TNU Journal of Science and Technology 228(01) 385 392 http //jst tnu edu vn 385 Email jst@tnu edu vn STUDY ON ANTIMICROBIAL ACTIVITIES IN VITRO BY FRACTIONS OF COPTOSAPELTA FLAVESCENS KORTH RUBIACEAE[.]
TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 STUDY ON ANTIMICROBIAL ACTIVITIES IN VITRO BY FRACTIONS OF COPTOSAPELTA FLAVESCENS KORTH RUBIACEAE Nguyen Thi Bach Tuyet*, Nguyen Nhut Truong Nguyen Tat Thanh University ARTICLE INFO Received: 25/10/2022 Revised: 07/12/2022 Published: 20/12/2022 KEYWORDS Coptosapelta flavescens Ethyl acetat fraction Antimicrobial activity MIC S aureus ABSTRACT Coptosapelta flavescens Korth Rubiaceae (CF) was reported as a potential herbal with various biological activities, especially antimicrobial activity To provide more scientific information, this research was conducted to evaluate the antimicrobial activity in vitro of this herbal CF’s crude extract was collected in Ninh Thuan province in March 2021 Fraction extracts were prepared by partitioning method with solvents of increasing polarity, including n-hexane, chloroform, dichloromethane, ethyl acetate, and methanol Their antimicrobial activities were determined by agar disc diffusion and agar dilution method The n- hexane and methanol extracts showed no inhibitory effect on all tested microorganisms The chloroform and dichloromethane extracts exhibited weak antibacterial activities, against tested Gram-positive bacteria It was interesting when the ethyl acetate extract resisted all tested microorganisms In particular, in tested microorganisms, the ethyl acetate extract inhibited the growth of S aureus ATCC 25923 strongest with MIC of 0.512 mg/mL and diameter of inhibition zone of 22.67 mm Because S aureus is a popular agent that causes skin and soft tissue infections, the extract will be a potential active ingredient for developing some preparations for the treatment of tissue infection KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT IN VITRO CỦA PHÂN ĐOẠN CAO KHAI (COPTOSAPELTA FLAVESCENS KORTH RUBIACEAE) Nguyễn Thị Bạch Tuyết*, Nguyễn Nhựt Trường Trường Đại học Nguyễn Tất Thành THƠNG TIN BÀI BÁO TĨM TẮT Dây khai (Coptosapelta flavescens Korth Rubiaceae) dược liệu quý Ngày nhận bài: 25/10/2022 hiếm, giàu tiềm với tác dụng sinh học khác nhau, có khả Ngày hồn thiện: 07/12/2022 kháng vi sinh vật Với mục đích cung cấp thêm sở khoa học, nghiên cứu thực khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật in vitro phân đoạn Ngày đăng: 20/12/2022 Cao khai Coptosapelta flavescens Korth (Rubiaceae family) Sử dụng Cao khai thu thập tỉnh Ninh Thuận vào tháng 03/2021 để chiết xuất cao TỪ KHĨA phân đoạn với dung mơi có độ phân cực tăng dần, bao gồm n –hexan, Cao khai chloroform, dichloromethan, ethyl acetat methanol Đánh giá hiệu kháng vi sinh vật cao phân đoạn phương pháp khuếch tán đĩa Cao ehtyl acetat thạch dựa vào đường kính vùng ức chế (mm) sử dụng phương pháp pha Kháng vi sinh vật loãng môi trường