ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC HỒ THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX 2, eNOS PHOSPHORYL HÓA VÀ MỘT SỐ CƠ TRƠN CÔ LẬ[.]
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC HỒ THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX-2, eNOS PHOSPHORYL HÓA VÀ MỘT SỐ CƠ TRƠN CƠ LẬP KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC HÀ NỘI – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ac y, VN U KHOA Y DƢỢC dP rm HỒ THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA TAM THẤT HOANG an (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) ine TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX-2, eNOS PHOSPHORYL Me dic HÓA VÀ MỘT SỐ CƠ TRƠN CƠ LẬP t© Khóa Sc ho ol of KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC : QH.2013.Y PGS TS DƢƠNG THỊ LY HƢƠNG Co p yri gh Ngƣời hƣớng dẫn : TS VŨ THỊ THƠM Hà Nội - 2018 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma LỜI CẢM ƠN VN U Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn đến toàn Ban chủ nhiệm khoa Y - Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội, Bộ môn Dược lý - Dược lâm sàng, Bộ môn Y - Dược ac y, học sở tạo điều kiện cho em để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giảng dạy, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua rm Em xin bày tỏ tri ân lòng biết ơn sâu sắc đến TS Vũ Thị Thơm PGS TS Dƣơng Thị Ly Hƣơng, người ln tận tình hướng dẫn, tạo dP điều kiện giúp em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, thầy cô Bộ môn Y – Dược học sở giúp đỡ em q trình hồn thành khóa luận an Em xin cảm ơn chương trình thuộc đề tài Tây Bắc: “Ứng dụng giải pháp Me dic ine khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ loài thuốc Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) vùng Tây Bắc”, mã số KHCN-TB.07C/1318 tài trợ kinh phí để em thực nội dung nghiên cứu Em xin cảm ơn Bộ môn Sinh lý học, Học viên Quân Y giúp đỡ em thực thí nghiệm of Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân ln quan tâm, động viên, giúp đỡ em hồn thành khóa luận Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên Co p yri gh t© Sc ho ol Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khóa luận thêm hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hồ Thị Thu Hà PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Giải thích ACh Acetylcholin BH4 Tetrahydrobiopterin CaM Camodulin CD Cụm biệt hóa (Cluster of differentiation) cGMP GMP vòng (Cyclic guanosine monophosphate) COX Cyclooxygenase COX-1 Cyclooxygenase-1 COX-2 Cyclooxygenase-2 eNOS Endothelial nitric oxide synthase FAD Flavin adenine dinucleotide FMN Flavin mononucleotide GTP Guanosine-5'-triphosphate HUVEC Tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người (Human umbilical vein endothelial cell) ac y, dP rm gh yri Co p NADPH an ine dic Me of ol ho Inducible nitric oxide synthase t© iNOS LPS Phân tử kết dính liên bào (Intercellular adhesion molecule 1) Sc ICAM - LD50 VN U Ký hiệu Liều gây chết 50% đối tượng thử (Lethal Dose 