Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm và kháng oxy hóa của cao chiết từ một số chủng nấm cordyceps sp phân lập tại việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÂM KHẮC KỶ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM VÀ KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT TỪ MỘT SỐ CHỦNG NẤM Cordyceps sp PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA SINH HỌC TP Hồ Chí Minh - năm 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÂM KHẮC KỶ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM VÀ KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT TỪ MỘT SỐ CHỦNG NẤM Cordyceps sp PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Ngành: HÓA SINH HỌC Mã số ngành: 62.42.01.16 Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Phản biện độc lập 1: Phản biện độc lập 2: NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Ngô Đại Hùng TS Đinh Minh Hiệp TP Hồ Chí Minh - Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan luận án tiến sĩ ngành hóa sinh học với đề tài “Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm kháng oxi hóa cao chiết từ số chủng nấm Cordyceps sp phân lập Việt Nam” công trình khoa học Tơi thực hướng dẫn PGS.TS Ngô Đại Hùng TS Đinh Minh Hiệp Những kết nghiên cứu luận án hoàn tồn trung thực, xác khơng trùng lắp với cơng trình cơng bố ngồi nước Nghiên cứu sinh (Ký tên, ghi rõ họ tên) PAGE \* MERGEFORMAT MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT DANH MỤC CÁC BẢNG 10 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ 13 MỞ ĐẦU 16 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 18 1.1 Giới thiệu chung Cordyceps 18 1.2 Tình hình phân bố đặc điểm sinh trưởng Cordyceps spp .20 1.3 Cách sử dụng Cordyceps spp nguồn dược liệu theo truyền thống 21 1.4 Các chiết xuất chủ yếu từ Cordyceps spp 23 1.4.1 Chiết xuất dùng nước làm dung môi 23 1.4.2 Chiết xuất dùng dung môi cồn 23 1.4.3 Chiết xuất từ dung môi ethyl acetate 23 1.4.4 Chiết xuất carbon dioxide (CO2) siêu tới hạn .24 1.5 Các hợp chất hóa học thu nhận từ Cordyceps spp 24 1.5.1 Các phương pháp thu nhận hợp chất hóa học .24 1.5.2 Các hợp chất hóa học thu nhận từ Cordyceps 26 1.6 Hiệu việc chủ động nuôi trồng nấm Cordyceps 32 1.7 Hoạt tính sinh học chiết xuất từ Cordyceps spp 34 1.8 Tiềm dược lý Cordyceps spp .37 1.8.1 Khả chống oxy hóa 38 1.8.2 Tiềm chống viêm .40 PAGE \* MERGEFORMAT 1.8.3 Khả điều hoà miễn dịch Cordyceps spp 42 1.8.4 Tác dụng kháng virus Cordyceps spp 42 1.8.5 Tác dụng kháng khối u .43 1.8.6 Khả hỗ trợ hạ đường huyết 45 1.8.7 Khả hỗ trợ làm hạ cholesterol, hạ huyết áp điều hòa mạch máu 46 1.8.8 Khả hỗ trợ chống mệt mỏi chống trầm cảm 49 1.8.9 Hỗ trợ tình dục 50 1.8.10 Tiềm bảo vệ thận gan 52 1.8.11 Khả chống lão hóa 53 1.9 Giới thiệu nấm nghiên cứu 54 1.9.1 Nấm Cordyceps neovolkiana 54 1.9.2 Nấm Cordyceps takaomontana 57 1.9.3 Nấm Isaria tenuipes 61 1.9.4 Nấm Isaria cicadae .64 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 71 2.1 Thu nhận cao chiết từ sinh khối thể nấm 71 2.1.1 Vật liệu hóa chất 71 2.1.2 Phương pháp chiết cao 71 2.2 Khảo sát hoạt tính kháng oxi hóa in vitro phương pháp hóa học.75 2.2.1 Khảo sát lực khử 76 2.2.2 Khảo sát hoạt tính bắt gốc tự DPPH 77 2.2.3 Khảo sát hoạt tính bắt gốc tự ABTS + 78 2.2.4 Khảo sát ức chế enzyme xanthine oxydase (XO) .79 PAGE \* MERGEFORMAT 2.3 Khảo sát khả kháng viêm in vitro cao chiết phương pháp ức chế biến tính BSA nhiệt độ 81 2.4 Phân chất từ cao phân đoạn .82 2.4.1 Sắc ký lớp mỏng .82 2.4.2 Sắc ký cột hở 83 2.5 Khảo sát độc tính tế bào RAW 264.7 87 2.6 Phân tích Western blot .89 2.7 Khảo sát khả ức chế sinh tổng hợp Nitric Oxide tế bào RAW 264.7 91 2.8 Xác định ảnh hưởng oxy hoá protein .92 2.9 Khảo sát khả bảo vệ DNA tế bào chiết xuất 93 2.10 Phương pháp xử lí số liệu 95 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN .96 3.1 Kết hiệu suất chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ mẫu sinh khối thể nấm .96 3.1.1 Kết hiệu suất chiết cao tổng cao phân đoạn từ mẫu sinh khối nấm C neovolkiana DL0004, C takaomontana DL0038a, I cicadae F004 I tenuipes VHI-2 96 3.1.2 Kết hiệu suất chiết cao tổng cao phân đoạn từ mẫu thể nấm C neovolkiana DL0004, C takaomontana DL0038a, I cicadae F004 I tenuipes VHI-2 98 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro mẫu cao chiết 100 3.2.