Nghiên cứu tổng hợp và khảo sát hoạt tính kháng vi khuẩn, vi nấm của dẫn chất 5 (5 clorosalicylaldehyd) 3 (4 clorosalicylamido)rhodanin

NGÔ THỊ MỘNG TUYỀN NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG VI KHUẨN, VI NẤM CỦA DẪN CHẤT 5-(5-CLOROSALICYLALDEHYD)-3-(4CLOROSALICYLAMIDO)RHODANIN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cần Thơ- 2018 BỘ Y TẾ ỌC Y DƯỢC CẦN THƠ  - NGÔ THỊ MỘNG TUYỀN NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG VI KHUẨN, VI NẤM CỦA DẪN CHẤT 5-(5-CLOROSALICYLALDEHYD)-3-(4CLOROSALICYLAMIDO)RHODANIN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS PHẠM THỊ TỐ LIÊN Cần Thơ- 2018 I CẢM ƠN sinh thành, nuôi nấng dạy dỗ nên người ộng viên chia sẻ với em khó khăn ố Liên lời cảm ơn chân thành sâu sắc Cơ hết lịng hướng dẫn, chia sẻ kiến thức, kinh nghiệm giúp em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy Ds Huỳnh Trường Hiệp, cô ThS Võ Thị Mỹ Hương, cô ThS Lê Thị Cẩm Tú, cô ThS Trần Lê Uyên, thầy Lê Việt Hùng chị Bùi Thị Ngọc Hân mơn Hóa dược, trường Đại học Y Dược Cần Thơ nhiệt tình bảo, giúp đỡ tạo điều kiện cho em suốt trình thực luận văn tốt nghiệp Em xin cảm ơn thầy cô liên môn Dược liệu - Dược cổ truyền - Thực vật dược, mơn Hóa Phân tích - Kiểm nghiệm - Độc Chất tạo điều kiện, hỗ trợ em phương tiện, máy móc để thực luận văn tốt nghiệp Cảm ơn chị Ds Nguyễn Ngọc Bảo Hà, anh Ds La Minh Thành nhiệt tình trao đổi, chia sẻ kinh nghiệm cho em Cảm ơn bạn nhóm luận văn Hóa dược, Dược liệu, Bào chế Kiểm nghiệm K39 đồng hành, giúp đỡ vượt qua khó khăn, trở ngại suốt thời gian qua I CAM ĐOAN ứu riêng Các số liệu, kết nêu ừng công bố cơng trình nghiên cứu Cần Thơ, ngày 14 tháng năm 2018 Ngô Thị Mộng Tuyền i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH .vi DANH MỤC SƠ ĐỒ vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 5-Clorosalicylaldehyd 1.1.1 Công thức cấu trúc 1.1.2 Danh pháp 1.1.3 Tính chất vật lý 1.1.4 Đặc tính cấu trúc 1.1.5 Tính chất hóa học 1.1.6 Tổng hợp 5-clorosalicylaldehyd 1.1.7 Tác dụng sinh học 5-clorosalicylaldehyd 1.2 3-Aminorhodanin 1.2.1 Công thức cấu trúc 1.2.2 Danh pháp 1.2.3 Tính chất vật lý 1.2.4 Đặc tính cấu trúc 1.2.5 Tính chất hóa học 1.2.6 Phương pháp tổng hợp 3-aminorhodanin dẫn chất 12 1.2.7 Tác dụng sinh học rhodanin dẫn chất 13 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng trang thiết bị nghiên cứu 17 ii 17 17 18 18 2.3 Nội dung nghiên cứu 19 2.3.1 Tổng hợp tinh chế dẫn chất 5-(5-clorosalicylaldehyd)-3-(4clorosalicylamido)rhodanin 19 2.3.2 Kiểm tra độ tinh khiết, xác định thơng số lý hóa cấu trúc hóa học 20 2.3.3 Khảo sát hoạt tính kháng vi khuẩn vi nấm 23 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Tổng hợp khung 3-(4-clorosalicylamido)rhodanin 29 3.2 Tổng hợp dẫn chất 5-(5-clorosalicylaldehyd)-3-(4-clorosalicylamido) rhodanin 29 3.2.1 Tiến hành phản ứng 29 3.2.2 Tinh chế sản phẩm 30 3.2.3 Tính chất sản phẩm 30 3.2.4 Định tính phản ứng hóa học 31 3.3 Kiểm tra độ tinh khiết, xác định thông số lý hóa cấu trúc hóa học 32 3.3.1 Kiểm tra độ tinh khiết xác định thơng số lý hóa 32 3.3.2 Xác định cấu trúc hóa học 33 3.4 Khảo sát hoạt tính kháng vi khuẩn vi nấm dẫn chất 5-(5-clorosalicylaldehyd)-3-(4-clorosalicylamido)rhodanin 34 3.4.1 Kết định tính kháng khuẩn, kháng nấm 34 3.4.2 Kết xác định MIC kháng khuẩn, kháng nấm 34 Chương BÀN LUẬN 35 4.1 Tổng hợp dẫn chất 5-(5-clorosalicylaldehyd)-3-(4-clorosalicylamido) rhodanin 35 4.1.1 Cơ chế phản ứng 35 4.