Xây dựng phương pháp định tính, định lượng dexamethasone acetat trong một số chế phẩm đông dược có tác dụng hỗ trợ hoặc điều trị viêm khớp bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Nghiên cứu được xây dựng với mục đích phát triển phương pháp phân tích dexamethasone acetat bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao. Quá trình phân tích được tiến hành trên cột: RESTEK C8 (5 μm, 150 mm x 4,6 mm). Dung môi pha động là methanol: Nước với tỷ lệ 65:35, (v/v) với tốc độ dòng là 1 ml/ phút.

Nguyễn Thị Quỳnh Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ 188(12/1): 75 - 81 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DEXAMETHASONE ACETAT TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM ĐƠNG DƯỢC CĨ TÁC DỤNG HỖ TRỢ HOẶC ĐIỀU TRỊ VIÊM KHỚP BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Nguyễn Thị Quỳnh1*, Hồ Thị Hồng Thắm1, Bùi Thị Luyến1, Hồ Lương Nhật Vinh2 Trường Đại học Y Dược - ĐH Thái Nguyên, 2Trường Cao đẳng Y tế Thái Nguyên TÓM TẮT Nghiên cứu xây dựng với mục đích phát triển phương pháp phân tích dexamethasone acetat sắc ký lỏng hiệu cao Q trình phân tích tiến hành cột: RESTEK C8 (5 μm, 150 mm x 4,6 mm) Dung môi pha động methanol: Nước với tỷ lệ 65:35, (v/v) với tốc độ dòng ml/ phút Dexamethason acetat xác định detector UV bước sóng 238 nm Kết thu đánh giá dựa khoảng nồng độ tuyến tính, độ thu hồi trung bình độ xác tương ứng 0,010 - 0,050 mg/ ml, 90,04% đến 94,47% 0,71% - 1,91% (n=6) Do đó, phương pháp HPLC có khoảng nồng độ tuyến tính tốt, độ lặp lại độ xác cao Phương pháp xây dựng ứng dụng để định lượng dexamethason acetat chế phẩm đơng dược Từ khóa: dexamethason acetat, sắc ký lỏng hiệu cao, định lượng, phương pháp, coticoid ĐẶT VẤN ĐỀ* Nhằm tạo hiệu tức thời cho người bệnh, giảm đau, ăn ngon, ngủ yên, tăng cân, sinh lực dồi , nhiều sở sản xuất thuốc y học cổ truyền sở chữa bệnh tư nhân trộn trái phép vào thuốc đông dược, thực phẩm chức số loại tân dược Hậu việc dùng thuốc đông y trộn tân dược trầm trọng khó lường trước mối nguy hiểm, người bệnh tin uống thuốc có nguồn gốc dược liệu nên an tồn uống kéo dài Điển hình nhóm thuốc tân dược hay trộn vào nhóm thuốc giảm glucose máu, thuốc glucocorticoid, thuốc giảm đau, chống viêm không steroid để điều trị viêm khớp, dị ứng, hen xuyễn, thuốc hạ huyết áp Trong đó, phổ biến pha trộn với steroid tổng hợp thuốc chống viêm không steroid Các corticoid thường tìm thấy bao gồm dexamethason, hydrocortison, prednisolon, betamethason, cortison, triamcinolon [9] Việc trộn corticoid trái phép chế phẩm đông dược phát từ lâu, ngày số lượng sở sản xuất trộn trái * Tel: 0963 027885, Email: quynhdhd1@gmail.com phép corticoid giảm nhiều so với trước [7] Nghiên cứu thực nhằm mục tiêu xây dựng phương pháp định tính, định lượng dexamethason acetat số chế phẩm đơng dược có tác dụng hỗ trợ điều trị viêm khớp sắc ký lỏng hiệu cao từ ứng dụng định lượng dexamethason acetat số chế phẩm đông dược lưu hành thị trường góp phần nâng cao chất lượng thuốc có nguồn gốc dược liệu Hóa chất, thiết bị phương pháp nghiên cứu Mẫu thử Một số chế phẩm đông dược sử dụng điều trị, hỗ trợ điều trị bệnh xương khớp, giảm đau, lưu hành thị trường Thái Nguyên Hóa chất, chất chuẩn - Chất đối chiếu: Dexemthason acetat SKS: 0200014; HL: 99,7%; độ ẩm: 0,1% tính theo ngun trạng, đóng lọ 100 mg viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương cung cấp - Các dung mơi, hóa chất thuộc loại dùng cho HPLC PA (Merck – Đức) - Nền mẫu: Dựa thuốc cổ truyền Độc hoạt tang ký sinh thang, Đại tần giao thang Tam tý thang với nhóm hoạt chất đa dạng, có tác dụng trừ phong thấp, giảm 75 Nguyễn Thị Quỳnh Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ đau, dưỡng can thận, bổ khí huyết dùng điều trị, hỗ trợ điều trị bệnh xương khớp, giảm đau, chống viêm [1], [2], [4] Tiến hành 03 mẫu: Nền viên nén, viên nang, bột Nền mẫu bào chế phòng nghiên cứu phát triển, công ty cổ phần Traphaco Thiết bị Hệ thống HPLC – L2000 Halo RB – 10 Diode aray detector với phần mềm EZ Chrom E.lite Cân phân tích Precisa, Thụy Sĩ (d = 0,01 mg); máy siêu âm Utrasonic cleaer D150H, trung Quốc; máy ly tâm lạnh Sartorius sigma – 16K, Đức; tủ lạnh Sanyo, Nhật; nồi cách thủy Memmer, Đức Các dụng cụ thủy tinh xác Phương pháp nghiên cứu - Điều kiện sắc ký + Cột: RESTEK C8 (5 μm, 150 mm x 4,6 mm) + Khảo sát pha động: Methanol – nước tỷ lệ khác nhau: (50: 50; 55:45; 60:40; 65:35) + Detector: UV 238 nm + Thể tích tiêm mẫu: 20 μL (tiêm thủ công) 188(12/1): 75 - 81 thời gian siêu âm thời gian thủy phân 10 – 30 phút (∆t = phút), đun cách thủy 60oC 15 phút, để nguội Chuyển tồn vào bình định mức 10 ml, rửa ống nghiệm lần lần với khoảng ml methanol Tập trung dịch rửa vào bình định mức Thêm methanol đến vừa đủ thể tích Ly tâm phút với tốc độ 1000 vòng/ phút Lọc lớp dịch qua màng lọc 0,45 μm - Thẩm định phương pháp: Theo hướng dẫn ICH [5] định tính, định lượng hoạt chất chế phẩm, gồm tiêu: Tính chọn lọc, tính thích hợp hệ thống, khoảng nồng độ tuyến tính, độ xác, độ -Ứng dụng phân tích mẫu thu thập + Xử lý mẫu theo quy trình xây dựng + Sắc ký mẫu thử, phát dexamethason acetat trộn trái phép mẫu đông dược dựa vào hệ số Rf so với chất chuẩn + Xác định nồng độ dexamethason acetat mẫu dựa vào phương trình hồi quy tuyến tính tương ứng chất nghiên cứu thiết lập ngày, từ tính lượng dexamethason acetat trộn trái phép (nếu có) mẫu đông dược ban đầu + Khảo sát tốc độ dòng: 1,5; 1,4; 1,3; 1,2; 1,1; 1,0 ml/ phút KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU + Nồng độ dexamethason acetat dung dịch mẫu tiêm: Khoảng 20 µg/ ml Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký - Chuẩn bị dung dịch: + Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác lượng chất chuẩn tương đương 100 mg dexamethason acetat cho vào bình định mức 100 ml, hòa tan vừa đủ thể tích methanol Bảo quản lọ thủy tinh kín – 8oC, dùng vòng tháng + Dung dịch chuẩn: Lấy xác ml dung dịch chuẩn gốc cho vào bình định mức 100 ml, pha lỗng vừa đủ thể tích methanol Lọc qua màng lọc 0,45 μm + Dung dịch thử: Lấy thuốc đơn vị chế phẩm chọn ngẫu nhiên Trộn đồng Cân xác 01 đơn vị chế phẩm vào ống nghiệm 10 ml, thêm ml methanol, khảo sát 76 Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích Dựa vào đặc tính hoạt chất kết nghiên cứu định lượng dexamethason acetat HPLC công bố [8], [3], tiến hành khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích phù hợp khả thi Thực sắc ký dexamethason acetat (dung dịch chuẩn) với hệ pha động methanol – nước với tỷ lệ thay đổi, methanol 5065%, nước 50 – 35% (∆C = 5%), tốc độ dòng 1,5 ml/ phút Kết cho thấy nồng độ methanol tăng thời gian lưu pic dexamethason acetat giảm áp suất cột tăng nhanh Ở tỷ lệ methanol 65%, nước 35% thời gian lưu khoảng phút áp suất khoảng 220 bar Để áp suất hệ thống không cao (