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro theo phương pháp xác định lực khử 101 3.2.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro theo phương pháp khảo sát bắt gốc tự DPPH 116 PAGE \* MERGEFORMAT 3.2.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro theo phương pháp khảo sát bắt gốc tự ABTS 121 3.2.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro theo phương pháp ức chế enzyme xanthine oxidase (XO) .126 3.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng viêm in vitro mẫu cao chiết theo phương pháp khảo sát hoạt tính ức chế biến tính bovine serum albumin nhiệt độ 130 3.3.1 Kết khảo sát hoạt tính ức chế biến tính BSA nhiệt độ cao EtOH cao phân đoạn từ sinh khối nấm C neovolkiana DL0004 C takaomontana DL0038a 130 3.3.2 Kết khảo sát hoạt tính ức chế biến tính BSA nhiệt độ cao EtOH cao phân đoạn từ thể nấm C neovolkiana DL0004 C takaomontana DL0038a 132 3.4 Kết phân tách chất từ cao phân đoạn EA sinh khối nấm C neovolkiana DL0004 136 3.5 Kết khảo sát khả gây độc tế bào RAW 264.7 chất phân tách từ cao phân đoạn EA sinh khối nấm C neovolkiana DL0004 138 3.6 Kết khảo sát khả ức chế sinh tổng hợp Nitric oxide tế bào RAW 264.7 139 3.7 Kết khảo sát ức chế p50 p65 tín hiệu NF-kB tế bào RAW 264.7 140 3.7.1 Kết khảo sát ức chế p50 p65 tín hiệu NF-kB tế bào RAW 264.7 cao EA từ sinh khối C neovolkiana 140 3.7.2 Kết khảo sát ức chế p50 tín hiệu NF-kB tế bào RAW 264.7 hợp chất phân tách từ cao chiết EA 142 PAGE \* MERGEFORMAT 3.7.3 Kết khảo sát ức chế p65 tín hiệu NF-kB tế bào RAW 264.7 hợp chất phân tách từ cao chiết EA 144 3.8 Kết khảo sát khả kháng oxy hóa protein màng tế bào RAW 264.7 148 3.9 Kết khảo sát khả bảo vệ DNA tế bào RAW 264.7 150 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 153 DANH MỤC CƠNG TRÌNH TÁC GIẢ 156 TÀI LIỆU THAM KHẢO 157 PHỤ LỤC 169 PAGE \* MERGEFORMAT DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT PAGE \* MERGEFORMAT DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Hệ thống phân loại Cordyceps .19 Bảng 1.2: Các hợp chất hóa học Cordyceps spp 26 Bảng 1.3: Tóm tắt số mơ tả hợp chất dược đặc tính điều trị loại chiết xuất từ nấm Cordyceps spp .34 Bảng 1.4: Tóm tắt số chế kháng u từ hợp chất thu nấm Cordyceps spp 44 Bảng 1.5: Tóm tắt số chế chống đái tháo đường từ hợp chất thu nấm Cordyceps spp 46 Bảng 1.6: Tóm tắt số chế hạ huyết áp điều hòa mạch máu từ hợp chất thu nấm Cordyceps spp .48 Bảng 1.7: Tóm tắt số chế hỗ trợ chống mệt mỏi chống trầm cảm từ hợp chất thu nấm Cordyceps spp 50 Bảng 1.8: Tóm tắt số chế hỗ trợ hỗ trợ tình dục 52 Bảng 2.1: Nguồn gốc nguyên liệu nghiên cứu 71 Bảng 2.2: Bố trí thí nghiệm khảo sát lực khử 76 Bảng 2.3: Bố trí thí nghiệm khảo sát khả bắt gốc tự DPPH 78 Bảng 2.4: Bố trí thí nghiệm khảo sát khả bắt gốc tự ABTS 79 Bảng 2.5: Bố trí thí nghiệm khảo sát khả ức chế enzyme xanthine oxydase 80 Bảng 2.6: Bố trí thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng viêm 81 Bảng 2.7: Phân đoạn cao phân đoạn ethyl acetate 86 Bảng 2.8: Quy trình Western blot 90 Bảng 2.9: Quy trình khảo sát ức chế NO 92 Bảng 2.10: Bố trí thí nghiệm khảo sát khả bảo vệ DNA tế bào RAW 264.7 94 Bảng 3.1: Kết hiệu suất chiết cao tổng cao phân đoạn từ mẫu sinh khối nấm 96 Bảng 3.2: Kết hiệu suất chiết cao tổng cao phân đoạn từ mẫu thể nấm 98 Bảng 3.3: Kết lực khử in vitro vitamin C .101 PAGE \* MERGEFORMAT ... HỌC TỰ NHIÊN LÂM KHẮC KỶ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM VÀ KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT TỪ MỘT SỐ CHỦNG NẤM Cordyceps sp PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Ngành: HÓA SINH HỌC Mã số ngành: 62.42.01.16 Phản... luận án tiến sĩ ngành hóa sinh học với đề tài ? ?Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm kháng oxi hóa cao chiết từ số chủng nấm Cordyceps sp phân lập Việt Nam? ?? cơng trình khoa học Tơi thực hướng dẫn PGS.TS... …thông qua sàng lọc số hoạt tính sinh học kháng oxi hóa kháng viêm để tìm phân đoạn có hoạt tính sinh học tiềm Từ kết nghiên cứu thực tế kết nghiên cứu trước đây, chọn phân đoạn cao chiết Ethyl acetate