Nghiên cứu phân lập hợp chất hữu cơ trong cây rau má ( centella asiatica l apiaceae ) thu hái tại cần thơ

T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 Krzyzanowski, A., Saleeb, M., & Elofsson, M (2018), Synthesis of Indole-, Benzo[b]thiophene-, and Benzo[b]selenophene-Based Analogues of the Resveratrol Dimers Viniferifuran and (±)-Dehydroampelopsin B Organic Letters, 20(21), pp 6650-6654 Mattio, L.M., Dallavalle, S., Musso, L et al (2019), Antimicrobial activity of resveratrolderived monomers and dimers against foodborne pathogens Scientific Reports, 9(1) Snyder, S.A., Zografos, A.L and Lin (2007), Total synthesis of resveratrol based natural products: A chemoselective solution Angewandte Chemie International Edition, 46, pp 8186-8191 Vo, D D., & Elofsson, M (2016), Total Synthesis of Viniferifuran, Resveratrol-Piceatannol Hybrid, Anigopreissin A and Analogues - Investigation of Demethylation Strategies Advanced Synthesis & Catalysis, 358(24), pp 4085–4092 Yi-tang Li, Chun-suo Yao, Jin-ye Bai, Mao Lin, Gui-fang Cheng (2006), Antiinflammatory effect of amurensin H on asthma-like reaction induced by allergen in sensitized mice Acta Pharmacologica Sinica, 27, pp 735–740 10 Zhu W, Sun S, Yang F, Zhou K (2018), UHPLC/MS Identifying Potent -glucosidase Inhibitors of Grape Pomace via Enzyme Immobilized Method Journal of Food Science, 83(4), pp 1131-1139 (Ngày nh n bài: 03/08/2020 - Ngày t ng: 07/09/2020) NGHIÊN C U PHÂN L P H P CH T H U C TRONG CÂY RAU MÁ (Centella asiatica L – Apiaceae) THU HÁI T I C N TH Nguy n Vinh1*, Lê Th Th y Ng c1, ng Cao Nguyên 1, Th ch Tr n Minh Uyên 1, D ng Th Trúc Ly1 Tr ng i h c Y D c C n Th *Email: nguyenvinh2526@gmail.com TÓM T T t v n : Rau má - Centella asiatica (L.), h Apiaceae – m t loài rau ph bi n Vi t Nam Bài báo trình bày cách chi t xu t, phân l p, tinh ch , xác nh c u trúc h p ch t phân l p c t ph n m t t c a Rau má thu hái t i C n Th M c tiêu nghiên c u: Phân l p xác nh c c u trúc m t h p ch t t Rau má ã thu hái i t ng ph ng pháp nghiên c u: Ph n m t t c a Rau má thu hái t i C n Th Nguyên li u c chi t xu t b ng ph ng pháp ng m ki t v i c n 50% Các ch t d ch chi t c n c h p ph vào than ho t gi i h p ph b ng methanol Cao methanol c tách thành phân o n b ng s c ký c t chân không Thu ch t tinh t t phân o n b ng cách k t tinh l i C u trúc ch t c xác nh b ng cách so sánh thông tin v i m ch y d li u ph 1H-NMR v i tài li u chuyên ngành K t qu : M t ch t tinh t ã c phân l p xác nh acid palmitic K t lu n: K t qu góp ph n vào vi c so sánh thành ph n hóa h c c a Rau má gi a a ph ng t o c s cho vi c m r ng ph m vi ng d ng c a Rau má t i C n Th T khóa: Centella asiatica (L.) Urb, Apiaceae, Rau má, phân l p 184 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 ABSTRACT STUDY THE METHOD OF ISOLATION AND IDENTIFICATION OF SOME ORGANIC COMPOUNDS PRESENTING IN CENTELLA ASIATICA L – APIACEAE COLLECTED IN CAN THO Nguyen Vinh 1*, Le Thi Thuy Ngoc1, Dang Cao Nguyen1, Thach Tran Minh Uyen 1, Duong Thi Truc Ly Can Tho University of Medicine and Pharmacy Background: Centella asiatica (L.) Urb, Apiaceae, also known as asiatic pennywort, is a common plant in Viet Nam This paper studies the extraction, isolation, refinement, structural identification and determination of some compounds in terrestrial part of Centella asiatica collected in Can Tho Objectives: The result shows that at least one chemical compound presenting in Centella asiatica was isolated and determined the structure Materials and methods: The terrestrial