Định lượng đồng thời salbutamol và bromhexin trong sirô bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (Rp-HPLC).pdf

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2019 Tên đề tài: Định lượng đồng thời salbutamol bromhexin sirô sắc ký lỏng hiệu cao (Rp-HPLC) Số hợp đồng: 2019.01.68 Chủ nhiệm đề tài: DS Dương Đình Chung Đơn vị cơng tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 09 tháng Tp.HCM, ngày 10 thảng 12 năm 2019 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TÔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2019 Tên đề tài: Định lượng đồng thời salbutamol bromhexin sirô sắc ký lỏng hiệu cao (Rp-HPLC) Số hợp đồng: 2019.01.68 Chủ nhiệm đề tài: DS Dương Đình Chung Đơn vị cơng tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 09 tháng Các thành viên phổi họp cộng tác: STT Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác Nguyền Hữu Khánh Ọuan Dược Sĩ Khoa Dược Nguyền Thị Ngọc Yến Dược Sĩ Khoa Dược Tp.HCM, ngày 10 tháng 12 năm 2019 Ký tên MỤC LỤC ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TÒNG QUAN 1.1 TỐNG QUAN VÈ BROMHEXIN 1.2 TỐNG QUAN VÈ SALBUTAMOL 1.3 TỐNG QUAN CÁC NGHIÊN cứu ĐỊNH LƯỢNG BROMHEXIN VÀ SALBUTAMOL 1.4 TỒNG QUAN THÁM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP HPLC 10 1.4.1 Tính đặc hiệu 11 1.4.2 Tính tuyến tính 12 1.4.3 Khoảng xác định 13 1.4.4 Độ 13 1.4.5 Độ xác 15 1.4.6 Giới hạn phát (LOD) 15 1.4.7 Giới hạn định luợng (LOQ) 16 1.4.8 Độ chắn 17 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu .18 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN cúư 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Dung mơi hóa chất 18 2.1.3 Trang thiết bị nghiên cứu 18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cửư 18 2.2.1 Quy trình xử lý mầu 18 2.2.2 Chuấn bị dung dịch nghiên cứu 19 2.2.3 Sàng lọc yếu tố ảnh hưởng đen q trình tách thơng số sắc ký pic bromhexin salbutamol (thiết kế Plackett - Burman) 20 2.2.4 Tối ưu hóa điều kiện sắc ký (RSM- CCD) 22 2.2.5 Thấm định phương pháp phân tích 23 2.2.6 Phân tích thống kê 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN cứu VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 XÂY DỤNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 26 3.1.1 Ket sàng lọc yếu tố ảnh hưởng 26 3.1.2 Ket tối ưu hóa yếu tố ảnh hưởng 30 3.1.3 Điều kiện sắc ký lựa chọn cho định lượng đồng thời SAL BROM 34 3.2 THÁM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 34 3.2.1 Tính tương tích hệ thống 34 3.2.2 Tính đặc hiệu/chọn lọc 35 3.2.3 Khoảng tuyến tính .36 3.3.3 Độ xác độ xác trung gian 37 3.3.4 Độ 37 3.4 ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP 39 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 40 4.1 KẾT LUẬN 40 4.2 ĐỀ NGHỊ 40 TÀI LIỆU THAM KHAO 41 ii DANH MỤC CHỮ VIÉT TẮT Chữ tắt Chữ nguyên Ý nghĩa BROM Bromhexin Bromhexin CCD Central composite design Thiet ke cấu trúc có tâm HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao ICH International Conference on Harmonization Hội đồng hòa họp quốc te LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng MeCN Acetonitril MeOH Methanol N Theoretical plate number OPA Orthophosphoric acid PDA Photodiod Arrays Đầu dò màng diod RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối RSM Response Surface Designs Phương pháp đáp ứng be mặt s Area (mMA*S) Diện tích pic SAL Salbutamol Salbutamol SD Standard deviation Độ lệch chuẩn T USP Tailling Hệ số kéo ÍR Retention time Thời gian lưu Số đĩa lý thuyết iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: cấu trúc hóa học Bromhexin hydrochloric! Hình 1.2: cấu trúc hóa học Salbutamol sulfat Hình 3.1: Biểu đồ Pareto thề ảnh hưởng yếu tố khảo sát lên: (a) số đĩa lý thuyết SAL; (b) diện tích pic SAL; (c) hệ số kéo đuôi SAL; (d) số đĩa lý thuyết BROM; (e) diện tích pic BROM; (f) thời gian lưu BROM; (g) hệ số kéo đuôi BROM; (h) độ phân giải pic SAL BROM mức độ tin cậy 95% (P < 0.05) 28 Hình 3.2: Giá trị thực nghiệm giá trị dự đoán (a b); phân ngẫu nhiên giá trị thực nghiệm (b d) 32 Hình 3.3: Đồ thị 3D biểu diễn mong muốn hàm mục tiêu dự đoán từ phần mềm DesignExpert 33 Hình 3.4: Kết chứng minh tính chọn lọc: (a) sắc ký mẫu, (b) Phổ 3D, (c) Độ tinh khiết cùa pic SAL, (d) Độ tinh khiết BROM (e) Phổ uv cùa SAL (f) uv phổ BROM 35 Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích đình nồng độ: SAL 36 Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích đỉnh nồng độ: BROM 36 Hình 3.7: sắc ký đồ giá trị nồng độ (a) LOD (b) LOQ SAL BROM 38 IV DANH MỤC BẢNG • Bảng 1.1: Bảng tóm tắt báo cáo phương pháp HPLC định lượng đồng thời BROM SAL dạng chế phẩm Bảng 1.2: Một số nghiên cứu HPLC định lượng SAL BROM với hoạt chất khác Bảng 2.1: Pha chế dung dịch chuẩn làm việc 19 Bàng 2.2: Các biến ma trận Plackett - Burman 20 Bảng 2.3: Ma trận thiết kế thí nghiệm Plackett- Burman 21 Bảng 2.4: Ma trận thiết kế thí nghiệm RSM-CCD 22 Bảng 3.1: Kết khảo sát biến ma trận Plackett- Burman ảnh hưởng chúng lên thông số sắc ký SAL BROM 27 Bảng 3.2: Kết ảnh hưởng yếu tố khảo sát lên hàm mục tiêu (biến phụ thuộc) 28 Bảng 3.3: Tên khoảng giá trị 03 yếu tố dùng RSM-CCD 30 Bảng 3.4: Kết thực nghiệm theo RSM-CCD 30 Bảng 3.5: Kết phân tích ANOVA hàm mục tiêu yi, y2 32 Bảng 3.6: Tối ưu hóa giá trị biến độc lập 33 Bảng 3.7: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống 34 Bảng 3.8: Kết thẩm định xác xác trung gian (n= 6) 37 Bảng 3.9: Kết thẩm định độ (n=9) 37 Bảng 3.10: Kết định lương SAL BROM chế phẩm 39 V TÓM TÁT KÉT QUẢ NGHIÊN cứu Sán phẩn đăng ký thuyết minh Sản phẩm thực đạt - 01 Quy trình định lượng đồng thời Có salbutamol bromhexin si rơ HPLC Đạt - 01 Bài báo tạp chí có chi số ISSN; Không đạt - Hướng dần 01 sinh viên đại học (Dược Sĩ) Thời gian đăng ký: 09 tháng kể từ tháng 04/2019 đến/12/2019 Thời gian nộp báo cáo: ngày 10/12/2019 VI ĐẶT VẤN ĐÈ Hiện nay, nghiên cứu, sản xuất thuốc, việc nghiên cứu tác dụng duợc