NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ LIGNAN TRONG NGŨ VỊ TỬ NGỌC LINH (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHDER E.H. WILSON)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐÌNH QUÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỤNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ LIGNAN TRONG NGŨ VỊ TỬ NGỌC LINH (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHDER & E.H WILSON) ĐỀ CƢƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐÌNH QUÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ LIGNAN TRONG NGŨ VỊ TỬ NGỌC LINH (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHDER & E.H WILSON) ĐỀ CƢƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Nơi thực đề tài: Viện Dƣợc liệu Thời gian thực hiện: từ 08/2018 đến 04/2019 HÀ NỘI 2019 LỜI CẢM ƠN Bản luận văn đƣợc hồn thành Khoa hóa phân tích - Tiêu chuẩn, Viện Dƣợc liệu dƣới hƣớng dẫn PGS.TS Phƣơng Thiện Thƣơng TS Trần Nguyên Hà Lời em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Phƣơng Thiện Thƣơng TS Trần Nguyên Hà ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn tận tình, chu đáo, ln động viên khích lệ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian thực luận văn Em xin trân trọng cảm ơn ban lãnh đạo Viện Dƣợc liệu tồn thể đồng nghiệp Khoa Hố phân tích - tiêu chuẩn, Viện Dƣợc liệu tạo điều kiện, động viên em hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn tới bạn bè, ngƣời thân gia đình ln tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ, động viên em suốt trình học tập, nghiên cứu Do thời gian thực đề tài có hạn nên luận văn em khơng tránh khỏi thiếu sót Rất mong nhận đƣợc góp ý thầy cô để luận văn em đƣợc hồn thiện Cuối em xin kính chúc thầy cô mạnh khỏe, hạnh phúc thành công công việc nhƣ sống Hà Nội, ngày 31 tháng 03 năm 2019 Học viên Nguyễn Đình Quân MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Phần 1: Tổng quan 1.1 Giới thiệu họ Schisandraceae 1.1 Tổng quan chi Schisandra 1.1.1 Các loài Schisandra giới 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Schisandra 1.1.3 Một số loài thuộc chi Schisandra Việt Nam 1.2 Tổng quan Ngũ vị tử Ngọc Linh 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Phân bố 1.2.3 Thành phần hóa học 1.2.4 Tác dụng dƣợc lý 10 1.3 Tổng quan schisandrin, gomisin B schisandrin A 10 1.3.1 Tính chất lý hóa 11 1.3.2 Tác dụng dƣợc lý schisandrin, gomisin B schisandrin A 12 1.4 Những nghiên cứu định tính định lƣợng lignan Ngũ vị tử 15 1.4.1 Các nghiên cứu định tính lignan Ngũ vị tử 15 1.4.2 Các nghiên cứu định lƣợng lignan Ngũ vị tử 17 1.5 Tiêu chuẩn Ngũ vị tử số Dƣợc điển 21 Phần ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 23 2.2 Chất chuẩn, hóa chất thiết bị 24 2.2.1 Chất chuẩn 24 2.2.2 Hóa chất 24 2.2.3 Thiết bị 24 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 25 2.3.2 Xây dựng phƣơng pháp định tính lignan Ngũ vị tử 26 2.3.2.1 Khảo sát hệ dung môi pha động 26 2.3.2.2 Thẩm định phƣơng pháp định tính 26 2.3.3 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời 03 lignan Ngũ vị tử Ngọc Linh 26 2.3.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 26 2.3.3.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 27 2.3.3.3 Thẩm định phƣơng pháp 28 2.3.4 Áp dụng số mẫu dƣợc liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh 31 2.3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 31 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 Xây dựng phƣơng pháp định tính SC, GB SA Ngũ vị tử Ngọc Linh 33 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 33 3.1.2 Thẩm định phƣơng pháp định tính 35 3.1.2.1 Độ đặc hiệu 35 3.1.2.2 Giới hạn phát 36 3.1.3 Áp dụng phƣơng pháp định tính mẫu thực 37 3.2 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng SC, GB SA 38 3.2.1.1 Khảo sát bƣớc sóng hấp thụ cực đại chất nghiên cứu 38 3.2.1.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 39 3.2.1.2.1 Lựa chọn pha tĩnh 39 3.2.1.2.2 Khảo sát thành phần pha động 39 3.2.1.2.3 Khảo sát thể tích tiêm mẫu 43 3.2.2 Nghiên cứu quy trình xử lý mẫu 44 3.2.2.1 Khảo sát phƣơng pháp chiết mẫu 44 3.2.2.2 Khảo sát dung môi chiết 45 3.2.2.3 Khảo sát thời gian chiết 46 3.2.2.4 Phƣơng pháp định lƣợng đồng thời SC, GB SA HPLC 47 3.3 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng HPLC 48 3.3.1 Độ chọn lọc phƣơng pháp 48 3.3.2 Độ thích hợp hệ thống 50 3.3.3 Đƣờng chuẩn khoảng tuyến tính 51 3.3.4 Giới hạn phát LOD giới hạn định lƣợng LOQ 52 3.3.5 Độ xác 53 3.3.6 Độ 55 3.4 Áp dụng phƣơng pháp định lƣợng SC, GB SA mẫu Ngũ vị tử Ngọc Linh 56 Chƣơng BÀN LUẬN 57 Kết luận đề xuất 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tên tiếng Anh tên khoa học ACN Acetonitril GB Gomisin B Tiếng Việt High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu chromatography cao High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu chromatography photodiode array cao gh p nối detector detetion mảng iod High performance thin layer Sắc ký lớp mỏng hiệu chromatography cao LC- Liquid chromatography tandem Sắc ký lỏng gh p khối MS/MS mass spectrometry phổ lần LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lƣợng R(%) Recovery Hiệu suất thu hồi RSD(%) Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SA Schisandrin A SC Schisandrin SD Standard Deviation HPLC HPLCPDA HPTLC TLTK Độ lệch chuẩn Tài liệu tham khảo DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bảng 1.2 Phân bố lồi Schisandra giới Tính chất hóa lý schisandrin, gomisin B Tr Tr 11 schisandrin A Bảng 1.3 Một số phƣơng pháp TLC định tính Ngũ vị tử Tr 16 Bảng 1.4 Một số phƣơng pháp định lƣợng lignan Ngũ vị tử Tr 18 Bảng 2.1 Các mẫu dƣợc liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh nghiên cứu Tr 23 Bảng 3.1 Thông số sắc ký Rf hệ dung môi khảo sát Tr 35 Bảng 3.2 Giới hạn phát phƣơng pháp định tính Tr 37 Bảng 3.3 Các chƣơng trình gradient khảo sát Tr 40 Bảng 3.4 Các thông số sắc ký hệ gradient khảo sát Tr 42 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ thích hợp hệ thống phƣơng Tr 50 pháp Bảng 3.6 Quan hệ tuyến tính nồng độ diện tích píc chất Tr 51 Bảng 3.7 Kết xác định LOD LOQ phƣơng pháp Tr 52 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp Tr 53 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ xác trung gian phƣơng Tr 54 pháp Bảng 3.10 Kết thẩm định độ phƣơng pháp Bảng 3.11 Kết hàm lƣợng SC, GB SA mẫu Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr 55 Tr 56 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hình ảnh Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr.6 Hình 1.2 Một số hình ảnh Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr.8 Hình 1.3 Một số lignan Ngũ Vị tử Ngọc Linh Tr Hình 2.1 Hình ảnh dƣợc liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr 23 Hình 3.1 Sắc ký đồ TLC hệ dung mơi khảo sát Tr 34 Hình 3.2 Sắc ký đồ TLC đánh giá độ đặc hiệu phƣơng pháp Tr 36 Hình 3.3 Sắc ký đồ TLC định tính mẫu Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr 37 Hình 3.4 Phổ hấp thụ UV-VIS SC, GB SA Tr 38 Hình 3.5 Sắc ký đồ HPLC hệ gradient Tr 41 Hình 3.6 Sắc ký đồ HPLC hệ gradient Tr 41 Hình 3.7 Sắc ký đồ HPLC hệ gradient Tr 42 Hình 3.8 Sắc ký đồ HPLC hệ gradient Tr 42 Hình 3.9 Sắc ký đồ HPLC khảo sát thể tích tiêm mẫu Tr 43 ... mẫu Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr 55 Tr 56 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hình ảnh Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr.6 Hình 1.2 Một số hình ảnh Ngũ vị tử Ngọc Linh Tr.8 Hình 1.3 Một số lignan Ngũ Vị tử Ngọc. .. tài ? ?Nghiên cứu xây dụng phƣơng pháp định tính định lƣợng số lignan Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehder & E.H Wilson)? ?? với mục tiêu nhƣ sau: - Xây dựng phƣơng pháp định tính định. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐÌNH QUÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ LIGNAN TRONG NGŨ VỊ TỬ NGỌC LINH (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHDER