Trường hợp nhẹ thấy run rẩy từng cơn, mắt trợn ngược rồi ngã vật xuống, sùi bọt mép giống như trâu bị cảm nắng Sau 20 - 30 phút con vật lại đứng dậy đi lại được Những trâu, bò mắc bệnh ở thể cấp tính thường có triệu chứng lâm sàng như trên Trâu, bò bị bệnh mạn tính thường kéo dài, cơ thể suy yếu, liệt hai chân sau, nằm tư thế quỳ và không đi lại được Mặc dù nằm liệt nhưng vẫn ăn và nhai lại cho đến khi sắp chết

- Phù thũng dưới da: phù thũng thường thấy ở vùng thấp của cơ thể như ở bốn chân (từ khớp khuỷu trở xuống), phần yếm, ngực, bộ phận sinh dục

- Viêm giác mạc và kết mạc mắt: triệu chứng này thấy ở hầu hết trâu, bò bệnh Mắt có dử trắng hay vàng, chảy liên tục, nếu nặng thì mắt sưng, đỏ ngầu Khi khỏi bệnh, mắt có màng trắng (cùi nhãn) kéo che kín giác mạc

- Hội chứng tiêu hoá: một số trâu, bò bệnh bị ỉa chảy nặng, phân lỏng, màu vàng, sau chuyển màu xám, có lẫn bọt và chất nhầy Các đợt ỉa chảy tiếp theo những cơn sốt cách quãng Ỉa chảy trong bệnh tiên mao trùng thường dai dẳng và con vật vẫn ăn được

- Gầy yếu, suy nhược: ở thể bệnh cấp tính trâu, bò gầy sút nhanh, chỉ sau 7 -

14 ngày từ khi phát bệnh con vật đã gầy rộc, mắt trũng sâu Nếu bệnh kéo dài thì con vật gầy xơ xác, lông dựng ngược, da khô nhăn nheo, niêm mạc mắt nhợt nhạt, lông dễ rụng, dần dần suy nhược cơ thể nặng, mất khả năng cày kéo và sinh sản Nếu gặp điều kiện bất lợi như thiếu ăn, rét mướt thì trâu, bò dễ chết Trong thực tế,

có khoảng 3 % số trâu bị bệnh ở thể ẩn vẫn béo khoẻ, làm việc bình thường khi được chăm sóc nuôi dưỡng tốt

Tình trạng thiếu máu thể hiện rõ trong bệnh do T evansi gây ra Theo Silva

Rams và cs (1995), Smith R D (1995), số lượng hồng cầu và hàm lượng huyết sắc

tố giảm, số lượng bạch cầu tăng, thành phần bạch cầu thay đổi: bạch cầu lymphô và bạch cầu ái toan tăng nhưng bạch cầu trung tính giảm, protein tổng số và albumin giảm rõ rệt

Phạm Sỹ Lăng (1982) [15] cho biết, khi protein tổng số và albumin giảm thì các thành phần α, β và γ - globulin đều tăng, chỉ số A/G < 0,5

Theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs (1999) [11]: trâu, bò bị bệnh thường thể hiện

ở thể mạn tính với những triệu chứng sau: sốt lên xuống với nhiệt độ 40 - 410C trong vòng 1 - 2 ngày, sau đó nghỉ sốt 2 - 6 ngày, rồi lại sốt Có trường hợp con vật sốt liên miên trong 18 ngày Niêm mạc mắt nhợt nhạt, mi mắt sưng, có hiện tượng hoàng đản Thuỷ thũng ở những vùng thấp của cơ thể, hồng cầu, huyết sắc tố giảm Gia súc có chửa dễ bị sảy thai

Phạm Sỹ Lăng và Lê Văn Tạo (2002) [18] cho biết, trâu, bò bị thiếu máu và suy nhược trong suốt quá trình bị bệnh Hồng cầu giảm thấp chỉ còn 3 triệu /1 mm3(trâu, bò khỏe: 5 - 6 triệu /1 mm3)

* Triệu chứng ở động vật khác:

Theo Aquino L P và cs (1999) [47], chó nhiễm T evansi có triệu chứng sốt

gián đoạn, niêm mạc nhợt nhạt, phù nề, con vật gầy yếu, các hạch bạch huyết sưng to Theo Sarah Womack và cs (2006) [150], dấu hiệu lâm sàng của bệnh có thể khác nhau tùy theo cá thể hoặc tùy theo loài Các dấu hiệu lâm sàng bao gồm giảm cân, ủ rũ, lười vận động, thiếu máu, suy nhược, các hạch bạch huyết sưng, phù thũng, nổi mề đay, rụng lông và sốt không liên tục Hiện tượng sảy thai và thai chết

