Đánh giá hoạt tính chống đông máu và chống ngưng tập tiểu cầu in vitro của một số hợp chất phân lập từ cây ngải hoa (canna generalis bail )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ THANH HOA ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CHỐNG ĐÔNG MÁU VÀ CHỐNG NGƯNG TẬP TIỂU CẦU IN VITRO CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ CÂY NGẢI HOA (Canna generalis Bail.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ THANH HOA ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CHỐNG ĐƠNG MÁU VÀ CHỐNG NGƯNG TẬP TIỂU CẦU IN VITRO CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ CÂY NGẢI HOA (Canna generalis Bail.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2016.Y Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Vân Anh ThS Nguyễn Xuân Tùng Hà Nội – 2021 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm thầy cô giáo công tác trường Đại học Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội dìu dắt, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua, tạo điều kiện cho em thực khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ tri ân lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Vân Anh - Trường Đại học Khoa học Công nghệ Hà Nội (USTH) ThS Nguyễn Xuân Tùng – Trường Đại học Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội Thầy ln tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, kiên nhẫn dạy động viên em thực khóa luận tốt nghiệp Em xin cảm ơn Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia Việt Nam (NAFOSTED) tài trợ cho dự án: “Nghiên cứu hoạt tính sinh học số lồi thuộc chi Canna, định hướng phát triển thuốc chủ lực chữa bệnh tim mạch”, mã số: 106.02-2018.334 để em hồn thành nghiên cứu Em xin cảm ơn Khoa xét nghiệm Huyết Học - Bệnh viện Bạch Mai Khoa Đông máu - Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương tạo điều kiện cho em thực thí nghiệm Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bố mẹ động viên, hỗ trợ quan tâm khơng ngừng Đồng thời lời cảm ơn đến người bạn, người hỗ trợ em thời gian hồn thành đề tài Trong q trình thực hồn thành khóa luận, dù cố gắng khó tránh khỏi sai sót Em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khóa luận hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Thanh Hoa DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu ADP AMP APTT AT III AUC CGE2 CGE3 CGE4 CHD COX-1 CVDs DVT EtOAc GP IC50 IHD IR LMWH MeOH MI MS NMR n-BuOH PCI PE PPP PRP PT S (Slope) TT TXA2 VTE %I DANH MỤC CÁC HÌNH STT Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 Hình 1.6 Hình 1.7 Hình 1.8 Hình 1.9 Hình 1.10 Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 2.4 Hình 2.5 Hình 2.6 Hình 3.1 Hình 3.2 DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh tim mạch 1.1.1 Giới thiệu chung bệnh tim mạch 1.1.2 Các yếu tố gây bệnh tim mạch 1.2 Thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu điều trị bệnh tim mạch .5 1.2.1 Vai trò thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu điều trị bệnh tim mạch 1.2.2 Các thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu…………………………………………………………………………6 1.3 Hạn chế số thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu 1.3.1 Hạn chế thuốc chống ngưng tập tiểu cầu 10 1.3.2 Hạn chế thuốc chống đông máu 11 1.4 Tổng quan chi Canna Ngải hoa .11 1.4.1 Giới thiệu chung chi Canna 11 1.4.2 Vài nét sơ lược Ngải hoa 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên liệu, đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ 26 3.1 Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu hợp chất từ Ngải hoa 26 3.1.1 Ảnh hưởng hợp chất khác từ Ngải hoa ngưng tập tiểu cầu sử dụng chất kích tập collagen 26 3.1.2 Ảnh hưởng hợp chất khác từ Ngải hoa ngưng tập tiểu cầu sử dụng chất kích tập ADP 29 3.2 Tác dụng chống đông máu hợp chất từ Ngải hoa 32 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 34 4.1 Mơ hình nghiên cứu 34 4.2 Kết nghiên cứu 36 4.3 Hạn chế nghiên cứu 36 KẾT LUẬN 38 ĐỀ XUẤT .