Bài viết Thẩm định phương pháp định lượng Ketoprofen trong transferosome bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao được nghiên cứu nhằm góp phần cung cấp các dữ liệu về phương pháp định lượng KETO trong transfersome và có thể được áp dụng để đánh giá chất lượng một số chế phẩm mới khi lưu hành.
HỘI NGHỊ KHOA HỌC HÌNH THÁI HỌC TỒN QUỐC LẦN THỨ XVIII NĂM 2022 Desiderio J, Trastulli S, Ricci F, Penzo J, Cirocchi R, Farinacci F, et al Laparoscopic versus open left colectomy in patients with sigmoid colon cancer: prospective cohort study with long-term follow-up Int J Surg 2014;12(8):745-50 Kim MJ, Kim JH, Lee YS, Kye BH, Cho HM, Kim HJ, et al Short- and long-term outcomes of laparoscopic segmental left colectomy for splenic flexure colon cancer: comparison with propensity score matching Ann Surg Treat Res 2021;101(5):274-80 Nguyễn Văn Xuyên Kết điều trị ung thư đại tràng Sigma phẫu thuật triệt để qua 68 trường hợp bệnh viện 103 Tạp chí Y Dược học quân 2010;32(102 - 108) THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG KETOPROFEN TRONG TRANSFEROSOME BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Phùng Quang Toàn1, Nguyễn Văn Bạch1, Trịnh Nam Trung1 TÓM TẮT 67 Mục tiêu: Thẩm định phương pháp định lượng Ketoprofen transfersome sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) nhằm góp phần tiêu chuẩn hóa chất lượng sản phẩm Đối tượng phương pháp: Tiến hành định lượng transfersome phương pháp HPLC với cột sắc ký SunFireTM C18 C18 (4,6 ì 150 mm, 5àm), nhit cột 26°C, tốc độ dòng 1,2 ml/phút, Detector UV bước sóng 270 nm, thể tích tiêm 20 µl, pha động gồm acetonitril:acid acetic 1% nước (45:55) Kết quả: phương pháp đảm bảo tính thích hợp, tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ lặp lại độ theo qui định ICH Kết luận: phương pháp định lượng đảm bảo yêu cầu sử dụng để định lượng Ketoprofen transfersome Từ khóa: Ketoprofen, transfersome, HPLC Học viện Quân y Chịu trách nhiệm chính: Phùng Quang Toàn Email: Digitalis.phung@gmail.com Ngày nhận bài: 15/7/2022 Ngày phản biện khoa học: 05/8/2022 Ngày duyệt bài: 30/8/2022 496 SUMMARY VALIDATION ASSAY METHOD FOR KETOPROFEN IN TRANSFEROSOME BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Objective: To validate a method for the quantification of Ketoprofen in transfersome by high performance liquid chromatography (HPLC) in order to contribute to product quality standardization Subjects and methods: Quantitative Ketoprofen by HPLC method with SunFireTM C18 column (4.6 ì 250 mm, 5àm), column temperature 26C, flow rate 1.2 ml/min, detector UV at 260 nm, injection volume 20 µl, mobile phase consisting of acetonitril and 1% acetic acid in water (45:55) Results: The method ensured suitability, specificity, linearity, repeatability, and precision as specified by ICH Conclusion: The quantitative method meets the requirements and can be used for the quantification of Ketoprofen in transfersome Keywords: Ketoprofen, transfersome, HPLC I ĐẶT VẤN ĐỀ Ketoprofen (KETO) dẫn chất acid TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 518 - THÁNG - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 propionic thuộc nhóm thuốc chống viêm khơng steroid Hiện nay, ketoprofen thuốc dùng để điều trị viêm xương khớp, nhiên, bệnh nhân dùng liều cao dùng thuốc kéo dài, thuốc gây tác dụng khơng mong muốn [1], [2] Vì vậy, để giảm tác dụng phụ đường tiêu hóa tránh q trình chuyển hóa qua gan lần đầu dùng Ketoprofen phương pháp nhà khoa học mong đợi đưa thuốc qua da dạng miếng dán, hệ vi nhũ tương hay dạng gel chứa transfersome [3], [4] Hiện nay, có số nghiên cứu định lượng KETO chế phẩm bào chế như: viên nén, viên nang, gel… [5], [6] Tuy nhiên chưa có nghiên cứu đề cấp tới định lượng KETO transfersome Vì vậy, nghiên cứu thực nhằm góp phần cung cấp liệu phương pháp định lượng KETO transfersome áp dụng để đánh giá chất lượng số chế phẩm lưu hành II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu - Ketoprofen chuẩn (SKS 0105178; hàm lượng 99,80%) Viện kiểm nghiệm thuốc TW cung cấp - Methanol, acetonitril, acid acetic: Đạt tiêu chuẩn P.A (Merck Đức) - Mẫu thử: transferosome ketoprofen nồng độ mg/ml 2.2 Thiết bị nghiên cứu - Máy HPLC Alliance Waters 2695D; Detector PDA (Mỹ) - Cân phân tích Mettler toledo có độ xác 0,1mg (Thụy Sỹ) - Máy đo pH Mettler Toledo (Thụy Sĩ) - Bể siêu âm Elmasonic S 100 H (Đức) - Màng lọc nilon Sartorius Minisart kích thước màng 0,45µm (Đức) - Hệ thống phễu thuỷ tinh Sartotius (Đức) - Các dụng cụ khác đạt tiêu chuẩn phân tích 2.3 Phương pháp nghiên cứu * Điều kiện sắc ký: - Hệ thống sắc ký: hệ thống HPLC Alliance Waters 2695D - Cột sắc ký pha đảo SunFireTM C18 (4,6 ì 250 mm, 5àm) - Detector: UV bc súng 260 nm - Pha động: acetonitril:acid acetic 1% nước tỉ lệ 45:55 - Thể tích tiêm: 20µl - Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút - Nhiệt độ cột: 26°C - Dung mơi hịa tan mẫu: MeOH * Phương pháp xử lý mẫu: - Chuẩn bị dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 20 mg KETO chuẩn vào bình định mức 100ml, thêm khoảng 10 ml MeOH vào bình định mức, lắc đến KETO chuẩn tan hết, bổ sung MeOH vừa đủ đến vạch lắc Hút xác 1,0 ml dung dịch pipet bầu cho vào bình định mức 10 ml, pha lỗng MeOH vừa đủ đến vạch, lắc đều, thu dung dịch KETO chuẩn có nồng độ 20 µg/ml - Chuẩn bị dung dịch thử: Hút xác ml hỗn dịch transfersome, cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 10 ml methanol, lắc siêu âm 15 phút, để nguội thêm tiếp dung môi vừa đủ 50 ml, lắc Tiếp tục pha loãng 10 lần methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm - Tính tốn kết quả: Nồng độ KETO dung dịch thử (Ct) tính theo cơng thức: 497 HỘI NGHỊ KHOA HỌC HÌNH THÁI HỌC TỒN QUỐC LẦN THỨ XVIII NĂM 2022 Trong đó: - St: Diện tích pic dung dịch thử (µV.s) - Cs: Nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml) - Ss: Diện tích pic dung dịch chuẩn (µV.s) Từ nồng độ chất dung dịch thử (Ct), ta tính hàm lượng KETO chế phẩm theo công thức sau: Trong đó: - ms: Khối lượng cân chất chuẩn (mg) - P: Hàm lượng ghi nhãn * Thẩm định phương pháp: Quy trình thẩm định phương pháp định lượng tiến hành theo hướng dẫn ICH [7]: - Tính thích hợp hệ thống: Tiêm lần mẫu KETO chuẩn 20 µg/ml vào hệ thống HPLC, tiến hành sắc ký theo điều kiện chọn Ghi kết quả: độ lệch chuẩn tương đối RSD (%) thời gian lưu (không 1%), diện tích pic (khơng q 2%), hệ số đối xứng (không 2%) số đĩa lý thuyết (không 2%) - Tính đặc hiệu: Chuẩn bị dung dịch KETO chuẩn dung dịch transfersome KETO thử có nồng độ 20 µg/ml Tiến hành phân tích dung dịch chuẩn, dung dịch thử mẫu trắng (chứa tá dược) theo phương pháp xây dựng - Đường chuẩn khoảng tuyến tính: Từ dung dịch KETO chuẩn có nồng độ 200 µg/ml Sau đó, pha lỗng MeOH thành dãy dung dịch chuẩn có nồng độ 9,85; 15,76; 19,70; 23,64; 29,55 39,40 μg/ml Phân tích dung dịch chuẩn theo phương pháp xây dựng Sử dụng diện tích píc KETO làm tín hiệu đáp ứng để lập đường chuẩn 498 - Độ đúng: Xác định độ thông qua độ thu hồi (độ tìm lại) phương pháp cách thêm lượng chất chuẩn xác định vào mẫu thử, phân tích mẫu thêm chuẩn Pha dung dịch thử thêm chuẩn: có nồng độ 70%, 100% 120% nồng độ định lượng (20 µg/ml) - Độ lặp lại: Tiến hành phân tích dung dịch thử chuẩn bị song song theo phương pháp xây dựng Tính độ lệch chuẩn tương đối (RSD) kết phân tích - Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng: Theo kết khảo sát tính tương thích hệ thống sắc ký với mẫu chuẩn KETO nồng độ 20 µg/ml, ta tính thời gian lưu trung bình mẫu Trên sắc ký đồ mẫu trắng, đo độ nhiễu đường khoảng thời gian tương ứng với thời gian lưu chất chuẩn, thu diện tích So (µV.s), từ ước lượng diện tích pic LOD (lớn lần So) LOQ (lớn 10 lần So) Căn vào diện tích pic LOD LOQ ước lượng được, pha mẫu chuẩn có nồng độ gần với nồng độ ước lượng tiến hành chạy sắc ký điều kiện chọn III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết thẩm định tính tương thích hệ thống Tiêm lần dung dịch chuẩn KETO nồng độ 20 µg/ml vào hệ thống HPLC, tiến hành sắc ký theo điều kiện xây dựng Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký trình bày bảng TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 518 - THÁNG - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 Bảng Kết khảo sát độ tương thích hệ thống sắc ký Thời gian lưu Số đĩa lý STT Diện tích pic (µV.s) Hệ số bất đối (AF) (phút) thuyết (N) 10,307 1523280 1,77 10784 10,377 1532126 1,78 10950 10,383 1532529 1,81 10981 10,389 1487381 1,82 10899 10,354 1536365 1,79 10940 10,432 1542428 1,77 10873 TB 10,374 1525684 1,79 10904 RSD (%) 0,40 1,30 1,17 0,65 Nhận xét: kết khảo sát cho thấy độ 3.2 Kết thẩm định độ đặc hiệu lệch chuẩn tương đối RSD (%) diện tích pic phương pháp KETO, số đĩa lý thuyết, hệ số bất đối Mục đích nhằm chứng minh có mặt phép thử nằm khoảng cho tá dược dung môi pha động không phép (< 2%), giá trị thời gian lưu ảnh hưởng đến phương pháp phân tích Khảo nằm giới hạn