Xây dựng quy trình định lượng đồng thời bốn thành phần chính trong tinh dầu vỏ quả chúc ứng dụng trong khảo sát điều kiện thu hoạch, bảo quản quả chúc (citrus hystrix) trồng ở an giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN THANH HÀO XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI BỐN THÀNH PHẦN CHÍNH TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CHÚC ỨNG DỤNG TRONG KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN THU HOẠCH, BẢO QUẢN QUẢ CHÚC (Citrus hystrix) TRỒNG Ở AN GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC CẦN THƠ – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN THANH HÀO XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI BỐN THÀNH PHẦN CHÍNH TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CHÚC ỨNG DỤNG TRONG KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN THU HOẠCH, BẢO QUẢN QUẢ CHÚC (Citrus hystrix) TRỒNG Ở AN GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS LÊ THANH VĨNH TUYÊN Cần Thơ – 2018 LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn đến Cha, Mẹ người gia đình Cám ơn người động viên con, cho điểm tựa vững vượt qua khó khăn học tập nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy ThS Lê Thanh Vĩnh Tuyên tận tình hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ em suốt thời gian qua Em chân thành cảm ơn cô ThS Nguyễn Ngọc Quỳnh, cô ThS Thạch Trần Minh Uyên, cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài, chị Nguyễn Vũ Phương Lan chị Ngô Thị Kim Hương quan tâm giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình em thực đề tài phịng thí nghiệm liên mơn Dược liệu – Dược cổ truyền – Thực vật dược Cảm ơn bạn nhóm đề tài Kiểm Nghiệm, Dược Liệu đồng hành, giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm nghiên cứu, kỷ niệm đẹp thời sinh viên Cảm ơn bạn Duy Thái chia sẻ, động viên khó khăn cản trở Cảm ơn người bạn thân Lê An Khang, Lê Phương Bảo Ngọc động viên, tiếp sức hôm thức xuyên đêm để hoàn thành đề tài Cảm ơn DS CKI Trần Công Vinh tạo điều kiện giúp em hồn thành đề tài Cần Thơ, tháng 6, năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng với hướng dẫn khoa học thầy ThS Lê Thanh Vĩnh Tuyên Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức trước Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Cần Thơ, tháng năm 2018 Người thực SV Nguyễn Thanh Hào i MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN .ii MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm Chúc 1.2 Các thành phần tinh dầu vỏ Chúc 1.3 Sắc ký khí 1.4 Phân tích định tính sắc ký khí 11 1.5 Phân tích định lượng sắc ký khí 12 1.6 Các phương pháp chiết xuất tinh dầu 13 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.2 Địa điểm nghiên cứu 16 2.3 Trang thiết bị, dung mơi, hóa chất 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 17 ii Chương KẾT QUẢ 26 3.1 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời sabinen, β-pinen, limonen, citronellal tinh dầu vỏ GC-FID 26 3.2 Thẩm định qui trình định lượng đồng thời sabinen, β-pinen, limonen, citronellal tinh dầu vỏ GC-FID 30 3.3 Đánh giá ảnh hưởng điều kiện bảo quản thu hoạch đến hàm lượng cảm quan tinh dầu thu 46 Chương BÀN LUẬN 52 4.1 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời sabinen, β-pinen, limonen, citronellal tinh dầu vỏ GC-FID 52 4.2 Thẩm định qui trình định lượng đồng thời sabinen, β-pinen, limonen, citronellal tinh dầu vỏ GC-FID 54 4.3 Đánh giá ảnh hưởng điều kiện bảo quản thu hoạch đến hàm lượng cảm quan tinh dầu thu 58 KẾT LUẬN 61 KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu viết tắt Nội dung viết tắt Ý nghĩa CĐL Chuẩn định lượng Chuẩn định lượng FID Flame ion detector Đầu dị ion hóa lửa FT-IR Fourier transform infrared Quang phổ hồng ngoại chuyển hóa Fourier GC Gas chromatography Sắc ký khí HHC Hỗn hợp chuẩn Hỗn hợp chuẩn LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantitative Giới hạn định lượng MS Mass spectrometry Khối phổ NĐL Nội định lượng Nội định lượng RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SKĐ Sắc ký đồ Sắc ký đồ iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần phần trăm chất tinh dầu vỏ Chúc theo cách chiết Bảng 1.2 Thành phần phần trăm chất tinh dầu vỏ Chúc theo vị trí địa lý .4 Bảng 1.3 Các loại cột mao quản Bảng 1.4 Các loại đầu dò sắc ký khí 10 Bảng 2.1 Dung mơi, hóa chất sử dụng đề tài 16 Bảng 2.2 Các điều kiện khảo sát 18 Bảng 2.3 Điều kiện tốc độ dòng 0,45 ml/phút 19 Bảng 3.1 Kết thông số điều kiện khảo sát mẫu thử 26 Bảng 3.2 Kết thông số điều kiện khảo sát mẫu chuẩn 27 Bảng 3.3 RSD (%) thông số mẫu thử 30 Bảng 3.4 RSD (%) thông số mẫu chuẩn .30 Bảng Kết thẩm định khoảng tuyến tính .32 Bảng 3.6 Kết khảo sát nồng độ sabinen tinh dầu vỏ 36 Bảng 3.7 Kết thẩm định độ sabinen tinh dầu vỏ 36 Bảng 3.8 Kết khảo sát nồng độ β-pinen tinh dầu vỏ 37 Bảng 3.9 Kết thẩm định độ β-pinen tinh dầu vỏ 38 Bảng 3.10 Kết khảo sát nồng độ limonen tinh dầu vỏ 39 Bảng 3.11 Kết thẩm định độ limonen tinh dầu vỏ 39 Bảng 3.12 Kết khảo sát nồng độ citronellal tinh dầu vỏ 40 Bảng 3.13 Kết thẩm định độ citronellal tinh dầu vỏ 41 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác ngày sabinen 42 Bảng 3.15 Kết khảo sát độ xác ngày β-pinen 42 Bảng 3.16 Kết khảo sát độ xác ngày limonen .43 Bảng 3.17 Kết khảo sát độ xác ngày citronellal .43 Bảng 3.18 Kết khảo sát độ xác liên ngày sabinen 44 Bảng 3.19 Kết khảo sát độ xác liên ngày β-pinen 44 Bảng 3.20 Kết khảo sát độ xác liên ngày limonen 45 v Bảng 3.21 Kết khảo sát độ xác liên ngày citronellal 45 Bảng 3.22 Kết khảo sát cách rửa 46 Bảng 3.23 Kết khảo sát nhiệt độ bảo quản .47 Bảng 3.24 Kết khảo sát đồ đựng để bảo quản 48 Bảng 3.25 Kết khảo sát số ngày bảo quản 49 Bảng 3.26 Kết khảo sát độ trưởng thành .50 Bảng 3.27 Kết khảo sát thời điểm thu hái 51 vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Sơ đồ thiết bị sắc ký khí .9 Hình 3.1 SKĐ mẫu thử điều kiện 28 Hình 3.2 SKĐ mẫu chuẩn điều kiện 29 Hình 3.3 SKĐ độ đặc hiệu .31 Hình 3.4 Đường chuẩn sabinen .32 Hình 3.5 Đường chuẩn β-pinen .33 Hình 3.6 Đường chuẩn limonen 33 Hình 3.7 Đường chuẩn citronellal 33 Hình 3.8 SKĐ LOD sabinen 34 Hình SKĐ LOD β-pinen 34 Hình 3.10 SKĐ LOD limonen 35 Hình 3.11 SKĐ LOD citronellal 35 Hình 3.12 Biểu đồ so sánh hàm lượng cảm quan tinh dầu cách rửa 46 Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hàm lượng cảm quan tinh dầu nhiệt độ bảo quản 47 Hình 3.14 Biểu đồ so sánh hàm lượng cảm quan tinh dầu loại đồ đựng 48 Hình 3.15 Biểu đồ so sánh hàm lượng cảm quan tinh dầu thời gian bảo quản 49 Hình 3.16 Biểu đồ so sánh hàm lượng cảm quan tinh dầu mức độ trưởng thành 50 Hình 3.17 Biểu đồ so sánh hàm lượng cảm quan tinh dầu thời điểm thu hái 51 PL-10 Phụ lục ĐỘ ĐẶC HIỆU PL 3.1 Overlay SKĐ độ đặc hiệu 1: khơng khí; 2: dung mơi; 3: chuẩn ngoại; 4: chuẩn nội; 5: chuẩn ngoại thêm chuẩn nội; 6: thử; 7: thử thêm chuẩn ngoại; 8: thử thêm chuẩn nội PL-11 Phụ lục TÍNH TUYẾN TÍNH PL 4.1 Đường chuẩn sabinen PL-12 PL-13 PL 4.2 Đường chuẩn β-pinen PL-14 PL-15 PL 4.3 Đường chuẩn limonen PL-16 PL-17 PL 4.4 Đường chuẩn citronellal PL-18 PL-19 PL 4.5 Overlay SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn PL-20 Phụ lục ĐỘ ĐÚNG PL 5.1 Overlay SKĐ độ nồng độ 1: mẫu thử thêm chuẩn 120 %, 2: mẫu thử thêm chuẩn 100 %, 3: mẫu thử thêm chuẩn 80 %, 4: mẫu thử PL-21 Phụ lục ĐỘ CHÍNH XÁC PL 6.1 Overlay SKĐ độ xác ngày thứ PL-22 PL 6.2 Overlay SKĐ độ xác ngày thứ hai PL-23 PL 6.3 Overlay SKĐ độ xác ngày thứ ba TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA CẦN THƠ VIỆT NAM KHOA DƯỢC Độc lập – Tự – Hạnh phúc GIẤY XÁC NHẬN ĐÃ BỔ SUNG, SỬA CHỮA LUẬN VĂN THEO Ý KIẾN ĐÓNG GÓP CỦA HỘI ĐỒNG CHẤM LUẬN VĂN DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC - Họ tên sinh viên: Nguyễn Thanh Hào - Tên đề tài: Xây dựng quy trình định lượng đồng thời bốn thành phần tinh dầu vỏ Chúc ứng dụng khảo sát điều kiện thu hoạch, bảo quản Chúc (citrus hystrix) trồng An Giang - Người hướng dẫn khoa học: ThS Lê Thanh Vĩnh Tuyên Luận văn sửa chữa bổ sung điểm sau: Chỉnh sửa cấu trức Viết lại phần đặt vấn đề Thêm dòng dẫn trước bảng kết nhận xét sau bảng kết Chỉnh sửa phần bàn luận Cần Thơ, ngày 05 tháng 07 năm 2018 Người hướng dẫn Họ tên học viên Xác nhận trưởng bàn chấm luận văn ... THANH HÀO XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI BỐN THÀNH PHẦN CHÍNH TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CHÚC ỨNG DỤNG TRONG KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN THU HOẠCH, BẢO QUẢN QUẢ CHÚC (Citrus hystrix) TRỒNG Ở AN GIANG. .. 10 phút xác định thể tích tinh dầu Natri sulfat khan dùng để làm khan nước tinh dầu bảo quản tinh dầu nhiệt độ < -10 oC 2.4.3.2 Khảo sát điều kiện bảo quản Chúc Các thông số cần khảo sát Cách rửa... % theo quy đinh AOAC (2016) 2.4.3 Đánh giá ảnh hưởng điều kiện bảo quản thu hoạch đến hàm lượng cảm quan tinh dầu thu 2.4.3.1 Bảo quản chưng cất tinh dầu Quả sau thu hái cân (