Mô hình đánh giá hoạt tính chống béo phì liên quan đến enzyme lipase của cây acacia mearnsii (keo đen mearnsii)

Nội dung: In vitro Tổng quan • • Tình hình bệnh Béo phì tác hại Mơ hình khảo sát Kết • • In vivo Cơ chế - biện pháp • • • Enzym lipase Cơ chế gây bệnh Biện pháp • • Mơ hình khảo sát Kết 01 TỔNG QUAN • • Tình hình bệnh Béo phì tác hại 4.000.000 ca tử vong Thứ nguy tử vong tồn giới Tình hình bệnh 2.000.000.000 người thừa cân/ béo phì Tỷ lệ thừa cân / béo phì theo mức thu nhập quốc gia a Quốc gia có mức thu nhập cao Tỷ lệ thừa cân / béo phì theo mức thu nhập quốc gia b Quốc gia có mức thu nhập thấp trung bình Tác hại bệnh Béo phì ➢ Gây vấn đề thẩm mỹ tâm sinh lý ➢ Nguy quan trọng dẫn đến bệnh nguy hiểm 02 CƠ CHẾ - BIỆN PHÁP ● ● ● Enzym lipase Cơ chế gây bệnh Biện pháp Điều trị bệnh Béo phì Thuốc ức chế lipase ngoại vi Thuốc ức chế thèm ăn trung ương Thuốc Chế độ ăn uống Tập thể dục Phẫu thuật Enzym Lipase Lipase liên kết este đặc biệt để thủy phân chất béo trung tính thành glycerol este, monoglyceride, glycerol axit béo Giới thiệu keo đen mearnsii Thành phần hóa học keo tannin ● ● ● Cây keo đen Mearnsii thuộc họ Fabaceae (họ đậu) Có nguồn gốc từ đông nam nước Úc Tasmania Vỏ có chứa lượng keo tannin tan nước đáng kể Robinethiol Fisetinidol Quy trình thí nghiệm 04 Chuẩn bị dung dịch mẫu 03 Tiến hành thí nghiệm 01 Chuẩn bị keo tannin Chuẩn bị dung dịch chất 02 Quy trình thí nghiệm Bước Chuẩn bị chiết xuất keo tannin - Bột vỏ keo đen mearnsii nghiền chiết xuất với nước nóng 100°C 30 phút -Sau làm khơ phương pháp sấy phun Quy trình thí nghiệm Bước Chuẩn bị dung dịch chất - Hỗn hợp huyền phù bao gồm: chất béo 9mL dung dịch đệm Tris 0.1M (pH = 7.0) đánh siêu âm 10 phút để hòa tan chất + 90 μmol triolein + 12.6 μmol lecithin + 9.45 μmol taurocholic acid Quy trình thí nghiệm Bước 3: Chuẩn bị dung dịch mẫu Chuẩn bị dung dịch chứa AP Orlistat theo nồng độ cho trước Final Concentration CF(Orlistat) (μg.mL-1) CF(AP) (mg.mL-1) 0.01 0.1 10 100 200 0.02 0.1 0.25 0.5 1.0 2.0 Mỗi bình đựng hịa tan với 0.1M đệm Tris (pH = 7.0) Quy trình thí nghiệm Bước 4: Tiến hành thí nghiệm - 50 μL lipase tuyến tụy (2 mg.mL-1 đệm Tris) Mix hỗn hợp - 100 μL dung dịch AP/Orlistat - 100 μL dung dịch chất - Ủ hỗn hợp t = 37°C 30 phút - Thêm mL chloroform-n-heptane (1:1) chứa 2% methanol chiết cách lắc phút Quy trình thí nghiệm Hỗn hợp ly tâm phút sau tạo thành pha: Được loại bỏ cách hút Thêm tác chất đồng (700 μL) lắc phút ly tâm với gia tốc quay 1000g phút Lấy 0.5mL pha hữu (chứa muối đồng axit béo chiết được) tác dụng với 0.5 mL dung dịch bathocuproine 0.1% chloroform có chứa 0.05% 3-(2)tert-butyl-4-hydroxyanisol (BHA) Đo bước sóng 490nm sử dụng thiết bị U – 2800 spectrophotometer Kết quả: Khả ức chế enzyme lipase AP • Orlistat có khả ức chế enzyme lipase mạnh với IC50 = 0.85 μg.ml -1 • AP có ức chế enzyme lipase với IC50 = 0.95 mg.ml -1 • Tuy nhiên yếu rõ rệt so với orlistat Inhibitory effects of AP (filled circle) or orlistat (open circle) on pancreatic lipase.The inhibitory activity of AP or orlistat on pancreatic lipase was measured as described in Methods section Data represent means ± SD (n = 4) 04 In Vivo • • Quy trình Kết Chuột ICR o Giữ nhiệt độ phòng (22 ± ° C), độ ẩm 55 ± 10%, với chu kỳ sáng / tối 12 (chiếu sáng nhân tạo: 08: 00–20: 00 giờ) o Thích nghi tuần trước thí nghiệm Đánh giá khả hấp thu lipid chuột ICR - Chuột không cho ăn 18 trước thử nghiệm - nhóm: I Chuột bình thường Uống nước cất II Chuột bệnh ml.kg-1 dầu ô liu III Chuột bệnh điều trị ml.kg-1 dầu ô liu + 0.25 g.kg-1 AP IV Chuột bệnh điều trị ml.kg-1 dầu ô liu + 0.5 g.kg-1 AP V Chuột bệnh điều trị ml.kg-1 dầu ô liu + 1.0 g.kg-1 AP Đánh giá khả giảm nồng độ chất béo AP chuột ICR - Lấy 60 μL mẫu máu từ mắt chuột thời điểm uống sau uống 1.5, 3, 4.5 - Thu thập máu ống mao dẫn phủ heparin Ly tâm (1000 g phút) Đông lạnh –80 ° C thử nghiệm Xét nghiệm Triglyceride Kết quả: Nhóm chuột bình thường Nhóm bệnh Nhóm 0.25 g.kg-1 AP Nhóm 0.5 g.kg-1 AP Nhóm 1.0 g.kg-1 AP (a) Mơ tả nồng độ triglycerid huyết tương o Mơ hình gây tăng lượng chất béo máu thành công o AP ức chế gia tăng nồng độ chất béo huyết tương (b) Mô tả ΔAUC triglycerid huyết tương vịng sau dùng dầu liu o Khi dùng 0.5 g.kg-1 AP, nồng độ chất béo giảm xuống khoảng 40% so với nhóm dùng dầu liu AP có tác dụng chống béo phì Tài liệu tham khảo: [1] Nobutomo Ikarashi, Rumi Takeda, Kiyomi Ito, Wataru Ochiai, Kiyoshi Sugiyama, “The Inhibition of Lipase and Glucosidase Activities by Acacia Polyphenol”,Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, Vol 2011,2011 [2] Nobutomo Ikarashi, Takahiro Toda, Takehiro Okaniwa, Kiyomi Ito, Wataru Ochiai,Kiyoshi Sugiyama, “AntiObesity and Anti-Diabetic Effects of Acacia Polyphenol in Obese Diabetic KKAy Mice Fed High-Fat Diet”, EvidenceBased Complementary and Alternative Medicine, Vol 2011, 2011 [3] Sosuke Ogawa, Yoshikazu Yazaki, Tannins from Acacia Mearnsii De Wild Bark: Tannin Determination and Biological Activities,Molecules, 2018, vol 23, no 4, 837 [4] Homayoun L Daneschvar, MD, Mark D Aronson, MD, Gerald W Smetana, MD,”FDA-Approved Anti-Obesity Drugs in the United States”,The American Journal of Medicine, vol 129, no 8,2016 [5] T T Liu, X T Liu, Q X Chen, and Y Shi, “Lipase Inhibitors for Obesity: A Review,” Biomed Pharmacother., vol 128, no November 2019, 2020 [6] D M Williams, A Nawaz, and M Evans, “Drug Therapy in Obesity: A Review of Current and Emerging Treatments,” Diabetes Ther., vol 11, no 6, pp 1199–1216, 2020 [7] G W Kim, J E Lin, E S Blomain, and S A Waldman, “Antiobesity pharmacotherapy: New drugs and emerging targets,” Clin Pharmacol Ther., vol 95, no 1, pp 53–66, 2014 [8] Shekar, Meera, and Barry Popkin, eds 2020 Obesity: Health and Economic Consequences of an Impending Global Challenge Human Development Perspectives series Washington, DC: World Bank THANKS FOR YOUR ATTENTION ...01 TỔNG QUAN • • Tình hình bệnh Béo phì tác hại 4.000.000 ca tử vong Thứ nguy tử vong tồn giới Tình hình bệnh 2.000.000.000 người thừa cân/ béo phì Tỷ lệ thừa cân / béo phì theo mức thu... thủy phân chất béo trung tính thành glycerol este, monoglyceride, glycerol axit béo Con đường chuyển hóa chất béo chế bệnh béo phì Khi ức chế enzym lipase tuyến tụy, lượng chất béo hấp thụ vào... Enzym lipase Cơ chế gây bệnh Biện pháp Điều trị bệnh Béo phì Thuốc ức chế lipase ngoại vi Thuốc ức chế thèm ăn trung ương Thuốc Chế độ ăn uống Tập thể dục Phẫu thuật Enzym Lipase Lipase liên kết