Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm gây bệnh của vi sinh vật nội sinh từ cây neem (azadirachta indica a juss) nghiên cứu khoa học

TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƢỞNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN CẤP TRƢỜNG Tên đề tài KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM GÂY BỆNH CỦA VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) Mã số đề tài Thuộc nhóm ngành khoa học: Cơng nghệ sinh học y dƣợc Tp Hồ Chí Minh, tháng 03 năm 2015 TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƢỞNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN CẤP TRƢỜNG Tên đề tài KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM GÂY BỆNH CỦA VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) Mã số đề tài Thuộc nhóm ngành khoa học: Công nghệ sinh học y dƣợc Sinh viên thực hiện: NGUYỄN TRUNG HIẾU Nam Dân tộc: Kinh Lớp, khoa: DH11SH02 – Công nghệ sinh học Ngành học: Vi sinh – Sinh học phân tử Năm thứ: /Số năm đào tạo: Ngƣời hƣớng dẫn: ThS DƢƠNG NHẬT LINH Tp Hồ Chí Minh, tháng 03 năm 2015 Lời cảm ơn Để hoàn thành đề tài này, chúng em xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô khoa Công Nghệ Sinh Học, trường Đại học Mở thành phố Hồ Chí Minh giảng dạy truyền đạt kiến thức để giúp chúng em làm sở cho đề tài nghiên cứu Chúng em xin chân thành cảm ơn cô Dương Nhật Linh thầy Nguyễn Văn Minh tận tình hướng dẫn, động viên, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện thuận lợi để chúng em hoàn thành tốt đề tài Chúng em xin cảm ơn chị Nguyễn Thị Mỹ Linh quan tâm, giúp đỡ chúng em thực tốt đề tài Bên cạnh đó,chúng xin cảm ơn bạn em phịng thí nghiệm Vi sinh ln ủng hộ, giúp đỡ chúng tơi q trình thực suốt đề tài Đề tài nghiên cứu kết thúc với kỷ niệm đẹp học hỏi thêm nhiều kinh nghiệm áp dụng kiến thức học nghiên cứu Chúng em xin gửi lời chúc sức khỏe đến tất người thầy, người cô đáng kính khoa Cơng nghệ sinh học, Trường Đại Học Mở TP Hồ Chí Minh, xin chúc thầy ngày gặt hái nhiều thành công Chúng xin chúc bạn chúng tơi hồn thành tốt cơng việc học tập trường thành cơng sống Xin chân thành cảm ơn Sinh viên thực Nguyễn Trung Hiếu Tháng 03/2015 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG I DANH MỤC BIỂU ĐỒ II DANH MỤC HÌNH ẢNH .II CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 1.1.1 Đặc điểm thực vật học 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Công dụng 1.1.5 Dược tính 1.2 SƠ LƢỢC VỀ VI SINH VẬT NỘI SINH 1.3 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ VI KHUẨN GÂY BỆNH CHO NGƢỜI 11 1.3.1 Staphylococcus aureus 11 1.3.2 Escherichia coli 12 1.3.3 Salmonella typhi 13 1.3.4 Pseudomonas aeruginosa 14 1.3.5 Klebsiella spp 15 1.3.6 Acinetobacter spp 16 1.4 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ NẤM GÂY BỆNH TRÊN NGƢỜI 16 1.4.1 Trichophyton spp 17 1.4.2 Microsporum spp 18 1.4.3 Bệnh dermatophytes gây 19 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 22 1.5.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 22 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 23 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 24 2.1 VẬT LIỆU 25 2.1.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 25 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 25 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất mơi trường 25 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 26 2.2.2 Tái phân lập 27 2.2.3 Định tính khả kháng khuẩn, kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 28 2.2.4 Định lượng khả kháng khuẩn, kháng nấm dịch lọc vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 30 2.2.5 Khảo sát khả kháng khuẩn vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 33 2.2.6 Khảo sát khả kháng nấm vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 34 2.2.7 Định danh chủng vi nấm vi khuẩn có hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm cao theo phương pháp truyền thống 36 2.2.8 hương pháp thống k số liệu 38 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 KẾT QUẢ TÁI PHÂN LẬP 41 3.1.1 Vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 41 3.1.2 Vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 41 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 42 3.2.1 Kết định tính khả kháng khuẩn vi sinh vật nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 42 3.2.2 Kết định lượng khả kháng khuẩn dịch lọc vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 44 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM CỦA VI KHUẨN NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 48 3.3.1 Kết định tính khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 48 3.3.2 Kết định lượng khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 49 3.4 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 51 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM CỦA VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 53 3.6 ĐỊNH DANH CHỦNG VI SINH VẬT CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CAO NHẤT PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 58 3.6.1 Định danh chủng vi khuẩn có khả kháng khuẩn, kháng nấm cao phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 58 3.6.2 Định danh chủng vi nấm có khả kháng khuẩn, kháng nấm cao phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 60 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 64 4.1 KẾT LUẬN 65 4.2 ĐỀ NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC 72 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số công dụng dƣợc liệu phận neem Bảng 2.1 Biểu mức phát triển khóm nấm 38 Bảng 3.1 Đặc điểm đại thể vi thể vi khuẩn nội sinh từ neem 41 Bảng 3.2 Đặc điểm đại thể vi thể vi nấm nội sinh từ neem 42 Bảng 3.3 Kết định tính khả kháng khuẩn vi sinh vật nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 43 Bảng 3.4 Kết định lƣợng khả kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) (mm) 44 Bảng 3.5 Kết định tính khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh 49 Bảng 3.6 Kết định lƣợng khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh 49 Bảng 3.7 Kết định tính khả kháng khuẩn gây bệnh với nấm nội sinh phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 51 Bảng 3.8 Kết xác định khả kháng khuẩn gây bệnh chủng vi nấm nội sinh phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) (mm) 52 Bảng 3.9 Kết định tính khả kháng khuẩn gây bệnh với nấm nội sinh phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 53 Bảng 3.10 Kết phần trăm ức chế khả kháng T rubrum với nấm nội sinh thử nghiệm từ neem (Azadirachta indica A Juss) 54 Bảng 3.12 Kết phần trăm ức chế khả kháng nấm T mentagrophytes với nấm nội sinh thử nghiệm phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 55 Bảng 3.13 Kết phần trăm ức chế khả kháng nấm M gypseurm với nấm nội sinh thử nghiệm phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 56 Bảng 3.14 Kết định danh sinh hóa chủng KT1, KT2 KT3 60 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU i NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 So sánh khả kháng khuẩn dịch lọc vi khuẩn nội sinh 45 Biểu đồ 3.2 So sánh khả kháng T rubrum vi khuẩn nội sinh từ neem 50 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu trúc vi thể nấm da 17 Hình 1.2 Cấu trúc hình thể nấm da dƣới kính hiển vi 17 Hình 2.1 Kết vòng kháng khuẩn, kháng nấm gây bệnh 30 Hình 2.2 Kết vòng kháng khuẩn, kháng nấm gây bệnh 32 Hình 2.3 Kết vịng kháng khuẩn gây bệnh 34 Hình 2.4 Bố trí thí nghiệm 35 Hình 3.1 Kết quan sát đại thể vi thể vi khuẩn KT2 nội sinh 41 Hình 3.2 Ảnh đại thể vi nấm NT2 nội sinh từ neem 42 Hình 3.3 Kết định lƣợng 48 Hình 3.4 Kết kháng nấm T.rubrum chủng vi khuẩn nội sinh 51 Hình 3.5 Kết khảo sát khả vi nấm nội sinh kháng P aeruginosa 53 Hình 3.6 Nấm T.rubrum đối chứng 55 Hình 3.7 Chủng NT1 kháng nấm T rubrum 55 Hình 3.8 Nấm T.mentagrophytes đối chứng 56 Hình 3.9 Chủng NL1 kháng T.mentagrophytes 56 Hình 3.10 Nấm M gypseurm đối chứng 57 Hình 3.11 Chủng NT2 kháng M gypseurm 58 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU ii NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH Hình 3.12 Kết nhuộm Gram hình thái khuẩn lạc môi trƣờng NA chủng KT1 59 Hình 3.13 Kết nhuộm Gram hình thái khuẩn lạc mơi trƣờng NA chủng KT2 59 Hình 3.14 Kết nhuộm Gram hình thái khuẩn lạc môi trƣờng NA chủng KT3 60 Hình 3.15 Quan sát hình thái nấm NT2 môi trƣờng PDA 61 Hình 3.16 Bào tử chủng NT2 dƣới kính hiển vi 61 Hình 3.17 Quan sát hình thái nấm NL1 mơi trƣờng PDA 62 Hình 18 Bào tử chủng NL1 dƣới kính hiển vi 62 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Bố trí thí nghiệm 27 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU iii GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CFU Colony Forming Unit – Đơn vị hình thành khuẩn lạc Cs Cộng E Coli Escherichia coli ESBL Extend Spectra Beta – Lactamases I (%) Phần trăm ức chế M canis Microsporum canis M gypseum Microsporum gypseum NA Nutrient Agar NB Nutrient Broth OD Optical Density PDA Potato Dextrose Agar P aeruginosa Pseudomonas aeruginosa SDA Sabouraud Dextrose Agar S aureus Staphylococcus aureus S typhi Samonella typhi T mentagrophytes Trichophyton mentagrophytes T rubrum Trichophyton rubrum SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU iv GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Between Groups 203.0586 101.5293 0.845687 0.453321 3.885294 Within Groups 1440.665 12 120.0555 Total 1643.724 14  Kết đường kính vịng kháng Klebsiella spp 81b (A) (mm) SUMMARY Groups Count Sum Average Variance KT1 95 31.66667 2.333333 KT2 42 14 KT3 63 21 ANOVA Source of Variation PSS df MS F Between Groups value F crit 5.76E474.8889 237.4444 164.3846 06 Groups 8.666667 1.444444 Total 483.5556 5.143253 Within  Kết đường kính vịng kháng Klebsiella spp 26b (E) (mm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance KT1 112 28 KT2 0 #DIV/0! #DIV/0! SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 0.666667 79 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KT3 68 17 2.666667 SS df MS F P-value Groups 242 121 60.5 0.000314 5.786135 Within Groups 10 Total 252 ANOVA Source of Variation F crit Between  Kết đường kính vòng kháng Acinetobacter spp 2d (C) (mm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance KT1 71 23.66667 0.333333 KT2 0 KT3 44 14.66667 6.333333 SS df MS ANOVA Source Variation of F Between Groups P-value F crit 3.605E- 856.2222 428.1111 192.65 13.33333 2.222222 06 5.143253 Within Groups SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 80 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Total 869.5556  Kết đường kính vịng kháng P aeruginosa 86c (C) (mm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance KT1 0 KT2 80 26.66667 9.333333 KT3 0 SS df MS F ANOVA Source Variation of P-value F crit Between Groups 1422.222 711.1111 228.5714 2.17425E-06 5.14325285 Groups 18.66667 