part of Centella asiatica was collected in Can Tho The terrestrial part of Centella asiatica with suitable size is extracted by immersion with 50% ethanol The extract is purified by adsorption on activated carbon then desorption through methanol The methanol solution is fractioned by vacuum column chromatography These fractions are further recrystallized for pure compounds Chemical structures of the compounds are elucidated by NMR (1H-NMR) Results: From Centella asiatica (L.) Urb, one pure compound was isolated: palmitic acid (CA1) Conclusion: The obtained results are consistent with the research objectives This result may contribute to the determination of the active components in asiatic pennywort and support further research in order to increase commercial value of asiatic pennywort Keywords: Centella asiatica (L.) Urb, Apiaceae, asiatic pennywort, isolation I TV N V i chi n l c phát tri n c a ngành D c n c nhà, ch ph m ông d c ho c s n ph m có ngu n g c d c li u ngày c tr ng nhi u h n s n xu t c s n ph m ch t l ng ki m sốt ngun li u u vào m t nh ng y u t quan tr ng hàng u, ó nh tính nh l ng ho t ch t m t y u t nh h ng tr c ti p n hi u qu s d ng có c t s n ph m n c ta, vùng tr ng Rau má phân b r t r ng t B c vào Nam v i di n tích k Rau má có nhi u tác d ng nh h tr làm lành v t th ng, tr b nh lao, ng n ng a b nh tim m ch [1], tinh d u Rau má Nam Phi có ho t tính kháng khu n r ng i v i vi khu n Gram d ng [7] M t khác, Rau má có tác d ng sinh h c nh vào triterpenoid, ch y u có khung ursan ho c khung oleanan [6], [10] Ngoài ra, Rau má m t s thành ph n hóa h c khác nh : sesquiterpen [8], acid phenolic [2], h p ch t flavonoid [2] h p ch t polyacetylen [4] Tuy nhiên, li u thành ph n hóa h c c ng nh hàm l ng ho t ch t có d c li u Rau má c thu hái t a ph ng khác có hồn tồn gi ng hi u qu s d ng có t ng t Câu h i cho th y nhu c u có c thơng tin v thành ph n c ng nh hàm l ng ho t ch t t ng ng v i t ng lo i Rau má thu hái a ph ng khác m t nhu c u c n thi t tr c ti n hành nghiên c u hay s n xu t s n ph m t lo i d c li u Vì v y, tài “Nghiên c u phân l p h p ch t h u c Rau má (Centella asiatica L - Apiaceae) thu hái t i C n Th ” ã c th c hi n v i m c tiêu phân l p c m t ch t có Rau má ã thu hái xác nh cc u trúc c a ch t phân l p c 185 T P CHÍ Y D II IT NG VÀ PH C H C C N TH S 29/2020 NG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 i t ng Nguyên li u: M u rau má Centella asiatica L c thu hái t i C n Th vào tháng 12 n m 2018 c nh danh b i b môn Sinh di truy n Tr ng i h c C n Th b ng ph ng pháp gi i trình t gen D c li u c lo i b t p, ph i khơ, xay kích c kho ng 3x3 mm tr c chi t xu t 2.2 Hóa ch t thi t b Ether d u h a (PE), methanol, chloroform, thu c th vanilin-sulfuric (VS), than ho t Thi t b : T s y Memmert, b p cách th y Memmert, Cân k thu t Kern ABJNM/ABS-N, máy cô quay chân không Heidolph, èn UV 254 365 nm Camag, b siêu âm Grant, cân phân tích m h ng ngo i AND Model MX50, máy o i m ch y Stuart SMP3, máy o c ng h ng t h t nhân Bruker a i m nghiên c u: Phòng nghiên c u t i LBM D c li u – D c c truy n – Th c v t d c, Khoa D c, tr ng i h c Y D c C n Th 2.3 Ph ng pháp nghiên c u 2.3.1 Chi t xu t phân l p D c li u c chi t xu t b ng ph ng pháp ng m ki t v i c n 50% Các ch t d ch chi t c n c cho h p ph vào than ho t theo t l 10 gam than ho t cho lít d ch chi t Sau y kín yên 24 gi , than ho t c l c s y khơ 60oC Sau ó, ch t có than ho t c ph n h p ph b ng methanol Quá trình ph n h p ph c th c hi n b p cách thu có nhi t 60oC v i th i gian 30 phút/l n, th