thạch để xác định giá trị nồng độ tối thiểu ức chế vi MIC sinh vật (MIC) cao tiềm Kết thu cho thấy, cao n hexan S aureus cao methnol hoạt tính kháng vi sinh vật Cao chloroform cao dichloromethan thể hoạt tính kháng khuẩn yếu, chủ yếu tác động chủng vi khuẩn Gram dương Cao ethyl acetat có khả kháng tốt chủng vi sinh vật thử nghiệm Đặc biệt, cao ethyl acetat kháng tốt vi khuẩn S aureus ATCC 25923 – tác nhân thường phân lập ổ nhiễm trùng da, mô mềm với giá trị MIC đạt 0,512 mg/mL đường kính vùng ức chế 22,67 mm Kết nghiên cứu tạo tiền đề để phát triển dạng bào chế dùng để rửa vết thương nhiễm trùng DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.6774 * Corresponding author Email: ntbtuyet@ntt.edu.vn http://jst.tnu.edu.vn 385 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 Giới thiệu Theo xu hướng đại, việc phát triển thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên ngày trọng Dây khai (Coptosapelta flavescens Korth (Rubiaceae family)) vốn loài đặc hữu, giàu tiềm năng, sử dụng lâu đời thông qua thuốc cổ truyền, chữa cảm cúm, điều trị gout [1], [2] Hiện này, Dây khai cao khô từ Dây khai (thường gọi “Cao khai”) tỉnh Ninh Thuận xem nguồn tài nguyên quý giá, với nhiều công dụng khác kháng viêm [3], [4], giảm đau [5], giãn mạch [6], giãn phế quản [7] Bên cạnh đó, theo kinh nghiệm dân gian, người đồng bào Re Đông Nam Bộ sử dụng nước sắc rễ Khai để rửa vết thương phần mềm, nhằm hạn chế nhiễm trùng, giúp vết thương mủ, mau lên da non [8] Năm 2014, Wipapan K cộng phân lập dẫn chất anthraquinon dẫn chất naptoquinon từ dịch chiết aceton rễ C flavences chứng minh khả kháng khuẩn MSSA MRSA – vi khuẩn thường phân lập ổ nhiễm trùng da, mô mềm [9] Từ cho thấy, Dây khai có tiềm kháng khuẩn làm lành vết thương Tuy nhiên, nay, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật Dây khai Do đó, nghiên cứu tiến hành khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật phân đoạn Cao khai nhằm chứng minh hoạt tính kháng vi sinh vật đánh giá tiềm sử dụng Cao khai hỗ trợ điều trị nhiễm trùng da, mô mềm, làm lành vết thương Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên vật liệu 2.1.1 Mẫu thử Cao khai thu thập tỉnh Ninh Thuận vào tháng 03/2021 Cao khai sản xuất sau: Sau thu hái dây khai tiến hành loại bỏ thừa, xử lý sơ cắt thành đoạn nhỏ, đưa vào quy trình nấu cao Cao nấu 03 lần với nước sôi (khoảng 100oC 48 tiếng/1 lần) Tiếp đến gộp dịch chiết cô đặc đến đạt độ sánh phù hợp (theo kinh nghiệm trình thực hiện) Sau cùng, đổ cao vào khuôn gọi Cao khai Cao màu nâu đen, có mùi thơm đặc trưng, vị đắng Sau thu mua, độ ẩm Cao khai 11,48%, phân loại cao đặc [10], bảo quản -20oC trước thử nghiệm Hình ảnh thân Dây khai sản phẩm Cao khai thể Hình (a) (b) (c) Hình Hình ảnh thân Dây khai sản phẩm Cao khai (a) Thân Dây khai Coptosapelta flavescens Korth.; (b) sản phẩm Cao khai thu thập tỉnh Ninh Thuận; (c) bột Cao Khai sau nghiền mịn 2.1.2 Vi sinh vật thử nghiệm Staphylococcus aureus ATCC 25923 