lý hoạt chất chính, nhà nghiên cứu cịn phải khảo sát cơng thức phối hợp thuốc nhiều hoạt chất nhằm tạo thành phấm dề sử dụng, thuận tiện sử dụng Salbutamol dạng kết hợp hoạt chất với pseudoephedrine, carbocistein, bromhexin, N-acetylcystein, ambroxol, prednisolone, guaifenisin, chlorpheniramin, theophylline chế phấm đuờng uống (như si rô, viên nén hay khí dung) Salbutamol sulfate (SAL) chất chủ vận P-adrenoceptor Kích hoạt thụ thể (h-adrenergic có trơn đường dần khí; dần đến việc kích hoạt adenyl cyclase dần đến tăng nồng độ nội bào cyclic-3,5'-adenosine monophosphate (AMP vịng) Có gia tăng C-AMP dần đến việc kích hoạt protein kinase-A, gây ức chế phosphoryl hóa myosin làm giảm ion nội bào nong độ canxi, dần đến giãn Nó sử dụng cho giảm co thắt phế quản tình trạng hen suyễn tính bệnh phối tắc nghẽn Tên hóa học SAL 4- [2- (tertbutylamine) -1hydroxy ethyl] -2- (hydroxymethyl) phenol Bromhexin hydrochlorid (BROM) hoạt động chất làm tan niêm mạc miệng Nó phá vờ cấu trúc sợi mucopolysacarit đờm tạo chất nhầy nhớt hơn, dề [2] Tên hóa học BROM 2,4-dibromo-6 [[cyclohexyl (methyl) amino] metyl] anilin, hydrochlorid Sự kết hợp BROM SAL sử dụng để điều trị hen suyễn viêm phế quản hay bệnh phổi tắc nghẽn mãn tính (COPD- Chronic obstructive pulmonary disease) Một so phương pháp khác báo cáo định lường đồng thời bromhexine salbutamol riêng biệt đồng thời liều dược phẩm phương pháp quang phổ [3-6], HPTLC [7, 8] Rp-HPLC [7, 9-13] Trong số này, HPLC tính phổ biến, khả lặp lại độ xác cao nên xem kỳ thuật hàng đầu việc đánh giá chất lượng sản phẩm Tuy nhiên, vần bị ảnh hưởng nhiều thông số liên quan đến dụng cụ phụ kiện, pha tình, thành phần pha động yếu tố môi trường Đe đảm bảo yêu cầu chung phát triển phương pháp phân tích mới, tổ chức ICH FDA gần đà yêu cầu Thiết kế thí nghiệm thống kê sử dụng nhằm tăng độ đặc hiệu [14-16], Phương pháp phản ứng bề mặt (RSM) phương pháp thống kê sử dụng việc phát triến tối ưu hóa quy trình phức tạp [17, 18], RSM sử dụng sau sàng lọc sơ yếu tố thí nghiệm ảnh hưởng đáng kể đến phản ứng sử dụng thiết kế Plackett-Burman [19], Vì lý trên, thực đề tài “Định lượng đồng thời salbutamol bromhexin sirô sắc ký lỏng hiệu cao” sử dụng công cụ Plackett - Burman thiết kế phương pháp phản ứng bề mặt (RSM) áp dụng để tối ưu hóa điều kiện cho quy trình phân tích sắc ký ... Tên đề tài: Định lượng đồng thời salbutamol bromhexin sirô sắc ký lỏng hiệu cao (Rp-HPLC) Số hợp đồng: 2019.01.68 Chủ nhiệm đề tài: DS Dương Đình Chung Đơn vị cơng tác: Khoa Dược Thời gian thực... thiết kế Plackett-Burman [19], Vì lý trên, chúng tơi thực đề tài ? ?Định lượng đồng thời salbutamol bromhexin sirô sắc ký lỏng hiệu cao? ?? sử dụng công cụ Plackett - Burman thiết kế phương pháp phản... Rele, R V (2015) p°], xây dựng phương pháp định lượng đồng thời bromhexine hydrochlorid and salbutamol sulphat Rp-HPLC Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao đơn giản, nhanh chóng xác Sự phân tách