3.111111 Total 1440.889 Within Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng khuẩn gây bệnh vi khuẩn nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn S aureus SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 81 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn E.coli  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn P Aeruginosa SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 82 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn S.typhi  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn E Coli 4a (A)  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn E.Coli 70a (A, E) SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 83 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn Klebsiella spp 153b (A, E)  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn Klebsiella spp 81b (A)  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn Klebsiella spp 26b (E) SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 84 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn Acinetobacter spp 2d (C)  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng khuẩn P aeruginosa 86c (C) SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 85 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Kết đƣờng kính vịng kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Kết đường kính vịng kháng T rubrum (mm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance KT1 89 29.66667 0.333333 KT2 83 27.66667 0.333333 KT3 92 30.66667 0.333333 SS df MS F P-value Groups 14 21 0.001953 5.143253 Within Groups 0.333333 Total 16 ANOVA Source of Variation F crit Between Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng nấm gây bệnh vi khuẩn nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0  Kết vi khuẩn nội sinh từ neem kháng nấm T rubrum SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 86 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Kết đƣờng kính vịng kháng khuẩn vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Kết đường kính vịng kháng P aeruginosa (mm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance NT1 0 NT2 88 29.33333 0.333333 NT3 0 NL1 0 SS df MS F ANOVA Source of Variation Between P-value F crit 3.46E- Groups 1936 Within Groups 0.666667 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 645.3333 7744 14 4.066180551 0.083333 87 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Total 1936.667 11  Kết đường kính vịng kháng S typhi (mm) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance NT1 0 NT2 87 29 NT3 0 NL1 96 32 SS df MS F ANOVA Source of Variation P-value Between F crit 1.01E- Groups 2804.25 934.75 Within Groups 0.5 Total 2808.25 11 1869.5 11 4.066180551 Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng khuẩn gây bệnh vi nấm nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0  Kết vi nấm nội sinh từ neem kháng P aeruginosa SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 88 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC  Kết vi nấm nội sinh từ neem kháng S typhi Kết phần trăm kháng nấm vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Kết phần trăm kháng nấm T rubrum (%) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average NT1 169.47 56.49 0.6889 NT2 0 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU Variance 89 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NT3 0 NL1 0 ANOVA Source of P- Variation SS df MS F Between value F crit 3.33E- Groups 7180.02 2393.34 Groups 1.3778 0.172225 Total 7181.398 11 13896.59 15 4.066181 Within  Kết phần trăm kháng nấm T mentagrophytes (%) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance NT1 141.55 47.18333 1.243233 NT2 0 NT3 0 NL1 300 100 ANOVA Source of P- Variation SS df MS Between 6810.534 21912.33 5.39E- 4.066180551 20431.6 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU F value F crit 90 GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Groups 16 Within Groups 2.486467 Total 20434.09 11 0.310808  Kết phần trăm kháng nấm M gypseurm (%) Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance NT1 146.29 48.76333 1.177233 NT2 0 NT3 0 NL1 300 100 ANOVA Source Variation of PSS df MS F value Between Groups F crit 4.25E20535.69 6845.23 Groups 2.354467 0.294308 Total 20538.05 11 23258.7 16 4.066181 Within Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng nấm gây bệnh vi nấm nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 91 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH  Kết vi nấm nội sinh từ neem kháng T rubrum  Kết vi nấm nội sinh từ neem kháng T mentagrophytes  Kết vi nấm nội sinh từ neem kháng M gypseurm SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 92 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU GVHD: ThS DƢƠNG NHẬT LINH 93 ... 3.1.1 Vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 41 3.1.2 Vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 41 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN C? ?A VI KHUẨN NỘI SINH TỪ... KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN C? ?A VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 51 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM C? ?A VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA. .. lượng khả kháng khuẩn, kháng nấm dịch lọc vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 30 2.2.5 Khảo sát khả kháng khuẩn vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)