Các bệnh thối rễ và thân có nguồn gốc từ đất

Các bệnh thối rễ và thân có nguồn gốc từ đất

10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất Các bệnh thối rễ thân tác nhân gây bệnh tồn đất nguyên nhân gây thiệt hại suất nghiêm trọng cho trồng Việt Nam Tính chất trồng trọt quanh năm vùng châu thổ Việt Nam, lan truyền tác nhân gây bệnh nước tưới, thoát nước kém, giống khơng bệnh khí hậu nhiệt đới yếu tố tạo điều kiện thuận lợi cho phát triển bệnh Bệnh tác nhân có nguồn gốc từ đất gây triệu chứng khơng điển hình, cịi cọc, vàng lá, héo chết Cần lưu ý số tác nhân gây bệnh khác sâu đục thân, sùng ăn rễ, điều kiện đất bất lợi gây triệu chứng Những bệnh số tác nhân gây bệnh phổ biến, bao gồm nấm, vi khuẩn gây bệnh tuyến trùng ký sinh thực vật Những tác nhân gây bệnh liệt kê Bảng 10.1 có đặc tính sau: • chúng tồn tại trong đất qua một thời gian dài khi khơng có mặt ký chủ, và nguồn bệnh đất tăng dần qua vài năm (chu kỳ mùa vụ) • chúng đều có phổ ký chủ rộng, ngoại trừ các dạng lồi (formae speciales) của Fusarium oxysporum • chúng có thể lan truyền theo: – nước tưới – đất động vật người mang – giống bị nhiễm bệnh (củ khoai tây, củ gừng, giống) • chúng thường khơng phân tán nhờ gió Vi khuẩn gây bệnh héo tồn hạt giống Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 105 Bảng 10.1 Các đặc tính tác nhân gây bệnh phổ biến tồn đất Việt Nam 106 Tác nhân gây bệnh Bệnh Phổ ký chủ Tồn (bảo tồn) Nhận xét Pythium speciesa (như P aphanidermatuma, P myriotiluma, P spinosuma) Chết con, thối rễ con, thối rễ Rộng Bào tử trứng đất Du động bào tử lan truyền qua nước đất nước mưa nước tưới Phytophthora palmivoraa Nhiều bệnh rễ, Rộng thân, trồng lâu năm Bào tử hậu, sợi nấm tàn dư bệnh bào tử trứng đất Du động bào tử lan truyền qua nước đất nước mưa nước tưới Phytophthora capsicia Thối gốc (héo nhanh) hồ tiêu, thối rễ ớt bệnh khác Rộng Bào tử hậu, sợi nấm tàn dư bệnh ruộng bào tử trứng đất Du động bào tử lan truyền qua nước đất nước mưa nước tưới Phytophthora nicotianaea Thối nõn dứa bệnh khác Rộng Bào tử hậu, sợi nấm tàn dư bệnh bào tử trứng đất Bào tử hậu đất, du động bào tử lan truyền qua nước đất nước mưa nước tưới Fusarium oxysporum, f sp lycopersicia Héo Fusarium Cà chua Bào tử hậu Mạch dẫn hóa nâu đất, xâm nhiễm rễ ký chủ Fusarium oxysporum, f sp pisia Héo Fusarium Đậu Hà lan Bào tử hậu Mạch dẫn hóa nâu đất, xâm nhiễm rễ ký chủ Fusarium oxysporum, f sp cubensea Héo Fusarium Chuối Bào tử hậu Mạch dẫn hóa nâu đất, xâm nhiễm ký chủ; nguồn giống Sclerotinia sclerotiorum Thối thân Rộng Hạch nấm lớn, màu đen đất Hạch nấm dấu hiệu chẩn đoán đồng ruộng Sclerotium rolfsii Thối gốc thân Hạch nấm tròn, nhỏ, màu nâu đất Hạch nấm dấu hiệu chẩn đoán đồng ruộng Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Rộng Tác nhân gây bệnh Bệnh Phổ ký chủ Tồn (bảo tồn) Nhận xét Rhizoctonia sp.a Chết con, thối rễ thân Rộng Hạch nấm sợi nấm điển hình tàn dư bệnh đất Hạch nấm dấu hiệu chẩn đốn cho số lồi đồng ruộng; sợi nấm phân nhánh vng góc mẫu cấy mơi trường Verticillium alboatrumab Héo Verticillium Rộng Sợi nấm Mạch dẫn hóa nâu tàn dư bệnh Verticillium dahliaeab Héo Verticillium Rộng Hạch nấm cực Mạch dẫn hóa nâu nhỏ đất, sợi nấm tàn dư bệnh Ralstonia solanacearuma Héo vi khuẩn Rộng Vi khuẩn đất, tàn dư bệnh vật liệu nhân giống Meloidogyne Tuyến trùng nốt sưng Rộng Tuyến trùng ngủ Tuyến trùng sống nghỉ đất nốt sưng rễ - đặc tính chẩn đốn Tuyến trùng gây lt rễa Gây vết bệnh Rộng rễ làm còi cọc Plasmodiophora brassicae Sưng rễ Brassica Bào tử dạng bảo tồn thuộc họ thập tự Raphanus đất Thân hóa nâu dịch khuẩn đặc tính chẩn đốn đồng ruộng Tuyến trùng ngủ Có thể nhìn thấy nghỉ đất vết loét rễ kính lúp cầm tay Các triệu chứng sưng rễ chẩn đốn đồng ruộng; thêm vơi vào đất để phịng trừ a Việc chẩn đốn xác tác nhân gây bệnh phụ thuộc vào q trình phân lập giám định sau phịng thí nghiệm Cần thực thí nghiệm lây bệnh nhân tạo để chứng minh chúng tác nhân gây bệnh ký chủ địa phương, trừ việc lây bệnh nhân tạo thực trước Việt Nam b Những loài chưa thức ghi nhận Việt Nam Những tác nhân gây bệnh thường bị bỏ sót khó giám định (xem Khung 10.1) - đa số vi sinh vật giám định xác phịng thí nghiệm Hai nhiều tác nhân gây bệnh lúc ảnh hưởng đến trồng vùng trồng rau thâm canh Việt Nam Chẳng hạn ruộng ớt bị bệnh héo vi khuẩn, thối rễ Phytophthora thối gốc thân Sâu đục thân lúc gây hại Tất tác nhân gây triệu chứng (héo chết) Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 107 Lý tưởng bị bệnh thối rễ thân kiểm tra phịng thí nghiệm vòng vài sau thu thập, 'cịn tươi' Vì vậy, phịng thí nghiệm chẩn đốn bệnh cần đặt Chi cục Bảo vệ thực vật cấp tỉnh gần khu vực sản xuất nơng nghiệp Các phịng thí nghiệm chẩn đốn bệnh quốc gia Viện Bảo vệ thực vật Hà Nội giám định mẫu vi sinh vật nuôi cấy, mẫu tiêu bản, vi rút, tuyến trùng vi khuẩn gây bệnh thực vật Khung 10.1 Lưu ý chẩn đoán: phân biệt héo mạch dẫn thối rễ thối thân Trong số trường hợp khó định nguyên nhân triệu chứng khơng điển cịi cọc, vàng héo Các bệnh gây héo mạch dẫn bệnh thối rễ, thối thân thường gây triệu chứng Sơ đồ hướng dẫn cách phân biệt bệnh Thân (mạch dẫn) bị nâu + có dịch khuẩn* Héo vi khuẩn Thân (mạch dẫn) bị nâu + khơng có dịch khuẩn Héo Fusarium Héo Verticillium Thân (mạch dẫn) khơng hóa nâu + khơng có dịch khuẩn Tác nhân gây bệnh thối rễ thân (do nấm vi sinh vật giống nấm) Tuyến trùng ký sinh thực vật Sưng rễ Ghi chú: Dịch khuẩn khó phát giai đoạn đầu nhiễm bệnh Ralstonia solanacearum Có thể dễ nhầm lẫn héo Fusarium với héo vi khuẩn héo Verticillium (hiện bệnh ngoại lai Việt Nam) Chúng gây triệu chứng tương tự gây tượng hóa nâu mạch dẫn Tuy nhiên, bị héo vi khuẩn thường chẩn đoán nhờ xuất dịch khuẩn Nếu khơng có dấu hiệu dịch khuẩn nên phân lập để xác định xem nguyên nhân F oxysporum hay Verticillium Các dạng lồi F oxysporum phân biệt dễ dàng với Verticillium albo-atrum V dahliae môi trường nhân tạo Các tản nấm Verticillium mọc chậm so với tản nấm F oxysporum Luôn lây bệnh nhân tạo cho mẫu Fusarium phân lập từ rễ trước kết luận chúng tác nhân gây bệnh 108 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Các loài Fusarium chủ yếu gây bệnh héo thối thân củ, rễ củ rau hoa Chúng tác nhân phổ biến gây bệnh thối rễ Tuy nhiên, nấm F oxysporum F solani thường sống hoại sinh mô rễ ảnh hưởng tác nhân gây bệnh khác, dễ dàng phân lập môi trường không chọn lọc 10.1 Sclerotinia sclerotiorum Bảng 10.2 cung cấp thông tin Sclerotinia sclerotiorum, loại nấm gây thối thân, hoa Bảng 10.2 Đặc tính Sclerotinia sclerotiorum Các triệu chứng Thối ướt mơ Các dấu hiệu chẩn đốn Sự có mặt sợi nấm màu trắng hạch nấm lớn, màu đen với hình dạng bất định Phổ ký chủ Gây hại nhiều trồng hai mầm (lá rộng) bao gồm cà chua khoai tây, xà lách, đậu tương, lạc, đậu cô ve lùn, đậu cô ve leo, cải bắp, súp lơ xanh, súp lơ trắng bầu bí Thời tiết Thích hợp với thời tiết ẩm ướt lạnh Bảo tồn Hạch nấm tồn đất qua thời gian dài Trong điều kiện ẩm, hạch nấm nảy mầm tạo thể đĩa Các thể đĩa tạo bào tử túi xâm nhiễm vào Xâm nhiễm Bào tử túi sinh từ thể đĩa Các bào tử túi thường xâm nhiễm vào vị trí nách Các cánh hoa già tạo điều kiện thuận lợi cho nấm bệnh trình xâm nhiễm Phòng trừ Luân canh với trồng ngô bông, tránh để tán dày (tán dày làm cho độ ẩm bên cao tạo điều kiện thuận lợi cho nấm bệnh xâm nhập) Phân lập Khử trùng bề mặt thân bệnh cách nhúng cồn êtyl 70% để khô giấy khử trùng (giấy lau mặt giấy vệ sinh chất lượng cao dùng được) Cắt miếng cấy từ ranh giới mô khỏe mô bệnh dùng dụng cụ vô trùng cấy lên môi trường thạch đường khoai tây Làm phương pháp cấy đỉnh sinh trưởng sợi nấm Nấm phân lập từ hạch nấm: Khử trùng bề mặt hạch nấm phút cồn êtyl 70% Rửa lại nước vô trùng để tự khô Cắt đôi hạch nấm Cấy miếng hạch lên môi trường thạch đường khoai tây cho mặt cắt tiếp xúc với mặt thạch Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 109 Hình 10.1 minh họa chu kỳ bệnh Sclerotinia sclerotiorum Hình 10.2 loạt hình ảnh cho thấy gây hại Sclerotinia sclerotiorum nhiều trồng khác nhau, hạch nấm thể đĩa héo chết hạch nấm tồn đất/tàn dư bệnh hạch nấm hình thành bệnh Bệnh nấm gây thối ướt thân, lá, hoa Tồn Xâm nhiễm bào tử túi giải phóng từ thể đĩa phát tán vào khơng khí để xâm nhiễm ký chủ Hình 10.1 Chu kỳ bệnh Sclerotinia sclerotiorum 110 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam thể đĩa phát triển từ hạch nấm a e b f g c d h Hình 10.2 Sclerotinia sclerotiorum gây hại: (a) đậu cô ve leo, (b) xà lách, (c) cải bắp (thối ướt), (d) cải bắp, (e) thể đĩa từ hạch nấm tàn dư đậu tương; (f ) thể đĩa cạnh đậu cô ve lùn; (g) đậu ve leo (hạch nấm hình thành đậu); (h) hạch nấm nảy mầm tạo thể đĩa Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 111 10.2 Sclerotium rolfsii Bảng 10.3 cung cấp thông tin Sclerotium rolfsii, nấm gây thối gốc thân Bảng 10.3 Đặc tính Sclerotium rolfsii Các triệu chứng Gây thối gốc thân, bệnh héo chết Các dấu hiệu chẩn đoán Các sợi nấm màu trắng hạch nấm nhỏ màu nâu trịn dạng hạt cải hình thành bề mặt gốc thân bị bệnh Các sợi nấm trắng phát triển mạnh bệnh lan từ bệnh sang khỏe Phổ ký chủ Phổ ký chủ rộng bao gồm cà chua, ớt, bầu bí, đậu ve, cà rốt hành Nấm bệnh thường xâm nhiễm vào trồng bị ảnh hưởng tác nhân gây bệnh khác Thời tiết Bệnh trầm trọng điều kiện thời tiết ấm đến nóng, mưa ẩm Bảo tồn Tồn dạng hạch nấm đất qua thời gian dài Xâm nhiễm Sợi nấm phát triển từ hạch nấm xâm nhiễm vào qua gốc thân Quá trình xâm nhiễm nhanh mạnh nơi có tàn dư bệnh sót lại bề mặt đất Các sợi nấm mọc lan đến vài cm mặt đất từ mô bị bệnh để xâm nhiễm gần Phịng trừ Luân canh Đưa nước ngập ruộng trình trồng hai vụ lúa nước liên tiếp diệt trừ tất hạch nấm đất Phân lập Có thể phân lập nấm môi trường thạch đường khoai tây từ mô thân khử trùng bề mặt, cắt miếng cấy từ ranh giới mô bệnh mơ khỏe Các mẫu S rolfsii phân lập từ hạch nấm: Khử trùng bề mặt hạch nấm phút cồn êtyl Rửa lại nước vô trùng để tự khô Cắt hạch làm đôi cấy lên môi trường thạch đường khoai tây cho mặt cắt tiếp xúc với mặt thạch Hình 10.3 đặc điểm Sclerotium rolfsii 112 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam a b c Hình 10.3 Sclerotium rolfsii: (a) thí nghiệm lây bệnh nhân tạo (chú ý sợi nấm lan ra), (b) dưa hấu bị thối, (c) thối gốc với hình thành hạch nấm hình cầu màu nâu 10.3 Các lồi Rhizoctonia Có nhiều lồi chủng Rhizoctonia Việt Nam Những loài đa dạng phân bố phổ ký chủ chúng Việc giám định hình thái đến lồi khó Ở Việt Nam có nhiều bệnh Rhizoctonia gây (Hình 10.4) Một số loài phát triển, xâm nhiễm, gây bệnh thân bề mặt điều kiện thời tiết ấm, mưa ẩm độ cao Ví dụ, lồi Rhizoctonia xâm nhiễm vào ngơ gây triệu chứng bệnh khơ vằn điển hình (Hình 10.4d) Người ta cho lồi đó, loài tương tự, gây thối bắp cải bắp Những nấm sinh hạch nấm màu nâu với hình dạng bất định bề mặt bị bệnh Rhizoctonia oryzae gây bệnh khô vằn lúa, bệnh phổ biến Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 113 a b c d Hình 10.4 Các ví dụ bệnh Rhizoctonia: (a) triệu chứng nhọn đầu mác rễ bệnh, (b) bệnh khô vằn lúa Rhizoctonia, (c) hạch nấm Rhizoctonia cải bắp bị bệnh, (d) bệnh Rhizoctonia vỏ ngơ Các lồi Rhizoctonia gây tượng lở cổ rễ đậu cô ve, cải bắp, lạc Triệu chứng lở cổ rễ nấm xâm nhiễm phần cổ rễ sát mặt đất làm chết Bệnh thối rễ Rhizoctonia hình thành nấm xâm nhập vào đỉnh sinh trưởng rễ phụ nhỏ Nấm sau phát triển từ đầu rễ lan vào rễ làm thối rễ Rhizoctonia xâm nhiễm đỉnh sinh trưởng rễ thường đưa đến triệu chứng 'đầu mác' rễ (Hình 10.4a) Bảng 10.4 cho thấy đặc điểm nấm Rhizoctonia, nấm gây nhiều bệnh nhiều trồng khác 114 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Bảng 10.10 Đặc điểm Verticillium albo-atrum V dahliae Các triệu chứng Các triệu chứng bao gồm vàng lá, héo hóa nâu gân Các mơ mạch dẫn thân thường có màu nâu Dấu hiệu chẩn đốn Héo hóa nâu mạch dẫn Để chẩn đốn xác cần phân lập giám định nấm Xâm nhiễm Những nấm xâm nhiễm qua rễ lan vào mạch xylem Sau chúng mọc lan mạch xylem thân vào cuống Nấm phát triển thân làm thân hóa nâu giảm trình hấp thụ nước, gây héo chết Phổ ký chủ Cả hai lồi có phổ ký chủ rộng, gây héo tắc bó mạch nhiều rộng (cây hai mầm) bao gồm cà chua, khoai tây, bơng, bầu bí, dâu tây số ăn ôn đới hạnh nhân hồ đào Bảo tồn Verticillium albo-atrum tồn dạng sợi nấm tàn dư ký chủ V dahliae tồn dạng hạch nấm nhỏ tàn dư ký chủ, đất tồn dạng sợi nấm tàn dư ký chủ Thời tiết Cả hai loài nấm gây bệnh thường phân bố vùng ôn đới giới Ở Việt Nam, vùng núi tây bắc vùng Đắc Lắc nơi có điều kiện thích hợp cho chúng Chúng gây hại vùng miền bắc miền trung, nơi có nhiệt độ mùa đơng thấp Phịng trừ Nếu có trồng kháng bệnh việc luân canh trồng biện pháp hữu hiệu Phổ ký chủ rộng tác nhân gây bệnh hạn chế việc chọn lựa trồng luân canh vùng trồng rau Đối với trồng dâu tây yêu cầu hom giống mẹ bệnh vô cần thiết Các ký chủ cỏ dại mẫn cảm với bệnh cần phòng trừ triệt để Phân lập V albo-atrum V dahliae phát triển chậm môi trường nhân tạo Việc phân lập chúng khó khăn Tốt nên phân lập từ mẫu thân cuống xuất triệu chứng hóa nâu thân Khử trùng bề mặt mẫu thân phút cồn êtyl 70% Để khô giấy thấm Cắt khoanh mô thân cấy lên môi trường thạch nước cất thạch thân lúa xanh (mơi trường thạch nước cất có chứa mẩu thân lúa xanh nhỏ khử trùng) Cấy truyền, làm kỹ thuật cấy đơn bào tử nuôi nấm PDA thạch thân lúa xanh V dahliae tạo hạch nấm nhỏ môi trường, đặc biệt mẩu thân mảnh rễ ký chủ Những loài sản sinh cành bào tử phân sinh mọc vòng điển hình từ mạch xylem miếng thân cấy môi trường WA thạch thân lúa xanh 136 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 10.7 Tuyến trùng ký sinh thực vật Tuyến trùng ký sinh thực vật thuộc nhóm giun trịn nhỏ khơng phân đốt Tuyến trùng ký sinh không ký sinh thực vật có đất Sự có mặt kim chích hút (Hình 10.18a) đặc tính tuyến trùng ký sinh thực vật Có thể quan sát kim chích kính hiển vi kính lúp soi với độ phóng đại cao Lưu ý có số lồi có kim chích lại sống nhờ thức ăn sợi nấm đất không gây hại cho a b Hình 10.18 Tuyến trùng: (a) ký sinh thực vật với kim chích, (b) khơng ký sinh thực vật, khơng có kim chích Tuyến trùng ký sinh thực vật nguyên nhân nhiều bệnh trồng Việt Nam (Nguyen 2003) Các bệnh thông thường Việt Nam tuyến trùng nốt sưng loài thuộc chi Meloidogyne tuyến trùng gây vết thương nơi rễ Pratylenchus loài khác (Hình 10.19) Tuyến trùng nang gây hại rễ, gây tượng mọc thêm rễ phụ Các tuyến trùng nang phát dễ dàng, bám vào bên rễ nơi rễ phụ mọc thành búi Tuyến trùng ký sinh thực vật thường gây hại rễ, làm giảm trình hấp thụ nước dinh dưỡng Chúng thường gây triệu chứng còi cọc, suất thấp đơi có biểu vàng rõ rệt Cây nhiễm tuyến trùng nặng có tượng héo tàn lụi điều kiện môi trường khắc nghiệt Hiện tượng phổ biến cà chua bị tuyến trùng nốt sưng gây hại Tuyến trùng nốt sưng chẩn đốn đồng ruộng nốt sưng rõ rệt rễ Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 137 a b Hình 10.19 Hệ thống rễ bị phá hủy do: (a) tuyến trùng nốt sưng, (b) tuyến trùng gây loét rễ, hai bệnh làm cịi cọc vàng a b Hình 10.20 Các triệu chứng tuyến trùng nốt sưng: (a) triệu chứng sưng rễ, (b) tuyến trùng ký sinh nốt sưng Khó nhận biết triệu chứng hại tuyến trùng gây loét rễ rễ nhỏ đồng ruộng, quan sát vết loét kính lúp cầm tay Dùng kính lúp soi quan sát vết loét dễ dàng Nếu nghi ngờ đối tượng gây hại tuyến trùng gây loét rễ, nhuộm màu rễ bệnh để quan sát có mặt tuyến trùng kính hiển vi Tuyến trùng ký sinh lấy thức ăn từ trồng phân lập phương pháp tách tuyến trùng từ đất (xem Phần 10.7.1) 138 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Các trồng có khả kháng số lồi tuyến trùng định khơng bị tuyến trùng gây hại có khả ngăn chặn sinh sản tuyến trùng ký sinh Những ký chủ giúp làm giảm mật độ tuyến trùng đất Các trồng có khả chịu đựng số lồi tuyến trùng định khơng bị tuyến trùng gây hại, lại cho phép tuyến trùng sinh sản Những ký chủ trì làm tăng nguồn tuyến trùng đất Vì vậy, khuyến cáo biện pháp phòng trừ cần hiểu biết khác biệt mối quan hệ ký chủ-tuyến trùng Tuyến trùng không bơi Chúng di chuyển đất rễ cách uốn chuyển động rắn dựa vào phần tử đất mô Tuyến trùng lan truyền theo dịng di chuyển nước tưới, nước lặng chúng chìm xuống đáy Chúng di chuyển tất hướng thơng qua đất ướt để tìm rễ ký chủ Tuyến trùng tồn khơng có ký chủ trạng thái ngủ nghỉ Vào mùa khô, chúng thường di chuyển sâu xuống đất Đa số tuyến trùng ký sinh thực vật có phổ ký chủ rộng, mức độ mẫn cảm với bệnh thay đổi tùy loại ký chủ 10.7.1 Tách tuyến trùng khỏi đất rễ nhỏ Tuyến trùng bơi nước Đặc điểm sở cho phương pháp tách tuyến trùng đơn giản mô tả (Hình 10.21) Phương pháp phễu Baerman Phương pháp phễu Baerman sử dụng thiết bị minh họa Hình 10.22 Lấy lượng nhỏ đất từ mẫu đất hỗn hợp (sau trộn 10 mẫu đất lấy từ vùng rễ 10 cây) Đổ từ từ lượng đất vào nước phễu nhựa phễu thủy tinh có đặt rây nhựa nhỏ với kích thước lỗ rây 1mm, phía lót giấy thấm Khơng làm rách giấy đất rễ chặt lớp giấy thấm (giấy ăn) dày rây lọc tuyến trùng di chuyển xuống qua hệ thống lọc nước Hình 10.21 Sơ đồ minh họa quy trình tách tuyến trùng từ rễ đất Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 139 Sau 24 mở kẹp cho thoát 5mL nước từ ống sang đĩa Petri nhỏ đĩa đếm Tuyến trùng di chuyển từ đất ướt xuống qua giấy thấm vào nước Bởi tuyến trùng khơng biết bơi, chúng chìm xuống tích tụ đáy ống nhựa Dàn dung dịch tuyến trùng đĩa kiểm tra kính lúp soi độ phóng đại lớn nhất, đưa sang lam kính để kiểm tra kính hiển vi Tuyến trùng ký sinh thực vật xác định nhờ có mặt kim chích hút Hình 10.22 Bộ dụng cụ phễu Baerman để tách tuyến trùng Phương pháp khay Whitehead Phương pháp khay Whitehead thường sử dụng cho mẫu đất rễ dùng thiết bị minh họa Hình 10.23 Đặt rây lọc (loại thường dùng bếp gia đình) lên bát to, rây lọc có lót lớp giấy thấm dày Đổ nước vào rây cho mặt nước cách mặt rây khoảng 2cm Nhẹ nhàng đặt đất rễ nước rây Chú ý không làm rách giấy Tuyến trùng tập trung lại nước bên lớp giấy thấm 140 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Sau 24 giờ, đổ nước vào cốc đong lọ thủy tinh tuyến trùng lắng xuống đáy lọ Dùng pipet hút nước từ đáy lọ sang đĩa Petri nhỏ để kiểm tra kính lúp soi Nhiều khả tuyến trùng ký sinh không ký sinh thực vật có mặt Những phương pháp xây dựng chủ yếu phục vụ cho việc chẩn đoán Tuy nhiên, với kinh nghiệm việc sử dụng phương pháp lấy mẫu tiêu chuẩn, cách phân lập tuyến trùng giúp cung cấp số liệu hữu ích số lượng tuyến trùng Khay Whitehead phương pháp thích hợp sử dụng việc nghiên cứu số lượng Hệ thống lọc làm từ rây lọc rá đỡ sẵn có bán chợ cửa hàng Việt Nam Hình 10.23 Bộ dụng cụ khay Whitehead để tách tuyến trùng Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 141 10.8 Bệnh vi khuẩn gây Nhiều loài vi khuẩn gây bệnh thực vật, loài khác gây bệnh cho động vật người Đa số vi khuẩn hoại sinh có mặt đất vật liệu hữu với vai trò tác nhân phân hủy Vi khuẩn gây bệnh vi sinh vật nhân ngun thủy nhỏ thấy kính hiển vi dùng vật kính ×100 Nhuộm màu vi khuẩn phù hợp dễ quan sát Chúng đa dạng kích cỡ hình thái; số lồi có lơng roi di chuyển Hầu hết vi khuẩn gây bệnh phân lập ni cấy mơi trường thích hợp Một tế bào vi khuẩn sinh sản cách phân chia đơn giản thành hai tế bào Vi khuẩn nhân lên nhanh số lượng điều kiện thích hợp Các bệnh vi khuẩn thường phổ biến vùng nhiệt đới Có nhiều bệnh vi khuẩn gây ra, bao gồm héo vi khuẩn, đốm lá, cháy lá, u sưng lt (Hình 10.24) Một số lồi gây thối nhũn rau trước sau thu hoạch Các vi khuẩn gây bệnh thông thường Việt Nam bao gồm chi Ralstonia, Xanthomonas, Pseudomonas Erwinia Một số vi khuẩn tồn hạt, số khác giống nhiễm bệnh Dịch khuẩn dấu hiệu có mặt vi khuẩn mô bệnh Vi khuẩn gây bệnh sản sinh dịch khuẩn vết đốm điều kiện ẩm ướt từ mô mạch dẫn thân bị héo vi khuẩn 10.8.1 Héo vi khuẩn Héo vi khuẩn Ralstonia solanacearum bệnh nghiêm trọng gây hại nhiều loại rau trồng Việt Nam Chẳng hạn tỉnh Quảng Nam, héo vi khuẩn gây hại cà chua, ớt, cà tím, mướp đắng, thuốc số trồng, cỏ dại khác Do có phổ ký chủ rộng, bệnh khó phịng trừ biện pháp luân canh Vi khuẩn tồn lâu dài tàn dư ký chủ đất R solanacearum lan rộng theo vật liệu làm giống nhiễm bệnh khoai tây gừng, theo dụng cụ làm ruộng động vật có dính đất Héo vi khuẩn chẩn đốn dựa vào mẫu héo đồng ruộng phòng thí nghiệm qua triệu chứng hóa nâu mạch dẫn thân xuất dịch khuẩn Nếu nhúng đoạn cành cắt vào nước, dòng dịch khuẩn dạng sợi trắng chảy nước Lưu ý ngồi R solanacearum có vi khuẩn khác gây bệnh héo 142 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam b a c d e f g Hình 10.24 Bệnh vi khuẩn gây ra: (a-c) mướp đắng bị héo vi khuẩn, (d) cháy vi khuẩn, (e) Ralstonia solanacearum gây héo nhanh gừng, (f ) thối nhũn cải thảo Erwinia aroideae, (g) Pseudomonas syringae bầu bí Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 143 Các biện pháp phòng trừ bao gồm luân canh trồng ngô lúa, dùng giống bệnh (cây cành giâm) di chuyển đốt bệnh Có số giống lạc trồng khác có khả kháng bệnh Bệnh héo vi khuẩn số giống trồng mẫn cảm phòng trừ cách sử dụng giống với gốc ghép kháng bệnh 10.8.2 Phân lập vi khuẩn gây bệnh Héo vi khuẩn, đốm cháy vi khuẩn bệnh phổ biến Việt Nam Nhiều vi khuẩn gây bệnh phân lập làm phịng thí nghiệm Sau mẫu dùng để lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch (xem Khung 8.1) Có thể gửi mẫu đến phịng thí nghiệm vi khuẩn để xác định xác nguyên nhân mẫu có khả gây bệnh Việc giám định xác tới lồi tốt nên thực phịng thí nghiệm chun mơn Nên dùng mơi trường King's B để phân lập vi khuẩn gây bệnh phổ biến Quá trình phân lập Ralstonia solanacearum, nguyên nhân gây bệnh héo vi khuẩn Cắt đoạn thân bệnh dài khoảng 2-3cm, sau kiểm tra dịch khuẩn (Hình 10.25a) Khử trùng bề mặt cách dùng giấy thấm cồn êtyl 70% lau đoạn thân nhúng đoạn thân vào cồn êtyl 70% hơ khơ (Hình 10.25b) Dùng dao mổ khử trùng cắt đoạn thân thành ba miếng (Hình 10.25c) Đưa miếng vào ống nghiệm chứa 10mL nước vơ trùng (Hình 10.25d) để n dịch vi khuẩn ứa làm nước vẩn đục sữa (Hình 10.25e) Khử trùng que cấy khuẩn cách hơ lửa đèn cồn để nguội (Hình 10.25f) Nhúng đầu que cấy vào dung dịch có chứa vi khuẩn (Hình 10.25g) Cấy vi khuẩn lên đĩa môi trường King's B cách chạm vào mặt thạch gần bên mép đĩa vạch nhẹ nhàng 3-4 vạch mặt thạch (Hình 10.25h) Khử trùng que cấy để nguội Vạch nhẹ nhàng 3-4 vạch mặt thạch cho đầu que cấy ngang vết vạch trước (Hình 10.26) 10 Làm lại bước lần nữa, vạch đường cuối hình chữ Z 11 Đặt đĩa cấy nhiệt độ khoảng 25-30°C ngày (Hình 10.27) 12 Kiểm tra đĩa để tìm khuẩn lạc đơn nhỏ vết vạch lần thứ ba thứ tư (Những khuẩn lạc lớn phát triển vịng 24 khơng phải R solanacearum 13 Dùng que cấy khuẩn khử trùng lấy khuẩn lạc nhỏ cấy lên môi trường King's B 14 Để ngày 144 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 15 Cấy truyền khuẩn lạc đơn mọc từ đĩa cấy sang lọ McCartney ống nghiệm chứa môi trường King's B đổ nghiêng Đây mẫu sử dụng cho q trình lây bệnh nhân tạo (xem ví dụ nghiên cứu cụ thể héo gừng Phần 3.1) a b c d e f g h Hình 10.25 Phương pháp phân lập Ralstonia solanacearum từ thân bị bệnh Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 145 HƠ LỬA HƠ LỬA HƠ LỬA Hình 10.26 Sơ đồ minh họa đĩa cấy vi khuẩn, cho thấy thứ tự vạch cấy hơ lửa khử trùng que cấy bước Hình 10.27 Đĩa cấy vi khuẩn phát triển sau ngày nhiệt độ 25°C 146 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Phân lập vi khuẩn từ vết đốm cháy Khử trùng bề mặt lam kính nhỏ giọt nước vô trùng lên lam Nhẹ nhàng lau khử trùng bề mặt giấy thấm cồn êtyl 70% Với dụng cụ khử trùng, cắt miếng nhỏ vết đốm cháy lá, kể gân lá, đưa sang giọt nước lam kính Quan sát miếng cắt kính hiển vi (vật kính X10) Nếu vết bệnh vi khuẩn gây ra, thường thấy dịch khuẩn ứa từ chỗ gân bị cắt Cắt nhỏ, chà xát miếng cắt để giải phóng vi khuẩn vào giọt nước Để khoảng 3-5 phút cho vi khuẩn có đủ thời gian giải phóng vào giọt nước Nhúng đầu que cấy khuẩn khử trùng vào giọt nước cấy lên môi trường King's B mô tả Làm mẫu khuẩn mô tả trên, thực trình lây bệnh nhân tạo, gửi mẫu cho chuyên gia vi khuẩn giám định xác cần thiết Để thực trình lây bệnh nhân tạo, phun dịch vi khuẩn lên để ẩm cách bọc túi nilon lớn Khơng để ngồi nắng túi q nóng, ngăn cản q trình xâm nhiễm Phân lập vi khuẩn từ rễ thân rễ Việc phân lập vi khuẩn từ rễ thân rễ tương tự việc phân lập từ vết đốm cháy (Hình 10.28) Tuy nhiên, mức độ khử trùng bề mặt thay đổi tùy theo độ dày rễ vi khuẩn cần phân lập Nên gọt bỏ phần mơ ngồi rễ thân rễ trước khử trùng phân lập Hình 10.28 Chà xát rễ thân rễ để chuẩn bị dịch vi khuẩn trước cấy Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 147 10.9 Bệnh vi rút gây Việc thảo luận chi tiết vi rút gây bệnh nằm phạm vi cẩm nang Cần tham khảo tài liệu khác nghi ngờ virút tác nhân gây bệnh Mặc dù virút gây bệnh thường có triệu chứng điển hình, việc giám định chúng thơng qua việc sử dụng kỹ thuật phân tử kỹ thuật chẩn đốn khác Ký chủ thị trợ giúp cho việc giám định Các phần tử vi rút thực vật nhỏ khơng thể nhìn thấy kính hiển vi Cần sử dụng kính hiển vi điện tử để quan sát phần tử vi rút thực vật Một phần tử vi rút thực vật gọi virion Vi rút có hình sợi, hình cầu hình que Tất vi rút gây bệnh thực vật cấu tạo từ axit nucleic, thường ARN; nhiên, số cấu tạo từ ADN Hầu hết vi rút có vỏ protein Khơng thể phân lập nuôi cấy vi rút thực vật mơi trường thạch, chúng tái tạo tế bào ký chủ sống Vi rút thực vật xâm nhiễm vào tế bào ký chủ thông qua vết thương nhỏ sâu bọ véc tơ khác, qua vết thương giới Vi rút tái tạo tế bào cây, cản trở hoạt động bình thường tế bảo Sự cản trở tế bào tác động đến ký chủ đưa đến triệu chứng rõ rệt Các phần tử vi rút di chuyển từ tế bào sang tế bào khác, lan đến phận khác (Hình 10.29) Cây bị nhiễm nhiều vi rút lúc Một số ký chủ bị nhiễm vi rút mà không biểu triệu chứng Các triệu chứng bệnh vi rút bao gồm còi cọc, biến vàng, khảm vằn lá, vàng có vết loét, đốm vòng, biến dạng, cuốn, còi cọc, số trường hợp, gây chết Một số triệu chứng vi rút gây tương tự dấu hiệu rối loạn dinh dưỡng tác nhân khác gây Vi rút gây bệnh lan truyền thông qua véctơ côn trùng, rễ, thân củ giống nhiễm bệnh, gốc chồi giống sử dụng để ghép Một số vi rút lan truyền qua hạt giống bị bệnh Một số vi rút lan truyền cách học từ sang khác thông qua dụng cụ dao ghép, kéo cắt cành (và với số virút, qua tay người) Vi rút khảm thuốc dễ truyền lan qua dụng cụ cắt tay người, chí tồn điếu thuốc lá, lan truyền thông qua tay người 148 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam a b c d e f Hình 10.29 Các bệnh vi rút: (a) vi rút héo đốm cà chua ớt, (b) vi rút biến vàng củ cải đường dưa chuột, (c) vi rút vàng xoăn cà chua, (d) vi rút khảm củ cải ăn họ cải bắp (phải), khỏe (trái), (e) vi rút dưa chuột, (f ) quăn vi rút mãn đình hồng (Althaea rosea) Phần 10 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 149 Việc giám định vi rút gây bệnh đòi hỏi phải có phịng thí nghiệm chun sâu Các phịng thí nghiệm chẩn đoán cấp tỉnh Việt Nam nên yêu cầu trợ giúp từ Viện Bảo vệ thực vật việc chẩn đốn bệnh vi rút Có số kít chẩn đốn cho số vi rút để chẩn đoán nhanh đồng ruộng, kit đắt tiền Khi khơng có mặt ký chủ, vi rút bảo tồn chủ yếu cỏ dại Tuy nhiên, số tồn hạt tìm thấy nhân giống vơ tính Việc phòng trừ bệnh vi rút tùy thuộc vào đặc tính vi rút, phổ ký chủ, phương thức lan truyền bảo tồn Các biện pháp phòng trừ bao gồm: • loại bỏ ký chủ cỏ dại của vi rút và véc tơ lan truyền • phịng trừ véc tơ truyền vi rút trong vụ trồng • sử dụng giống sạch bệnh • dùng những hệ thống danh mục để cung cấp cây trồng sạch bệnh • vệ sinh cây trồng tốt – giảm thiểu việc tiếp xúc với bệnh – khử trùng dụng cụ tỉa trước dùng 10.10 Tài liệu tham khảo Erwin D.C Ribeiro O.K 1996 Phytophthora diseases worldwide American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Drenth A Sendall B 2001 Practical guide to detection and identiication of Phytophthora CRC for Tropical Plant Protection: Brisbane, Australia 150 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam ... thối r? ?? Rhizoctonia hình thành nấm xâm nhập vào đỉnh sinh trưởng r? ?? phụ nhỏ Nấm sau phát triển từ đầu r? ?? lan vào r? ?? làm thối r? ?? Rhizoctonia xâm nhiễm đỉnh sinh trưởng r? ?? thường đưa đến triệu... noãn phát triển thành bào tử trứng có vách dày Bào tử trứng bào tử bảo tồn có vai trị quan trọng chu kỳ bệnh Bào tử trứng Pythium có vách mịn dạng trang trí sừng Bào tử trứng Phytophthora có vách... Các triệu chứng bệnh điển hình héo chết thối nâu r? ?? thối thân Pythium gây hại r? ?? ni cây, gây tượng cịi cọc, vàng trưởng thành Khi bị bệnh trưởng thành, Pythium phát triển gây thối r? ?? hay r? ?? Pythium