50%) Lipopolyshaccharide Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate nNOS Neuronal nitric oxide synthase NO Nitric oxide NOS Nitric oxide synthase PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Thuốc chống viêm không steroid (Non-steroidal anti- NSAIDs inflammatory drugs) Nhiễm sắc thể PDGF Yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc tiểu cầu (Platelet-derived growth factor) PG Prostaglandin PGE2 Prostaglandine E2 PGI2 Prostacyclin PS27 Cao giàu saponin Tam thất hoang PSBt Cao chiết dung môi n - butanol Tam thất hoang PSnH Cao chiết dung môi n - hexan Tam thất hoang PST Cao tổng chiết dung môi ethanol 70% Tam thất hoang ine an dP rm ac y, VN U NST reaction) dic PCR thời gian thực (Reverse transcription polymerase chain RT-PCR Serine sGC Guanylyl cyclase hòa tan (Soluble guanylyl cyclase) Thr Threonin TTH Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.T Tsai et K.M.Feng) Sc Phân tử kết dính tế bào mạch (Vascular cell adhesion molecule) Co p yri gh t© VCAM-1 ho ol of Me Ser PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang VN U STT Hình 1.3 Cấu trúc thành động mạch Hình 1.4 Cấu trúc eNOS Hình 1.5 Sự điều hịa vị trí phosphoryl hóa eNOS 11 Hình 1.6 12 Hình 1.7 Sự tổng hợp NO eNOS chức sinh lý NO nội mạc Sinh tổng hợp prostaglandin Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn Tam thất hoang 18 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất cao giàu saponin từ Tam thất hoang 19 Hình 2.3 Phương pháp gắn đoạn trơn vào bình ni hệ thống ghi Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng tạo màu thuốc thử Griess với NO2- Hình 3.1 Sự giãn trơn khí quản cao tổng Tam thất hoang Hình 3.2 Sự giãn trơn cổ bàng quang cao tổng Tam thất hoang Hình 3.3 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang tổng hợp NO Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu protein eNOS phosphoryl hóa Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu mARN COX-2 26 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu protein COX-2 29 rm an ine dic Me of ol ho Sc t© gh Hình 3.4 dP Hình 1.2 ac y, Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) Cấu trúc hóa học chất 1–15 phân lập từ Panax stipuleanatus Hình 1.1 Co p yri Hình 3.5 Hình 3.6 15 20 23 25 25 27 28 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang VN U STT Các dạng NOS Bảng 3.1 Tác dụng phân đoạn Tam thất hoang trơn lập 24 Co p yri gh t© Sc ho ol of Me dic ine an dP rm ac y, Bảng 1.1 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT VN U DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ ac y, CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Tam thất hoang .2 rm 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Sinh thái phân bố dP 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng dược lý .4 an 1.1.5 Công dụng ine 1.2 Tổng quan nội mạc mạch máu eNOS dic 1.2.1 Nội mạc mạch máu 1.2.2 eNOS Me 1.3 Tổng quan viêm COX-2 14 of 1.3.1 Viêm prostaglandin viêm 14 ol 1.3.2 COX – 15 ho CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 Sc 2.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 t© 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 19 gh 2.2 Dung môi, hóa chất thiết bị 20 yri 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 Co p 2.3.1 Nghiên cứu tác dụng trơn cô lập 21 2.3.2 Nghiên cứu biểu COX-2 eNOS phosphoryl hóa .22 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Kết 24 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 3.1.1 Tác dụng trơn cô lập 24 3.1.2 Tác dụng biểu eNOS phosphoryl hóa 26 VN U 3.1.3 Tác dụng biểu COX-2 28 3.2 Thảo luận 30 ac y, 3.2.1 Tác dụng trơn cô lập 30 3.2.2 Tác dụng biểu eNOS phosphoryl hóa 31 rm 3.2.3 Tác dụng biểu COX-2 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 35 Co p yri gh t© Sc ho ol of Me dic ine an dP TÀI LIỆU THAM KHẢO PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ĐẶT VẤN ĐỀ VN U Nội mạc mạch máu lớp tế bào nội mơ mỏng nằm lót mặt lịng mạch [1] Các tế bào có khả sản xuất nitric oxid (NO), chất giãn mạch quan trọng có nhiều vai trị điều hịa chức sinh lý mạch máu trương lực mạch, kết tập tiểu cầu, sinh mạch, kết dính bạch cầu – nội mơ… ac y, Tại nội mạc mạch máu, NO tổng hợp nhờ enzym nitric oxide synthase nội rm mạc (eNOS - Endothelial nitric oxide synthase) Hoạt động enzym điều khiển nhiều chế có q trình phosphoryl hóa eNOS [41,69] Viêm nguyên nhân gây rối loạn chức nội mạc [67] Rối loạn chức nội mạc có liên quan đến NO, phosphoryl hóa eNOS q trình viêm an dP báo cáo nhiều bệnh lý tim mạch xơ vữa động mạch, cao huyết áp…[24,37] Trong năm gần đây, điều hịa eNOS thơng qua q trình phosphoryl hóa mục tiêu y học triển vọng điều trị nhiều bệnh lý [41] Me dic ine Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng ) thuộc chi Panax L., nước ta có vùng núi cao thuộc dãy Hoàng Liên Sơn [9] Nghiên cứu bước đầu thành phần hóa học cho thấy rễ Tam thất hoang có chứa saponin với hàm lượng cao [6] Đặc biệt, saponin loài thuộc chi Panax L chứng minh có tác dụng giãn trơn, tăng tổng hợp ho ol of NO, tăng biểu eNOS phosphoryl hóa [39,73] chống viêm [32,45,58] Tuy nhiên, đến nghiên cứu loài hạn chế Điều đặt câu hỏi liệu với thành phần giàu saponin, Tam thất hoang có tác dụng kể hay khơng? Để làm sáng tỏ điều đó, tơi thực đề tài: “Nghiên cứu tác dụng Sc Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) biểu COX-2, eNOS phosphoryl hóa số trơn lập” với ba mục tiêu: t© Bước đầu đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang trơn lập khí quản, bàng quang thể hang yri gh Đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang biểu eNOS phosphoryl hóa tổng hợp NO Co p Đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang biểu gen COX-2 protein COX-2 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VN U 1.1 Tổng quan Tam thất hoang Tam thất hoang có tên khoa học Panax stipuleanatus H T Tsai et K M ac y, Feng, thuộc họ Ngũ gia bì (Araliaceae), chi Panax L.; hay gọi với tên khác Tam thất rừng, Bình biên tam thất, Thổ tam thất [2,8] 1.1.1 Đặc điểm thực vật rm Cây thân thảo cao 25 – 75 cm; thẫn rễ mập, nằm ngang, có nhiểu vết lõm vết thân để lại, phân nhánh Mỗi khóm thường có thân mang lá, – dP Lá kép chân vịt, gồm – cái, mọc vòng ngọn; cuống dài – 10 cm Lá chét 5, có cuống ngắn, hình thn hay mác thn, dài – 13 cm, rộng – cm, nhọn hai t© Sc ho ol of Me dic ine an đầu, cuống hoa dài – 1,5 cm Hoa màu vàng xanh với đài nhỏ, cánh hoa, nhị bầu Quả mọng, gần hình cầu dẹp, đường kính 0,6 – 1,2 cm, chín màu đỏ Hạt gồm hạt màu xám trắng (Hình 1.1) [2] Hình 1.1 Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) [11] gh 1.1.2 Sinh thái phân bố Co p yri Tam thất hoang (TTH) ưa ẩm sáng Cây mọc rải rác đất có nhiều mùn, tán rừng kín thường xanh, độ cao 1600 – 2300 m Tái sinh hạt Ra hoa tháng – 5, có tháng – Cho đến nay, toàn giới, lồi tìm thấy tỉnh Vân Nam (Trung Quốc) vài điểm Vườn Quốc gia Hoàng Liên Sơn thuộc tỉnh Lào Cai, Việt Nam [2,9] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1.1.3 Thành phần hóa học Trong thân rễ TTH chứa saponin khung oleanan (hầu hết VN U saponin dẫn chất acid oleanolic) với hàm lượng tương đối cao số saponin khung dammaran với hàm lượng thấp [19] Năm 1985, từ dịch chiết methanol thân rễ TTH phân lập ac y, saponin dẫn chất acid oleanolic stipuleanosid R1và stipuleanosid R2 [19] rm Năm 2002, nhóm nghiên cứu Đại học Toyama, Nhật Bản phân tích thành phần dịch chiết ethanol TTH thu hái Trung Quốc xác định hàm lượng nhỏ saponin khung dammaran gồm ginsenosid Rb1, Rc, Rb3 Rd [43] Năm 2010, nhóm nghiên cứu Chun Liang cộng phân lập an dP 11 hợp chất saponin dẫn chất acid oleanolic, có chất spinasaponin A methyl ester từ rễ TTH thu hái Việt Nam [15] Năm 2013, nhóm tiếp tục xác định thêm hợp chất saponin khung oleanan khác [45] Ngoài gh t© Sc ho ol of Me dic ine polyacetylen, sesquiterpen acid béo phân lập [15] (Hình 1.2) yri Hình 1.2 Cấu trúc hóa học 15 chất phân lập từ P stipuleanatus [45] Co p Tại Việt Nam, nghiên cứu Trần Công Luận cộng TTH ngồi saponin cịn có thành phần khác như: polyacetylen, triterpenoid, tinh dầu, đường khử, acid hữu cơ, acid polyuronic, acid béo, acid amin nguyên tố vi lượng [5,6] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1.1.4 Tác dụng dƣợc lý Trên giới, năm 2010, từ 11 hợp chất saponin phân lập từ TTH (1 – VN U 11, hình 1.2) nhóm nghiên cứu Chun Liang tiến hành thử tác dụng gây độc tế bào ung thư bạch cầu cấp tiền tủy bào (HL-60) ung thư ruột kết người (HCT-116) thu kết quả: Chất thể hoạt tính gây độc tế bào đáng kể với ac y, giá trị IC50 4,44 0,63 µM dịng tế bào HL-60 HCT-116 [15] Năm 2013, Chun Liang cộng tiếp tục đánh giá hoạt tính 15 chất (1 – 15, hình 1.2) lên yếu tố nhân kappa B (NF-κB) tế bào HepG2 cho kết quả: Các chất rm từ – 11 ức chế NF-κB với IC50 từ 3,1 – 18,9 µM Các chất 8, 10 11 ức chế biểu mARN iNOS (inducible nitric oxide synthase) COX-2 dP (cyclooxygenase-2) phụ thuộc nồng độ Điều đem lại tiềm điều trị chất chống viêm, chống xơ vữa động mạch chống loạn thần [45] ine an Năm 2011, polyacetylen phân lập từ TTH stipudiol stipuol ức chế đáng kể tăng sinh tế bào ung thư HL-60 HCT-116 thơng qua kích hoạt trình apotosis tế bào [46] Me dic Tại Việt Nam, nghiên cứu Trần Công Luận năm 2002 cho thấy: Cao TTH có tác dụng phục hồi thời gian ngủ stress, đưa trạng thái bình thường mức liều thử 44; 88 176 mg/kg Ở nồng độ 25; 50 100 μg/ml cao ol of saponin tồn phần TTH có tác dụng chống oxy hóa, ức chế hình thành malonyl dialdehyd Cao thân rễ rễ củ TTH thể độc tính cấp đường uống với liều LD50 = 8,8 g/kg [5] Sc ho Nghiên cứu Lê Thị Tâm Nguyễn Thị Tuyết Trinh (2016) cho kết TTH có tác dụng chống đông ức chế ngưng tập tiểu cầu in vitro [7,11] 1.1.5 Cơng dụng t© Sách đỏ Việt Nam (2007) có ghi “Tất phận có cơng dụng làm thuốc; thân rễ thường dùng làm thuốc bổ, cầm máu, tăng cường sinh Co p yri gh dục, chống stress Lá, nụ hoa dùng làm trà uống có tác dụng kích thích tiêu hóa, an thần” TTH có tác dụng tán ứ, định thống Bộ phận dùng thân rễ Rhizoma Panacis Stipuleanati [2] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1.2 Tổng quan nội mạc mạch máu eNOS 1.2.1 Nội mạc mạch máu VN U 1.2.1.1 Đặc điểm cấu trúc Về giải phẫu học từ ngồi, thành động mạch có cấu tạo gồm lớp áo đồng tâm: Lớp áo lớp vỏ xơ, có sợi thần kinh chi phối; lớp áo gồm ine an dP rm ac y, sợi trơn sợi đàn hồi; lớp áo lớp tế bào nội mơ (Hình 1.3) [3] dic Hình 1.3 Cấu trúc thành động mạch [1] Sc ho ol of Me Tương tự thành động mạch, thành tĩnh mạch, mao mạch mạch bạch huyết có lớp tế bào nội mơ lợp mặt lịng mạch Lớp nội mơ thuộc biểu mơ lát đơn, gồm hàng tế bào nội mơ hình đa giác dẹt, có phần bào tương chứa nhân lồi vào lòng mạch, phần bào tương ngoại vi tỏa thành mỏng Các tế bào nội mô liên kết với dải bịt liên kết khe [1] Ở người trưởng thành, nội mạc mạch máu gồm khoảng mười ngàn tỷ (1013) tế bào, bao phủ diện tích khoảng - m2 hình thành nên tổ chức nặng khoảng kg [27,52] 1.2.1.2 Chức nội mạc mạch máu t© Nội mạc mạch máu có vai trị quan trọng việc kiểm sốt lưu thơng dịng máu, trương lực mạch máu, kết tập tiểu cầu tham gia điều hịa yri gh q trình viêm, miễn dịch, sinh mạch, chuyển hóa trì định nội môi [30] Các tế bào nội mô thực hai chức trao đổi chất tổng hợp [52] Co p Nội mạc mạch máu hình thành nên hàng rào bán thấm kiểm soát di chuyển chất hòa tan, đại phân tử tế bào dịng máu với mơ xung quanh [27,30] Irie Tavassoli gọi hàng rào máu – mơ [65] Rối loạn tính thấm nội mạc gây nhiều bệnh lý phù, sốc, xung huyết PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Các tế bào nội mô có khả sản xuất nhiều phân tử khác chất giãn mạch: nitric oxide (NO), prostacyclin (PGI2), EDHF (yếu tố cường phân VN U cực có nguồn gốc nội mô/ endothelium-derived hyperpolarizing factor); chất co mạch: Endothelin, thromboxan A2, angiotensin II; phần tử kết dính: E-selectin, P-selectin, ICAM -1 (phân tử kết dính liên bào/ intercellular adhesion molecule) ac y, VCAM-1 (phân tử kết dính tế bào mạch/ vascular cell adhesion molecule); cytokin yếu tố tăng trưởng: GM-CSF (Yếu tố kích thích quần thể bạch cầu hạt – đại thực bào/ Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor), interleukin (IL-1, IL-6) rm SCF (Yếu tố tế bào gốc/ Stem cell factor); chemokin: α β chemokin, fractalkin; yếu tố liên quan đến trình cầm máu: t-PA (yếu tố hoạt hóa dP plasminogen mơ), PAI-1 (chất ức chế yếu tố hoạt hóa plasminogen), yếu tố Willebrand, thromboxan A2, NO, PGI2, TF (yếu tố mô), TFPI (chất ức chế ine an đường yếu tố mô); hay yếu tố liên quan đến tăng sinh trơn sinh mạch: VEGF (yếu tố tăng trưởng nội mạc mạch/ vascular endothelial growth factor), PDGF (yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc tiểu cầu/ platelet derived growth factor) [17,26,27,38] Me dic Rối loạn cấu trúc chức nội mạc mạch máu liên quan đến nhiều trình bệnh lý xơ vữa động mạch, tăng huyết áp, bệnh động mạch vành, suy tim mạn, bệnh mạch ngoại vi, tiểu đường, tăng áp lực phổi, nhiễm khuẩn hội chứng viêm [26,27] ho 1.2.2.1 Nitric oxide ol of 1.2.2 eNOS gh t© Sc Năm 1980, Furchgott Zawadzki chứng minh giãn động mạch thỏ kích thích acetylcholin (ACh) cần có mặt nội mơ ngun vẹn ACh kích thích giải phóng chất gọi yếu tố giãn mạch nguồn gốc nội mạc (Endothelium derived relaxing factor – EDGR) Năm 1987, Palmer cộng xác định yếu tố nitric oxide (NO) [25] Ngày Co p yri nay, NO biết đến gốc khí tự đơn giản đóng vai trị tín hiệu trung gian quan trọng thể [41] NO tham gia điều hòa nhiều trình sinh lý dẫn truyền thần kinh, trương lực mạch máu, co cơ, kết tập tiểu cầu, chuyển hóa, đáp ứng miễn dịch, phiên mã gen dịch mã mARN, trình biến đổi sau dịch mã protein [25,69] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Về đặc điểm cấu trúc tính chất, NO gốc khí tự nhỏ nặng 30 Dalton, không màu nhiệt độ nóng chảy khoảng 163,6 °C, cấu trúc VN U NO có electron chưa ghép cặp [25,60] NO có khả phản ứng với nguyên tố kim loại chuyển tiếp để hình thành nên nitrosyl kim loại, đặc tính quan trọng đường tín hiệu Mặt khác, NO tan ac y, nước, dễ vượt qua màng tế bào để tham gia điều hịa q trình sinh lý Tuy nhiên, chất khơng bền có thời gian bán thải (T1/2) ngắn bị chuyển hóa nhanh thể [25] rm Trong thể NO tổng hợp qua hai đường: thông qua enzym NOS (Nitric oxide synthase) từ trình khử NO2- NOS enzym xúc tác dP cho phản ứng hình thành NO L-citrullin từ L-arginin O2 [69] Ở động vật có vú, NOS có ba dạng chính, mã hóa gen riêng biệt nhiễm sắc thể (NST) Me dic ine an khác nhau: NOS thần kinh (nNOS) hay NOS loại 1; NOS cảm ứng (iNOS) hay NOS loại NOS nội mạc (eNOS) hay NOS loại (Bảng 1.1) Con đường thứ hai để hình thành NO từ phản ứng khử NO2-, phản ứng tạo điều kiện enzym NO2- reductase enzym chứa molypden (xanthin oxidase), NOS nhiều thành phần chuỗi vận chuyển điện tử ti thể Phản ứng khử NO2- đóng vai trị quan trọng trường hợp thiếu oxy hoạt động NOS bị giới hạn Trong thể NO chuyển hóa q trình oxy hóa để hình thành nên NO2- Co p yri gh t© Sc ho ol of NO3- Q trình tự xảy (autooxidation) xúc tác Một phần NO bị bất hoạt stress oxy hóa, NO kết hợp với superoxid (O2-) để hình thành nên peroxynitrit (ONOO-) [25,69] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Bảng 1.1 Các dạng NOS [13,69] biến NOS – nNOS (Neuronal NOS) iNOS (Inducible NOS) NOS - eNOS (Endothelial NOS) VN U Tên phổ NOS - Neuron thần kinh Nhiều loại tế bào hệ Tế bào nội mô số tế bào khác thống miễn dịch rm lipopolysaccharid ac y, đại thực bào đáp ứng với Tế bào biểu chất khác NST 17, 26 exon NST 7, 26 exon Enzym cấu trúc Enzym cảm ứng Enzym cấu trúc an Đặc điểm NST 12, gồm 29 exon dP Gen (LPS), cytokin Ở hệ thần kinh trung Tham gia vào sinh lý Tham gia vào dic ine ương: có liên quan bệnh trình nhiều chức đến trình học tập viêm hệ thống tim mạch quan ghi nhớ; kiểm soát miễn dịch trọng: Giãn mạch, huyết áp trung ương ức chế Me Chức Ở hệ thần kinh ngoại vi: Chất dẫn truyền thần kinh, giãn trơn mạch trình kết tập tiểu cầu, kết dính bạch cầu, tăng sinh tế bào trơn thành mạch Sc ho ol of trình sinh học t© 1.2.2.2 eNOS gh eNOS (Endothelial nitric oxide synthase) dạng NOS NO Co p yri sản xuất nội mô eNOS hợp chất vận mạch quan trọng, tham gia điều hịa nhiều q trình sinh lý đặc biệt liên quan đến chức tim mạch eNOS biểu chủ yếu tế bào nội mơ, ngồi enzym phát tế bào tim, tiểu cầu, neuron não, hợp bào nuôi thai người tế bào biểu mô ống thận LLC-PK1 [69,70] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Cấu trúc gen protein eNOS mã hóa gen nằm nhiễm sắc thể số (7q35–7q36); VN U có cấu trúc gồm 26 exon, gen chiếm đoạn khoảng 21 – 22 kb [13,66,70] Về cấu trúc, eNOS protein chứa 1203 acid amin, nặng 133 kDa, có dạng homodimer gồm domain (Hình 1.4) [13,70]: Domain reductase nằm đầu –COOH, chứa vị trí gắn NADPH (Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate), FAD (Flavin adenine dinucleotide) FMN (Flavin mononucleotide) - Domain oxygenase nằm đầu –NH2 chứa vị trí gắn BH4 (Tetrahydrobiopterin), hem L-arginin rm ac y, - Hai domain gắn kết với trình tự dài khoảng 30 acid amin chứa vị trí gắn Camodulin (CaM) Me dic ine an dP - Hình 1.3 Cấu trúc eNOS (Ser: Serine; Thr: Threonin) [29] of Phosphoryl hóa eNOS ol Hoạt động eNOS điều khiển chế chế phụ thuộc Ca khơng phụ thuộc Ca2+: ho 2+ gh t© Sc Cơ chế phụ thuộc Ca2+: eNOS enzym phụ thuộc Ca2+/CaM Khi nồng độ Ca2+ nội bào tăng, tạo điều kiện cho CaM gắn vào vị trí eNOS CaM protein tương tác với eNOS, gắn CaM làm dịch chuyển điện tử từ NADPH domain reductase đến hem domain oxygenase thông qua FAD Co p yri FMN Tại vị trí hem điện tử dùng để khử hoạt hóa O2 từ oxi hóa Larginin thành L-citrullin NO Các yếu tố thiết yếu cần cho eNOS chức bao gồm L-arginin, Fe, BH4, NADPH, FAD FMN [69] Phosphoryl hóa eNOS: Phosphoryl hóa eNOS biến đổi sau dịch mã, điều khiển hệ thống kinase, phosphatase tương tác protein – protein chế tham gia điều khiển eNOS Mặc dù hoạt động eNOS phụ thuộc vào nồng độ Ca2+ yếu tố cần PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma cho điều hòa hoạt động enzym Sự gắn CaM dịch chuyển dòng điện tử từ domain reductase đến domain oxygenase enzyme phụ VN U thuộc vào phosphoryl hóa khử phosphoryl hóa eNOS [41] Các nghiên cứu rằng, phosphoryl hóa eNOS xảy Serin (Ser) mức độ thấp Tyrosin (Tyr) Threonin (Thr) Ở người, phosphoryl hóa Ser1177, Ser617 ac y, Ser633 làm kích hoạt eNOS phosphoryl hóa Thr495 Ser114 làm giảm chức eNOS Sự phosphoryl hóa eNOS điều hịa nhiều yếu tố “shear stress”, yếu tố tăng trưởng tế bào nội mô mạch máu (VEGF), rm bradykinin, insulin, estrogen… làm hoạt hóa enzym khác serin/ threonin kinase Akt, CaMKII (Ca2+/ calmodulin dependent protein kinase II), dP AMPK (AMP-activated protein kinase), PKA (protein kinase A) gây phosphoryl hóa eNOS vị trí khác (Hình 1.5) [29,34,41] Me dic ine an Ngồi ra, hoạt động eNOS điều khiển tương tác với protein Hsp90 hay Caveolin-1 Cav-1 (Caveolin-1) protein vỏ caveolae tế bào nội mô, cav-1 gắn với eNOS kết làm bất hoạt eNOS [59] Hsp90 (Protein shock nhiệt 90) làm tăng hoạt động eNOS theo chế điều hòa dị lập thể, nghiên cứu cho thấy hình thành phức hợp eNOS – Hsp90 tế bào nội mô bị kích thích histamin, bradykinin, yếu tố tăng trưởng nội mạc “shear stress” làm tăng hoạt tính eNOS lên lần [31] Sự tương tác eNOS với Co p yri gh t© Sc ho ol of protein chế điều hịa hoạt tính eNOS độc lập với Ca2+ 10 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U ac y, rm dP dic ine an Hình 1.5 Sự điều hịa vị trí phosphoryl hóa eNOS Các vị trí eNOS phosphoryl hóa đánh số theo thứ tự eNOS người/ bò [41] (VEGF: Vascular endothelial cell growth factor/ Yếu tố tăng trưởng tế bào nội mơ mạch máu; 8-Br-cAMP: 8-bromoadenosine-3’,5’- monophosphate vịng; S-1-P: sphingosine 1-phosphate; PMA: phorbol 12-myristate 13-acetate; HDL: highdensity lipoprotein/ lipoprotein trọng lượng phân tử cao; S: Serin; T: Threonin; ) Me 1.2.2.3 Chức sinh lý eNOS NO nội mạc a Điều hịa trương lực mạch máu t© Sc ho ol of Tại nội mạc NO tạo eNOS làm hoạt hóa guanylyl cyclase hịa tan (sGC/ soluble guanylyl cyclase) kích hoạt đường truyền tin cGMP (GMP vòng) sGC xúc tác cho phản ứng chuyển GTP (Guanosine-5'-triphosphate) thành cGMP chất truyền tin thứ hai, cGMP hoạt hóa protein kinase G (PKG), thúc đẩy q trình phosphoryl hóa protein kết làm giảm nồng độ Ca2+ nội bào giãn mạch (Hình 1.6) [25] Nghiên cứu cho thấy huyết áp tăng nhóm chuột bị xóa bỏ gen eNOS [47] gh b Ức chế kết dính bạch cầu viêm mạch máu Co p yri NO kiểm soát biểu gen liên quan đến xơ vữa động mạch NO làm giảm biểu protein hóa hướng động bạch cầu mono MCP-1 (Monocyte chemoattractant protein-1) [56], ức chế kết dính bạch cầu với thành mạch cách can thiệp vào khả gắn phân tử kết dính bạch cầu CD11/ CD18 (Cụm biệt hóa/ Cluster of differentiation) với bề mặt tế bào nội mô ức chế biểu CD11/ CD18 bạch cầu Sự kết dính bạch cầu 11 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ...ĐẠI H? ??C QUỐC GIA H? ? NỘI ac y, VN U KHOA Y DƢỢC dP rm H? ?? THỊ THU H? ? NGHIÊN CỨU T? ?C DỤNG CỦA TAM TH? ?T HOANG an (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) ine TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX- 2, eNOS PHOSPHORYL. .. hoang H? ?nh 3.2 Sự giãn trơn cổ bàng quang cao t? ??ng Tam th? ?t hoang H? ?nh 3.3 Ảnh h? ?ởng phân đoạn Tam th? ?t hoang t? ??ng h? ??p NO Ảnh h? ?ởng phân đoạn Tam th? ?t hoang biểu protein eNOS phosphoryl h? ?a Ảnh h? ?ởng... h? ??i liệu với thành phần giàu saponin, Tam th? ?t hoang có t? ?c dụng k? ?? hay khơng? Để l? ?m sáng t? ?? điều đó, t? ?i thực đề t? ?i: ? ?Nghiên cứu t? ?c dụng Sc Tam th? ?t hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et