lưu cũng là triệu chứng thường xảy ra Động vật nhiễm T evansi có thể không thể

hiện các triệu chứng lâm sàng

1.1.3.3 Bệnh tích của trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng

Theo Nguyễn Thị Kim Lan (2011) [13]: Trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng khi chết gầy xơ xác, mổ khám thấy có những biến đổi bệnh tích đại thể rõ rệt ở hệ tuần hoàn và hô hấp: tim nhão, xoang bao tim tích nước vàng; phổi sung huyết và tụ máu từng đám nhỏ; gan sưng to, nhạt màu; lách sưng, mềm nhũn và nhạt màu; hạch lâm

ba sưng và tụ máu trong hạch; cơ nhão, màu nhợt nhạt, nhát cắt rỉ nước; xoang ngực

và xoang bụng tích dịch màu vàng nhạt; có những đám keo nhầy màu vàng dưới vùng

da thuỷ thũng

1.1.4 Chẩn đoán bệnh tiên mao trùng

1.1.4.1 Phương pháp chẩn đoán lâm sàng

Có thể căn cứ vào các dấu hiệu lâm sàng của con vật mắc bệnh để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng Tuy nhiên, các biểu hiện lâm sàng đặc trưng của bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò, ngựa không phải lúc nào cũng phát hiện được Rất nhiều gia súc mang bệnh nhưng khó phát hiện các triệu chứng đặc trưng, nhất là đối với những gia súc mắc bệnh tiên mao trùng mạn tính Đối với gia súc mắc bệnh ở thể cấp tính, các biểu hiện bệnh đặc trưng là sốt cao, bỏ ăn, có triệu chứng thần kinh và chết nhanh Trâu bị bệnh mạn tính có thể thấy: sốt gián đoạn, gầy còm, thiếu máu kéo dài, viêm giác mạc, phù thũng ở bụng và chân sau, chết do kiệt sức (Phạm Sỹ Lăng, 1982 [15]) Triệu chứng sẩy thai có thể thấy ở trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng (Nguyễn Đăng Khải, 1995 [10])

Theo Damayanti R và cs (1994) [63]: trâu bệnh có những biểu hiện gầy yếu, ủ

rũ, kém vận động, bỏ ăn, khối lượng cơ thể giảm rõ rệt

1.1.4.2 Các phương pháp chẩn đoán thí nghiệm

* Phương pháp phát hiện tiên mao trùng:

Muốn phát hiện tiên mao trùng trực tiếp, có thể áp dụng những phương pháp sau:

- Phương pháp xem tươi (Direct smear)

- Phương pháp nhuộm Giemsa tiêu bản máu khô (Romanovsky)

- Phương pháp làm tan hồng cầu: dung dịch SDS (Sodium Dodecyl Sulfate)

là chất làm tan hồng cầu Nhờ dung dịch SDS, tiên mao trùng dễ dàng được phát hiện trong máu Dung dịch SDS rất độc nên tránh tiếp xúc với da và tránh hút bằng pipet Dung dịch SDS dễ bảo quản ở nhiệt độ thường trong nhiều tháng (Van Meirvenne, 1989)

- Phương pháp tập trung tiên mao trùng:

Người ta đã sử dụng phương pháp ly tâm tập trung tiên mao trùng bằng ống Haematocrit hoặc tách tiên mao trùng bằng gel DEAE - cellulose

Phương pháp ly tâm tập trung bằng ống Haematocrit (WOO, 1971): cho máu động vật nghi mắc bệnh vào ống Haematocrit, một đầu ống được bịt kín bằng chất dẻo matit, một đầu ống để hở Ly tâm với tốc độ 14.000 vòng/phút trong 5 phút Sau đó kiểm tra sự tập trung của tiên mao trùng tại vị trí tiếp giáp giữa huyết tương

- Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm:

Đây là phương pháp thường được ứng dụng để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng

ở Việt Nam Phương pháp này có ưu điểm là chính xác, do trực tiếp phát hiện thấy tiên mao trùng sau khi nhân chúng lên trong động vật thí nghiệm mẫn cảm Song, nhược điểm của phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm là khi cần chẩn đoán nhanh, với số lượng nhiều và thời gian ngắn thì phương pháp này không thể đáp ứng được

* Phương pháp chẩn đoán huyết thanh học:

Bằng các phương pháp huyết thanh học đặc hiệu có thể phát hiện kháng thể hoặc kháng nguyên tiên mao trùng

- Các phương pháp phát hiện kháng thể kháng tiên mao trùng

Khi tiên mao trùng ký sinh, cơ thể vật chủ sinh ra kháng thể đặc hiệu chống lại tiên mao trùng Những phương pháp sau cho phép phát hiện kháng thể kháng tiên mao trùng trong máu vật chủ:

+ Phương pháp ngưng kết trên phiến kính (SAT: Slide Agglutination Test): hoà

1 giọt huyết thanh của gia súc nghi mắc bệnh vào 1 giọt nước muối sinh lý trên phiến kính, sau đó cho 1 giọt máu chuột bạch có nhiều tiên mao trùng vào, trộn đều, đậy la men và soi dưới kính hiển vi (độ phóng đại 10 x 20 hoặc 10 x 40) Nếu thấy ngưng kết hình hoa cúc là (+) và ngược lại là (-) Phương pháp này đơn giản, dễ làm và có thể áp dụng trên diện rộng (Đoàn Văn Phúc, 1989 [30]; Lê Ngọc Vinh, 1992 [42]) Phạm Sỹ Lăng (1982) [15] cho biết, ngưng kết trên phiến kính giữa kháng nguyên tiên mao trùng sống có sẵn, với kháng thể có trong máu động vật nghi nhiễm có độ chính xác là 70 - 80%

