Nghiên cứu ứng dụng chiết pha rắn để định lượng vitamin d trong một số chế phẩm multivitamin bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Bộ giáo dục đào tạo Bộ y tế Trường Đại học Dược Hà nội Đinh văn Thành Nghiên cứu ứng dụng chiết pha rắn để định lượng vitamin D mét SỐ chÕ phÈm Multivitamin b»ng s¾c ký láng hiệu cao Luận văn thạc sĩ dược học Hà nội - 2006 Bộ giáo dục đào tạo - Bộ y tế Trường Đại học Dược Hà nội Đinh văn Thành Nghiên cứu ứng dụng chiết pha rắn để định lượng vitamin D S chế phẩm Multivitamin sắc ký lỏng hiệu cao Chuyên ngành : KiĨm nghiƯm thc - ®éc chÊt M· sè : 607315 Luận văn thạc sĩ dược học Người hướng dẫn: PGS.TS Thái Phan Quỳnh Như Hà nội - 2006 Lời cảm ơn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Thái Phan Quỳnh Như TS Trần Việt Hùng tận tình hướng dẫn bảo, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trìmh học tập nghiên cứu thực đề tài Xin trân trọng cám ơn Ban giám hiệu nhà trường, cám ơn thầy cô Phòng Đào tạo sau đại học, Bộ môn Phân tích Bộ môn khác trường Đại học Dược Hà nội tạo điều kiện tốt cho thời gian học tập trường Tôi xin chân thành cám ơn Ban giám đốc Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương, phòng Hoá lý nơi thực đề tài, Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm - Mü phÈm thc Së Y tÕ NghƯ an n¬i công tác quan tâm tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành nhiệm vụ học tập nghiên cứu thời gian qua Cuối xin cám ơn gia đình bạn bè động viên, chia sẻ, khích lệ giúp đỡ tận tình để có kết ngày hôm Đinh văn Thành Học viên cao học khóa chuyên ngành Kiểm nghiệm thuốc độc chất MC LC Li cm n Trang Mục lục Danh mục từ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình Đặt vấn đề Phần Tổng quan 1.1 Vài nét vitamin D 1.1.1 Cơng thức, cấu trúc hóa học 1.1.2 Tính chất 1.1.3 Dược lý tác dụng 1.2 Các chế phẩm multivitamin có vitamin D 1.2.1 Chế phẩm trình bày thị trường 1.2.2 Kỹ thuật áp dụng để bào chế vitamin D 1.2.3 Trở ngại phân tích, kiểm soát chất lượng vitamin D 1.3 Các phương pháp định tính, định lượng vitamin D 1.3.1 Định tính 1.3.2 Định lượng 1.4 Tổng quan SPE 1.4.1 Quá trình nghiên cứu cho chiết pha rắn 1.4.2 Các loại pha rắn 1.4.3 Cơ chế liên kết rửa giải 1.4.4 Thực hành SPE 1.4.5 Vi chiết pha rắn 1.4.6 Ứng dụng, ưu nhược điểm chiết pha rắn 1.5 Tổng quan HPLC, so sánh HPLC SPE Phần Đối tượng, thiết bị, nội dung phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu, hóa chất, thiết bị 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu cho mẫu nghiên cứu 3 4 5 8 10 14 14 16 19 22 24 25 26 29 29 30 30 2.2.2 Khảo sát xây dựng quy trình chiết pha rắn 2.2.3 Xây dựng quy trình HPLC để phân tích vitamin D 2.2.4 Đánh giá chương trình sắc ký vừa xây dựng 2.2.5 Áp dụng định lượng chế phẩm 2.2.6 Phương pháp nghiên cứu 2.2.7 Phương pháp xử lý đánh giá kết Phần Thực nghiệm, kết quả, bàn luận 3.1 Khảo sát trình chiết SPE 3.1.1 Xử lý cột SPE 3.1.2 Khảo sát điều kiện chiết SPE 3.1.3 Rửa tạp phục hồi cột 3.1.4 Khảo sát hiệu suất chiết SPE 3.2 Xử lý mẫu thử mẫu chuẩn 3.2.1 Siro Patarvit 3.2.2 Nang mềm Homtamin 3.2.3 Lựa chọn điều kiện sắc ký 3.3 Kết khảo sát trình sắc ký, xây dựng ph/pháp định lượng 3.3.1 Khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký 3.3.2 Khảo sát tuyến tính của phương pháp định lượng 3.3.3 Khảo sát giới hạn định lượng, giới hạn phát 3.3.4 Định lượng vitamin D chế phẩm siro Patarvit 3.3.5 Định lượng vitamin D chế phẩm Homtamin 3.3.6 Áp dụng định lượng vitamin D chế phẩm nang mềm Amorvita nhũ tương Hydrosol 31 31 31 32 33 32 35 35 35 35 38 39 40 40 40 41 42 42 43 44 46 48 3.4 Bàn luận Phần Kết luận đề xuất 4.1 Kết luận 4.2 Đề xuất Tài liệu tham khảo Phụ lục 55 62 62 63 52 DANH MỤC CÁC HÌNH Stt Ký hiệu Nội dung Trang Hình 1.1 Mô tả qúa trình chiết pha rắn 23 Hình 1.2 Mô tả quá trình vi chiết pha rắn 25 Hình 3.1 37 Hình 3.3 Sắc ký đồ mẫu rữa bằng bằng 1ml (methanol:nước) thứ nhất Sắc ký đồ mẫu rữa bằng bằng 1ml (methanol:nước) thứ năm Sắc ký đồ mẫu thử siro Patarvit chưa qua