Methicillin resistant Staphylococcus areus (MRSA) ATCC 33591 Escherichia coli ATCC 25922 Streptococus pyogens ACTT 4111 Pseudomonas aeruginose ATCC 27853 Candida albicans ATCC 10231 http://jst.tnu.edu.vn 386 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 Các vi sinh vật cung cấp Bộ môn Vi sinh – ký sinh trùng, Khoa Dược, Đại học Nguyễn Tất Thành 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Chiết xuất cao phân đoạn từ Cao khai tồn phần Quy trình chiết xuất cao phân đoạn từ cao toàn phần sau: Cao toàn phần tái hoà tan vào nước với tỉ lệ cao toàn phần – nước (1:10), thu dịch Dịch lắc phân bố riêng rẽ với dung mơi (tỉ lệ dịch – dung mơi (1:1)) có độ phân cực tăng dần gồm n - hexan, chloroform, dichloromethan, ethylacetat, methanol, sau bay dung mơi để thu cao phân đoạn tương ứng, đặt tên cao n- hexan, cao chloroform, cao dichloromethan, cao ethyl acetat, cao methanol (Hình 2) Cao tồn phần (1:10) Lắc với n - hexan Cao n - hexan Dịch nước Lắc với chloroform Cao Chloroform Dịch nước Lắc với dichloromethan Cao Dichloromethan Dịch nước Lắc với ethyl acetat Cao Etylacetat Dịch nước Cao Methanol Lắc với methanol Dịch nước Hình Quy trình chiết cao phân đoạn Các cao đánh giá hoạt tính kháng số vi sinh vật gây nhiễm trùng mơ mềm ngồi da in vitro nhằm lựa chọn cao phân đoạn có hoạt tính kháng vi sinh vật tốt 2.2.2 Xác định hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán đĩa Mục tiêu: Đánh giá vùng ức chế vi sinh vật thử nghiệm phân đoạn phương pháp khuếch tán đĩa [11] Mẫu thử: Các cao phân đoạn hồ tan vào dung mơi tương ứng để đạt nồng độ mg/mL so với mẫu chứng âm (dung mơi hồ tan cao phân đoạn) Vi sinh vật thử nghiệm: Vi khuẩn S aureus, MRSA, E coli, P aeruginosa phân lập môi trường MHA (Mueller Hinton Agar); S pyogenes phân lập môi trường BHI (ủ 37oC 24 Lấy – khuẩn lạc riêng rẽ phân tán dung dịch NaCl 0,85% bổ sung 0,05% tween 80, cho mật độ vi khuẩn đạt khoảng – x 108 CFU/ ml (OD600 nm từ 0,08 – http://jst.tnu.edu.vn 387 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 0,12) Nấm men C albicans phân lập môi trường SDA (Sabauraud Dextrose Agar) vịng 48 37oC Sau đó, lấy – khóm nấm phân tán dung dịch NaCl 0,85% bổ sung 0,05% tween 80 cho mật độ vi nấm khoảng 106 CFU/mL (OD530 nm từ 0,08 – 0,12) Tiến hành: Dùng que vô trùng trải huyền dịch vi sinh vật lên bề mặt môi trường thử nghiệm Đặt đĩa giấy vơ trùng tẩm 20 µL chất thử (cao phân đoạn nồng độ mg/ml) Ủ đĩa thạch 37oC 24 vi khuẩn 48 nấm men Ghi nhận đường kính vịng ức chế (mm) lặp lại lần để lấy giá trị trung bình Từ đó, lựa chọn phân đoạn có đường kính vịng ức chế cao để thực thử nghiệm xác định MIC 2.2.3 Xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật (MIC) Mục tiêu: Xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật (MIC) cao phân đoạn tiềm phương pháp pha lỗng mơi trường thạch theo hình bàn cờ [12] Mơi trường thử nghiệm: MHA vi khuẩn (S aureus, MRSA, E coli, P aeruginosa), BHI vi khuẩn S pyogenes MHA + 2% glucose C albicans ATCC 10231 Vi sinh vật chuẩn bị mục 2.2.2 Tiến hành: Cao phân đoạn pha loãng liên tục với môi trường thử nghiệm với nồng độ giảm dần theo lũy thừa bậc đĩa 96 giếng Cấy vi khuẩn thử nghiệm (vi khuẩn 104 CFU, vi nấm C albicans 103 CFU) lên bề mặt thạch [13] Ủ đĩa thạch điều kiện thích hợp: vi khuẩn 37oC/24 giờ, vi nấm 37oC/48 ghi nhận giá trị MIC Lặp lại lần để lấy giá trị trung bình Kết bàn luận 3.1 Chiết xuất cao phân đoạn từ Cao khai toàn phần Khối lượng hiệu suất chiết cao phân đoạn thể Bảng Bảng Khối lượng phân đoạn Khối lượng (g) Màu sắc Hiệu suất chiết (%) Cao n - hexan 0,01 Vàng nâu 0,50% Cao chloroform 0,019 Vàng nâu 0,95% Cao dichloromethan 0,0252 Vàng nâu 1,26% Cao Ethylacetat 0,0527 Vàng nâu 2,64% Cao methanol 0,3995 Vàng nâu 19,98% Từ kết bảng cho thấy, cao phân đoạn thu có hiệu suất chiết tăng dần theo độ phân cực dung môi 0,5% tới 19,98% Nghiên cứu sử dụng cao phân đoạn để đánh giá hoạt tính kháng khuẩn in vitro 3.2 Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật in vitro cao phân đoạn Cao khai tồn phần 3.2.1 Xác định hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán đĩa Đường kính vùng ức chế vi sinh vật thử nghiệm cao phân đoạn Cao khai toàn phần thể Bảng Hình Bảng Đường kính vùng ức chế (mm) mẫu thử nghiệm S aureus MRSA S.pyogens P.aeruginosa E coli C.albicans Đường kính vịng ức chế vi khuẩn (mm) (Mean ± SD) N –hexan Chloroform Dichloromethan Ethyl acetat Methanol 8,00 ± 1,00 11,17 ± 1,26 22,67 ± 0,29 11,00 ± 0,00 8,00 ± 0,00 15,67 ± 0,58 8,00 ± 1,00 8,00 ± 1,73 11,00 ± 2,00 8,00 ± 0,50 8,33 ± 0,58 11,33 ± 1,04 - http://jst.tnu.edu.vn 388 Chứng âm - Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology S aureus 228(01): 385 - 392 MRSA S.pyogens P aeruginosa E coli C albicans Chú thích: (1) cao n – hexan, (2) cao chloroform (3) cao dichloromethan, (4) cao ethylacetat, (5) cao methanol, (6) chứng âm Hình Vùng ức chế vi sinh vật thử nghiệm phân đoạn Nhận xét: Hoạt tính kháng vi sinh vật cao phân đoạn nồng độ mg/mL: • Mẫu chứng âm dung mơi hồ tan tương ứng với cao phân đoạn không cho vùng ức chế Điều cho thấy kết thử nghiệm không bị ảnh hưởng dung mơi hồ tan • Cao n – hexan cao methanol không cho vùng ức chế, chứng tỏ cao khơng có hoạt tính, khơng kháng vi sinh vật thử nghiệm • Cao chloroform cao dichloromethan thể hoạt tính kháng vi sinh vật yếu, chủ yếu tác động chủng vi khuẩn gram dương, không ức chế phát triển vi khuẩn gram âm vi nấm Cụ thể, với cao chloroform cao dichloromethan có đường kính vùng ức chế S.aureus, MRSA, S.pyogenes mm, 11 mm, mm 11,17 mm, mm, mm • Cao ethyl acetat có khả kháng vi khuẩn vi nấm với đường kính vùng ức chế S aureus 22,67 mm, MRSA 15,67 mm, S.pyogens 11 mm, P.aeruginosa mm, E.coli 8,33 mm, C.albicans 11,33 mm Phổ kháng khuẩn cao ethyl acetat tốt nhóm vi khuẩn gram dương Điểm đặc biệt cao ethyl acetat có khả kháng tốt vi khuẩn S aureus MRSA – tác nhân thường phân lập ổ nhiễm trùng da, mơ mềm Vì vậy, nghiên cứu lựa chọn phân đoạn ethyl acetat để xác định giá trị MIC, đánh giá tác động kháng khuẩn in vivo 3.2.2 Xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật (MIC) cao ethyl acetat Giá trị MIC phân đoạn ethyl acetat xác định phương pháp pha lỗng mơi trường thạch với nồng độ cao 8,192 mg/mL Thực đồng thời mẫu chứng âm đĩa 12 Hoạt tính kháng S aureus, P aeruginosa, E coli, MRSA cao ethyl acetat minh họa Bảng Hình 4, sử dụng hỗn hợp dung mơi hịa tan bao gồm DMSO 1%, PEG 400 2%, Tween 80 0,5% môi trường thử nghiệm MHA Bảng Xác định MIC S aureus, P aeruginosa, E coli, MRSA Nồng độ (mg/mL) Vi sinh vật S aureus P.aeruginosa E coli MRSA 8,192 4,096 2,048 1,024 0,512 0,256 0,128 0,064 0,032 10 0,016 11 0,008 12 - - - + + - + + - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + Chú thích: (-) Vi sinh vật không tăng trưởng, (+) Vi sinh vật tăng trưởng http://jst.tnu.edu.vn 389 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 10 11 Chú thích: (A) S.aureus, (B) P.aeruginosa, (C) E.coli, (D) MRSA 12 Hình Kết MIC S aureus, P aeruginosa, E coli, MRSA Từ Bảng Hình cho thấy, đĩa số có nồng độ mẫu thử thấp ức chế phát triển vi khuẩn gram dương S aureus MRSA Từ đó, xác định giá trị MIC vi khuẩn S aureus MRSA phân đoạn ethyl acetat 0,512 mg/mL Mặt khác, đĩa số nồng độ thấp mẫu thử ức chế phát triển vi khuẩn gram âm P aeruginosa E coli Từ đó, xác định giá trị MIC phân đoạn ethyl acetat vi khuẩn P aeruginosa E coli 2,048 mg/mL Hoạt tính kháng khuẩn S pyogens phân đoạn ethyl acetat minh họa Bảng Hình 5, sử dụng hỗn hợp dung mơi hịa tan bao gồm DMSO 1%, PEG 400 2%, Tween 80 0,5% môi trường thử nghiệm BHI Bảng Xác định MIC S pyogens Nồng độ (mg/mL) Vi sinh vật S.pyogens 8,192 4,096 2,048 1,024 0,512 0,256 0,128 0,064 0,032 10 0,016 11 0,008 12 - - - - - + + + + + - + Chú thích: (-) Vi sinh vật khơng tăng trưởng, (+) vi sinh vật tăng trưởng 10 Hình Kết MIC S.pyogens 11 12 Từ Bảng Hình cho thấy, đĩa số nồng độ thấp ức chế phát triển vi khuẩn S pyogens Từ đó, nghiên cứu xác định giá trị MIC 0,512 mg/mL Hoạt tính kháng nấm C albicans cao ethyl acetat minh họa Bảng Hình 6, sử dụng hỗn hợp dung mơi hòa tan bao gồm DMSO 1%, PEG 400 2%, Tween 80 0,5% môi trường thử nghiệm MHA bổ sung 2% glucose http://jst.tnu.edu.vn 390 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 Bảng Xác định MIC C albicans Nồng độ (mg/mL) Vi sinh vật C.albicans 8,192 - 4,096 + 2,048 + 1,024 + 0,512 + 0,256 + 0,128 + 0,064 + 0,032 + 10 0,016 + 11 0,008 - Chú thích: (-) Vi sinh vật không tăng trưởng, (+) vi sinh vật tăng trưởng 10 Hình Kết MIC C.albicans 11 12 Qua Bảng Hình cho thấy, đĩa số đến số 10 có vi nấm mọc tăng trưởng Đĩa số khơng có tượng vi nấm C albicans mọc Từ đó, nghiên cứu xác định giá trị MIC cao ethyl acetat nấm C albicans 8,192 mg/mL Kết giá trị MIC cao ethyl acetat chủng vi sinh vật thể Bảng Bảng Giá trị MIC cao ethyl acetat chủng vi sinh vật Vi sinh vật S aureus P.aeruginosa E coli MRSA S.pyogens C.albicans MIC (mg/mL) 0,512 ± 2,048 ± 2,048 ± 0,512 ± 0,512 ± 8,192 ± Qua Bảng cho thấy, cao ethyl acetat kháng tốt chủng vi khuẩn gram dương (S aureus, MRSA, S pyogens) với MIC 0,512 mg/mL, chủng vi khuẩn gram âm (P aeruginosa, E coli) với MIC 2,048 mg/mL cuối vi nấm C albicans với MIC 8,192 mg/mL Kết phù hợp với phương pháp khuếch tán đĩa (Bảng 2, Hình 3) Từ kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp đặt đĩa giấy với xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật (MIC), cho thấy phân đoạn cao ethyl acetat cho kết kháng vi sinh vật lớn cao phân đoạn, đặc biệt chủng S aureus (đường kính ức chế trung bình lớn 22,67 mm) Đồng thời, nồng độ tối thiểu (MIC) 0,512 mg/mL (tương đương 512 μg/mL) có khả ngăn chặn tăng trưởng S aureus Do đó, cao ethyl acetat có tiềm việc kháng tốt chủng S aureus Hiệu kháng Staphylococcus aureus thấp lần so với cao acetone (MIC = 128 μg/mL) mà Wipapan Kongyen cộng (năm 2014) [9] thực Sự khác nhóm nghiên cứu giải thích khác dung môi chiết xuất (ethyl acetat, aceton) nơi thu hái dược liệu mang thổ nhưỡng khác (Ninh Thuận – Việt Nam, Thái Lan) Trên chủng vi sinh vật khác, cao ethyl acetat thể đường kính vùng ức chế S.pyogens (d = 11 mm), P aeruginosa (d = mm), E coli (d = 8,33 mm), C albicans (d = 11,33 http://jst.tnu.edu.vn 391 Email: jst@tnu.edu.vn 12 + TNU Journal of Science and Technology 228(01): 385 - 392 mm) Kết đường kính vùng ức chế 8,33 mm cao ethyl acetat với chủng E coli tương tự với nghiên cứu D Dewi Marliana cộng (2019) [14] với đường kính ức chế từ 11,5 đến 15 mm tăng nồng độ từ – 16% phân đoạn methanol rễ Dây khai Trên chủng vi nấm C albicans, cao ethyl acetat thể đường kính vịng ức chế 11,33 mm Kết tương đồng với nhóm nghiên cứu Kusumawati cộng (2020) với đường kính ức chế 12,98 mm cao chiết ethanol 10% rễ C flavences so với đối chứng ketoconal (20,17 mm) [15] Kết luận Nghiên cứu thu cao phân đoạn với hiệu suất chiết cao n–hexan 0,50%; cao chloroform 0,95%; cao dichloromethan 1,26%; cao ethylacetat 2,64%; cao methanol 19,98% Cao ethyl acetat thể hoạt tính kháng vi sinh vật tốt cao phân đoạn với đường kính vùng ức chế S.aureus (d = 22,67 mm), MRSA (d = 15,67 mm), S.pyogens (d = 11 mm), P.aeruginosa (d = mm), E.coli (d = 8,33 mm), C.albicans (d = 11,33 mm) Đặc biệt, cao ethyl acetat kháng tốt với chủng S.aureus với MIC = 0,512 mg/mL Các kết tạo tiền đề để tiếp tục thực nghiên cứu mơ hình kháng khuẩn in vivo trước ứng dụng bào chế sản phẩm điều trị nhiễm trùng ngồi da, mơ mềm TÀI LIỆU THAM KHẢO/ REFERENCES [1] M V Vo, Y K T Nguyen, and T K T Pham, “Medicinal plants used by the hre community in the Ba to district of central Vietnam,” Journal of Medicine Plants Stud., vol 2, pp 64-71, 2014 [2] K C Tran, “Herbal medicine named “Day khai” in Vietnamese,” Medicine and health, no 383, p 15, 2009 [3] K Kosala et al., "In vitro and in vivo anti-inflammatory activities of Coptosapelta flavescens Korth Root’s methanol extract," Journal of Applied Pharmaceutical Science, vol 8, pp 42-48, 