+ Phương pháp LATEX (Latex Agglutination Test)

LATEX là phương pháp được dùng để phát hiện kháng thể lưu động có trong máu của gia súc mắc bệnh tiên mao trùng

Nguyên lý của phương pháp LATEX: khi kháng nguyên bề mặt T evansi gắn

lên các hạt latex kết hợp với kháng thể đặc hiệu kháng tiên mao trùng ở trên bản nhựa, thì sẽ xảy ra phản ứng ngưng kết giữa kháng nguyên và kháng thể Hiện tượng ngưng kết có thể quan sát được bằng mắt thường, và được giải thích là do kháng nguyên bề mặt tiên mao trùng được gắn lên các hạt latex là loại kháng nguyên hữu hình, có nhiều điểm quyết định tính kháng nguyên bề mặt (epitop surface) Còn kháng thể đặc hiệu kháng tiên mao trùng lại có nhiều điểm thụ thể (receptor) tương ứng, đặc hiệu với các điểm quyết định của kháng nguyên Do đó, khi kháng nguyên tiên mao trùng gặp kháng thể đặc hiệu kháng tiên mao trùng, sẽ có hiện tượng một phân tử kháng thể đặc hiệu liên kết với nhiều phân tử kháng nguyên và ngược lại Kết quả là các hạt latex cùng với kháng nguyên chụm lại, tạo thành đám ngưng kết có thể quan sát bằng mắt thường Kháng nguyên dùng cho phản ứng là kháng nguyên bề

mặt được tinh chế từ chủng T evansi không nhuộm màu

Phương pháp này có thể ứng dụng trong kiểm tra dịch tễ và có thể ứng dụng ở

cơ sở Tuy nhiên, tỷ lệ phát hiện bệnh không cao, do phương pháp này cho kết quả dương tính cả khi con vật khỏi bệnh nhưng vẫn còn kháng thể tồn tại trong huyết thanh Mặt khác, đối với những súc vật mới nhiễm tiên mao trùng, trong huyết thanh chưa có kháng thể nên khi kiểm tra bằng phương pháp LATEX sẽ cho kết quả

Trong phương pháp IFAT, huyết thanh dương chuẩn được lấy từ trâu, bò mắc bệnh tiên mao trùng, huyết thanh âm chuẩn được lấy từ trâu bò khoẻ mạnh, huyết thanh cần chẩn đoán là huyết thanh lấy từ gia súc nghi mắc bệnh

Cách tiến hành: sử dụng huyết thanh dương chuẩn đã gắn với thuốc nhuộm huỳnh quang trộn với huyết thanh của động vật nghi mắc bệnh, rồi cố định trên slide Sau đó, rửa sạch slide để loại bỏ những kháng thể huỳnh quang không gắn với kháng nguyên rồi đem soi dưới kính hiển vi huỳnh quang Nếu thấy kháng nguyên phát sáng dưới kính hiển vi huỳnh quang là dương tính, không phát sáng là âm tính (Gary E Kaiser, 2012 [81])

Ứng dụng phương pháp này ở Việt Nam, Lương Tố Thu (1994) [37] đã chế tạo conjugate huỳnh quang trên thỏ kháng IgG của bò để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng Độ pha loãng của conjugate tự chế sử dụng cho phản ứng là 1/8 và huyết thanh chuẩn pha loãng ớ 1/40 Theo Lương Tố Thu và Lê Ngọc Mỹ (1996) [38], độ nhậy của phương pháp IFAT là 71,25

Để tinh chế kháng nguyên T evansi dùng trong phản ứng miễn dịch huỳnh

quang gián tiếp chẩn đoán bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò, Vương Thị Lan Phương

(2002) [31], (2004) [32] đã nghiên cứu kháng nguyên bề mặt của T evansi phân lập

từ trâu, bò ở 6 tỉnh phía Bắc Việt Nam và cho biết: đã thu được 6 mẫu tiên mao trùng từ 6 tỉnh, tiến hành phân dòng, phân VAT (Variable Antigenic Type) và thu

được 26 VAT thuộc 6 kho kháng nguyên khác nhau Bằng phản ứng dung giải miễn dịch và phương pháp thấm miễn dịch, tác giả đã xác định được sự thay đổi kháng

nguyên bề mặt của T evansi: đa số các VAT của các kho kháng nguyên khác nhau

là khác nhau, chỉ có 8/26 VAT có hiệu giá kháng thể đơn giá đặc hiệu, có phản ứng chéo với các VAT của các kho kháng nguyên khác Các VAT trội xuất hiện sớm trong 4 tuần lễ đầu nhiễm bệnh, có tính kháng nguyên mạnh, có thể nghiên cứu ứng dụng chế kháng nguyên chẩn đoán Từ đó, tác giả đã tinh chế kháng nguyên theo phương pháp tách tiên mao trùng để dùng trong phản ứng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp, ứng dụng chẩn đoán bệnh tiên mao trùng cho độ nhạy và độ đặc hiệu cao

+ Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

Phương pháp ELISA là một trong những phương pháp hiện đại được ứng dụng

để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng

Nguyên lý: dùng kháng thể hoặc kháng thể kháng globulin (kháng kháng thể)

có mang một enzym (phosphatase hoặc peroxydase) được gắn trên mảnh Fc, cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên Sau đó, cho cơ chất sinh màu vào

Cơ chất này sẽ kết hợp với enzym và bị enzym phân huỷ tạo nên màu So sánh với màu của quang phổ kế sẽ định lượng được mức độ của phản ứng

Phương pháp ELISA hiện đang được sử dụng rộng rãi ở các nước trên thế giới

và Việt Nam

* Các phương pháp phát hiện kháng nguyên tiên mao trùng

- Phương pháp ELISA kháng nguyên (Ag - ELISA)

Đây là phương pháp sử dụng phản ứng ELISA kháng nguyên để phát hiện kháng nguyên lưu động trong máu của gia súc nhiễm bệnh Phản ứng dựa trên kháng thể đơn dòng đặc hiệu với tiên mao trùng

- Phản ứng Suratex: là phản ứng ngưng kết giữa các hạt latex được gắn kháng

thể đơn dòng với kháng nguyên lưu động trong máu động vật nhiễm tiên mao trùng (Nantulya, 1994) Phản ứng này hiện đang được thử nghiệm và đánh giá ở thực địa Cách tiến hành: lấy huyết thanh, huyết tương hoặc máu của động vật nghi mắc bệnh trộn với thuốc thử Suratex trên thẻ kiểm tra, lắc nhẹ thẻ để trộn đều hỗn hợp Sau 2 - 3 phút, tiến hành đọc kết quả: nếu xảy ra hiện tượng ngưng kết, kết luận mẫu dương tính và ngược lại (Nantulya V M và Diall O., 1998 [123])

* Phương pháp phát hiện ADN của tiên mao trùng bằng phản ứng PCR (Polymerase Chain Reaction)

PCR là phương pháp hiện đại nhất được đưa vào ứng dụng để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng trong những năm gần đây

Nguyên lý: dựa vào phản ứng chuỗi Polymerase để xác định sự có mặt AND của tiên mao trùng trong máu động vật nhiễm bệnh

1.1.5 Phòng, trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò, ngựa

1.1.5.1 Phòng bệnh

Để phòng ngừa bệnh tiên mao trùng có hiệu quả cao, các nhà khoa học đã đề nghị áp dụng 3 biện pháp sau:

* Diệt tiên mao trùng trên cơ thể ký chủ:

Diệt tiên mao trùng ký sinh ở vật chủ không những ngăn chặn được tác hại gây bệnh của chúng mà còn làm cho bệnh không lây lan Các biện pháp cụ thể là:

- Phát hiện gia súc nhiễm tiên mao trùng ở vùng có bệnh và những vùng lân cận, nhốt riêng trong chuồng có lưới để ngăn côn trùng và điều trị triệt để cho gia súc bệnh

- Ở những vùng không có bệnh thì không nhập gia súc từ vùng có bệnh về Nếu thật cần thiết thì chỉ nhập những gia súc khoẻ (có kết quả kiểm tra âm tính với tiên mao trùng), song vẫn cần nhốt riêng để theo dõi Nếu không bị bệnh mới cho nhập đàn Phát hiện và diệt những loài thú hoang nghi là nguồn tàng trữ mầm bệnh, không chăn thả gia súc trong khu vực có những loài đó sinh sống

* Diệt ruồi, mòng môi giới truyền bệnh:

- Diệt ruồi, mòng hút máu bằng biện pháp thay đổi sinh thái:

Thay đổi sinh thái là thay đổi điều kiện sống, làm cho ruồi, mòng không sinh sản, không thực hiện được chu kỳ phát triển

Phát quang cây cối ở từng khu vực, không để nước tù đọng, ủ phân để diệt trứng và ấu trùng ruồi, mòng, làm chuồng gia súc có lưới ngăn là các biện pháp hữu hiệu, tạo ra những điều kiện bất lợi cho đời sống của ruồi, mòng

Tuy nhiên, do ruồi, mòng có khả năng di chuyển khá mạnh nên các biện pháp trên phải thực hiện đồng thời trên phạm vi rộng mới có hiệu quả

Challier A (1974) cho biết, ở Nigieria, việc phát quang cây cối xung quanh hồ

và các con sông trong một khu vực rộng 400 - 800 mét, dài 10.000 mét chỉ hạn chế được một phần hoạt động của những côn trùng môi giới truyền bệnh tiên mao trùng

- Diệt ruồi, mòng bằng hoá dược:

Có thể dùng các hoá dược tiêu diệt ruồi, mòng môi giới của tiên mao trùng Các hoá dược đã được dùng là: endosulfan, brophos, dieldrine, tetracloreinphos…

- Diệt ruồi, mòng hút máu bằng phương pháp sinh học:

Các nhà khoa học đã phát hiện được 25 loài ong và côn trùng ký sinh gây hại cho các loài ruồi, mòng môi giới truyền bệnh tiên mao trùng Một số loài vi khuẩn

có thể xâm nhập vào cơ thể ruồi, mòng làm chúng mắc bệnh và chết

Laird (1974) đã thử nghiệm và phân lập được một số loài vi khuẩn như:

Bacillus thuringiensis, B mathisi để tiêu diệt các loài ruồi hút máu Biện pháp này

có ưu điểm là không ảnh hưởng đến môi trường sinh thái

Jordan A N và cs (1974) đã gây đột biến gen của ruồi hút máu bằng một số hoá chất và tia sáng có bước sóng ngắn, bằng phương pháp di truyền quần thể, đã tạo ra những ruồi đực vô tính rồi thả với ruồi cái trong tự nhiên Kết quả là làm cho ruồi không sinh sản được Phương pháp này có nhiều khả năng thành công nhưng rất tốn kém

Nhìn chung, các biện pháp tiêu diệt ruồi, mòng môi giới đã có hiệu quả nhất định nhưng cũng còn nhiều hạn chế

* Phòng bệnh cho gia súc bằng hoá dược:

Năm 1978, tại hội thảo quốc tế chuyên đề về phòng chống bệnh tiên mao trùng cho vật nuôi, các nhà khoa học đã kết luận, biện pháp sử dụng hoá dược để phòng bệnh rộng rãi cho gia súc ở những vùng có bệnh tiên mao trùng lưu hành cần phải được tiếp tục trong nhiều năm (Touratier L và cs., 1979 [160])

Hiện nay, thuốc Trypamidium, liều 0,5 mg /kgTT được khuyên dùng để phòng bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò

1.1.5.2 Điều trị bệnh

Một số loại hoá dược đã được dùng để điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu,

bò, ngựa ở nước ta từ những năm 60 đến nay, gồm:

- Naganin, liều 10 mg /kgTT Pha thuốc với dung dịch nước muối sinh lý hoặc nước cất thành dung dịch 10 %, tiêm tĩnh mạch

Phan Địch Lân và cs (1962), Phạm Sỹ Lăng và cs (1965) đã thử nghiệm

naganin và cho biết, thuốc có tác dụng tốt trong điều trị bệnh do T evansi gây ra trên

trâu, bò ở nước ta

bò bị bệnh

- Trypamidium samorin, liều 1 mg /kgTT Tiêm sâu bắp thịt

Nguyễn Quốc Doanh và cs (1996) [3] đã dùng trypamidium samorin điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò và xác định, thuốc có hiệu lực và độ an toàn rất cao (100 %)

Theo Phan Văn Chinh (2006) [1], thuốc trypamidium (liều 1 mg /kgTT) cho tỷ

lệ diệt hết tiên mao trùng là 100 %

- Trypazen liều 3,5 mg /kgTT

Điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò bằng trypazen với liều trên, Nguyễn Quốc Doanh và Phạm Sỹ Lăng (1997) [4] nhận thấy, thuốc rất an toàn, tỷ lệ khỏi bệnh là 100 %

Phạm Sỹ Lăng và Lê Văn Tạo (2002) [18] đã cho biết về thành phần, chỉ định, liều lượng và cách sử dụng của một số loại thuốc điều trị bệnh tiên mao trùng như sau:

* Berenil (Hãng Intervet - Hà lan):

Berenil là dung dịch tiêm, được hoàn nguyên từ dạng hạt, dùng điều trị bệnh đơn bào ký sinh trong máu của gia súc

Thành phần: mỗi gam dạng hạt chứa 445 mg diminazene aceturate và 555 mg phenuldimethyl parazolone (antipyrin) Sau khi pha, 1 ml chứa 70 mg diminazene aceturate và 87,3 mg phenuldimethyl parazolone (antipyrin)

Chỉ định: thuốc dùng điều trị bệnh đơn bào đường máu cho trâu, bò, cừu, ngựa

Liều áp dụng chung là 3,5 mg /kg TT Tùy thuộc vào thể trọng của gia súc mà liều áp dụng có thể đến 8 mg /kg TT, nhưng liều tối đa cho mỗi gia súc không vượt quá 4 gam /con

Đường tiêm: pha thuốc với nước cất, tiêm bắp thịt

Quy cách: gói lớn gồm 100 gói nhỏ (23,6 g /gói), mỗi gói nhỏ chứa 10,5 g hoạt chất

Chống chỉ định: không dùng cho chó và lạc đà

* Azidin (Công ty Hanvet): trong 1 lọ azidin 1,18 g chứa 525 mg diminazene aceturate

- Tác dụng: chữa và phòng bệnh ký sinh trùng đường máu cho trâu, bò, ngựa

- Liều lượng và cách sử dụng: Pha 1 lọ azidin 1,18 g với 7 ml nước cất, lắc cho đến khi tan hết, dùng cho 150 kg TT Tiêm sâu vào bắp thịt

Chú ý:

+ Nếu tiêm lượng thuốc lớn, nên tiêm 2 điểm khác nhau

+ Nếu cần thiết có thể tăng liều gấp đôi, song tổng liều không quá 7 lọ

+ Nếu thân nhiệt không giảm, tiêm nhắc lại sau 24 giờ

+ Dung dịch pha rồi có thể bảo quản ở nhiệt độ bình thường 5 ngày, trong tủ lạnh 4 - 8 0C bảo quản được 14 ngày

Hạn dùng: 5 năm

Bảo quản: nơi khô, râm mát

* Naganin (Tên khác: naganol): Thuốc được hãng Bayer chế tạo, sau đó nhiều nước đã sản xuất để sử dụng điều trị bệnh tiên mao trùng cho gia súc

Biệt dược: suramin, bayer 205, moranin, furno 309

- Tính chất: tên hóa học N - amino - benzoin - m - amino - pmetio - benzoin -

1 - naptilamin - 4 - 6 - 8 trisunfonat natri Là loại bột trắng mịn, màu hơi vàng chanh (naganol) hoặc hơi hồng (naganin), nhẹ, dễ hút ẩm, tan trong nước, không bị phá hủy trong nước đun sôi (100 0C) Khi pha, dung dịch trong, hơi ánh vàng chanh (naganol) hoặc hơi hồng, chuyển thành nâu nhạt (naganin)

- Tác dụng: có tác dụng mạnh trong điều trị bệnh tiên mao trùng ở gia súc Thuốc được đào thải qua thận nhưng tồn lưu lâu ở gan và cơ của động vật, vì vậy còn được dùng để phòng nhiễm tiên mao trùng

- Chỉ định: thuốc được chỉ định để điều trị các bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò,

ngựa do Trypanosoma evansi, T brucei, T vivax, T congolense…

- Liều dùng: dùng cho trâu, bò, ngựa với liều dùng và liệu trình như sau:

+ Ngày thứ nhất: dùng liều 0,01 g /kg TT

+ Ngày thứ hai, thứ ba: cho súc vật nghỉ

+ Ngày thứ tư: dùng liều 0,01 g /kg TT

Thuốc pha với nước cất theo tỷ lệ 10 %, có thể tiêm bắp thịt hoặc tiêm tĩnh mạch Khi tiêm thuốc vào tĩnh mạch cần tiêm trước thuốc trợ tim (cafein hoặc long não nước)

- Chú ý:

+ Một số súc vật có thể xuất hiện phản ứng cục bộ sau khi tiêm vào bắp thịt như: nơi tiêm sưng, thủy thũng kéo dài vài ngày Có thể tiêm cafein, vitamin B1 trong ba ngày, chỗ sưng sẽ hết dần

+ Một số súc vật có phản ứng toàn thân (khoảng 1%) như: chảy nước dãi, run rẩy, tim đập nhanh Có thể xử lý bằng cách cho gia súc vào nơi mát, tiêm vitamin B1, vitamin C và long não nước Khoảng một giờ sau phản ứng sẽ hết

+ Thuốc pha xong chỉ dùng trong thời gian 6 - 8 giờ

* Trypamidium (Tên khác: isometamidium): hãng Rhone - Merieux của Pháp sản xuất

Biệt dược: samorin (do các hãng thuốc của Anh sản xuất)

Tên hóa học: isometamidium hydrochlorur

- Tính chất: trypamidium là bột màu đỏ, mịn, tan dễ dàng trong nước thành dung dịch màu hồng Thuốc được đóng gói 1 g trong giấy thiếc, lọ chứa 10 g hoặc 25 g

- Tác dụng: thuốc có tác dụng diệt các loại tiên mao trùng trên gia súc (trâu,

bò, ngựa…) Ngoài tác dụng điều trị bệnh tiên mao trùng cấp và mạn tính, thuốc còn có khả năng tồn dư trong gan và tổ chức của động vật trong thời gian 50 - 60 ngày Do vậy thuốc có tính phòng nhiễm bệnh tiên mao trùng cho vật nuôi

- Chỉ định: thuốc được dùng để phòng và trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò,

ngựa do T evansi, T vivax, T brucei, T congolense

+ Liều phòng bệnh cho trâu, bò, ngựa: 0,5 mg /kg TT

+ Liều điều trị bệnh cho trâu, bò, ngựa: 1 mg /kg TT

Thuốc pha với nước cất (300 mg + 30 ml nước cất) Tiêm vào tĩnh mạch hoặc bắp thịt Khi tiêm tĩnh mạch cần tiêm thuốc trợ tim trước 15 - 20 phút Thuốc chỉ

tiêm 1 lần Nếu súc vật chưa khỏi bệnh thì sau 15 - 20 ngày tiêm nhắc lại lần thứ hai với liều như lần thứ nhất