SPE Hình 3.4 Đường hồi quy tuyến tính giữa nồng độ và diện tích píc của vitamin D 44 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn của của vitamin D 51 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu thử siro Patarvit 52 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu thử viên nang mềm Homtamin 52 Hình 3.2 37 38 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao SPE Chiết pha rắn SPME Vi chiết pha rắn USP Dược điển Mỹ BHT Butyl HydroxyToluen LOD Giới hạn phát hiện LOQ Giới hạn định lượng RSD Độ lệch chuẩn DMSO DiMethylSulfocid MS Sắc ký khối phổ PCB PolyCloBiphenyl GC Sắc ký khí SDB Styren Divinyl Benzen PTFE PolyTetraFluoroEtylen PE PolyEtylen TLC Sắc ký lớp mỏng DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ LIỆU Stt Ký hiệu Nội dung Trang Bảng 1.1 Một số chế phẩm multivitamin có vitamin D Bảng 1.2 Các loại pha liên kết cho SPE 20 Bảng 1.3 Một số pha không liên kết cho chiết pha thuận 21 Bảng 1.4 So sánh một số đặc điểm HPLC và SPE 27 Bảng 3.1 Kết quả rửa cột SPE bằng nước 36 Bảng 3.2 Kết quả rửa cột bằng methanol : nước 37 Bảng 3.3 Kết quả khảo sát hiệu suất chiết 39 Bảng 3.4 Bảng 3.5 44 10 Bảng 3.6 11 Bảng 3.7 Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc ký (số đĩa lý thuyết và hệ số cân xứng) Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc ký (thời gian lưu và diện tích pic của vitamin D) Kết quả sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic Kết quả khảo sát giới hạn định lượng 12 Bảng 3.8 Hàm lượng vitamin D siro Patarvit 46 13 Bảng 3.9 Khảo sát độ lặp lại mẫu siro Patarvit 47 14 Bảng 3.10 Kết quả đánh giá độ đúng mẫu siro Patarvit 48 15 Bảng 3.11 Kết quả hàm lượng vita D Homtamin 50 16 Bảng 3.12 Khảo sát độ lặp lại mẫu Homtamin 50 17 Bảng 3.13 Khảo sát độ đúng mẫu Homtamin 51 18 Bảng 3.14 Kết quả định lượng vitamin D Amorvita 53 19 Bảng 3.15 Kết quả định lượng vitamin D Hydrosol 54 43 44 45 ĐẶT VẤN ĐỀ Vitamin nhóm chất thiết yếu sống mà thể người không tự tổng hợp tổng hợp không đủ đáp ứng yêu cầu, thiếu thường thiếu lúc nhiều loại Các vitamin cần cung cấp nguồn ngoại sinh Vì phối hợp vitamin nhằm cung cấp số vitamin cần thiết cho nhu cầu sinh lý, bệnh lý thiếu thể mục tiêu nhà bào chế sử dụng multivitamin trở thành cách sử dụng thuốc quen thuộc nhiều người Hiện thị trường, số lượng lớn multivitamin lưu hành với dạng bào chế phong phú dung dịch, viên nang mềm, siro, nhũ tương, viên bao, bột gói…Các multivitamin dần thay vitamin đơn thành phần chiếm thị phần lớn thị trường thuốc chữa bệnh Khác với chế phẩm vitamin đơn thành phần, multivitamin có đặc điểm thực gây khó khăn cho cơng tác phân tích, giám sát chất lượng Việc đảm bảo chất lượng cho nhóm thuốc trở thành nhu cầu cấp thiết Việc phân tích vitamin tan dầu nước thực tốt phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Tuy nhiên vitamin D chế phẩm multivitamin q trình phân tích gặp nhiều khó khăn, chế phẩm dạng nhũ tương, nang mềm Vitamin D có hoạt lực sinh học cao nên hàm lượng chế phẩm thường nhỏ so với thành phần khác Vitamin D dễ bị oxy hóa Ở nồng độ phân tích vitamin D ảnh hưởng tá dược, vitamin khác, tạp phân hủy thành phần chế phẩm gây cản trở đáng kể P8 2b Một số sắc ký đồ định lượng vitamin D siro Patarvit P9 P 10 2c Một số sắc ký đồ định lượng vitamin D nhũ tương Hydrosol P 11 P 12 P 13 2d Sắc ký đồ định lượng vitamin D nang mềm Amorvita P 14 P 15 P 16 P 17 P 18 P 19 P 20 P 21 P 22 ... - 2006 Bộ giáo d c đào tạo - Bộ y tế Trường Đại học D ợc Hà nội Đinh văn Thành Nghiên cứu ứng d ng chiết pha rắn để định lượng vitamin D S chế phẩm Multivitamin sắc ký lỏng hiệu cao Chuyên ngành... phòng hóa để loại tá d ợc thân d u - Chiết vitamin D, rửa làm d ch chiết loại bỏ dung môi chiết - Sử d ng sắc ký lỏng pha đảo cột C8, d ng dung mơi thích hợp để tinh chế làm vitamin D dung d ch thử... chế phẩm multivitamin sắc ký lỏng hiệu cao Công trình thực hiện các nội dung sau: - Nghiên cứu quy trình chiết pha rắn để làm sạch, làm giàu vitamin D số chế phẩm multivitamin - Xây d ng