(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu ứng dụng kit chẩn đoán và thử nghiệm phác đồ điều trị hiệu quả bệnh tiên mao trùng (trypanosomiasis) ở trâu tại huyện sơn dương, tỉnh tuyên quang

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HỨA VĂN TRUNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KIT CHẨN ĐOÁN VÀ THỬ NGHIỆM PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ HIỆU QUẢ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG (Trypanosomiasis) Ở TRÂU TẠI HUYỆN SƠN DƯƠNG - TỈNH TUYÊN QUANG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Chăn nuôi Thú y Khoa : Chăn nuôi Thú y Khoá : 2010 - 2014 Giáo viên hướng dẫn : ThS Phạm Thị Trang Thái Nguyên, 2014 n Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Bệnh tiên mao trùng hay gọi bệnh ký sinh trùng trâu, bò nhiều động vật khác Trâu, bò mắc bệnh cấp tính thường sốt cao 41 41,7oC với triệu chứng thần kinh ngã quỵ, kêu rống, vòng tròn… Trâu, bò bệnh chết sau – 15 ngày Ở thể mạn tính triệu chứng lâm sàng nhẹ bệnh kéo dài – tháng, vật ngày gầy, sốt gián đoạn, da khô mốc, thiếu máu kéo dài, viêm giác mạc, phù thũng chân… Trường hợp bệnh nặng, vật đột ngột sốt cao, bụng chướng to lăn chết Vì vậy, cần có nghiên cứu chẩn đốn bệnh tiên mao trùng đàn trâu, bò nhiều phương pháp để xác định thực trạng nhiễm bệnh, từ thử nghiệm phác đồ điều trị thích hợp hiệu Tun Quang tỉnh có địa hình phức tạp, nhiều đồi núi thung lũng, khí hậu nhiệt đới gió mùa, thời tiết nóng ẩm mưa nhiều điều kiện thuận lợi cho ruồi trâu mịng (vật mơi giới truyền bệnh tiên mao trùng) phát triển Chúng hút máu, truyền mầm bệnh tiên mao trùng từ trâu, bò bệnh sang trâu, bò khoẻ, làm cho bệnh tiên mao trùng lây lan, gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi Với phát triển ngành công nghệ sinh học nước ta nay, nhiều phương pháp đại nghiên cứu, ứng dụng sinh học phân tử, chẩn đoán bệnh gia súc, gia cầm Trong đó, có phương pháp ứng dụng Kit chế tạo theo nguyên lý CATT để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng gia súc Xuất phát từ vấn đề trên, nhận thấy, cần thiết phải nghiên cứu bệnh tiên mao trùng, biện pháp chẩn đoán nhanh ứng dụng phác đồ điều trị có hiệu nhằm giúp người chăn ni có n hiểu biết cách phòng trị bệnh, hướng tới mục tiêu cuối hạn chế tới mức thấp hậu mà bệnh gây cho người chăn ni Từ mục đích trên, thực đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng Kit chẩn đoán thử nghiệm phác đồ điều trị hiệu bệnh tiên mao trùng (Trypanosomiasis) trâu huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang” 1.2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định hiệu chẩn đoán Kit CATT tự chế - Lựa chọn phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng có hiệu quả, phù hợp với điều kiện chăn nuôi Tuyên Quang - Xây dựng quy trình phịng, trị bệnh, góp phần hạn chế thiệt hại bệnh tiên mao trùng cho đàn trâu huyện Sơn Dương – tỉnh Tuyên Quang 1.3 Ý nghĩa đề tài 1.3.1 Ý nghĩa học tập nghiên cứu khoa học Đề tài ứng dụng Kit chẩn đoán chế tạo từ kháng nguyên tái tổ hợp (sản phẩm khoa học công nghệ đề tài cấp nhà nước) hướng nghiên cứu mới, ứng dụng công nghệ cao vào thực tiễn sản xuất Việt Nam Kết đề tài thông tin khoa học độ nhạy, độ đặc hiệu Kit chẩn đoán phác đồ điều trị bệnh TMT có hiệu cao 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết đề tài sở khoa học để tiếp tục nghiên cứu sản xuất kháng nguyên tái tổ hợp phục vụ chế tạo Kit chẩn đoán bệnh TMT, đồng thời khuyến cáo cán thú y người chăn nuôi sử dụng Kit chẩn đoán nhanh bệnh tiên mao trùng cho đàn trâu để có biện pháp điều trị kịp thời Kết đề tài sở khoa học để khuyến cáo người chăn sử dụng phác đồ điều trị bệnh TMT cho trâu, bị có hiệu cao n Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ sở khoa học đề tài 2.1.1 Những hiểu biết bệnh tiên mao trùng ký sinh trâu, bò 2.1.1.1 Phân loại tiên mao trùng ký sinh trâu, bò Theo Levine cs (1980) (dẫn theo Lương Văn Huấn cs, 1997) [6], vị trí tiên mao trùng hệ thống phân loại nguyên bào (Protozoa) sau: Ngành Sarcomastigophora Phân ngành Mastigophora Lớp Zoomastigophorasida Bộ Kinetoplastorida Phân Trypanosomatorida Họ Trypanosomatidae Donein, 1901 Giống Trypanosoma Gruby, 1843 Giống phụ Megatrypanum Hoare, 1964 Loài Trypanosoma (M) theileria Giống phụ Herpetosoma Donein, 1901 Loài Trypanosoma (H) leisi Giống phụ Schizotrypanum Chagas, 1909 Loài Trypanosoma (S) cruzi Giống phụ Duttonella Chalmers, 1918 Loài Trypanosoma (D) vivax Loài Trvpanosoma (D) uniform Giống phụ Nalmomonas Hoare, 1964 Loài Trypanosoma (N) congolense n Loài Trypanosoma (N) siminae Loài Trypanosoma (N) vanhogi Giống phụ Trypanozoon Liihe, 1906 Loài Irypanosoma (T) brucei Loài Trypanosoma (T) gambience Loài Trypanosoma (T) rhodesiense Loài Trypanosoma (T) equiperdum Giống phụ Pycnomonas Hoare, 1964 Loài Trypanosoma (P) suis Giống phụ Trypanosoma Gruby, 1843 Loài Trypanosoma evansi (Steel, 1885) Trong lồi tiên mao trùng trên, có lồi tổ chức dịch tễ quốc tế (OIE) thơng báo có khả gây bệnh cho người động vật có vú, là: T brucei, T congolense, T cruzi, T evansi, T gambiense, T siminae, T Vivax 2.1.1.2 Đặc điểm hình thái, cấu tạo tiên mao trùng Phạm Sỹ Lăng Lê Văn Tạo (2002) [11] cho biết: Tiên mao trùng có kích thước nhỏ: 18 – 34 x 2,5 µm, có hình mũi khoan, di động máu nhờ roi tự xuất phát từ phía sau thân, chạy vòng quanh thân tạo thành màng rung Khi rung động roi tự vung phía trước màng rung chuyển động giúp cho tiên mao trùng di chuyển nhanh máu vật chủ Tiên mao trùng T evansi xếp vào loại đơn hình thái, thể tế bào, có kích thước nhỏ, chiều dài 18 - 34 µm (trung bình 25 µm), chiều rộng 1,5 – µm Cơ thể có hình suốt mảnh hình thoi, cuối thân nhọn Nhìn chung, cấu trúc T evansi giống cấu trúc loài tiên mao trùng khác thuộc họ Trypanosomatidae Cấu trúc từ ngồi vào chia thành phần chính: n - Vỏ: lớp vỏ dày 10 - 15 nm, vỏ chia làm lớp (lớp lớp tiếp giáp với nguyên sinh chất dầy lớp giữa) Lớp vỏ cấu tạo từ phân tử glycoprotein biến đổi (Vanant Glycoprotein Surface -VGS) Tiếp giáp với lớp cặp vi ống xếp song song dọc theo chiều dài thân tiên mao trùng Chính nhờ xếp cặp vi ống nên tiên mao trùng có dạng hình suốt mảnh (Hoare, 1972 [33]; Phạm Sỹ Lăng, 1982 [10]; Nguyễn Quốc Doanh, 1999 [4]) - Nguyên sinh chất: Gồm lớp lớp Trong nguyên sinh chất có chứa nội quan: Ribosome có màu thẫm xen kẽ vùng không bào màu sáng, kinetoplast (thể động), mitochrondno, reticulum (lưới nội bào) mạng lưới golgi - Nhân: Nhân tiên mao trùng có chứa ADN, hình bầu dục hình trứng Nhân thường nằm vị trí trung tâm gần vị trí trung tâm thể Ngồi nhân, phía cuối thân cịn kinetoplast chứa AND (KADN) Từ kinetoplast có roi chạy vịng quanh thân lên đầu phía thể thành roi tự Roi tiên mao trùng có lớp vỏ ngồi giống lớp vỏ thân Trong roi có cặp vi ống xung quanh cặp trung tâm, xếp song song dọc chiều dài roi (Hoare, 1972 [33]; Nguyễn Quốc Doanh, 1999 [4]) n Hình 2.1: Cấu tạo Trypanosoma A - roi trước; B - Các khung tế bào phức tạp tiềm ẩn; C - Nhân; D Ty thể; E - Các kinetoplast (bộ gen ti thể); F - Thể đặc; G - Túi roi; H Phần thân chính; I - Golgi; J - Lưới nội sinh chất K - Màng nhấp nhơ L Tập tin đính kèm roi vào màng nhấp nhô M - Chỗ tiếp xúc roi với thân (Dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan, 2011 [7]) 2.1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên tiên mao trùng Trypanosoma evansi Kháng nguyên T Evansi gồm loại: kháng nguyên ổn định (kháng nguyên không biến đổi) kháng nguyên biến đổi * Kháng nguyên ổn định (kháng nguyên không biến đổi) Phần lớn thành phần kháng nguyên tiên mao trùng không biến đổi trình sống ký sinh Bằng phương pháp điện di miễn dịch huyết thỏ tối miễn dịch với T evansi Người ta phát tới thành phần kháng nguyên không biến đổi màng nguyên sinh chất tế bào (ISG: Invanant Surface Glycoprotein): ISG 65, ISG 75 ISG 100 Do cấu trúc n không gian ba chiều đặc tính ưa nước, loại không kết hợp với kháng thể vật chủ * Kháng nguyên biến đổi Về kháng nguyên biến đổi, cần đề cập đến biến đổi lớp vỏ bề mặt VSG (Variant Surface Glycoprotein), quan điểm xuất kháng nguyên biến đổi tiên mao trùng chế di truyền kháng nguyên biến đổi Nhờ kháng thể đặc hiệu đánh dấu mà Vickerman Luckins (1969) phát biến đổi lớp kháng nguyên bề mặt Cross (1975) mô tả lớp áo bề mặt tiên mao trùng có thành phần glycoprotein bao phủ toàn bề mặt tế bào lớp phân tử giống (mỗi tiên mao trùng có 107 phân tử) Lớp áo bề mặt kích thích thể vật chủ tạo kháng thể đặc hiệu với type kháng nguyên biến đổi VAT (Variable Antigen Type) Chỉ có kháng nguyên biến đổi có khả kích thích vật chủ tạo miễn dịch chủ động Người ta ước lượng rằng, tiên mao trùng có vài trăm vài nghìn VSG, nghĩa 10% số gen tiên mao trùng cung cấp cho kháng nguyên bề mặt Nhiều tác giả nghiên cứu miễn dịch học cho rằng, tiên mao trùng biến đổi kháng nguyên bề mặt để né tránh miễn dịch đặc hiệu vật chủ Những quan điểm hoàn toàn để lý luận xuất kháng nguyên biến đổi tiên mao trùng Như vậy, quan điểm biến đổi kháng nguyên lớp vỏ tiên mao trùng chưa thống * Cơ chế di truyền kháng nguyên biến đổi Khi kháng thể đặc hiệu kết hợp với phân tử kháng nguyên bề mặt (VSG), làm tiêu tan tiên mao trùng ngun nhân thúc đẩy hoạt hoá gen Kết phân tử kháng nguyên VSG thay đổi hoàn toàn phân tử VSG Lúc này, kháng thể đặc hiệu lúc trước khơng cịn tác dụng kháng ngun n Theo Barry Tumer (1991) [26], Vanhamme cs (1995) [45], VSG mã hoá nhờ gen chuyên biệt Từ kho chứa hàng nghìn đến khác nhau, gen VSG hoạt hoá cách chọn lọc, dẫn đến tổng hợp loại kháng nguyên VSG Mỗi bên VSG tạo loại kháng nguyên VSG Trong gen tiên mao trùng tồn số lớn gen VSG, gen sử dụng nhiều chế xếp khác nhau, tiên mao trùng tạo nhiều VSG khác gia súc bị bệnh mãn tính Cơ chế biến đổi kháng nguyên theo cách: Cách thứ là, sử dụng điểm biểu (expression side) khác nhau, khơng có xếp ADN Các điểm biểu khác mang gen VSG khác nhau, luân phiên dẫn đến thay đổi type kháng nguyên Cơ chế quan sát chủ yếu giai đoạn đầu q trình cảm nhiễm Có lẽ giai đoạn đầu chưa có đáp ứng miễn dịch vật chủ VSG, điều khơng gây cản trở hoạt hoá tự nhiên điểm biểu gen Cách thứ hai là, tập hợp lại đoạn ADN khác để tái tổ hợp gen, mà việc tái tổ hợp cho phép thay hoàn toàn phần gen; việc thay diễn dựa vào chuyển đổi gen dựa vào tái tổ hợp gen Trường hợp diễn giải sau: Một gen hoạt hoá thay chép gen khác Do có thay phần gen nên tạo loại gen phức hợp đặc trưng * Đặc tính kháng nguyên Các kháng nguyên bề mặt tạo thành type biến đổi (Variable Antigenic Type - VAT) khác giúp cho tiên mao trùng trốn tránh hệ thống miễn dịch vật chủ Khi vật mắc bệnh thấy tượng sốt hồi quy thể đồ thị hình sin Ở pha lên (Asending phase) tiên mao trùng có type kháng nguyên giống gọi homotype Hệ thống miễn dịch vật chủ nhận kháng ngyên sản sinh kháng thể Lúc tượng kháng thể tương đồng tăng lên xuất với n tượng tiên mao trùng giảm xuống, đồ thị trình biểu pha xuống (Descending phase) Tuy nhiên phần VAT lại biến đổi nhân lên tạo thành heterotype mà kháng thể lúc trước khơng cịn khả nhận Cơ chế đáp ứng miễn dịch lại lặp lại theo chu kỳ 10 - 12 dẫn đến tượng sốt cách nhật 10 - 12 ngày gia súc bị bệnh 2.1.2 Dịch tễ học bệnh tiên mao trùng 2.1.2.1 Phân bố bệnh tiên mao trùng Bệnh tiên mao trùng phân bố rộng, từ phía Tây sang phía Đơng bán cầu Phía Tây bán cầu thuộc châu Mỹ, phía Đông bán cầu trải dài từ châu Phi Philippine Theo Davison (1999) [30] bệnh phổ biến trâu, bò, ngựa nước nhiệt đới châu Phi, châu Á Nam Mỹ Ở châu Phi, bệnh trải dài từ Tây sang Đơng, phía Bắc qua vùng sa mạc Sahara, dọc theo bờ biển Atlantique Địa trung hải Bệnh tiên mao trùng xảy với tên gọi "bệnh Surra” Ả rập Saudi, Yêmen, Sultanate, Ả Rập thống nhất, Thổ Nhĩ Kỳ, Israel, Syrie, Afganistan, Pakistan Ở châu Á, bệnh xuất Trung Á (thuộc Liên Xô cũ), Ấn Độ, Malaysia, bán đảo Đông Dương, Trung Quốc, Indonexia, Philippine Ở châu Âu, bệnh xuất Bungaria (nay tốn), cịn vùng Volga Nam Capcase (Liên Xô cũ) Ở châu Mỹ, bệnh xuất Trung Mỹ, Nam Mỹ, đặc biệt phổ biến Brazil, Mexico, Venezuela, Colombia Châu Úc xác định có bệnh tiên mao trùng (Reid, 2002 [39]; Losos G T., 1972 [35]) cho rằng, bệnh tiên mao trùng phổ biến châu Á châu Phi, từ Ấn Độ đến Srilanca, Trung Quốc, Indonexia, Thái Lan, Lào, Camphuchia, Iran, Philippine n 66 38 Ngaira J M., Bett B., Karanja S M., Njagi E N (2003), “Evaluation of antigen and antibody rapid detection tests for Try panosoma evansi infection in camels in Kenya”, Vet Parasitol ;114(2) : 131-41 39 Reid S A (2002), Command and retenue T evansi in Autralia, Tedences Parasitology Silva Rams (1995), Pathogenesis of T evansi infection in dogs and horses, haematological and clinical aspects, Science Rur 40 Singh N., Pathak K M., Kumar R (2004), “A comparative evaluation of parasitological, serological and DNA amplification methods for diagnosis of natural Trypanosoma evansi infection in camels”, Vet Parastol, 126(4) : 365-73 41 Tamarit A., Gutierrez C., Arroyo R., Jimenez V., Zagalá G., Bosch I., Sirvent J., Alberola J., Alonso I., Caballero C (2010), “Trypanosoma evansi infection in mainland Spain”, Vet Parasitol, 167(1):74 - 42 Tonin A A., Da Silva A S., Costa M M., Otto M A., Thomé G R., Tavares K S., Miletti L C., Leal M R., Lopes S T., Mazzanti C M., Monteiro S G., de La Rue M L (2011), “Diminazene aceturate associated with sodium selenite and vitamin E in the treatment of Trypanosoma evansi infection in rats”, Exp Parasitol 128(3):243 - 43 Ul Hasan M., Muhammad G., Gutierrez C., Iqbal Z., Shakoor A., Jabbar A (2006), “Prevalence of Trypanosoma evansi infection in equines and camels in the Punjab region, Pakistan”, Ann N Y Acad Sci; 1081:322 - 44 Umezawa E S., Souza A I., Pinedo Cancino V., Marcondes M., Marcili A., Camarrgo L M., Caamacho A A., Stolf A M., Teixeira M M (2009), :TESA - blot for the diaqnosis of Chaqas disease in doqs from co-endemic regions for Trypanosoma cruzi, Trypanosoma evansi and Leishmania chagasi” , Acta Trop 45 Vanhamme L., Pays E., (1995), Control of gene expression in Trypanosomes, Microbiol, Reb n 67 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập Trường Đại học Nông Lâm – Thái Nguyên trình thực tập sở em nhận dạy bảo giúp đỡ tận tình thầy cô giáo khoa Chăn Nuôi Thú Y Nhân dịp cho em gửi lời cảm ơn đến ban giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm – Thái Nguyên, ban chủ nhiệm khoa Chăn Nuôi - Thú Y cán Trạm Thú Y huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt cho em gửi lời biết ơn tới cô giáo GS.TS Nguyễn Thị Kim Lan ThS.NCS Phạm Thị Trang tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ em suốt q trình hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, bạn bè đồng nghiệp dành tình cảm động viên suốt trình học tập thực đề tài Em xin kính chúc thầy lãnh đạo nhà trường thầy cô giáo khoa Chăn Nuôi – Thú Y sức khỏe, hạnh phúc thành đạt.Chúc bạn sinh viên mạnh khỏe, hạnh phúc thành công sống Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 30 tháng 05 năm 2014 Sinh viên Hứa Văn Trung n 68 LỜI NÓI ĐẦU Thực phương châm “Học đôi với hành”, “Lý thuyết gắn liền với thực tiễn sản xuất”, thực tập tốt nghiệp giai đoạn cuối chương trình đào tạo Trường Đại học nói chung Trường Đại học Nơng Lâm Thái Ngun nói riêng Giai đoạn thực tập đóng vai trị quan trọng sinh viên trước trường Đây khoảng thời gian để sinh viên củng cố hệ thống hóa kiến thức học, đồng thời làm quen với phương pháp nghiên cứu khoa học tiếp cận thực tiễn sản xuất Qua giúp sinh viên nâng cao lý luận chuyên môn kinh nghiệm thân Được trí Ban giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Chăn ni – Thú y, bảo tận tình cô giáo hướng dẫn ThS NCS Phạm Thị Trang, em thực đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng Kit chẩn đoán thử nghiệm phác đồ điều trị hiệu bệnh tiên mao trùng (Trypanosomiasis) trâu huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang” Với trình độ thời gian có hạn,bước đầu cịn bỡ ngỡ với cơng tác nghiên cứu khoa học nên khóa luận em cịn nhiều hạn chế thiếu sót phương pháp kết nghiên cứu Em mong nhận đóng góp q báu thầy, bạn bè đồng nghiệp để khóa luận em đầy đủ hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! n 69 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CATT : Card Agglutination Test for Trypanosomiasis Cs : Cộng KgTT : Kilogam thể trọng MI : Tiêm truyền chuột bạch Nxb : Nhà xuất T.evansi : Trypanosoma evansi TMT : Tiên mao trùng LATEX : Latex Agglutination Test ELISA : Enzym Linked Immunosorbent Assay n 70 MỤC LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa đề tài 1.3.1 Ý nghĩa học tập nghiên cứu khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ sở khoa học đề tài 2.1.1 Những hiểu biết bệnh tiên mao trùng ký sinh trâu, bò 2.1.1.1 Phân loại tiên mao trùng ký sinh trâu, bò 2.1.1.2 Đặc điểm hình thái, cấu tạo tiên mao trùng 2.1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên tiên mao trùng Trypanosoma evansi 2.1.2 Dịch tễ học bệnh tiên mao trùng 2.1.2.1 Phân bố bệnh tiên mao trùng 2.1.2.2 Vật chủ vật môi giới truyền bệnh tiên mao trùng 10 2.1.2.3 Tuổi vật chủ, mùa mắc bệnh 12 2.1.2.4 Cơ chế sinh bệnh tiên mao trùng 12 2.1.3 Đặc điểm bệnh lý lâm sàng bệnh 13 2.1.3.1 Đặc điểm bệnh lý 13 2.1.3.2 Triệu chứng lâm sàng bệnh tiên mao trùng trâu, bò 14 2.1.3.3 Bệnh tích bệnh tiên mao trùng 16 2.1.4 Những phương pháp chẩn đoán bệnh tiên mao trùng 17 2.1.4.1 Chẩn đoán lâm sàng 17 2.1.4.2 Chẩn đốn thí nghiệm 18 n 71 2.1.4.3 Độ nhạy độ đặc hiệu phương pháp chẩn đoán tiên mao trùng 24 2.1.5 Phòng trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 26 2.1.5.1 Phòng bệnh 26 2.1.5.2 Điều trị bệnh 29 2.2 Tình hình nghiên cứu tiên mao trùng 30 2.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 30 2.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 31 Phần ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 34 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 34 3.1.2 Động vật thí nghiệm vật liệu nghiên cứu 34 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 35 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 35 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 35 3.3 Nội dung nghiên cứu 36 3.3.1 Ứng dụng Kit Card Agglutination Test for Trypanosomiasis (CATT) xác định tình hình nhiễm tiên mao trùng trâu số xã thuộc huyện Sơn Dương - Tỉnh Tuyên Quang 36 3.3.2 Nghiên cứu phác đồ điều trị bệnh T evansi cho trâu đề xuất biện pháp phòng chống 36 3.3.2.1 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng 36 3.3.2.2 Đề xuất biện pháp phòng chống bệnh T evansi cho trâu huyện Sơn Dương – tỉnh Tuyên Quang 36 3.4 Phương pháp nghiên cứu 36 3.4.1 Phương pháp thu thập mẫu 36 n 72 3.4.1.1 Phương pháp lấy máu trâu 36 3.4.1.2 Phương pháp lấy mẫu máu 37 3.4.1.3 Phương pháp lấy mẫu huyết 37 3.4.2 Phương pháp chẩn đoán bệnh tiên mao trùng mẫu máu trâu thu thập 37 3.4.2.1 Phương pháp ứng dụng Kit chẩn đoán bệnh 37 3.4.2.2 Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm 38 3.4.3 Một số quy định nghiên cứu đặc điểm dịch tễ 38 3.4.4 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng 39 3.4.4.1 Phương pháp nghiên cứu khả mẫn cảm T evansi với số thuốc trị tiên mao trùng chuột bạch 39 3.4.4.2 Phương pháp nghiên cứu biện pháp trị bệnh tiên mao trùng 39 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 40 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 41 4.1 Ứng dụng Kit chẩn đốn để xác định tình hình nhiễm tiên mao trùng trâu huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang 41 4.1.1 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng số xã thuộc huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang 41 4.1.2 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu theo lứa tuổi 43 4.1.3 Tỷ lệ nhiễm bệnh tiên mao trùng trâu theo tính biệt 44 4.1.4 Tỷ lệ nhiễm bệnh tiên mao trùng trâu theo tháng năm 45 4.2 Nghiên cứu phác đồ điều trị bệnh T evansi cho trâu đề xuất biện pháp phòng chống 47 4.2.1 Xác định tính mẫn cảm T evansi với số thuốc trị TMT chuột bạch 47 4.2.1.1 Xác định tính mẫn cảm T evansi với thuốc Trypamidium samorin chuột bạch 47 n 73 4.2.1.2 Xác định tính mẫn cảm T evansi với thuốc Trypanosoma chuột bạch 49 4.2.1.3 Xác định tính mẫn cảm T evansi với thuốc Phar Trypazen chuột bạch 50 4.2.2 Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu diện hẹp 54 4.2.3 Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng diện rộng 57 4.3.4 Đề xuất ứng dụng biện pháp phòng chống bệnh hiệu 58 4.3.4.1 phòng bệnh 58 4.3.4.2 Điều trị 58 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 60 5.1 Kết luận 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 n 74 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 4.1: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu số xã thuộc huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang 41 Bảng 4.2: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu theo lứa tuổi 42 Bảng 4.3: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu theo tính biệt 44 Bảng 4.4: Tỷ lệ nhiễm bệnh tiên mao trùng trâu theo tháng năm .45 Bảng 4.5: Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc Trypamidium samorin 47 Bảng 4.6: Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc Trypanosoma 49 Bảng 4.7: Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc Phar – Trypazen 51 Bảng 4.8: Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc Berenil 53 Bảng 4.9: Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu diện hẹp .55 Bảng 4.10: Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng diện rộng .57 Bảng 4.11: Đánh giá kết ứng dụng biện pháp phòng chống bệnh tiên mao trùng cho trâu huyện Sơn Dương - tỉnh Tuyên Quang 59 n 75 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 2.1: Cấu tạo Trypanosoma n 76 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA ĐỀ TÀI Ảnh 1: Trâu bị bệnh TMT da khơ, lơng xù, mắt có dử Ảnh : Lấy máu trâu xã Tân Trào để kiểm tra TMT Kit tiêm truyền chuột bạch n Ảnh : Tiêm truyền máu trâu cho chuột bạch 77 Ảnh : Phiết kính tiêu máu trâu Ảnh : Tiêu máu nhuộm giemsa Ảnh : Lấy máu đuôi chuột bạch Nhiễm T evansi Ảnh : Soi tiêu nhuộm giemsa, soi tươi n 78 Ảnh : Lơ chuột đối chứng thí nghiệm gây nhiễm T evansi Ảnh 9: T evansi tiêu máu tươi Ảnh 10: T evansi tiêu máu nhuộm giemsa n 79 Ảnh 11 : Điều trị trâu bị nhiễm TMT huyện Sơn Dương n 80 Âm tính Dương tính Ảnh 12 : Ứng dụng Kit CATT chẩn đoán bệnh TMT cho trâu huyện Sơn Dương n ... bệnh tiên mao trùng - Thử nghiệm tính mẫn cảm tiên mao trùng với số thuốc trị TMT - Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng diện hẹp - Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng. .. Dương, tỉnh Tuyên Quang? ?? 1.2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định hiệu chẩn đoán Kit CATT tự chế - Lựa chọn phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng có hiệu quả, phù hợp với điều kiện chăn nuôi Tuyên Quang. .. mà bệnh gây cho người chăn nuôi Từ mục đích trên, chúng tơi thực đề tài: ? ?Nghiên cứu ứng dụng Kit chẩn đoán thử nghiệm phác đồ điều trị hiệu bệnh tiên mao trùng (Trypanosomiasis) trâu huyện Sơn