2018 [4] T B T Nguyen and L P T Hoang, "Study on oral acute toxicity and anti-inflammatory effects of Cao Khai traditional medicine produced in Ninh Thuan province, Vietnam," Journal of Science and Technology - Nguyen Tat Thanh University, vol 3, no 3, pp 61-67, 2020 [5] L P T Hoang and T B T Nguyen, "Evaluation of the analgesic effect of the extract from Coptosapelta flavescens Korth stem on white mice," Journal of Science and Technology - Nguyen Tat Thanh University, vol 4, no 1, pp 56-62, 2021 [6] K Kosala et al., "In vitro exploration of vasodilaction activity of the methanol extract of the Coptosapelta flavescens Korth stem," Journal of Islamic Medicine Research, vol 1, pp 10-14, 2017 [7] K Kosala, M A Widodo et al., "In Vitro study of the bronchorelaxation effect on Coptosapelta flavescens Korth Root’s extract and fractions," Asian Tournal of Pharmaceutical and Clinical Research, vol 12, pp 95-97, 2019 [8] B H Do, Medicinal plants and medicinal animals in Vietnam, vol 1, Hanoi Science and Technology Publishing House, 2003, pp 645-646 [9] K Wipapan et al., “Anthraquinone and Naptoquinone Derivatives from the Roots of Coptosapelta flavescens,” Natural Product Communication, vol 9, pp 219-220, 2014 [10] Ministry of Health, Vietnamese-pharmacopoeia-V (in vietnamese), vol 2, Hanoi Medical Publishing House, 2017 [11] CLSI, Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts, Approved Guideline, 2004 [12] J Golus et al., "The agar microdilution method–a new method for antimicrobial susceptibility testing for essential oils and plant extracts," Journal of Applied Microbiology, vol 121, no 5, pp 1291-1299, 2016 [13] L B Reller, M Weinstein et al., "Antimicrobial susceptibility testing: a review of general principles and contemporary practices," Clinical infectious diseases, vol 49, no 11, pp 1749-1755, 2009 [14] D D Marliana et al., "Phytochemical test and antibacterial activity test of methanol extract of merung root (Coptosapelta tomentosa)," Journal Atomik, vol 4, no 2, pp 69-72, 2019 [15] Kusumawati et al., "Antifuncial activity test of Root ethanol extract (Coptosapelta tomentosa Valeton ex K Heyne) against Candida albicans in vitro," Scientific and Applied Journal of Hasnur Polytechnic, vol 8, no 1, pp 1-9, 2020 http://jst.tnu.edu.vn 392 Email: jst@tnu.edu.vn ... cao phân đoạn Các cao đánh giá hoạt tính kháng số vi sinh vật gây nhiễm trùng mơ mềm ngồi da in vitro nhằm lựa chọn cao phân đoạn có hoạt tính kháng vi sinh vật tốt 2.2.2 Xác định hoạt tính kháng. .. theo độ phân cực dung môi 0,5% tới 19,98% Nghiên cứu sử dụng cao phân đoạn để đánh giá hoạt tính kháng khuẩn in vitro 3.2 Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật in vitro cao phân đoạn Cao khai tồn... thử hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp đặt đĩa giấy với xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật (MIC), cho thấy phân đoạn cao ethyl acetat cho kết kháng vi sinh vật lớn cao phân đoạn,