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng tổng hợp 36 iii 37 ịnh thơng số lý hóa cấu trúc hóa học 37 ịnh thơng số lý hóa 37 ọc 38 4.2.3 Xác định cấu trúc hóa học 38 4.3 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm 44 4.3.1 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 44 4.3.2 Đánh giá hoạt tính kháng nấm 45 KẾT LUẬN 46 KIẾN NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC iv ỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ý nghĩa nguyên CFU Colony-forming unit Đơn vị tính số khuẩn lạc 13 13 Phổ 13C xóa ghép đa xung C-CPD C-Composite Pulse Decoupling DMF Dimethylformamide Dimethylformamid DMSO Dimethylsulfoxyde Dimethylsulfoxyd ESI Electrospray ionization Ion hóa phun sương electron 1 Phổ cộng hưởng từ proton H-NMR H nuclear magnetic resonance IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% IN Intergrase Enzym hợp IR Infrared Phổ hồng ngoại MIC Minimum inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MRSA Methicillin-resistant Staphylococcus Vi khuẩn Staphylococcus aureus aureus kháng Methicillin MS Mass spectrometry Khối phổ NMR Nucleus magnetic resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân PDAB Paradimethylaminobenzaldehyde Paradimethylaminobenzaldehyd PL Phụ lục UV-Vis Ultra violet & visible Phổ tử ngoại khả kiến λmax Bước sóng hấp thu cực đại Ν Dao động hóa trị Δ Độ dịch chuyển hóa học h Hour Giờ v ỤC BẢNG khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 3-(4-clorosalicylamido)rhodanin………….…… 17 Bảng 2.2 Trang thiết bị sử dụng nghiên cứu……………… ………………… 18 Bảng 2.3 Đỉnh hấp thu IR đặc trưng sản phẩm ghép 5-(5-clorosalicylaldehyd)-3(4-clorosalicylamido) rhodanin……………………………………………………… 23 Bảng 3.1 Kết định tính sản phẩm ghép phản ứng hóa học…………………31 Bảng 3.2 Kết giá trị Rf ………………………………………………………… 32 Bảng 3.3 Kết đo nhiệt độ nóng chảy sản phẩm ghép 5-(5clorosalicylaldehyd)- 3-(4-clorosalicylamido)rhodanin……………………………….32 Bảng 3.4 Định tính khả kháng khuẩn, kháng nấm…………………………… 34 Bảng 3.5 Kết MIC sản phẩm ghép………………………………………… 34 vi ỤC HÌNH ẢNH Hình 1.3 Cấu trúc aminorhodanin……………………………………………….7 Hình 1.4 Phổ IR 3-aminorhodanin……………………………………………… Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo dẫn chất ký hiệu 1a 1b……………………… 14 Hình 1.6 Công thức cấu tạo dẫn chất ký hiệu 3d 3e………………………… 15 Hình 1.7 Cơng thức hợp chất có ký hiệu 11…………………………………… 15 Hình 1.8.Cơng thức dẫn chất có ký hiệu T21………………………………….………16 Hình 2.1 Phương trình phản ứng để tổng hợp dẫn chất ngưng tụ 5-(5clorosalicylaldehyd)-3-(4-clorosalicylamido)rhodanin………………… ……………19 Hình 2.2 Thứ tự vết chấm mỏng…………………………………………….21 Hình 2.3 Phản ứng định tính khung rhodanin……………………………………… 22 Hình 2.4 Đĩa thạch định tính khả kháng vi khuẩn vi nấm .26 Hình 2.5 Đĩa thạch xác định MIC vi khuẩn, vi nấm…………………………… 28 Hình 3.1 Phương trình phản ứng để tổng hợp dẫn chất ngưng tụ 5-(5clorosalicylaldehyd)-3-(4-clorosalicylamido)rhodanin………………………… ……29 Hình 3.2 Mơ hình phản ứng……………………………………………………… …30 Hình 3.3 Hình dạng cảm quan sản phẩm 5-(5-clorosalicylaldehyd)- 3-(4clorosalicylamido)rhodanin……………………………………………………………31 Hình 4.1 Khả phản ứng ngưng tụ hợp chất mang nhóm carbonyl 36 Hình 4.2 Phổ 1H-NMR khung rhodanin sản phẩm ghép…………………… 40 Hình 4.3 Phổ 1H-NMR sản phẩm ghép………………………………………… 41 Hình 4.4 Phổ 13C-CPD khung rhodanin…………… 42 Hình 4.5 Phổ 13C-CPD sản phẩm ghép………………………………………… 42 Hình 4.6 Phổ 13C-CPD & DEPT khung rhodanin……………………………… 43 Hình 4.7 Phổ 13C-CPD & DEPT sản phẩm ghép……………………………… 44