- Chú ý:

+ Khi tiêm thuốc cần cho súc vật nghỉ lao tác

+ Chăm sóc súc vật, cho ăn uống tốt, không cần nhịn ăn khi dùng thuốc

+ Dung dịch thuốc đã pha chỉ dùng trong ngày

+ Khi súc vật sử dụng thuốc có phản ứng phụ (run rẩy, chảy dãi dớt) thì tiêm thuốc trợ tim và cho uống nước đường

1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG

1.2.1 Tình hình nghiên cứu trong nước

Theo Phạm Sỹ Lăng và Đào Trọng Đạt (1991) [16] tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng

ở bò tại các tỉnh phía Bắc dao động từ 7 - 13 %

Theo Nguyễn Đăng Khải (1995) [10], bệnh tiên mao trùng do T evansi là một

bệnh ký sinh trùng đường máu khá phổ biến ở trâu, bò miền Bắc Việt Nam

Phạm Sỹ Lăng và cs (1995) [17] đã kiểm tra 155 bò cày kéo ở một số địa phương thuộc Hà Bắc (cũ), thấy 32 bò cho kết quả dương tính với tiên mao trùng (chiếm 20,64%) Kiểm tra 168 bò sữa ở một số địa phương thuộc Hà Nội, thấy 20

bò cho kết quả dương tính với tiên mao trùng (chiếm 11,90%)

Theo Lê Đức Quyết (1995) [34], trâu ở một số tỉnh miền Nam và Tây Nguyên nhiễm tiên mao trùng là 22,12%; bò là 6,6 - 10,3%

Phan Lục và Nguyễn Văn Thọ (1995) [24] cho biết, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng

ở bò tại một số địa phương thuộc các tỉnh phía Bắc là 26,92 %

Nguyễn Quốc Doanh và cs (1996) [3] đã kiểm tra máu 73 trâu ở xã Tả Thanh Oai - Thanh trì - Hà Nội bằng phương pháp tiêm truyền chuột bạch, phát hiện 13

trâu có T evansi trong máu (chiếm 17,80 %) Kiểm tra máu 83 trâu ở xã Phấn Mễ

bằng phương pháp Card - test, đã phát hiện 25 trâu nhiễm bệnh (chiếm 30,12 %) Theo Hà Viết Lượng (1998) [26], tỷ lệ bò nhiễm tiên mao trùng ở các tỉnh miền Trung là 8,99 %

Nguyễn Quốc Doanh và Phạm Sỹ Lăng (2001) [7] đã kiểm tra 760 cá thể bò sát

(gồm 670 rắn và 90 ba ba), thấy tỷ lệ nhiễm T evansi trung bình là 7,89 % Tỷ lệ

nhiễm ở các loài bò sát không giống nhau do đặc tính sinh học của chúng khác nhau

Phan Địch Lân (2004) [23] đã tổng hợp kết quả điều tra 3.172 trâu ở các tỉnh đồng bằng và cho biết: trâu dưới 3 năm tuổi nhiễm thấp nhất (3,2 - 6,l %), trâu 3 - 5 năm tuổi nhiễm cao hơn (l0,6 - 12,7 %), trâu 6 - 8 năm tuổi nhiễm cao nhất (12,9 - 14,8 %), trâu trên 9 năm tuổi tỷ lệ nhiễm giảm thấp hơn trâu 3 - 8 năm tuổi

Theo Phan Văn Chinh (2006) [1], tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao nhất ở trâu, bò 4

- 8 năm tuổi (trâu: 12,71 %; bò: 5,77 %), thấp nhất ở trâu, bò dưới 3 năm tuổi (6,92 %

và 2,31 %) Bệnh thường lây lan trong các tháng nóng ẩm, mưa nhiều (từ tháng 4 đến tháng 9) Thời gian này điều kiện sinh thái thuận lợi cho các loài ruồi, mòng phát triển, hoạt động mạnh, hút máu súc vật và truyền tiên mao trùng

Nguyen Q D và cs (2013) [126] cho biết: trong 585 mẫu huyết thanh trâu thu thập tại Thái Nguyên và Cao Bằng có 131 mẫu dương tính với tiên mao trùng,

chiếm tỷ lệ 22,4 % Trong đó, tỷ lệ nhiễm thấp nhất ở trâu nhỏ hơn 3 năm tuổi

Phạm Sỹ Lăng và Đào Trọng Đạt (1991) [16] cho biết, trong điều kiện nóng

ẩm của Việt Nam, ruồi hút máu mang mầm bệnh tiên mao trùng với tỷ lệ từ 5,61 - 19,34 % và mòng với tỷ lệ 3,84 - 24,9 %

Theo dẫn liệu của Nguyễn Đăng Khải (1995) [10], những ca sảy thai đầu tiên do tiên mao trùng đã được ghi nhận trên đàn trâu Murrah nuôi tại trung tâm Phùng Thượng vào năm 1987 Tổng số có 28 trâu bị sảy thai, chiếm 46,6 % số trâu chửa đẻ

của trung tâm Qua xét nghiệm toàn đàn, thấy 34/78 trâu dương tính với T evansi Sử

dụng naganin để điều trị bệnh, hiện tượng sảy thai đã được ngừng lại nhanh chóng Theo Nguyễn Thị Kim Lan (2012) [14]: ở ngựa có 3 thể bệnh là cấp tính, á cấp tính và mạn tính Thời kỳ nung bệnh ở thể cấp tính và á cấp tính dài 1 - 1,5 tháng Thể mạn tính thì thời gian nung bệnh tới 4 - 6 tháng Ở ngựa thường có triệu chứng điển hình như: Sốt cao, thủy thũng (phù), xuất hiện triệu chứng thần kinh, thời kỳ cuối bốn chân bị tê liệt, con vật chết

Theo Nguyễn Quốc Doanh (1999) [6], các triệu chứng lâm sàng chủ yếu ở thỏ

nhiễm T evansi gồm: thủy thũng tai, thủy thũng bẹn, thủy thũng mi mắt, mắt có

nhử, khó thở và phân nhão

Theo Nguyễn Quang Sức và cs (2002) [35], dê mắc bệnh tiên mao trùng thiếu máu, suy yếu kéo dài làm giảm khối lượng cơ thể và sản lượng sữa Nếu không được điều trị sớm thì khoảng 10 - 15 % số dê mắc bệnh sẽ chết

Phan Địch Lân và cs (2002) [22] cho biết, bệnh được truyền đi do vật môi

giới gieo truyền là ruồi trâu (Stomoxys) và mòng (Tabanus) Tiên mao trùng không

có sự phát triển và sinh sản ở vật môi giới, nó chỉ được truyền đi một cách cơ giới

T evansi có thể duy trì sức sống ở vật môi giới trong khoảng 24 - 44 giờ, nếu ruồi

trâu và mòng chưa kịp mang căn bệnh đi truyền cho những súc vật khác thì căn bệnh sẽ chết trong vòi hút của chúng Vì vậy, mùa phát bệnh có liên quan chặt chẽ với mùa côn trùng hoạt động (tháng 5 - 9)

Phan Văn Chinh (2006) [1] cho biết: triệu chứng, bệnh tích bệnh tiên mao trùng

do gây nhiễm không khác biệt với bệnh tiên mao trùng tự nhiên ở thể cấp và mạn tính, số lượng hồng cầu giảm, số lượng bạch cầu tăng ở trâu bệnh so với trâu khỏe

Nguyễn Quốc Doanh và cs (1997) [5] cho biết: T evansi gây cho thỏ một thể

bệnh toàn thân, khi mổ thỏ bệnh ở ngày 70 thấy bệnh tích đại thể như sau: bao tim có dịch màu vàng; gan cứng; lách nhũn; phổi bám dính màu vàng, có vùng bị khí thũng; một số khớp bị viêm, trong có dịch màu vàng Tác giả còn cho biết, bệnh tích vi thể ở

thỏ nhiễm T evansi gồm: vân các sợi cơ tim bị mỡ rất khó nhận biết, bào tương nở to,

thoái hóa dạng hốc và dạng hạt; các xoang gan và tĩnh mạch giãn, tế bào gan thoái hóa mô rải rác, tế bào Kupffer tăng sinh, tế bào Limpho và một số ống mật giãn, trong lòng ống phát hiện thấy ký sinh trùng; thận: sung huyết, một số ống thận giãn; lách: một số nang Limpho bị sơ hóa, các xoang giãn, có nhiều đại thực bào

Lê Ngọc Mỹ (2002) [27] đã sử dụng phản ứng huyết thanh học để kiểm tra tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu Việt Nam, thấy tỷ lệ nhiễm tương đối cao (53,33 %), trong

đó, trâu ở các tỉnh vùng núi phía Bắc và trung du nhiễm cao hơn ở vùng đồng bằng Vương Thị Lan Phương và cs (2004) [33] đã áp dụng phương pháp IFAT (phản ứng kháng thể huỳnh quang gián tiếp) để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng cho

bò Brahman tại cơ sở sản xuất bò thịt Phú Ba - Ninh Bình Kết quả cho thấy, có 10/167 mẫu dương tính với tiên mao trùng, chiếm 5,99 %

Trần Đức Hạnh và cs (2009) [8] đã sử dụng phương pháp ELISA chẩn đoán bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò tại huyện Phổ Yên, tỉnh Thái Nguyên Kết quả cho thấy: trong số 239 mẫu huyết thanh trâu kiểm tra có 36 mẫu dương tính, chiếm 15,06

%; trong số 246 mẫu huyết thanh bò kiểm tra có 43 mẫu dương tính, chiếm 17,48 % Phạm Sỹ Lăng và Lê Văn Tạo (2002) [18] đã đề xuất biện pháp phòng chống bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò như sau: