LUẬN văn THẠC sĩ nghiên cứu tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu IN VITRO của cao giàu saponin sâm vũ diệp (panax bipinnatifidus seem) và tam thất hoang (panax stipuleanatus h t tsai et k m feng)

TỔNG QUAN

Tổng quan về Tam thất hoang và Sâm vũ diệp

Sâm vũ diệp, còn gọi là Trúc tiết nhân Sâm, Tam thất lá xẻ, Sâm hai lần xẻ, Hoàng liên thất, Vũ diệp tam thất Tên khoa học: Panax bipinnatifidus Seem., thuộc họ Nhân Sâm - Araliaceae [4, 20]

Sâm vũ diệp là cây thảo sống nhiều năm; rễ dài có nhiều đốt và những vết sẹo do thân rụng hằng năm để lại Thân mảnh cao 10–20 cm, tới 50 cm, thường lụi vào mùa khô Lá kép chân vịt, mọc vòng ba cái một, mang 3-7 lá chét mỏng, không lông, mép có răng đôi cạn hay sâu dạng thùy Hoa màu trắng lục, xếp 20-30 cái thành tán đơn trên một trục dài 15-20 cm ở ngọn thân, cuống hoa cỡ 1 cm Qủa mọng, khi chín màu đỏ, chứa 1-2 hạt [4]

Tam thất hoang được gọi với các tên khác là Tam thất rừng, Dã tam thất, Bình biên tam thất, Thổ tam thất Tên khoa học: Panax stipuleanatus H T Tsai et

K M Feng, họ Nhân Sâm (Araliaceae) [4, 20], cây thân thảo cao 25-75 cm; thân rễ mập, nằm ngang, có nhiều vết lõm do vết thân để lại, ít phân nhánh Mỗi khóm thường có một thân mang lá Lá kép chân vịt, gần 1-3 cái, mọc vòng ở ngọn; cuống dài 5-10 cm Lá chét 5, có cuống ngắn, hình thuôn hay mác thuôn, dài 5-13 cm, rộng 2-4 cm, nhọn hai đầu, mép cuống hoa dài 1-1,5 cm Hoa màu vàng xanh với năm lá đài nhỏ, 5 cánh hoa, 5 nhị và bầu 2 ô Qủa mọng, gần hình cầu dẹt, đường kính 0,6-1,2cm, khi chín màu đỏ Hạt 1 hoặc 2, màu xám trắng [4, 25]

Hai loài Sâm vũ diệp và Tam thất hoang có hình thái tương đối giống nhau Điểm khác biệt nhất là Sâm vũ diệp có lá xẻ thùy, còn Tam thất hoang thì không [20]

Hình 1.1 Sâm vũ diệp Hình 1.2 Tam thất hoang

1.1.2 Thực trạng và phân bố

Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) được Seemann phát hiện lần đầu tiên tại vùng núi Hymalaya của Ấn Độ và được công bố năm 1868 trên tạp chí J

Botany Trên thế giới, Sâm vũ diệp được tìm thấy ở Trung Quốc, bắc Myanma, đông bắc Ấn Độ và Nepal Ở nước ta, Sâm vũ diệp phân bố hẹp ở vùng núi Hoàng Liên Sơn (thuộc địa phận Sapa, Bát Xát, Lào Cai) và huyện Than Uyên (Lai Châu)

Sapa chính là điểm cực nam của bản đồ phân bố Sâm vũ diệp trên thế giới ( khoảng

Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) được hai nhà khoa học người Trung Quốc công bố năm 1975 trên tạp chí Acta Phytotaxonomica

Sinica Loài này được tìm thấy đầu tiên tại khu rừng Mã Quan, Trung Quốc (phía bắc Việt Nam) ở độ cao 1100-1700 m so với mặt nước biển Cho đến nay, trên toàn thế giới, loài này mới chỉ tìm thấy ở tỉnh Vân Nam (Trung Quốc) và một vài điểm ở Vườn Quốc gia Hoàng Liên Sơn thuộc tỉnh Lào Cai, Việt Nam [20]

Tại Việt Nam cho đến nay, các kết quả nghiên cứu cho thấy hai loài Sâm vũ diệp và Tam thất hoang phân bố tự nhiên ở sườn tây bắc dãy Hoàng Liên Sơn và một vài nhánh phụ cận kề, thuộc địa phận của 6 xã thuộc huyện Bát Xát và Sa Pa của tỉnh Lào Cai [10, 20, 21] Phạm vi phân bố của hai loài này rất hạn chế, các quẩn thể của chúng được tìm thấy trong tự nhiên với kích thước rất nhỏ Tuy nhiên gần đây Sâm vũ diệp đã được thuần hóa và bước đầu được trồng thử nghiệm ở một số địa phương ở Hà Giang và Lào Cai [10]

1.1.3 Công dụng và tác dụng dược lý của Sâm vũ diệp và Tam thất hoang

Theo Đông y, Tam thất hoang có vị ngọt, hơi đắng, tính ấm Có tác dụng tư bổ cường tráng, tiêu viêm giảm đau, khử ứ sinh tân và cầm máu Sách đỏ Việt Nam năm 2007 ghi “Tất cả các bộ phận của cây đều có thể dùng làm thuốc Thân rễ thường được dùng làm thuốc bổ, cầm máu, tăng cường sinh dục, chống stress Lá, nụ, hoa dùng làm trà uống có tác dụng kích thích tiêu hóa, an thần” [4]

Sâm vũ diệp vị đắng, nhạt, tính hàn, có tác dụng tư bổ cường tráng, tiêu viêm, giảm đau, khư ứ sinh tân và cầm máu Dược liệu từ Sâm vũ diệp là thân rễ, rễ củ dùng cầm máu các loại vết thương và xuất huyết Làm thuốc bổ chữa thiếu máu, xanh xao gầy còm nhất là đối với phụ nữ sau sinh đẻ; còn có tác dụng kích thích sinh dục và được dùng trong điều trị vô sinh Ở Vân Nam (Trung Quốc), người ta dùng rễ củ chữa thổ huyết, chảy máu mũi, đòn ngã tổn thương, thương tổn bên trong gây đau lưng [4]

Nghiên cứu của Trần Công Luận năm 2002 công bố cao Tam thất hoang và Sâm vũ diệp có tác dụng phục hồi thời gian ngủ bị rút ngắn bởi stress, đưa về trạng thái bình thường ở các liều thử nghiệm 44, 88, 176 mg/kg Cao saponin toàn phần của Tam thất hoang có tác dụng chống oxy hóa, ức chế sự hình thành MDA ở nồng độ 25, 50, 100 àg/mL [13] Năm 2009, nghiờn cứu của Viện Dược liệu chỉ ra rằng phân đoạn saponin của Tam thất hoang có hoạt tính chống oxy hóa – lipid peroxidation, dịch chiết tổng ethanol có tác dụng chống trầm cảm ở liều 44-176 mg/kg trên chuột [14]

Năm 2017, nghiên cứu của Lê Thị Tâm cho thấy Sâm vũ diệp có tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu trên in vitro ở các phân đoạn và các mức liều: phân đoạn tổng, phân đoạn n-butanol, phân đoạn etylacetat có tác dụng ở các mức liều 0,5-1-2-

5 mg/mL, phân đoạn ete các mức liều 1-2-5 mg/mL Tam thất hoang có tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu trên in vitro ở các phân đoạn và mức liều: phân đoạn tổng ở mức liều 1-2-5 mg/mL, phân đoạn n-butanol ở mức liều 5 mg/mL, phân đoạn n- hexan các mức liều 0,5-1-2-5 mg/mL) [19]

Nghiên cứu về thành phần hóa học của lá và thân rễ Sâm vũ diệp cho thấy có nhiều saponin khung dammaran và oleanan Năm 1989, Trung Quốc đã phân lập 13 saponin khung dammaran Hai saponin mới đã được phân lập là bipinnatifidusoside F1 và F2, cùng với 11 saponin đã biết từ lá khô của Sâm vũ diệp thu thập ở dãy núi Qinling Trung Quốc Saponin đã biết được xác định là ginsenosid F1, F2, F3, Rg2,

Re, Rd, Rb1, Rb3, 24(S)-pseudoginsenosid F11, panasenosid và majorosid F1 [44]

Năm 2011, nhóm nghiên cứu Việt Nam- Hàn Quốc phân lập và xác định cấu trúc 10 saponin khung oleanan từ thân rễ Sâm vũ diệp, được thu hái ở Hoàng Liên Sơn, Việt Nam, trong đó có 3 chất mới là bifinosid A-C (1-3) và 7 hợp chất đã biết, bao gồm: narcissiflorine methyl ester (4), chikusetsusaponin IVa (5), pseudoginsenoside RP1 methyl ester (6), stipuleanoside R1 (7), pseudoginsenoside RT1 methyl ester (8), momordinIIe (9), và stipuleanoside R2 methyl ester (10) [40] Năm 2015, nhóm tác giả Viện Dược liệu bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học của Sâm vũ diệp, kết quả là đã phân lập được một hỗn hợp saponin (11) bao gồm: stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranosid (11A) và β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (11B), glycosphingolipid: 1-O-(β-D- glucopyranosyl)-N-(1,3,4-trihydroxytridec-8-en-2-yl) heptacosanamid (12), dichaccarid: saccharose (13), saponin: 28-desglucosylchikusetsusapnin IV (14) từ phân đoạn chiết ethyl acetat thân rễ Sâm vũ diệp Đây là lần đầu tiên một số hợp chất trên được công

Sinh lý học tiểu cầu

Tiểu cầu là tế bào mỏu nhỏ nhất, khụng cú nhõn, đường kớnh 3-4 àm, được sản xuất từ mẫu tiểu cầu, nguyên mẫu tiểu cầu bắt đầu từ tế bào nguồn dòng tủy, do tế bào gốc sinh máu tạo nên Mỗi mẫu tiểu cầu có thể tạo được 3000 tiểu cầu Số

Copyright © School of Medicine and Pharmacy, VNU lượng tiểu cầu lưu hành ở máu ngoại vi khoảng 150 - 450 × 10 9 /L [18, 29] Tiểu cầu có đời sống ngắn, khoảng từ 8-14 ngày Hiện nay có thể giữ tiểu cầu trong 7 ngày ngoài cơ thể ở nhiệt độ 20-22 °C, lắc liên tục [18]

Tiểu cầu có một cấu trúc phức tạp gồm 4 khu vực: khu ngoại vi, khu sol-gel, khu bào quan và khu màng

Khu ngoại vi gồm lớp màng tiểu cầu kết nối với hệ thống các ống mở Màng tiểu cầu gồm hai lớp lipid bao quanh tiểu cầu Màng tiểu cầu chứa các glycoprotein quan trọng đóng vai trò như các receptor bề mặt liên quan đến quá trình đông máu

[52] Glycoprotein Ib (GPIb): là protein xuyên màng có nhiệm vụ liên kết với yếu tố wWF giúp cho tiểu cầu dính bám vào collagen Đây là bước đầu tiên trong hoạt động đông cầm máu của tiểu cầu [18, 29] Glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa): là protein màng, hoạt động phụ thuộc vào ion canxi, có nhiệm vụ liên kết với fibrinogen, giúp cho tiểu cầu ngưng tập tạo thành đinh cầm máu [18, 29] Ngoài ra, các phospholipid điện tích âm, đặc biệt phosphatidylserine (PS) có vai trò quan trọng trong quá trình đông máu, là chất nền ban đầu cho các phản ứng enzym tiểu cầu để tạo ra thromboxan A2 (TXA2), sản phẩm quan trọng trong quá trình hoạt hóa tiểu cầu và là chất chủ vận mạnh gây nên quá trình ngưng tập tiểu cầu Màng tiểu cầu cũng có khả năng nhận và chuyển tín hiệu bề mặt thành tín hiệu hóa học bên trong [17, 52]

Hình 1.3 Các glycoprotein màng tiểu cầu và chức năng của chúng [29]

Hệ thống các kênh mở gồm các kênh mở vào trong tiểu cầu như các không bào làm tăng diện tích bề mặt tiểu cầu, các hạt tiểu cầu phóng thích các chất qua hệ thống kênh này [18] Hệ thống ống dẫn từ trong bào tương của tiểu cầu ra đến lớp màng ngoài, tạo thành các lỗ nhỏ li ti trên bề mặt tiểu cầu Hệ thống này đóng vai trò như một đường dẫn cho các chất từ bên ngoài môi trường đi vào trong tế bào chất của tiểu cầu và là nơi đưa các chất được giải phóng từ các hạt ra khỏi tiểu cầu khi chúng bị hoạt hóa [7]

Khu sol-gel nằm dưới khu ngoại vi gồm các vi ống và vi sợi Vi ống nằm sát màng tiểu cầu tạo nên khung đỡ và tham gia vào hoạt động co rút khi tiểu cầu bị kích thích [52] Vi sợi gồm các sợi actin có liên hệ chặt chẽ với các vi ống và tham gia vào hoạt động tạo giả túc của tiểu cầu [52] Ngoài ra khu sol-gel còn chứa glycogen [28]

Khu bào quan gồm có các loại hạt và thành phần tế bào như các lysosom, ty thể… Những bào quan này tham gia vào quá trình trao đổi chất, là nơi dự trữ enzym và một lượng lớn các chất khác có vai trò quan trọng với chức năng tiểu cầu [18,

23] Hạt đặc chứa một số chất như ADP, ATP, GDP, GTP, serotonin, histamin, canxi, magie, pyrophosphat, nucleotid khác Các chất này được giải phóng khi tiểu cầu bị kích thích [18] Hạt γ-gamma (Túi lysosome) chứa enzym như galactosidase, fucosidase, hexosaminidase, glucuronidase Hạt α chứa nhiều protein dính như fibrin, fibronectin, vWF, thrombospondin, thromboglobulin, vitronectin; Yếu tố phát triển (platelet derived growth factor - PDGF); Peptid hoạt hóa tổ chức liên kết (CTAP: connective tissue activating peptid); Yếu tố 4 tiểu cầu; Yếu tố đông máu: yếu tố V, kininogen, fibrinogen, yếu tố XI, protein S, chất ức chế yếu tố hoạt hóa plasminogen Hạt λ: làm tan cục máu đông trong giai đoạn sau của sự hồi phục mạch [18, 37]

Khu vực màng gồm hệ thống ống dày đặc gắn với canxi một cách chọn lọc, đóng vai trò là nơi dự trữ canxi của tiểu cầu Đây cũng là nơi tổng hợp men cyclooxygenase và prostaglandin của tiểu cầu [52]

Hình 1.4 Cấu trúc của tiểu cầu [29]

Chức năng chính của tiểu cầu là làm vững bền mạch máu, tạo nút cầm máu ban đầu và tham gia vào quá trình đông máu huyết tương [17, 29]

1.2.2.1 Vai trò của tiểu cầu trong quá trình cầm máu

Trong trạng thái sinh lý bình thường, tiểu cầu không dính vào nội mô mạch máu còn nguyên vẹn, khi khi tế bào nội mô thành mạch bị tổn thương tiểu cầu nhanh chóng trải qua các quá trình thông qua một loạt các phản ứng phối hợp tinh xảo, mà kết quả cuối cùng là hình thành một nút tiểu cầu tại nơi mô tổn thương

Quá trình chuyển đổi tiểu cầu bất hoạt thành tiểu cầu hoạt hóa xảy ra theo một chiều dọc liên tục nhưng có thể được chia thành các bước: bám dính, kết tập, phóng thích các chất [7, 18, 23, 35]

Tiểu cầu dính vào các bề mặt lạ những tổ chức dưới nội mạc bộc lộ khi mạch máu bị tổn thương (in vivo) hoặc bề mặt ống nghiệm thủy tinh, lam kính (in vitro) [17]

Trong thành mạch khỏe mạnh, tiểu cầu được duy trì ở trạng thái không hoạt động bởi oxid nitric và prostacyclin từ tế bào nội mô các mạch máu Tế bào nội mô còn chứa ADPase (adenosin diphosphatase) có tác dụng kìm hãm quá trình kích hoạt ADP Khi thành mạch bị tổn thương, lớp tế bào nội mô bị mất đi và bộc lộ lớp dưới nội mô, lớp này có bản chất là các protein dính như: collagen, yếu tố von Willebrand, fibronectin, lamilin…[7, 41, 52] Yếu tố vWF tạo điều kiện cho sự bám dính ban đầu, thông qua liên kết với phức hợp GPIb/IX/V đóng vai trò thụ thể trên

Copyright © School of Medicine and Pharmacy, VNU màng tiểu cầu, vWF đóng vai trò quan trọng trong bám dính của tiểu cầu khi tốc độ dòng máu cao Trong điều kiện tốc độ dòng máu thấp hoặc tĩnh, bám dính ban đầu của tiểu cầu chủ yếu thông qua liên kết collagen với GPIa/IIa Những tương tác này cho phép tiểu cầu lưu thông chậm lại đủ để có sự tương tác, ràng buộc hơn nữa của các cặp thụ thể - phối tử dẫn đến sự bám dính tĩnh [7, 35] Đặc biệt sự tương tác ban đầu giữa collagen và GPVI gây ra sự kích hoạt GPIIb/IIIa và GPIa/IIa vWF và collagen hình thành liên kết mạnh mẽ tương ứng với GPIIb/IIIa và GPIa/IIa, fibrinogen liên kết với GPIIb/IIIa giữ tiểu cầu tại chỗ [7, 12]

Là hiện tượng tiểu cầu tập trung thành nút qua hiện tượng dính Hiện tượng dính đã hoạt hóa tiểu cầu, tạo điều kiện cho tiểu cầu ngưng tập [18] Ngưng tập tiểu cầu được đặc trưng bởi sự tích tụ tiểu cầu vào một nút cầm máu Các thụ thể tiểu cầu trung tâm trong quá trình này là GPIIb/IIIa, liên kết các tiểu cầu kích hoạt thông qua cầu fibrinogen Một tiểu cầu không hoạt hóa có khoảng 4.000-5.000 phức hợp GPIIb/IIIa trên bề mặt của nó Trong trạng thái không hoạt động, thụ thể này không thể gắn với fibrinogen, vWF, TSP, fibronectin, vitronectin Chỉ khi tiểu cầu được hoạt hóa, phức hợp GPIIb/IIIa mới được hoạt hóa, hoạt động như một thụ thể dành cho fibrinogen, chất này lại gắn với thụ thể trên các tiểu cầu khác tạo nên một cầu nối làm cho các tiểu cầu ngưng tập lại với nhau và tiếp tục hoạt hóa Hai giai đoạn ngưng tập và hoạt hóa tác động qua lại, tương hỗ lẫn nhau diễn ra liên tục cho đến khi tạo thành nút tiểu cầu [7, 29, 35]

Các xét nghiệm đánh giá chức năng tiểu cầu

Hiện nay, có rất nhiều phương pháp đánh giá chức năng tiểu cầu như: đo thời gian máu chảy, đo sức bền mao mạch, đếm số lượng tiểu cầu, co cục máu đông, đo độ dính tiểu cầu, đo độ ngưng tập tiểu cầu

Nguyên lý là khi mạch máu bị tổn thương, máu sẽ thoát ra ngoài, đồng thời hệ thống cầm máu bắt đầu hoạt động Hoạt động cầm máu gồm vai trò của thành mạch và của tiểu cầu Chất lượng của hoạt động này không tốt sẽ làm cho thời gian để cầm được máu dài hơn Xét nghiệm thời gian máu chảy là tạo ra tổn thương mạch máu và đo thời gian từ lúc máu chảy đến khi máu ngừng chảy [16]

Nguyên lý của phương pháp Duke là dùng kim chủng tạo một vết thương nằm ngang ở vùng giữa dái tai và đo thời gian máu chảy [12] Trị số bình thường từ

Nguyên lý của phương pháp Ivy là đo thời gian máu chảy của các vết thương ở mặt duỗi cẳng tay, dưới 1 áp suất đã định [12] Trị số bình thường: 4-8 phút [12, 23]

Phương pháp Borchgrevink có trị số bình thường từ 7-10 phút [23]

1.3.2 Đo sức bền mao mạch

Có 2 phương pháp, nhưng phương pháp giảm áp ít dùng hơn phương pháp tăng áp: dùng huyết áp kế, duy trì lực bằng trung bình cộng giữa huyết áp tối đa và tối thiểu trong vòng 10 phút sau đó tháo hơi nhanh Đếm số nốt xuất huyết ngay dưới vùng dưới da nếp khuỷu Nếu trên 7 nốt xuất huyết là dương tính Sức bền

Copyright © School of Medicine and Pharmacy, VNU mao mạch giảm gặp trong một số bệnh lý: Giảm tiểu cầu, viêm thành mạch dị ứng, viêm thành mạch do độc tố Trong bệnh von-Willebrand, bệnh rối loạn chức năng tiểu cầu Ngoài ra còn có thể gặp ở người già, thiếu vitamin C, do thể tạng hoặc có tính gia đình [16, 23]

1.3.3 Đếm số lượng tiểu cầu

Có rất nhiều phương pháp đếm tiểu cầu, nhưng phổ biến nhất hiện nay ở các bệnh viện là đếm tiểu cầu bằng máy dựa trên nguyên lý trở kháng hoặc laser Trị số bình thường của tiểu cầu là 150.000 - 300.000/mm 3 Số lượng tiểu cầu giảm gặp trong: xuất huyết do giảm tiểu cầu có nguyên nhân miễn dịch, suy tuỷ xương, leucemie cấp, sốt xuất huyết Số lượng tiểu cầu tăng gặp trong: tăng tiểu cầu tiên phát, leucemie kinh dòng hạt, đa hồng cầu tiên phát [16, 23]

1.3.4 Quan sát hình thái và độ tập trung của tiểu cầu trên tiêu bản nhuộm Giêmsa

Rất cần thiết phải làm đặc biệt ở các trường hợp nghi ngờ bệnh lý tiểu cầu

Bình thường tiểu cầu bắt màu đỏ tím, không có nhân nhưng có các hạt màu đỏ và đứng thành cụm nếu máu chưa qua chống đông Độ tập trung tiểu cầu tăng trong: tăng tiểu cầu tiên phát, leucemie kinh dòng hạt, đa hồng cầu tiên phát Độ tập trung tiểu cầu giảm gặp trong: Suy tuỷ xương, leucemie cấp [16, 23]

Có nhiều phương pháp khác nhau, tuy nhiên trong lâm sàng thường dùng kỹ thuật của Budtz-Olzen Đây là xét nghiệm đơn giản nhưng khá đặc hiệu Đánh giá sự co cục máu bằng cách quan sát cục máu đông sau 2 giờ Nguyên lý của phương pháp: máu ra khỏi thành mạch sẽ bị đông, máu đông là máu chuyển thành dạng rắn nhờ hình thành các sợi fibrin Mạng lưới sợi fibrin ôm lấy các thành phần hữu hình rồi co rút lại tạo nên cục máu đông tách rời khỏi phần huyết thanh Cục máu đông co được là nhờ vai trò của tiểu cầu và của fibrin [16, 23] Cục máu co hoàn toàn: phản ảnh tình trạng bình thường của fibrrinogen và tiểu cầu (cả số lượng và chất lượng) Cục máu không co (không tạo thành cục máu tách riêng rõ ràng với huyết thanh) hay cục máu co không hoàn toàn (phần huyết thanh tách ra ít dưới 30% máu) hoặc co cục máu nhưng còn nhiều hồng cầu tự do trong huyết thanh) là thể hiện bất thường của tiểu cầu (số lượng hoặc chất lượng) và/hoặc các fibrrinogen Mức độ bất thường càng nặng thì cục máu càng không co

Xét nghiệm co cục máu phụ thuộc vào số lượng và chất lượng tiểu cầu, lượng fibrinogen, yếu tố VIII và hematocrit [16, 23]

1.3.6 Đo độ dính tiểu cầu

Trên in vivo sử dụng phương pháp Borchrevink Nguyên lý là đo độ dính tiểu cầu qua việc lấy máu để đếm tiểu cầu trực tiếp tại vết thương vào các thời điểm cách đều nhau Trị số bình thường: 20-40 % Trên in vitro có 3 phương pháp (phương pháp Salzman, Bowie, Hellem) Nguyên lý là đo độ dính tiểu cầu sau khi cho máu hoặc huyết tương qua cột bi thủy tinh [23] Độ dính tiểu cầu giảm trong: bệnh Von – Willebrand, trong một số bệnh lý rối loạn chức năng tiểu cầu, dùng một số thuốc giảm đau, sau truyền Dextran Độ dính tiểu cầu tăng trong: bệnh lý huyết khối, tiểu đường, hút thuốc lá, cũng có thể gặp trong những trường hợp sau mỗ, sau sinh, sau một sang chấn nào đó (đặc biệt sau cắt lách, …) [23]

1.3.7 Đo độ ngưng tập tiểu cầu

Có rất nhiều kỹ thuật để đo độ ngưng tập tiểu cầu nhưng chủ yếu dựa trên nguyên lý sau: Mật độ quang của huyết tương giàu tiểu cầu tỷ lệ thuận với nồng độ của tiểu cầu có trong huyết tương đó Bởi vậy khi cho thêm một chất gây ngưng tập tiểu cầu nào đó (ADP, adrenalin) vào dung dịch huyết tương giàu tiểu cầu, hiện tượng ngưng tập tiểu cầu sẽ xãy ra Nồng độ tiểu cầu dưới dạng những phân tử riêng biệt sẽ giảm dẫn đến mật độ quang học tăng Ghi nhận một số hình ảnh của quá trình thay đổi của mật độ quang sẽ biết được đặc điểm của quá trình ngưng tập tiểu cầu [2, 3, 23, 50]

Hình 1.7 Nguyên lí của xét nghiệm đo độ ngưng tập tiểu cầu

(PPP: huyết tương nghèo tiểu cầu, PRP: huyết tương giàu tiểu cầu)

Nguyên lý của phương pháp đo quang: thiết bị đo độ ngưng tập tiểu cầu bằng phương pháp quang học là một quang phổ kế có bước sóng thích hợp cố định Một chùm tia ánh sáng đỏ chiếu qua một ống chứa huyết tương giàu tiểu cầu và một chùm tia khác chiếu qua một ống chứa huyết tương nghèo tiểu cầu Khi đo, sử dụng một mẫu huyết tương giàu tiểu cầu của mẫu máu cần đo để thiết lập điểm chuẩn ở đó ánh sáng bị cản hoàn toàn và độ dẫn truyền ánh sáng là 0 % Đồng thời sử dụng huyết tương nghèo tiểu cầu của cùng mẫu máu để thiết lập điểm chuẩn ở đó ánh sáng đi qua hoàn toàn và độ dẫn truyền ánh sáng là 100 % Khi cho chất kết tập như ADP, collagen, thrombin, epinephrin, acid arachidonic, ristocetin vào huyết tương giầu tiểu cầu sẽ xẩy ra hiện tượng các tiểu cầu ngưng tập với nhau tạo thành đám vì vậy độ dẫn truyền ánh sáng sẽ tăng lên Độ dẫn truyền ánh sáng phản ánh mức độ ngưng tập tiểu cầu Kết quả được thể hiện bằng % độ dẫn truyền ánh sáng của huyết tương giàu tiểu cầu trong đó tiểu cầu đã ngưng tập tối đa [24, 37, 50, 51].

Các thuốc kháng tiểu cầu

Tiểu cầu có vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh huyết khối Trong nhiều bệnh lý, sự hoạt hóa tiểu cầu bao gồm: hiện tượng dính, ngưng tập, phóng thích ra các yếu tố/thành phần nội tiểu cầu… đó là những cơ sở sinh lý, sinh hóa và cơ học quyết định cho sự hình thành huyết khối Bởi vậy, hiện nay liệu pháp kháng tiểu cầu ngày càng được quan tâm đúng mức hơn trong việc điều trị dự phòng và chống sự hình thành huyết khối [23] Thuốc kháng tiểu cầu là thuốc ức chế quá trình kết dính, hoạt hóa, ngưng tập, nhằm ngăn ngừa, hạn chế tắc mạch [18] Điều trị chống ngưng tập tiểu cầu có thể tấn công lên các mục tiêu trên con đường của quá trình ngưng tập tiểu cầu [26] Hiện nay có nhiều thuốc kháng tiểu cầu với cơ chế khác nhau được sử dụng như: Aspirin, Ticlopidin, Clopidogrel, Prasugrel…

1.4.1 Nhóm ức chế men Cyclo-oxygenase: Aspirin

Aspirin được coi là thuốc kháng tiểu cầu hàng đầu và được sử dụng rộng rãi

Cơ chế tác dụng: Aspirin ức chế men cyclooxygenase 1 (COX-1) dẫn đến ngăn cản sự tạo thành Thromboxan A2 (TXA2), nhờ đó mà ức chế ngưng tập tiểu cầu Sự ức chế này là rất mạnh và tồn tại suốt đời sống tiểu cầu đó, vì tiểu cầu không thể tổng hợp thêm men mới được nữa Bên cạnh đó, Aspirin cũng ức chế sự tổng hợp chất prostaglandin kháng đông, là PGI2 của tế bào nội mạc mạc thông qua việc ức chế men prostacyclin synthetase, do đó gián tiếp kích thích NTTC Tuy nhiên tác dụng này không mạnh bằng tác dụng ức chế men cyclooxygenase và tác dụng này cũng không kéo dài vì tế bào nội mạc có thể tổng hợp ra men mới [22, 23] Aspirin có thể ức chế ngưng tập tiểu cầu với các chất kết tập như collagen, ADP, epinephrin

1.4.2 Nhóm ức chế ADP Receptor (nhóm Thienopyridin)

Ticlopidin: cơ chế tác dụng ức chế NTTC của Ticlopidin là do Ticlopidin tưong tác với glycoprtein IIb/IIIa receptor của fibrinogen làm ức chế sự gắn fibrinogen vào tiểu cầu hoạt hóa, ngăn cản sự kết dính tiểu cầu Ngoài ra, thuốc còn làm tăng prostaglandin D2 và E2 góp phần chống đông vón tiểu cầu và tăng thời gian chảy máu [1, 22] Ngày nay Ticlopidine ít sử dụng hơn vì có một số tác du ̣ng phụ quan trọng như giảm ba ̣ch cầu ha ̣t (có thể gây tử vong), suy tủy và tắc mâ ̣t.

Clopidogrel: bản thân Clopidogrel là tiền thuốc không có hoa ̣t tính kháng tiểu cầu Sau khi được hấp thu ở ruô ̣t, khoảng 85 % lượng thuốc hấp thu được chuyển hó a bởi các enzym esterase thành những chất không có hoa ̣t tính và 15% được chuyển hóa bởi hê ̣ enzym cytochrome P-450 (hai bước) ở gan thành chất có hoạt tính ức chế thu ̣ thể P2Y12 trên bề mă ̣t tiểu cầu, làm ADP không gắn được vào thụ thể của nó dẫn tới không hoa ̣t hoá được tiểu [1, 22, 39].

Prasugrel: là thuốc mới nhất thuô ̣c nhóm Thienopyridin Sau khi vào ống tiêu hóa, prasugrel bi ̣ thủy phân nhanh chóng bởi esterase trong ruô ̣t và máu thành chất chuyển hóa trung gian Chất này la ̣i được biến thành chất chuyển hóa có hoa ̣t tính bởi enzym cytochrome P450 (mô ̣t bước), chất chuyển hóa có hoa ̣t tính của prasugrel ứ c chế không hồi phu ̣c thu ̣ thể P2Y12 của tiểu cầu Như vậy Prasugrel khắc phục được nhược điểm của Clopidogrel nên Prasugrel có tác du ̣ng ức chế kết tập tiểu cầu ma ̣nh hơn, nhanh hơn và ổn đi ̣nh hơn so với clopidogrel [1].

Thuốc ứ c chế P2Y12 không thuô ̣c nhóm thienopyridin Ức chế trực tiếp có hồi phu ̣c thu ̣ thể P2Y12 của tiểu cầu Đây là thuốc đầy triển vọng qua nghiên cứu PLATO (Study of Platelet Inhibition and Patient Outcomes) [1]

1.4.3 Cá c thuốc ức chế thụ thể Glycoprotein IIb/IIIa của tiểu cầu

Abciximab, Eptifibati và Tirofiban Các thuốc này ức chế glycoprotein IIb/IIIa sẽ ức chế những liên kết chéo bằng fibrin giữa các tiểu cầu do đó ức chế hình thành huyết khối [1, 22]

1.4.4 Thuốc làm tăng AMP vòng tiểu cầu

Dipyridamol: Ức chế sự vỡ ra của AMP vòng do phosphodiesterase do đó là tăng nồng độ APM vòng, ngăn cản sự ngưng tập, phóng xuất và kết dính tiểu cầu[1,

22] Thuốc có tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu nhưng không làm kéo dài thời gian chảy máu [23]

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nguyên liệu và đối tượng nghiên cứu

Mẫu Sâm vũ diệp toàn cây tươi thu hái ở Sa Pa – Lào Cai vào tháng 3 năm

2016 được giám định tên khoa học là Sâm vũ diệp - Panax bipinnatifidus Seem bởi chuyên gia thực vật học, Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu Phần dưới mặt đất được rửa sạch, thái lát mỏng, sấy khô ở 40-50 °C đạt độ ẩm dưới 10 %, xay nhỏ và bảo quản trong túi nilon Mẫu được giám định tên khoa học là Sâm vũ diệp sau khi được sơ chế, làm khô, xay nhỏ được chiết bằng EtOH 50 % với tỷ lệ dung môi : dược liệu là 7:1, ở nhiệt độ 90 °C Chiết 2h/lần, 3 lần/mẻ Dịch chiết cồn 50 % thu được cô dưới áp suất giảm đến khi tạo thành cao lỏng (1:1)

Cao chiết toàn phần của Sâm vũ diệp còn nhiều tạp chất bao gồm các hợp chất ít phân cực, dầu béo và các thành phần saccarid tan trong nước Loại bỏ các tạp chất ít phân cực, thân dầu: dùng phương pháp chiết phân bố lỏng-lỏng với n-hexan theo tỷ lệ 1:1 qua 3 lần Cất loại thu hồi dung môi n-hexan để tái sử dụng Lớp nước sau chiết lỏng-lỏng chứa toàn lượng saponin đã được loại dầu béo và tạp chất thân dầu Loại bỏ các thành phần saccarid tan trong nước: sử dụng sắc ký hấp phụ bằng resin diaion HP-20, rửa giải bằng EtOH 96 %

Dịch sau loại tạp được cất thu hồi dung môi dưới áp xuất giảm đến cao đặc, đem sấy chân không tại 55-60 °C trong 24 giờ, sử dụng máy xay dược liệu, nghiền cao thành dạng bột, rây qua rây 355, thu được cao khô định chuẩn giàu saponin của Sâm vũ diệp, bảo quản trong túi nilon kín tại nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng Các phân đoạn chiết cao khô định chuẩn giàu saponin của Sâm vũ diệp được tiến hành tại bộ môn Hóa Dược và Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, do TS Nguyễn Hữu Tùng cung cấp (Hình 2.1) [27]

Hình 2.1 Sơ đồ qui trình chiết cao giàu saponin Sâm vũ diệp [27]

Mẫu toàn cây tươi Tam thất hoang thu hái ở Sa Pa - Lào Cai ngày 26 tháng

10 năm 2015 được giám định tên khoa học là Tam thất hoang- Panax stipuleanatus

H T Tsai et K M Feng Thân rễ Tam thất hoang rửa sạch, thái lát mỏng, sấy khô ở 40-50 °C đạt độ ẩm dưới 10 %, xay nhỏ, thu được bột thô

Bột thô Tam thất hoang chiết với EtOH 50 %, tỷ lệ dung môi : dược liệu là 10:1, ở nhiệt độ 90 °C, Chiết 1h/lần, 3 lần/mẻ Dịch chiết cồn 50 % thu được, được cô dưới áp suất giảm, tạo cao lỏng (1:20)

Quá trình loại tạp được áp dụng phương pháp chiết lỏng-rắn sử dụng nhựa hấp phụ D101, rửa giải bằng EtOH 80 % Thu dịch rửa giải EtOH 80 %, cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm đến cao đặc, đem sấy chân không tại 55-60°C trong 24 giờ, sử dụng máy xay dược liệu, nghiền cao thành dạng bột, rây qua rây 355, thu được cao tam thất hoang, bảo quản trong túi nilon kín tại nhiệt độ phòng Các quy

Hình 2.2 Sơ đồ qui trình chiết cao giàu saponin Tam thất hoang [8]

Vật liệu nghiên cứu: xylanh 10 mL, 20 mL, kim lấy máu 20 G, ống nghiệm chống đông citrate, ống nghiệm sạch, ống đo mẫu, viên khuấy từ, đầu côn, micropipet, găng tay, máy ly tâm, máy đo độ ngưng tập tiểu cầu chronolog, ADP, dung môi (DMSO - Dimethyl sulfoxide), thuốc thử (cao dược liệu), thuốc chứng dương (aspirin – Aspegic 100mg)

Bột thô tam thất hoang

Cô dưới áp suất giảm

- Cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm

- Sấy chân không tại 55-60 o C, 24 h Kiểm tra TLC Đóng gói Tiêu chuẩn kiểm nghiệm cơ sở

Sau khi được sự đồng ý và chấp thuận của hội đồng đạo đức chúng tôi đã tiến hành thu thập máu lấy từ người tình nguyện khỏe mạnh Tuân thủ theo tuyên bố Helsinki về đạo đức nghiên cứu với đối tượng nghiên cứu là con người Người tham gia nghiên cứu cần được biết về lý do, mục đích của nghiên cứu, các lợi ích, cũng như rủi ro của nghiên cứu, và ký đồng thuận tham gia nghiên cứu Người tình nguyện đáp ứng tiêu chuẩn lựa chọn và loại trừ sau:

Tiêu chuẩn lựa chọn: người tình nguyện khoẻ mạnh, 20-25 tuổi, không hút thuốc lá, không có tiền sử các bệnh về máu, không đang sử dụng các thuốc tác dụng trên quá trình đông máu, tiêu fibrin

Tiêu chuẩn loại trừ: có bất thường về số lượng tiểu cầu tại thời điểm nghiên cứu, mẫu máu thu nhận bị vỡ hồng cầu, ngườ i mới cho máu với lượng > 450 mL trong vòng 28 ngày trước

Tất cả các nghiên cứu được thực hiện vào buổi sáng với các tình nguyện viên nhịn ăn 12 giờ trước khi lấy máu Máu tĩnh mạch toàn phần được lấy bằng kim tiêm cỡ 20 gauge.

Phương pháp nghiên cứu

Sử dụng phương pháp đo độ đục của Born: đo độ ngưng tập tiểu cầu trên máy Chrono - Log CA - 560 của Mỹ [34]

Lấy 10-15 ml máu tĩnh mạch toàn phần từ người tình nguyện khỏe mạnh chống đông bằng natri citrate 3,8 % (1:10); người tình nguyện phải nhịn ăn 12 giờ trước khi lấy máu, có số lượng tiểu cầu từ 200-400 G/L, hematocrit bình thường

Lắc đều để đảm bảo máu được chống đông hoàn toàn Ly tâm ở tốc độ 500 vòng trong 10 phút, lấy phần nổi là huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) cho vào ống falcon vô khuẩn có nút và giữ ở nhiệt độ phòng Sau đó, ly tâm số huyết tương còn lại ở tốc độ cao 3000 vòng trong 10 phút, được huyết tương nghèo tiểu cầu (PPP)

Pha Stock cao chiết giàu saponin của Tam thất hoang và Sâm vũ diệp nồng độ 200 mg/mL trong DMSO 10 %, Cao chiết phân đoạn giàu saponin của Tam thất hoang và Sâm vũ diệp ở các phân đoạn được hoà tan trong dung môi DMSO, sau đó được pha loãng trong nước muối sinh lý để đạt nồng độ cuối cùng trong dung dịch nghiên cứu là 0,1; 0,2; 0,4; 0,8 và 1,6 mg/mL Dùng DMSO 0,1

% làm chứng âm Nghiên cứu thăm dò từ giai đoạn trước của Lê Thị Tâm năm

2017 đã lần lượt thử Aspirin với các liều 0,25 mg/mL, 0,5 mg/mL, 0,75 mg/mL, 1 mg/mL thì nhận thấy với liều 1 mg/mL cho tác dụng tối ưu và đạt được mức ức chế kết tập tiểu cầu như mong muốn Chính vì vậy, chúng tôi đã chọn liều này làm liều chứng dương

Tiến hành đo mẫu trên máy Chrono - Log CA – 560

Cho 450 àl huyết tương nghốo tiểu cầu (PPP) + 50 àl DMSO 0,1 % vào cuvet thuỷ tinh khụng chứa bi khuấy từ Chia lần lượt 450 àl huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) vào cuvet thuỷ tinh chứa bi khuấy từ Thờm lần lượt vào mỗi cuvet 50 àl hóa chất gồm DMSO 0,1 %, Aspirin (1 mg/mL), các phân đoạn giàu saponin của Sâm vũ diệp hoặc Tam thất hoang với các nồng độ: 0,1; 0,2; 0,4; 0,8; 1,6 mg/mL Ủ trong 5 phút ở 37 °C Nhấc ống vào vị trí đo (01 ống nghèo tiểu cầu, 01 ống giàu tiểu cầu vào các vị trí tương ứng trên máy) Cho 5 l chất kết tập ADP vào ống giàu tiểu cầu Chờ máy chạy và đo mẫu tự động, đọc và ghi lại kết quả gồm: phần trăm NTTC tối đa (MPA), tốc độ thay đổi ngưng tập trong 1 phút được biểu diễn thông qua chỉ số Slope, diện tích dưới đường cong được biểu diễn dưới dạng AUC (Area under the aggregation curve) Lặp lại thí nghiệm 7 lần ở mỗi nồng độ Quy trình thí nghiệm được thể hiện trong hình 2.3

Hình 2.3 Qui trình đo độ ngưng tập tiểu cầu

Ngưng tập tiểu cầu trên in vitro với chất kết tập ADP

Hình 2.4 Đồ thị ngưng tập tiểu cầu trên in vitro với chất kết tập ADP

Sử dụng chất kết tập ADP 5 àL: ADP bỏm vào receptor ADP trờn bề mặt tiểu cầu, làm giải phóng Canxi nội bào, kích thích giải phóng acid arachidonic từ màng phospholipid; dẫn tới thay đổi hình dạng tiểu cầu từ hình đĩa sang dạng hình cầu gai, tạo đáp ứng nguyên phát, sau đó có đáp ứng thứ phát bởi việc giải phóng hạt đặc thông qua hệ thống kênh mở (chất adenine nucleotide, serotonin, thromboxan được chứa trong hạt đặc của tiểu cầu) Đáp ứng này được gọi là sóng ngưng tập nguyên phát và thứ phát [5, 6, 37, 50] Qúa trình này được chia thành 5 giai đoạn:

1- Trước khi đưa chất kết tập ADP vào cuvet

2- Chất kết tập được thêm vào, đồ thì dạng đỉnh nhọn

3- Ánh sáng truyền qua cuvet giảm, tiểu cầu thay đổi hình dạng (kết quả của việc ADP bám vào tiểu cầu)

4- Tăng ánh sáng truyền qua cuvet, tạo sóng ngưng tập nguyên phát

5- Nếu kích thích không đủ mạnh, tiểu cầu sẽ không ngưng tập được (dữ liệu không hiển thị được) Nếu đủ mạnh, sẽ taọ sóng ngưng tập thứ phát của ADP – ngưng tập tăng lên Sự uốn cong nhẹ ở cuối giai đoạn 4 (mũi tên) cho

Copyright © School of Medicine and Pharmacy, VNU thấy sự khởi đầu của sóng ngưng tập thứ phát; giải phóng 1 số thành phần trong tiểu cầu như: fibrinogen, serotonin, thromboxan và ADP, làm tăng đáp ứng ngưng tập [37, 50]

Các thông số nghiên cứu

Phần trăm ngưng tập tiểu cầu tối đa (Maximum platelet aggregation – MPA) được biểu diễn qua chỉ số Amplitude Độ ngưng tập tiểu của các mẫu thử và mẫu chứng dương được chuẩn hóa theo độ ngưng tập tiểu cầu của DMSO: coi độ ngưng tập tiểu cầu tối đa (MPA) của DMSO là 100 %, MPA (%) của Aspirin và cao giàu Tam thất hoang và Sâm vũ diệp ở các nồng độ được tính theo công thức:

Bên cạnh độ ngưng tập tiểu cầu tối đa MPA, thì tốc độ thay đổi trong một phút (Slope) cũng là một chỉ số được quan tâm nhằm đánh giá giai đoạn đầu của quá trình ngưng tập, giai đoạn tiểu cầu được hoạt hóa Slope được xác định bằng cách vẽ một đường tiếp tuyến với đường ngưng tập sau giai đoạn tiểu cầu biến dạng (giai đoạn 4) [37, 50]

Mức độ NTTC được thể hiện thông qua chỉ số diện tích dưới đường cong (Area under the aggregation curve – AUC) tính từ thời điểm sau khi tiểu cầu biến

Copyright © School of Medicine and Pharmacy, VNU thuộc vào cả tốc độ thay đổi ngưng tập (slope) và phần trăm ngưng tập tối đa (giai đoạn 4, 5) [30, 39] Hiện nay, ba chỉ số này luôn được các nhà lâm sàng quan tâm trong việc đánh giá chức năng tiểu cầu của người bệnh, và rất có giá trị trong phân loại các dạng bệnh lý tiểu cầu

Hình 2.6 Chỉ số diện tích dưới đường cong - AUC Phương pháp phân tích số liệu

Số liệu được xử lý thống kê bằng phần mềm SPSS 20.0 Kết quả được biểu diễn dưới dạng X ± SE (X: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình giữa các lô bằng Test one-way ANOVA, dùng hậu kiểm Tukey hoặc Dunnett’T3 để so sánh giá trị trung bình của từng lô Sự khác biệt giữa các lô được coi là có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Kết quả

3.1.1 Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu của Sâm vũ diệp

3.1.1.1 Ảnh hưởng của cao giàu saponin Sâm vũ diệp lên mức độ ngưng tập tiểu cầu (Area under the aggregation curve – AUC)

Bảng 3.1 Mức độ ngưng tập tiểu cầu (AUC) của cao giàu saponin Sâm vũ diệp

Lô Thuốc dùng N AUC P so với lô dùng DMSO

P so với lô dùng Aspirin

Nhận xét: cao giàu saponin Sâm vũ diệp ở tất cả các mức liều đều không làm thay đổi mức độ ngưng tập tiểu cầu (AUC) một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng Tuy nhiên, dựa vào kết quả bảng 3.1, có thể thấy Sâm vũ diệp mức liều 0,8 mg/mL và 1,6 mg/mL (AUC tương ứng là 213,78±21,50; 145,93±12,76) làm giảm mức độ NTTC so với lô chứng DMSO (AUC là 255,05±20,90)

3.1.1.2 Ảnh hưởng của cao giàu saponin Sâm vũ diệp đến phần trăm ngưng tập tiểu cầu tối đa (Maximum platelet aggregation - MPA)

Bảng 3.2 Phần trăm ngưng tập tiểu cầu tối đa của cao giàu saponin Sâm vũ diệp

Lô Thuốc dùng N MPA (%) P so với lô dùng DMSO

Nhận xét: kết quả ở bảng 3.2 cho thấy nồng độ 0,8 và 1,6 mg/mL của cao giàu saponin của Sâm vũ diệp có tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu một cách rõ rệt so với lô chứng DMSO (p0,05)

3.1.1.4 Đồ thị ngưng tập tiểu cầu của Sâm vũ diệp

Phần trăm NTTC tối đa (Maximum platelet aggregation -

Phần trăm NTTC điểm cuối (Final platelet aggregation -

Hình 3.1 Đồ thị ngưng tập tiểu cầu của cao giàu saponin Sâm vũ diệp

(A: DMSO; B: Aspirin 1 mg/mL; C: Sâm vũ diệp 0,1 mg/mL; D: Sâm vũ diệp 0,2 mg/mL;

E: Sâm vũ diệp 0,4 mg/mL; F: Sâm vũ diệp 0,8 mg/mL; G: Sâm vũ diệp 1,6 mg/mL)

Nhận xét: Từ hình 3.1 cho thấy, cao giàu saponin của Sâm vũ diệp ở mức liều 0,8 mg/mL có tác dụng làm giảm tỷ lệ ngưng tập điểm cuối tương đương với Aspirin 1 mg/mL, mức liều 1,6 mg/mL có tác dụng giảm tỷ lệ ngưng tập điểm cuối mạnh hơn chứng dương Aspirin 1 mg/mL, lô chứng âm DMSO không có tác dụng đó Tiểu cầu sau khi ngưng tập tối đa, có xu hướng phục hồi Có nghĩa là sau khi kết tập một thời gian (5 phút) thì Aspirin, phân đoạn cao giàu saponin của Sâm vũ diệp có xu hướng phân rã ngưng tập, độ ngưng tập tiểu cầu tiếp tục giảm, thể hiện ở xu hướng đi lên ở phía cuối đồ thị ngưng tập

3.1.2 Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu của Tam thất hoang

3.1.2.1 Ảnh hưởng của cao giàu saponin Tam thất hoang lên mức độ ngưng tập tiểu cầu (Area under the aggregation curve – AUC)

Bảng 3.4 Mức độ ngưng tập tiểu cầu (AUC) của cao giàu saponin Tam thất hoang

Lô Thuốc dùng N AUC P so với lô dùng DMSO

Nhận xét: Cao giàu saponin của Tam thất hoang ở mức liều 0,8 và 1,6 mg/mL làm giảm mức độ ngưng tập tiểu cầu một cách rõ rệt so với lô chứng DMSO Trong đó, mức liều 1,6 mg/mL còn có hiệu quả làm giảm mức độ ngưng tập tiểu cầu mạnh hơn Aspirin (p

Định dạng
Số trang	48
Dung lượng	2,44 MB