c hi n 07 l n D ch methanol ph n h p ph c cô bay h i dung môi thu c cao c (cao M) Cao M c tách thành phân o n n gi n b ng s c ký c t chân không v i pha t nh silica gel 40 - 63 µm (Merck) v i pha ng l n l t ether d u h a - chloroform (1:1), ether d u h a - chloroform (4:6) thu phân o n Các phân o n có thành ph n n gi n có th ti n hành phân l p ch t tinh t b ng ph ng pháp k t tinh l i 2.3.2 Xác nh c u trúc ch t C u trúc c a ch t phân l p c c xác nh b ng cách so sánh thông tin v i m ch y d li u ph 1H-NMR v i tài li u chuyên ngành III K T QU 3.1 Phân l p tinh ch T 3,2 kg Rau má khô chi t v i c n 50% b ng ph ng pháp ng m ki t thu c 25,71 lít d ch chi t u m c 30 lít d ch chi t loãng X lý d ch chi t c n v i than ho t ph n h p ph b ng methanol D ch methanol c cô quay bay h i dung môi thu c 67 gam cao (cao M) 50 gam cao M c n p lên s c ký c t chân không tri n khai l n l t v i hai h dung môi: s Ether d u h a – chloroform (1:1) thu c 24 phân o n t A1 – A24 s Ether d u h a – chloroform (4:6) thu c phân o n t A25 – A28 Phân o n A9 có kh i l ng t ng i l n thành ph n n gi n nên c ch n phân l p ch t tinh t b ng ph ng pháp k t tinh tinh ch b ng cách k t tinh l i K t qu t phân o n thu c mg ch t t tên CA1 Ch t cho th y s tinh t s c ký l p m ng ki m tra qua 03 h dung môi dung mơi có phân c c khác 186 T P CHÍ Y D H PE - CHCl3 (7:3) Hình 1: S c ký C H C C N TH H CHCl3 100% ki m tra S 29/2020 H CHCl3 - CH3OH (9:1) tinh t c a CA1 3.2 Xác nh c u trúc ch t CA1 H p ch t CA1 có d ng tinh th hình kim, ng n, khơng màu, nhi t nóng ch y 62,3oC Trên s c ký l p m ng, CA1 không hi n v t d i UV 365 254 nm; v i thu c th VS (h nóng) cho v t tr ng hình cung Ph 1H-NMR cho th y CA1 có 31H, c th : H (ppm), J (Hz): 0,88 (3H, t, J = Hz, H-16); 1,30 (24H, m, H-14); 1,63 (2H, m, H-15); 2,34 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-2) Sau so sánh c i m lý hóa d li u ph 1H-NMR c a CA1 v i tài li u tham kh o có th k t lu n CA1 acid palmitic, m t acid béo ph bi n th c v t IV BÀN LU N 4.1 Phân l p tinh ch T 50 gam cao M, qua s c ký c t chân không thu c 27 phân o n t phân c c n phân c c V i k thu t s c ký này, t cao toàn ph n nhanh chóng tách thành phân o n n gi n h n Khi k t tinh ch t t phân o n A9, qua kh o sát th y h dung mơi thích h p k t tinh PE - chloroform (4:6) N u t ng hay gi m phân c c b ng cách t ng hay gi m t l nh ng dung môi h k t tinh hình d ng k t tinh s thay i, xa phân c c c a dung mơi t i u tinh th k t tinh s ng n l i hi u su t k t tinh s không cao Sau k t tinh b ng h dung môi PE - chloroform (4:6) thu c m u Ki m tra tinh t b ng s c ký l p m ng nh n th y v t t p có Rf1 = 0,75 Rf2 = lo i t p này, m u ti p t c c k t tinh n-hexan methanol ây hai dung môi i di n cho nhóm phân c c (n-hexan) nhóm phân c c (methanol) phù h p hòa tan t p phân c c (Rf1 = 0,75) t p phân c c (Rf2 = 0) Vi c r a m u b ng dung môi l nh giúp ch t k t tinh b hao h t h n Sau l n k t tinh b ng dung mơi có phân c c khác nhau, t phân o n A9 ã thu c ch t CA1 Khi ki m tra b ng s c ký l p m ng v i h dung mơi có phân c c khác nhau, CA1 ch cho v t phát hi n b ng thu c th VS d i èn UV 254 365 nm khơng th y t p ch t l n ch t CA1 i u ch ng t ch t không phát hi n c b ng UV có th g i tinh t s c ký l p m ng 187 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 4.2 Xác nh c u trúc ch t CA1 H p ch t CA1 có d ng tinh th hình kim, ng n, khơng màu, nhi t nóng ch y o 62,3 C Ch t thu c t phân o n phân c c, tan n-hexan, PE ch ng t ây ch t có phân c c Trên s c ký l p m ng, CA1 không hi n v t d i UV 365 254 nm; v i thu c th VS (h nóng) cho v t tr ng hình cung i u có th g i ý r ng CA1 khơng có ho c có r t n i ôi c u trúc n i ôi (n u có) không liên h p v i Ph 1H-NMR cho th y CA1 có 31H, d ốn ó có 3H n m nhóm CH 3, 28H n m nhóm CH2 T c i m có th cho th y kh n ng CA1 m t acid béo Ki m tra s l ng H v i acid béo th ng hi n di n th c v t nh n th y có s t ng ng gi a CA1 acid palmitic Ti p t c so sánh d li u ph 1H-NMR i m ch y c a CA1 v i acid palmitic nh n th y có s phù h p v i Nh v y có th nói CA1 acid palmitic K t qu c ng phù h p v i tài li u công b v h p ch t hóa h c có Rau má ã công b [3] B ng D li u ph 1H-NMR c a CA1 so v i acid palmitic [9] STT CA1 (CDCl3, 500 MHz ) H, J (Hz) 2,31 (2H, t, 7,5) 1,63 (2H, m) 1,3 (24H, m) 0,88 (3H, t, 7) Acid palmitic (CDCl3, 400 MHz) H, J (Hz) 2,36 (2H, t, 7,6) 1,64 (2H, m) 1,24 (24H, m) 0,89 (3H, t, 6,4) B ng So sánh i m nóng ch y c a CA1 v i acid palmitic [5] i m nóng ch y ( C) o CA1 62,3 Acid palmitic 62,5 Hình 2: C u trúc c a CA1 = acid palmitic V K T LU N T ph n m t t c a loài Rau má Centella asiatica (L.) Urb - Apiaceae thu hái t i C n Th , b ng ph ng pháp s c ký k t h p v i k thu t k t tinh l i ã phân l p c m t ch t tinh t D a vào c i m lý hóa d li u ph 1H-NMR ã xác nh c h p ch t acid palmitic ây m t acid béo có chu i dài bão hịa, ã c s d ng r ng rãi ngành ph gia m ph m 188 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 TÀI LI U THAM KH O T t L i (2006), Cây rau má, Nh ng thu c v thu c Vi t Nam, tr 631-632 Chong N.J and Aziz Z (2011), A systematic review on the chemical constituents of Centella asiatica, Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 2(3), pp 445-459 Gohil K.J., Patel J.A and Gajjar A.K (2010), Pharmacological Review on Centella asiatica: A Potential Herbal Cure-all, Indian Journal of Pharmaceutical Sciences, 72(5), pp 546-556 Govindan G (2007), A Bioactive Polyacetylene Compound Isolated from Centella asiatica, Planta Medica, 73(6), pp 597-599 Haynes W.M (2015), CRC Handbook of Chemistry and Physics 95th Edition, CRC Press LLC, Boca Raton Oydefi O.A and Afolayan A.J (2005), Chemical composition and Antibacterial activity of the Essential oil of Centella asiatica Growing in South Africa, Pharmaceutical Biology, 43(3), pp 249-252 P Puttarak, P Panichayupakaranant (2012), Factors affecting the content for pentacyclic triterpenes in Centella asiatice raw materials, Pharmaceutical Biology, 5(12), pp 1508-1512 Qin L.P., Ding R.X., Zhang W.D and et al (1998), Essential oil from Centella asiatica and its antidepressant activity, Di Er Jun Yi Da Xue Xue Bao, 19 (2), pp 186-187 The metabolomics innovation centre (2016), 1H-NMR Spectrum (HMDB0000220), Biological Magnetic Resonance Data Bank 10 Zheng, L Qin (2007), Chemical components of Centella asiatica and their bioactivities, Journal of Chinese Integrative Medicine, 5(3), pp 348-351 (Ngày nh n bài: 02/08/2020 - Ngày t 189 ng: 06/09/2020) ... ? ?Nghiên c u phân l p h p ch t h u c Rau má (Centella asiatica L - Apiaceae) thu hái t i C n Th ” ã c th c hi n v i m c tiêu phân l p c m t ch t có Rau má ã thu hái xác nh cc u trúc c a ch t phân. .. Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 2(3 ), pp 445-459 Gohil K.J., Patel J.A and Gajjar A.K (2 01 0), Pharmacological Review on Centella asiatica: A Potential Herbal Cure-all, Indian Journal of... có Rau má ã công b [3] B ng D li u ph 1H-NMR c a CA1 so v i acid palmitic [9] STT CA1 (CDCl3, 500 MHz ) H, J (Hz) 2,31 (2 H, t, 7, 5) 1,63 (2 H, m) 1,3 (2 4H, m) 0,88 (3 H, t, 7) Acid palmitic (CDCl3,