Nghiên cứu xây dựng phương pháp định tính nhanh tadalafil, sildenafil và vardenafil ngụy tạo trong thực phẩm chức năng hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương bằng kỹ thuật khối phổ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ HUỲNH NGỌC THÙY TRANG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH NHANH TADALAFIL, SILDENAFIL VÀVARDENAFIL NGỤY TẠO TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN CƯƠNG DƯƠNG BẰNG KỸ THUẬT KHỐI PHỔ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP THẠC SĨ DƯỢC HỌC Cần Thơ – Năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ HUỲNH NGỌC THÙY TRANG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH NHANH TADALAFIL, SILDENAFIL VÀ VARDENAFIL NGỤY TẠO TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN CƯƠNG DƯƠNG BẰNG KỸ THUẬT KHỐI PHỔ Chuyên ngành : Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số ngành : 8720210 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP THẠC SĨ DƯỢC HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS.DS ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ Cần Thơ – Năm 2019 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc , em xin gửi lời chân thành cám ơn TS DS ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ , người thầy tận tụy truyền cho em bao nhiệt huyết với nhiều kiến thức quý giá Thầy theo dõi quan tâm , hỗ trợ, động viên vật chất tinh thần giúp em vượt qua khó khăn trở ngại suốt q trình thực hồn thành luận văn Em xin cảm ơn thầy cô liên mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất, cô Dương Thị Trúc Ly, cô Nguyễn Thị Ngọc Vân, thầy Lữ Thiện Phúc, cô Nguyễn Thị Đặng, thầy Đỗ Trung Hiền giúp đỡ, tạo điều kiện cho em có đầy đủ trang thiết bị, dụng cụ, máy móc để thực đề tài Cảm ơn anh chị, em học viên lớp cao học Kiểm Nghiệm 2017- 2019, em Nguyễn Thị Hồng Phương K39, em sinh viên DK40, DK42 giúp đỡ em nhiều suốt thời gian qua Xin cảm ơn người bạn nhóm đề tài kiểm nghiệm, cảm ơn đồng đội khối phổ hỗ trợ giúp đỡ em nhiều mặt Và cuối , xin cám ơn gia đình ln bên cạnh động viên hỗ trợ cho em hoàn thành thật tốt luận văn Cảm ơn người bạn dù xa thăm hỏi, động viên giúp đỡ hết lịng để em ln tự tin giữ vững tâm hoàn thành mục tiêu LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học TS.DS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực, chưa công bố tài liệu khác Cần Thơ, ngày 15 tháng 08 năm 2019 Sinh viên HUỲNH NGỌC THÙY TRANG i MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ .vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chương – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan rối loạn cương dương 1.2 Tổng quan chất ức chế PDE-5 nghiên cứu 1.1.1 Tác dụng dược lý 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Các nghiên cứu phân tích sildenafil, tadalafil vardenafil 1.1.4 Tác dụng phụ độc tính thuốc trị rối loạn cương dương 10 1.2 Thực trạng sử dụng thực phẩm chức hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương Việt Nam 11 1.3 Đầu dò khối phổ ba lần tứ cực 14 1.3.1 Nguyên lý 14 1.3.2 Cấu tạo 14 1.3.3 Kỹ thuật ghi phổ 17 Chương – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2.Tiêu chuẩn chọn mẫu 19 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 19 2.1.4 Địa điểm - thời gian nghiên cứu 19 2.2 Hóa chất, thuốc thử, chất chuẩn - trang thiết bị 20 2.2.1 Hóa chất, thuốc thử, chất chuẩn 20 2.2.2 Trang thiết bị – dụng cụ 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu .21 2.3.1.Thiết kế nghiên cứu: nghiên cứu thực nghiệm 21 2.3.2.Cỡ mẫu 21 2.3.3 Phương pháp chọn mẫu 23 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 23 2.4 Nội dung nghiên cứu .24 ii 2.4.1.Chuẩn bị mẫu 24 2.4.2 Khảo sát điều kiện khối phổ tối ưu tín hiệu SDF, TDF VDF 24 2.4.3 Khảo sát quy trình xử lý mẫu thích hợp 27 2.4.4.Thẩm định quy trình định tính 28 2.4.5 Áp dụng qui trình định tính thẩm định để định tính nhanh đồng thời SDF, TDF, VDF TPCN hỗ trợ điều trị RLCD thu thập TP Cần thơ 29 Chương – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 3.1 Khảo sát điều kiện khối phổ tối ưu .31 3.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu thích hợp 40 3.3 Thẩm định quy trình 43 3.3.1 Tính tương thích hệ thống 43 3.3.2 Độ dặc hiệu 43 3.3.3 Giới hạn phát 45 3.5 Áp dụng qui trình định tính thẩm định để phát taladafil, sildenafil vardenafil mẫu chế phẩm thực phẩm chức thu thập Cần Thơ 47 Chương – BÀN LUẬN .49 4.1 Xây dựng thẩm định quy trình định tính đồng thời taladafil, sildenafil vardenafil có mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương 49 4.1.1 Tối ưu hóa điều kiện khối phổ 49 4.1.2 Khảo sát quy trình chiết thích hợp 54 4.1.3 Biện giải cấu trúc ion mẹ phân mảnh để định tính xác nhận TDF, SDF VDF có mẫu thực phẩm chức 55 4.1.4 Thẩm định quy trình 60 4.1.4 Ứng dụng quy trình định tính thẩm định xác định taladafil, sildenafil vardenafil có chế phẩm thực phẩm chức thu thập 61 KẾT LUẬN 63 KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt Association of Official Hiệp hội nhà hóa phân tích Analytical communities thức ACN Acetonitrile Acetonitril BP 2016 British Pharmacopeia 2016 Dược điển Anh 2016 CE Collision Energy Năng lượng va đập CUR Curtain Gas Khí CXP Collision cell Exit Potential Thế đầu DĐVN V Dược điển Việt Nam V DP Declustering Potential Thế đầu vào EI Electron ionization Ion hóa điện tử ESI Electrospray ionization Ion hóa phun điện tử GS1 Ion Source Gas Áp suất khí bên đầu phun GS2 Ion Source Gas AOAC HPLC High performance Liquidchromatography Áp suất luồng khí nóng (GS2) Sắc ký lỏng hiệu cao Liquid chromatography Sắc ký lỏng ghép hai lần khối tandem mass spectrometry phổ LOD Limit of detection Giới hạn định tính LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng MeOH Methanol Methanol MS Mass Spectrometry Khối phổ NMR Nuclear Magnetic Cộng hưởng từ hạt nhân LC-MS/MS iv Resonance Enzyme phá vỡ liên kết PDE-5 Phosphodiesterase - RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối SDF Sildenafil TDF Tadalafil TLC Thin Layer Chromatography Sắc kí lớp mỏng m/z Mass to charge ratio Tỉ lệ khối lượng điện tích S/N Signal to noise Tín hiệu nhiễu SRM USP 41 UV-Vis Selected Reaction Monitoring United States Pharmacopeia 41 Ultra violet visible spectrophotometry phosphodiester Giám sát phản ứng chọn lọc ion Dược điển Mỹ 41 Quang phổ tử ngoại khả kiến VDF Vardenafil Vardenafil WHO World Health Orgination Tổ chức y tế giới v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các nghiên cứu phân tích chất ức chế PDE-5 Bảng 1.2 Tóm tắt cách lựa chọn [44] 16 Bảng 2.1 Dung mơi- hố chất sử dụng trogn nghiên cứu 20 Bảng 2.2 Bốn mươi mẫu thực phẩm chức thu thập TP Cần Thơ 22 Bảng 2.3 Đặc trưng khối phổ chất ức chế PDE-5 26 Bảng 3.1 Điều kiện khối phổ tối ưu cho phân tích TDF, SDF VDF 40 Bảng 3.2 Ion mẹ ion phân mảnh đặc trưng TDF, SDF VDF 40 Bảng 3.3 Giới hạn phát chất phân tích mẫu placebo 45 Bảng 3.4 Kết định tính nhanh TDF, SDF, VDF có mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị RLCD (n = 3) 47 Bảng 4.1 Trình tự định tính xác nhận TDF, SDF, VDF có mẫu 56 vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Sơ đồ minh họa chế hoạt động chất ức chế phosphodiesterase-5 (PDE-5) Hình 1.2 Cấu trúc hóa học tadalafil Hình 1.3 Cấu trúc hóa học sildenafil Hình 1.4 Cấu trúc hóa học vardenafil Hình 1.5 Cấu tạo khối phổ 14 Hình 1.6 Hệ thống khối phổ ba lần tứ cực 18 Hình 3.1 (a) Kết auto- tune cơng cụ Intelligent Stat Masslynx 4.1 để tìm ion mẹ (ESI+) phân mảnh đặc trưng SDF, (b) phổ đồ minh họa cone, (c) lượng va đập (d) cường độ tín hiệu mảnh đặc trưng m/z 99.64 32 Hình 3.2 (a) Kết auto- tune công cụ Intelligent Stat để tìm ion mẹ (ESI+) phân mảnh đặc trưng VDF (b) phổ đồ minh họa cone, (c) lượng va đập (d) cường độ tín hiệu phân mảnh ion mảnh đặc trưng m/z 151.05 34 Hình 3.3 (a) Kết auto- tune cơng cụ Intelligent Stat để tìm ion mẹ (ESI+) phân mảnh đặc trưng TDF (b) phổ đồ minh họa cone, (c) lượng va đập (d) cường độ tín hiệu mảnh đặc trưng m/z 268.01 36 Hình 3.4 Kết kiểm tra manual-tune tìm ion mẹ (ESI+) TDF (m/z 390) phân mảnh đặc trưng m/z 262 135 37 Hình 3.5 Kết kiểm tra manual-tune tìm ion mẹ (ESI+) SDF (m/z 475) phân mảnh đặc trưng m/z 99.8 38 Hình 3.6 Kết kiểm tra manual-tune tìm ion mẹ (ESI+) VDF (m/z 489.1) phân mảnh đặc trưng m/z 151.0 38 Hình 3.7 (a) Phổ đồ MS1 hỗn hợp chuẩn TDF, SDF, VDF (150 ppb) (b) phổ Daughter scan TDF, SDF, VDF nồng độ 150 ppb dung môi điều kiện khối phổ tối ưu 39 Hình 3.8 Phổ Daughter scan mẫu trắng giả lập thêm chuẩn SDF 100 ppb pha MeOH, ACN, ACN+ acid formic 0,1% điều kiện khối phổ tối ưu 41 PL - 15 PL 5.8 Phổ đồ tín hiệu SDF chuẩn mẫu thử 36, 37, 39 chế độ daughter PL - 16 Phụ lục Các mảnh gây ảnh hưởng tín hiệu PL 6.1 Các mảnh điển hình gây ảnh hưởng tín hiệu mẫu placebo PL 6.2 Các mảnh điển hình gây ảnh hưởng tín hiệu mẫu thử thị trường PL - 17 Phụ lục Kết thực nghiệm sắc ký lớp mỏng số mẫu thử thực phẩm chức thu thập cho kết dương tính với phương pháp khối phổ PL 7.1 Kết SKLM mẫu thử M01-KD, M04- WL, M18 – MCR7 PL 7.2 Kết SLKM mẫu thử M29 - TTSN, M36 – BTNA PL - 18 PL 7.3 Kết SKLM mẫu thử M05- ADF ,, M34 - BTND, M37 – MDNV PL - 19 Phụ lục Danh mục mẫu thành lập mẫu trắng DANH SÁCH TẠO MẪU TRẮNG GIẢ LẬP SĐK/ Công bố NSX Cao chiết bá bệnh ,Chiết xuất Butea Superba PE Bạch tật lê , Sâm nhung ,L-Arginine HCI ,Kẽm Chiết xuất từ diệp lục ,Ginkgo Biloba Gelatin, Magnesium Stearate vừa đủ viên M24- Đông trùng hạ thảo , câu TMP kỷ tử, hoàng tinh, dâm dương hoắc, nhân sâm 26209/2014/AT TP-XNCB 210118 210120 Bá bệnh,chiết xuất tảo M28- đỏ,bạch tật lê, Nipazol, RK Talc, Mg stearat, Canxi Carbonat M14 Chiết xuất hàu biển –HB tươi,Kẽm ,Vitamin E, M16- Sâm nhung, lộc C nhung,cao khô hỗn hợp: dâm dương , bạch tật lê, câu kỷ tự, bá bệnh, nhục thung dung,trâu cô, vit e 32037/2015/AT TP-XNCB 180816 180819 10405/2015/AT TP-XNCB 17763/2017/AT TP-XNCB 40818 ST T Mã mẫu M39 – ALP M07 KM D M40 – DLĐ Thành phần Dâm dương hoắc, bạch tật lê, nấm tỏa hương, sâm nhung, Yohimbe Cao Dâm dương hoắc ,Cao Bạch tật lê ,Nhục thung dung ,Cao Bá bệnh ,Cao Ba kích Hạn dùng 2691/2016/ATT 100318 100321 P-XNCB 40820 030318 030321 1180/2019/ĐKS 250319 250322 P 150618 150621 PL - 20 10 M36- Bá bệnh, cá ngựa, nhân BTN sâm, quế nhục, ba kích, A dâm dương hoắc, nhục thung dung, câu kỷ tử, phá cổ chí, xà sáng tử, đổ trọng, hồi sơn, phụ tử chế, sơn thù, thục địa, kẽm oxyd M19 Nhung hươu , hải mã , – nhân sâm , cao ban long NDV Linh chi , phá cổ chi , quế nhục , hồi sơn ,ba kích , kim anh , hà thủ ô đỏ , liên nhục , đẳng sâm , cẩu tích , thục địa , tá dược vừa đủ viên M07 Sâm Eurycoma – longifalia, cao tật lê, cao KM dâm dương hoắc, cao ba X kích , cao thạch học 3980/2015/ATT 160517 150520 P-XNCB 781/2016/ATTP 221018 221020 -XNCB 4928/2016/ATT 110618 100621 P-XNCB 2019 521 59 0866 - 7861 CÂY ĐU ĐỦ Carica papaya L Họ Đu Đủ - Caricaceae BỘ Y TẾ XUẤT BẢN Địa Tòa soạn: 138A Giảng Võ - Quận Ba Đình - Hà Nội Tel: 0243.8461430 - 0243.7368367 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC ISSN 0866 - 7861 09/2019 (Số 521 NĂM 59) PHARMACEUTICAL JOURNAL ISSN 0866 - 7861 09/2019 (No 521 Vol 59) MỤC LỤC CONTENTS NGHIÊN CỨU - KỸ THUẬT RESEARCH - TECHNIQUES ●● TRẦN NGÂN HÀ, CAO THỊ THU HUYỀN, BÙI THỊ NGỌC THỰC, NGUYỄN THU MINH, PHẠM THỊ TUYẾT NGA, CẨN TUYẾT NGA, VŨ ĐÌNH HỒ, TRẦN NHÂN THẮNG, NGUYỄN HỒNG ANH: Giám sát tích cực phản ứng có hại thuốc thơng qua cơng cụ phát tín hiệu đơn vị lâm sàng chuyên khoa tim mạch tuyến Trung ương ●● TRẦN NGÂN HÀ, CAO THỊ THU HUYỀN, BÙI THỊ NGỌC THỰC, NGUYỄN THU MINH, PHẠM THỊ TUYẾT NGA, CẨN TUYẾT NGA, VŨ ĐÌNH HỒ, TRẦN NHÂN THẮNG, NGUYỄN HỒNG ANH: Detecting adverse drug reactions using a trigger tool in a cardiology department of a central hospital ●● NGUYỄN THỊ THẢO, HOÀNG THỊ TRANG, NGUYỄN THỊ THANH THỦY, PHẠM THỊ THÚY VÂN: Một số vấn đề liên quan đến sử dụng insulin chưa phù hợp bệnh nhân đái tháo đường bệnh viện tuyến Trung ương 11 ●● NGUYỄN ĐỨC HẠNH, TRẦN TOÀN VĂN, NGUYỄN ĐĂNG KHOA: Nghiên cứu cải thiện tính chất cao khơ sấy phun ngải trắng sử dụng tá dược silicon dioxid 17 ●● TẠ MẠNH HÙNG, PHAN THỊ NGHĨA, NGUYỄN THỊ DUNG, NGUYỄN THỊ THU HÒA: Nghiên cứu định lượng rosuvastatin huyết tương người phương pháp sắc ký lỏng – khối phổ 22 ●● HỒ ĐẮC HÙNG, NGUYỄN XUÂN CẢNH, VÕ THỊ BẠCH HUỆ: Thẩm định quy trình xác định độ tinh khiết hóa phóng xạ thuốc 2-[18F] fluoro-2-deoxy-D-glucose (18F-FDG) 27 ●● NGÔ TRÚC DUYÊN, NGUYỄN LÊ THANH TUYỀN, NGUYỄN THỊ KIM OANH, ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI: Khảo sát độc tính cấp đường uống tác động hạ đường huyết chuột nhắt viên nang cứng Sapentol 31 ●● THÂN THỊ KIỀU MY, PHẠM THANH KỲ: Hai saponin phân lập từ loài Gynostemma guangxiense X X Chen & D H Qin thu hái Yên Bái 34 ●● ĐỖ HỮU TUẤN, TRẦN CAO SƠN, LÊ THỊ HỒNG HẢO, LÊ DANH TUYÊN, THÁI NGUYỄN HÙNG THU: Đánh giá nguy độc tố vi nấm aflatoxin B1, ochratoxin A, fumonisin B1 zearalenon thực phẩm Bắc Giang Thái Bình 41 ●● NGUYỄN THỊ THẢO, HOÀNG THỊ TRANG, NGUYỄN THỊ THANH THỦY, PHẠM THỊ THÚY VÂN: Some problems arising from the improper use of insulin in diabetic patients at a national hospital 11 ●● NGUYỄN ĐỨC HẠNH, TRẦN TOÀN VĂN, NGUYỄN ĐĂNG KHOA: Improvement of Curcuma aromatica spray-dried extracts using silicon dioxide 17 ●● TẠ MẠNH HÙNG, PHAN THỊ NGHĨA, NGUYỄN THỊ DUNG, NGUYỄN THỊ THU HÒA: Quantification of rosuvastatin in human plasma by liquid chromatography electrospray ionization mass spectrometry 22 ●● HỒ ĐẮC HÙNG, NGUYỄN XUÂN CẢNH, VÕ THỊ BẠCH HUỆ: Validation of a thin layer chromatography method for determination of the radiochemical purity of 2-[18F] fluoro-2deoxy-D-glucose (18F-FDG) 27 ●● NGÔ TRÚC DUYÊN, NGUYỄN LÊ THANH TUYỀN, NGUYỄN THỊ KIM OANH, ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI: Study on oral acute toxicity and hypoglycemic effect of the Sapentol capsules in mice 31 ●● THÂN THỊ KIỀU MY, PHẠM THANH KỲ: Two dammaran saponins from the plant Gynostemma guangxiense X X Chen & D H Qin Collected in Yen Bai provine (North Vietnam) 34 ●● ĐỖ HỮU TUẤN, TRẦN CAO SƠN, LÊ THỊ HỒNG HẢO, LÊ DANH TUYÊN, THÁI NGUYỄN HÙNG THU: An assessment of intoxication risk by aflatoxin B1, ochratoxin A, fumonisin B1 and zearalenone in some foodstuffs collected in Bac Giang and Thai Binh province 41 l Mục lục ●● ĐỖ THỊ THANH THUỶ, ĐOÀN CAO SƠN: Xây dựng phương pháp xác định tạp chất liên quan nguyên liệu tạp chất A terazosin bằng sắc ký lỏng hiệu cao 47 ●● ĐỖ THỊ THANH THUỶ, ĐOÀN CAO SƠN: Development of an HPLC method for determination of impurity A-related substances of terazosin 47 ●● TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN, NGUYỄN HỮU SƠN, LÊ THỊ THU CÚC, NGUYỄN NGỌC VINH: Xây dựng quy trình định lượng đồng thời vicenin-2 vitexin cao dược liệu rau đắng đất phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 50 ●● TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN, NGUYỄN HỮU SƠN, LÊ THỊ THU CÚC, NGUYỄN NGỌC VINH: Development of an HPLC procedure for simultaneous determination of vicenin-2 and vitexin in the extracts of Glinus oppositifolius (L.) Aug DC 50 ●● NGỤY TẤN LỘC, ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ, LÊ HỮU PHƯỚC: Nghiên cứu xây dựng qui trình phân tích dư lượng số thuốc trừ sâu nhóm phospho hữu carbamat nước kênh rạch phương pháp LC - MS/MS 54 ●● NGỤY TẤN LỘC, ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ, LÊ HỮU PHƯỚC: Simultaneous determination of several organophosphate and carbamate pesticide residues in canal wastewater samples by LC-MS/MS 54 ●● ĐẶNG TRƯỜNG GIANG, TRẦN THỊ HIỆN, PHẠM VĂN HIỂN, CHỬ VĂN MẾN, NGUYỄN HỮU MỸ, TRẦN KIM THANH, VŨ BÌNH DƯƠNG: Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình tạo phức silybin phosphatidylcholin 60 ●● ĐẶNG TRƯỜNG GIANG, TRẦN THỊ HIỆN, PHẠM VĂN HIỂN, CHỬ VĂN MẾN, NGUYỄN HỮU MỸ, TRẦN KIM THANH, VŨ BÌNH DƯƠNG: Study on the factors effective to the formation of silybin - phosphatidylcholine complex 60 ●● HỒNG THỊ KIM VÂN, VŨ ĐÌNH NGỌ, TRẦN THỊ HẰNG, TRẦN THỊ PHƯƠNG, NGUYỄN THỊ THU MINH, ĐINH THỊ THU THỦY, NGUYỄN HẢI ĐĂNG: Nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học tinh dầu tía tơ (Perilla frutescens (L.) Britt) 65 ●● HỒNG THỊ KIM VÂN, VŨ ĐÌNH NGỌ, TRẦN THỊ HẰNG, TRẦN THỊ PHƯƠNG, NGUYỄN THỊ THU MINH, ĐINH THỊ THU THỦY, NGUYỄN HẢI ĐĂNG: Study on chemical compostions and biological activity of the essential oils of Perilla frutescens (L.) Britt 65 ●● ĐỖ THỊ THANH THUỶ, NGUYỄN HẢI NAM: Xây dựng phương pháp định tính nguyên liệu tạp chất A của terazosin bằng sắc ký lớp mỏng 68 ●● ĐỖ THỊ THANH THUỶ, NGUYỄN HẢI NAM: Development of a TLC method for identification of impurity A of terazosin 68 ●● TRỊNH HỒNG THÚY, PHẠM THANH KỲ: Nghiên cứu đặc điểm vi học thành phần hóa học trà hoa dormoy (Camellia dormoyana (Pierre) Sealy) 71 ●● TRỊNH HỒNG THÚY, PHẠM THANH KỲ: Study on the microscopy and phytochemistry of the leaves of Camellia dormoyana (Pierre) Sealy 71 ●● NGUYỄN VIỆT ĐỨC, NGUYỄN THỊ MINH THUẬN, VÕ THỊ BẠCH HUỆ : Nghiên cứu phân lập khảo sát hoạt tính kháng khuẩn carpain từ đu đủ (Carica papaya L., Caricaceae) 75 ●● NGUYỄN VIỆT ĐỨC, NGUYỄN THỊ MINH THUẬN, VÕ THỊ BẠCH HUỆ : Isolation and antibacterial activity of a carpain from the leaves of papaya (Carica papaya L., Caricaceae) 75 ●● HUỲNH NGỌC THÙY TRANG, ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ: Nghiên cứu xây dựng phương pháp định tính nhanh tadalafil, sildenafil vardenafil ngụy tạo thực phẩm chức hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương kỹ thuật khối phổ 78 ●● HUỲNH NGỌC THÙY TRANG, ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ: Development of a direct infusion mass spectrometry method for simultaneous determination of adulterated synthetic pde-5 inhibitors (tadalafil, sildenafil and vardenafil) in dietary supplements for erectile dysfunction 78 ●● ĐÀO NGUYỆT SƯƠNG HUYỀN, NGUYỄN ĐÌNH LUYỆN, NGUYỄN VĂN HẢI: Cải tiến quy trình tổng hợp mesna qua trung gian natri S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioat 83 ●● ĐÀO NGUYỆT SƯƠNG HUYỀN, NGUYỄN ĐÌNH LUYỆN, NGUYỄN VĂN HẢI: Improvement of the synthesis of mesna base via sodium S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioate 83 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) l Nghiên cứu - Kỹ thuật Nghiên cứu xây dựng phương pháp định tính nhanh tadalafil, sildenafil vardenafil ngụy tạo thực phẩm chức hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương kỹ thuật khối phổ Huỳnh Ngọc Thùy Trang, Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ* Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ * E-mail: dcmvtho@ctump.edu.vn Summary A direct infusion MS/MS method was validated for simultaneous identification of tadalafil (TDF), sildenafil (SDF) and vardenafil (VDF) as adulterants of synthetic PDE-5 inhibitors in dietary supplements for erectile dysfunction The MS/MS procedure was experimentally optimized as: The apillary voltage - kV; desolvation temperature - 900 oC; gas flow rate - 400 L/h, cone voltage range - 20 to 40V, and collision cell energy - 20 to 80V The sample preparation was performed ultrasonically for 10 minutes with acetonitrile containing 0.1% formic acid (50:50) as solvent On validation, the method proved high specificity and a very good detection limit (LOD) of 0.008, 0.015, 2.5 ppb for VDF, SDF, TDF, respectively, and practically applicable By this method, 40 supplementary products for erectile dysfunction treatment were analyzed, of which 40% were found to be adulterated with TDF and/or SDF, VDF Key words: Daughters scan, MS fullscan, tadalafil, limit of detection Đặt vấn đề Cùng với phát triển xã hội gia tăng mơ hình bệnh tật Hiện bệnh lý rối loạn cương dương nam giới, ngày gia tăng trở nên phổ biến xã hội Việc điều trị dựa tảng Tây y Đơng y Theo đó, xu hướng “trở lại với tự nhiên” tạo điều kiện cho thị trường thực phẩm chức có nguồn gốc thảo dược hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương ngày phát triển Tuy nhiên, số sở sản xuất, mua bán thuốc Đơng y khơng chân chính, mục đích lợi nhuận cao, đặc biệt thực phẩm chức có nguồn gốc nhập sử dụng nhóm hợp chất tân dược ức chế PDE-5 để điều trị rối loạn cương dương (RLCD), ngụy tạo vào thực phẩm chức [5] nhằm đánh lừa người bệnh hiệu ban đầu để lại nhiều biến chứng tác dụng phụ nguy hiểm đến tính mạng sử dụng thời gian lâu hơn, tạo gánh nặng to lớn cho người bệnh ngành y tế Hiện nay, việc ngụy tạo hoạt chất có tác dụng điều trị rối loạn cương dương (sildenafil, tadalafil, vardenafil) vào chế phẩm Đông dược, thực phẩm chức ngày phổ biến, tinh vi khó phát đặc điểm mẫu Đông dược, thực phẩm chức phần lớn chiết xuất hỗn hợp nhiều chất phức tạp từ thuốc, hàm lượng hoạt chất ngụy tạo thấp nhiều loại khác nên việc phát ngụy tạo gặp nhiều khó khăn [3, 4] Hiện nay, chưa có quy trình định tính, định lượng hoạt chất có tác dụng 78 điều trị rối loạn cương dương vào chế phẩm Đông dược, thực phẩm chức quy định tài liệu thống như: Dược điển Việt Nam 5, Dược điển Anh (BP 2017), Dược điển Mỹ (USP 41) Tại Việt Nam, có vài nghiên cứu, định tính tadalafil kỹ thuật sắc ký lớp mỏng tác giả Hoàng Thị Quỳnh (2013), (“Nghiên cứu phát sildenafil số chế phẩm Đơng dược sắc ký lớp mỏng”, Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội), định lượng đồng thời hợp chất PDE-5 phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò Uv-Vis tác giả Trần Văn Chính (2016), (“Xây dựng phương pháp phân tích đồng thời sildenafil, tadalafil vardenafil thực phẩm chức HPLC”, Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội) Do đó, việc xây dựng phương pháp phân tích để phát nhanh, đồng thời với độ nhạy cao, đặc hiệu tin cậy cho sildenafil, tadalafil, vardenafil ngụy tạo thực phẩm chức hỗ trợ điều trị RLCD nam giới yêu cầu cần thiết Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Mẫu dung dịch hỗn hợp chuẩn tadalafil (TDF), sildenafil (SDF) vardenafil (VDF) Mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị RLCD thu mua địa bàn TP Cần Thơ Chất đối chiếu, thiết bị, hóa chất, dung mơi Chất chuẩn đối chiếu: Tadalafil (97,7%), sildenafil (98,4%) Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) l Nghiên cứu - Kỹ thuật cung cấp, vardenafil hydroclorid trihydrat (99,0%) cung cấp hãng Sigma-Aldrich Thiết bị: Hệ thống đầu dò khối phổ ba lần tứ cực Waters (Xevo TQD) với phân ion hóa ESI kiểm định định kỳ độ độ xác khối theo quy định nhà sản xuất; cân phân tích ABT 220-5DM, bể siêu âm Wisd WUC-D22H, máy cô quay chân không Hei-VAP Value Heidolph, máy Vortex VM-10 DAIHAN Scientific, máy li tâm Hittech, tủ lạnh sâu (- 20 oC), máy khuấy từ IKAC-MAG HS 10, máy đo pH WTW- INOLAB pH720, quay chân khơng Heidolph (Hei-VAP) Hố chất, dung mơi: Acetonitril (ACN), methanol (MeOH), triethylamin (TEA), acid formic, tetrahydrofuran, nước cất hai lần đạt tiêu chuẩn phân tích sắc ký lỏng Dung môi ethyl acetat, chloroform, nhexan cho xử lý mẫu đạt tiêu chuẩn phân tích Phương pháp nghiên cứu Hỗn hợp chuẩn TDF, SDF VDF pha hỗn hợp dung môi acetonitril-acid formic (99,9: 0,1) nồng độ khoảng 500 ppb bơm trực tiếp vào hệ thống khối phổ Xevo TQD, sử dụng chế độ Auto tune với công cụ Intelligent Start, phần mềm Masslynx 4.1 để tối ưu hóa điều kiện khối phổ để thu ion mẹ chế độ MS-1 scan tìm phân mảnh đặc trưng chế độ Daughters scan MS-2 scan, với cường độ tín hiệu tốt nhằm xác nhận định tính chất TDF, SDF VDF đặc hiệu nhạy Mẫu chuẩn thêm vào mẫu trắng (placebo) với mẫu thử khảo sát so với phổ chuẩn TDF, SDF VDF Các thông số khối phổ cần khảo sát, bao gồm: ES+ hay ES-, mao quản, cone, tốc độ dịng khí phun (nebulizer gas flow), nhiệt độ buồng ion hóa, nhiệt độ khí hóa (desolvation temp), tốc độ dịng khí hóa (desolvation gas flow), lượng va đập Theo hướng dẫn EC-657/2002 [2], để xác nhận chất kỹ thuật khối phổ lần tứ cực cần phải tìm ion ban đầu 03 phân mảnh đặc trưng ion này, biện giải phù hợp cấu trúc hay so với thư viện phổ chuẩn công bố Sau tìm điều kiện khối phổ tối ưu, tiến hành thẩm định quy trình định tính theo hướng dẫn AOAC [1] bao gồm khảo sát tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, giới hạn phát Mẫu thử âm tính khơng ghi nhận ion mẹ phân mảnh đặc trưng chất phân tích, nhận diện ion ban đầu phân mảnh phổ đồ không tương ứng với phổ chuẩn dung mơi Kết dương tính xác nhận trường hợp ion mẹ TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) phân mảnh đặc trưng ghi nhận phổ đồ Quy trình sau thẩm định đạt yêu cầu áp dụng để định tính nhanh đồng thời TDF, SDF VDF có 20 mẫu thực phẩm chức có tác dụng bổ thận, tráng dương, tăng cường sinh lý nam giới lưu thông địa bàn TP Cần Thơ Chuẩn bị mẫu Mẫu hỗn hợp chuẩn gốc TDF, SDF VDF: Được pha hỗn hợp dung môi acetonitril-acid formic (99,9: 0,1) nồng độ 100 ppm, từ dung dịch chuẩn gốc thực pha loãng để thu dung dịch hỗn hợp chuẩn làm việc có nồng độ từ 200-500 ppb, khảo sát điều kiện khối phổ tối ưu tín hiệu ion mẹ phân mảnh Mẫu trắng giả lập: Mẫu TPCN có tác dụng bổ thận, tráng dương, tăng cường sinh lý nam giới với thành phần thuốc đại diện nhất, lưu hành hợp pháp cấp phép Cục An toàn vệ sinh thực phẩm, đảm bảo khơng chứa chất phân tích mẫu, đồng thời thực chiết kiệt chất phân tích có dung mơi MeOH, phần cịn lại sử dụng làm mẫu trắng Mẫu thử giả lập: Mẫu hỗn hợp chuẩn TDF, SDF, VDF thêm vào mẫu trắng giả lập với nồng độ thích hợp để xây dựng thẩm định phương pháp Mẫu thử: 20 mẫu thực phẩm chức có tác dụng bổ thận, tráng dương, tăng cường sinh lý nam giới lưu thông thị trường TP Cần Thơ Mẫu trắng thêm chuẩn mẫu thực xử lý theo quy trình chiết mẫu thích hợp Kết bàn luận Điều kiện khối phổ Sử dụng chế độ infusion, tiêm mẫu trực tiếp hỗn hợp chuẩn TDF, SDF VDF 300 ppb pha dung môi MeOH, ACN, nước acid formic 0,1% hệ dung môi ACN/MeOH - acid formic 0,1% với chế độ quét MS1 scan, MS/MS full scan daughter scan để xác định ion phân tử (parents ion) phân mảnh ion đặc trưng cho chất phân tích để tìm thông số khối phổ tối ưu cho chất phân tích Kết thực nghiệm cho thấy hệ dung mơi CAN - acid formic 0,1% (99,1:0,1) cho cường độ tín hiệu ion mẹ [M+H]+ phân mảnh tín hiệu mạnh ổn định Các ion mẹ phân mảnh đặc trưng tìm thấy so sánh với thư viện phổ châu Âu (Euro Mass Bank) phù hợp mức độ tin cậy cao (~ 99%) Việc thăm dị chất phân tích mode ESI (-) khảo sát Tuy nhiên, tín hiệu thu thấp ESI (+) nhiều ổn định Kết trình bày bảng 1, hình 79 l Nghiên cứu - Kỹ thuật Bảng Điều kiện khối phổ tối ưu cho phân tích TDF, SDF VDF Thơng số Giá trị Dung mơi pha mẫu ACN-acid formic (99,9:0,1) Kiểu ion hóa ESI (+) Thế mao quản 3,5 kV Thế cone TDF (40), SDF (20V), VDF (62) Thế phân mảnh (V/m/z) TDF (12V: 268, 30V: 262, 34V:169, 20V: 135) SDF (28V: 99, 40V: 283, 30V: 311, 48V: 70) VDF (44V: 151, 40V: 312, 26V: 113, 30V:299) Nhiệt độ khí (N2) hóa 900 oC Tốc độ dịng khí hóa 400 Lít/giờ Tốc độ dịng phun 30 µL/min Bảng Ion mẹ ion phân mảnh đặc trưng TDF, SDF VDF Chất phân tích [M+H]+ Ion phân mảnh TDF 390,2 268, 262, 240, 169, 135 SDF 475,2 311, 299, 283, 123,101, 99, 70, 58 VDF 489,2 312, 299, 283, 151, 123, 113 a) b) c) d) Hình (a) Kết auto- tune công cụ Intelligent Stat Masslynx 4.1 để tìm ion mẹ (ESI+) phân mảnh đặc trưng SDF, (b) phổ đồ minh họa cone, (c) lượng va đập (d) cường độ tín hiệu mảnh đặc trưng m/z 99 Quy trình chiết mẫu thích hợp Quy trình xử lý mẫu đơn giản với hỗ trợ siêu âm cho thời gian xử lý mẫu nhanh (15 phút/mẫu) 80 sau: Cân xác khoảng 10 mg lượng bột thuốc có mẫu thực phẩm chức (viên nang, nén, nang mềm) cho vào bình định mức 10 mL, TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) l Nghiên cứu - Kỹ thuật thêm mL hỗn hợp ACN- acid formic (99,1:0,1), lắc đều, siêu âm 10 phút, bổ sung vừa đủ thể tích Tiếp tục pha lỗng lần với hỗn hợp dung mơi pha mẫu để thu dung dịch mẫu thử có nồng độ khoảng 150 ppb, lọc qua màng lọc 0,22 µm phun trực tiếp vào hệ thống đầu dò khối phổ ba lần tứ cực Thẩm định quy trình Tính đặc hiệu Mẫu trắng phải khơng cho tín hiệu chất phân tích, mẫu thử giả lập phải cho tín hiệu ion mẹ chế độ MS1-scan 03 mảnh đặc trưng chất phân tích chế độ daughters scan [2] Khi ta thêm chuẩn nồng độ cao vào mẫu trắng giả lập, tín hiệu ion mẹ 03 phân mảnh tăng lên rõ rệt Kết tính đặc hiệu qui trình định tính trình bày hình Giới hạn phát hiện: Được xác định nồng độ mà nồng độ tín hiệu ion ban đầu phân mảnh đặc trưng phát phân biệt với tín hiệu đường (tín hiệu/nhiễu đường ≥ 3) Kết trình bày bảng Bảng Giới hạn phát chất phân tích mẫu placebo Chất phân tích LOD (ng/mL) MS1 scan Daughters scan Taladafil 7,50 2,500 Sildenafil 0,50 0,015 Vardenafil 0,02 0,008 Hình Phổ Daughters scan minh họa tính đặc hiệu VDF: (a) mẫu placebo, (b)VDF 50 ppb (c) VDF 100 ppb placebo Nhận xét: Giá trị LOD chế độ MS1 scan daughters scan đặc trưng cho phân tích khối phổ Hai yêu cầu thẩm định quy trình phân tích định tính tính đặc hiệu giới hạn phát đạt theo yêu cầu quy định [1], tổng thời gian xử lý mẫu phân tích định tính 17 phút Do đó, phương pháp đạt độ nhạy, đặc hiệu cao để áp dụng quy trình phân tích định tính nhanh đồng thời TDF, SDF VDF có mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị RLCD TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) Ứng dụng quy trình thẩm định để phân tích mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị RLCD lưu hành địa bàn TP Cần Thơ Tiến hành phân tích 40 mẫu thực phẩm chức năng, mẫu tiến hành phân tích lần Kết phát 16/40 (40%) dương tính với chất phân tích, có 3/40 (7,5%) mẫu dương tính với TDF SDF Đặc biệt có 4/40 (10%) mẫu dương tính chế phẩm có số đăng ký, nguồn gốc nước Kết trình bày bảng hình 81 l Nghiên cứu - Kỹ thuật Bảng Kết định tính nhanh TDF, SDF, VDF có mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị RLCD (n = 3) STT Mã số sản phẩm Nguồn gốc Hoạt chất tìm thấy M1-KD Việt Nam tadalafil M2-SNBT-PLT Việt Nam tadalafil M3-XTV Việt Nam tadalafil M4-LV Việt Nam tadalafil/sildenafil M5-ADF Việt Nam sildenafil M6-KMD Việt Nam vardenafil M21-BTED Việt Nam tadalafil M25-WL Hồng Kông tadalafil M26-MM Hồng Kông sildenafil 10 M27-MNX Thái Lan tadalafil 11 M29-TTSN Malaysia tadalafil/sildenafil 12 M30-TBBB Hồng Kông tadalafil/sildenafil 13 M31-HDD Việt Nam tadalafil 14 M32-BTPV Việt Nam tadalafil 15 M33-BTW Việt Nam tadalafil 16 M34-BTND Hồng Kơng vardenafil Hình Phổ Daughters scan mẫu M29-TTSN M34-BTND Kết luận Nghiên cứu xây dựng thành cơng quy trình định tính nhanh, đồng thời tadalafil, sildenafil vardenafil ngụy tạo mẫu thực phẩm chức hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương kỹ thuật khối phổ ba lần tứ cực, phun mẫu trực tiếp Quy trình định tính thẩm định đạt yêu cầu theo hướng dẫn AOAC, EC-657/2002 Quy trình phân tích có tính chọn lọc, nhạy tin cậy cao Quy trình ứng dụng vào thực tế để đánh giá chất lượng 40 mẫu thực phẩm chức có tác dụng bổ thận, tráng dương, tăng cường sinh lý nam giới lưu 82 thông thị trường TP Cần Thơ Kết phát 40% mẫu dương tính với chất phân tích; 7,5% mẫu dương tính với tadalafil, sildenafil Đặc biệt có 10% mẫu dương tính chế phẩm có số đăng ký, nguồn gốc nước Nghiên cứu tài trợ Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 103.99-2016.75 Tài liệu tham khảo AOAC International (2002), AOAC guidelines for single laborator validation of chemical methods for dietary supplements and botanicals, Section 3.3, 3.4.1, 3.4.2, 3.4.6, pp 18-22 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) l Nghiên cứu - Kỹ thuật European Union (2002), Commission decision of 12 August 2002 implementing Ida Fej˝os, Gábor Neumajer, Szabolcs Béni, Péter Council Directive 96/23/EC Jankovics (2014), “Qualitative and quantitative analysis concerning the performance of analytical methods and the of PDE-5 inhibitors in counterfeit medicines and dietary interpretation of results Eung-Sun Lee, Ji Hyun Lee, Kyoung Moon Han, Ji Won Kim, In Sun Hwang, Sooyeul Cho, Soon Young Han, Jinho Kim (2013), “Simultaneous determination of 38 phosphodiestrase-5 inhibitors in illicit erectile dysfunction products by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry”, J of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 83, pp 171-178 supplements by HPLC-UV using sildenafil as a sole reference”, J of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 98, pp 327-333 Julie Vaysse, Véronique Gilard, Robert Martino, Myriam Malet-Martino (2012) «Identification of a novel sildenafil analogue in an adulterated herbal supplement”, J of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 59, pp 58-66 (Ngày nhận bài: 24/07/2019 - Ngày phản biện: 21/08/2019 - Ngày duyệt đăng: 03/09/2019) Cải tiến quy trình tổng hợp mesna qua trung gian natri S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioat Đào Nguyệt Sương Huyền*, Nguyễn Đình Luyện, Nguyễn Văn Hải Trường Đại học Dược Hà Nội * E-mail: daonguyetsuonghuyen@gmail.com Summary Mesna was synthesized by a 2-step process from sodium 2-chloroethanesulfonate: (1) Formation of Bunte salt sodium S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioate and (2) Acidic hydrolysis to obtain mesna (3) The synthesis was experimentally optimized to be suitable for the scale of 10 Gr mesna per batch The overall yield of this improved synthesis was raised to 30.1% Keywords: Mesna, natri 2-cloroethansulfonat, natri thiosulfat, natri S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioat, Bunte salt Đặt vấn đề Mesna hóa dược nằm danh mục thuốc thiết yếu Việt Nam lần thứ VI, sử dụng nhiều hóa trị liệu ung thư để dự phịng tác dụng độc hại ifosfamid cyclophosphamid [1] Những năm gần đây, triển khai nghiên cứu tổng hợp hoạt chất nhằm tìm phương pháp phù hợp, ứng dụng vào thực tế điều kiện Việt Nam [24] Trong nghiên cứu trước, công bố phương pháp tổng hợp mesna từ nguyên liệu: 1,2-dicloroethan qua trung gian muối Bunte natri S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioat quy mơ phịng thí nghiệm Phương pháp có triển vọng áp dụng nhờ ưu điểm: Sử dụng ngun liệu hố chất dễ đáp ứng quy mơ lớn (alkyl halogenid, natri thiosulfat acid sulfuric), quy trình thiết bị tổng hợp đơn giản, chất thải (natri clorid, natri sulfat, ethanol) thân thiện với môi trường [5] Tuy nhiên, thời gian thực phản ứng dài hiệu suất chưa cao (đạt 23% tính từ natri 2-cloroethansulfonat) thấp so với phương pháp tổng hợp mesna qua trung gian TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 9/2019 (SỐ 521 NĂM 59) guanidini 2-mercaptoethansulfonat (40 %) [2], natri benzoylthioethansulfonat (50 %) [3] trithiocarbonat (47 %) [4]; trình tinh chế muối Bunte gặp nhiều khó khăn [5] Chính vậy, phương pháp qua trung gian muối Bunte cần tiếp tục tối ưu hóa để tìm thơng số phản ứng thích hợp Mục tiêu nghiên cứu khảo sát thơng số quy trình tổng hợp; tinh chế mesna qua trung gian natri S-(2-sulfonatoethyl)sulfurothioat nâng cao hiệu suất quy mơ phịng thí nghiệm Ngun liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu Natri 2-cloroethansulfonat tổng hợp Phịng thí nghiệm BM Cơng nghiệp Dược, Trường Đại học Dược Hà Nội Các hóa chất khác đạt tiêu chuẩn tinh khiết hóa học (xuất xứ Trung Quốc): Acid sulfuric, dung dịch acid hydrocloric đặc (36,5 %), natri hydroxid, natri thiosulfat pentahydrat, 1,4-dioxan, ethanol, methanol, natri sulfit, ethanol 96 % (Việt Nam), mesna chuẩn (99,5 %, Hãng Merck) 83 ... nhanh tadalafil, sildenafil vardenafil ngụy tạo thực phẩm chức hỗ trợ điều trị rối loạn cương dương kỹ thuật khối phổ? ?? Với mục tiêu : Xây dựng thẩm định quy trình phát đồng thời tadalafil, sildenafil, ... điều trị rối loạn cương dương ngụy tạo vào chế phẩm đông dược, thực phẩm chức yêu cầu cần thiết Vì thế, thúc đẩy việc nghiên cứu tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu xây dựng phương pháp định tính nhanh. .. VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ HUỲNH NGỌC THÙY TRANG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH NHANH TADALAFIL, SILDENAFIL VÀ VARDENAFIL NGỤY TẠO TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG HỖ