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, bệnh tim mạch nguyên nhân gây tử vong cao giới [54,55] Những nghiên cứu gần cho thấy để phòng ngừa điều trị bệnh huyết khối tắc mạch, thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu coi liệu pháp lý tưởng Một số thuốc kháng tiểu cầu có như: aspirin, clopidogrel, prasugrel, dipyridamol sử dụng rộng rãi dự phòng điều trị huyết khối, bên cạnh lợi ích, thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đơng máu cịn số tác dụng phụ như: gây chảy máu, loét dày, giảm tiểu cầu Vì vậy, việc nghiên cứu thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đơng máu có tác dụng tốt tác dụng phụ trọng Bên cạnh thuốc tổng hợp, thuốc có nguồn gốc từ thảo dược đối tượng quan tâm nghiên cứu Canna chi họ Cannaceae với mười chín lồi thực vật có hoa, nghiên cứu thành phần hóa học dược tính chúng cịn hạn chế tập trung vào C edulis C indica Một số nghiên cứu chứng minh hàm lượng phenol flavonoid C edulis có tác dụng chống ung thư, chống oxy hóa chống viêm [37,48]; nghiên cứu dược lý C indica có tiềm kháng khuẩn, kháng vi rút, tẩy giun sán, diệt nhuyễn thể, chống viêm, chống oxy hóa, độc tế bào, cầm máu, bảo vệ gan, chống tiêu chảy, giảm đau, giảm co thắt tác dụng khác [12,32] Hiện nay, theo danh mục thực vật Việt Nam có lồi: C edulis Ker-Gawl, C generalis Bail., C glauca L., C indica L, C sylvestris Rosc Một số loài Canna dân gian sử dụng để chữa bệnh viêm loét dày, đau nhức xương, tức ngực đặc biệt hiệu việc điều trị bệnh tim mạch [5,6,10] Theo định hướng nghiên cứu đó, nhiều đề tài nghiên cứu tác dụng chống đông máu ức chế ngưng tập tiểu cầu số lồi Canna cơng bố Năm 2018, TS Nguyễn Thị Vân Anh cộng nhận định dịch chiết ethyl acetat từ phần C warzewiczii có tác dụng ức chế đơng máu tốt so với dịch chiết từ thân rễ Những chất chiết xuất chất chống đơng máu chống huyết khối tiềm sử dụng để điều trị phòng ngừa rối loạn huyết khối [38] Năm 2019, ThS Trần Quốc Hùng lần khẳng định thêm kết TS Nguyễn Thị Vân Anh cộng Ngoài ra, phát thêm phân đoạn etyl axetat C waszewiczii cho thấy hoạt tính chống oxy hóa tốt [50] Hướng đến việc ứng dụng hợp chất thiên nhiên có nguồn gốc từ Ngải hoa (C generalis Bail.) phòng điều trị bệnh tim mạch huyết khối, tiến hành đề tài: “Đánh giá hoạt tính chống đơng máu chống ngưng tập tiểu cầu in vitro số hợp chất phân lập từ Ngải hoa (C generalis Bail.)” với mục tiêu cụ thể sau: Đánh giá tác dụng chống đông máu hợp chất phân lập từ Ngải hoa in vitro Đánh giá tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu hợp chất phân lập từ Ngải hoa in vitro Nhìn chung, liệu cho thấy mối tương quan thuận nồng độ chất với số đơng máu PT, APTT Điều có nghĩa nồng độ chất tăng lên dẫn đến tăng thời gian đông máu (Bảng 3.5) Trong thử nghiệm PT, có CGE2 nồng độ 0,4 mg/mL kéo dài thời gian đông máu, với giá trị cao so với chứng dương chứng âm (p > 0,05) Trong đó, chất khác khơng có khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) Trong thử nghiệm APTT, hầu hết chất cho giá trị thấp đáng kể so với chứng dương (p < 0,05), xấp xỉ chứng âm (p > 0,05; trừ CGE4 nồng độ 0,4 mg/mL 0,2 mg/mL có p < 0,05) Cả ba chất khơng có khác biệt đáng ý giá trị TT so với chứng âm (p > 0,05), cho giá trị thấp đáng kể so với chứng dương (p < 0,05) 33 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Mơ hình nghiên cứu Thử nghiệm chống ngưng tập tiểu cầu Đề tài sử dụng phương pháp quang học để đo độ ngưng tập tiểu cầu (Light Transmission Aggregometry - LTA) phương pháp phát triển Born năm 1962 Đây coi tiêu chuẩn vàng đánh giá chức ngưng tập tiểu cầu sử dụng phổ biến [25,34] Nguyên lí phương pháp cho chất kích tập như: adenosin diphosphat (ADP), acid arachidonic, collagen, thrombin, epinephrine vào huyết tương giàu tiểu cầu xảy tượng tiểu cầu ngưng tập với tạo thành đám; làm tăng độ dẫn truyền ánh sáng qua huyết tương Độ dẫn truyền ánh sáng phản ánh mức độ ngưng tập tiểu cầu [9] Trong thử nghiệm thực nghiên cứu này, ADP collagen tác nhân kích hoạt trình ngưng tập tiểu cầu ADP chất chủ vận biết đến chất chủ vận quan trọng để ngưng tập tiểu cầu ADP không gây ngưng tập tiểu cầu mà ADP chất chủ vận khác nguyên nhân gây ngưng tập thứ cấp [41] Ngoài ra, ADP tham gia vào nhiều phản ứng khác tiểu cầu làm thay đổi hình dạng, tiết, tạo thromboxan A2, hoạt hóa GP IIb/IIIa ADP có hạt đặc tiểu cầu tiết tiểu cầu trở nên hoạt hóa [4] Collagen liên kết với Gp VI tham gia vào trình truyền tín hiệu tiểu cầu tạo thành thromboxan A2 Collagen liên kết với thụ thể Gp Ia/IIa có liên quan đến kết dính tiểu cầu [50] Aspirin thuốc kháng tiểu cầu sử dụng phổ biến lâm sàng [3] Aspirin gắn vào gốc Serin vị trí 529 men Cyclooxygenase1 (COX-1) tiểu cầu; ức chế khơng hồi phục COX-1 ngăn không cho acid arachidonic chuyển thành thromboxan A2 Tác dụng aspirin làm giảm sản xuất thromboxan A2 (chất làm co mạch mạnh kích thích gây ngưng tập tiểu cầu) Aspirin ảnh hưởng đến chức tiểu cầu cách bất hoạt chức hoạt hoá tiểu cầu bạch cầu trung tính [28] Aspirin tác động phần ngưng tập tiểu cầu tác động ADP, thrombin, collagen 34 [18,22] Aspirin làm giảm ngưng tập với ADP bệnh nhân sử dụng aspirin [1] Việc sử dụng thêm chứng âm (dung dịch DMSO 0,1%) nhằm kiểm tra loại bỏ ảnh hưởng dung môi chiết đến kết nghiên cứu Ảnh hưởng hợp chất lên chức tiểu cầu đánh giá với ba thông số báo cáo: tỷ lệ phần trăm ức chế tiểu cầu (% I) thể khả ức chế ngưng tập tiểu cầu, diện tích đường cong ngưng tập tiểu cầu (AUC) ước tính tổng thể ngưng tập tiểu cầu; độ dốc đường cong ngưng tập (S) cho biết vận tốc ngưng tập tiểu cầu theo thời gian Hiện nay, ba thông số nhà nghiên cứu quan tâm việc đánh giá chức tiểu cầu người bệnh có giá trị việc phân loại bệnh liên quan đến tiểu cầu Thử nghiệm chống đông máu Ba xét nghiệm in vitro: thời gian prothrombin (PT), thời gian thromboplastin hoạt hóa phần (APTT) thời gian thrombin (TT) - đo khoảng thời gian thời điểm khác từ bắt đầu q trình đơng máu đến hình thành fibrin, sử dụng để đánh giá khả chống đông máu C generalis PT kiểm tra yếu tố góp phần vào đường đơng máu ngoại sinh II, V, VII, X, fibrinogen… với mức bình thường từ 12 đến 15 giây; APTT đánh giá yếu tố VIII, IX, XI, XII, II, X, fibrinogen… yếu tố có mặt đường đông máu nội sinh, với khoảng tham chiếu 30 đến 35 giây [52] TT đánh giá thời gian cần thiết để hình thành fibrin từ fibrinogen (con đường đơng máu chung), với phạm vi tham chiếu từ 14 đến 16 giây [23] Thời gian đông máu gấp 1,5 – 2,5 lần giá trị bình thường coi khoảng điều trị cho liệu pháp chống đông máu Heparin thuốc chống đông máu ức chế yếu tố X thrombin, đồng thời kích hoạt anti-thrombin Trong nghiên cứu này, heparin sử dụng làm chứng dương với nồng độ 0,2 IU/mL Việc lựa chọn heparin phù hợp giống với mơ hình Li C., et al 2013 [32] Lau A J., et al 2009 [31] DMSO 0,1% sử dụng làm chứng âm nhằm kiểm tra loại bỏ ảnh hưởng dung môi chiết đến kết nghiên cứu 35 4.2 Kết nghiên cứu Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu hợp chất từ Ngải hoa Khi nhìn vào số liệu %I hợp chất, thấy hợp chất từ Ngải hoa thể tác dụng phụ thuộc vào liều, cụ thể tác dụng chất nồng độ 0,4 mg/mL cao hẳn so với 0,2 mg/mL cao 0,1 mg/mL; nhận thấy tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu CGE4 tốt so với CGE3 CGE2 nồng độ với chất kích tập (ADP collagen) Ngoài ra, tác dụng chất chống ngưng tập tiểu cầu với chất kích tập ADP cao so với collagen so sánh chất với nồng độ thử tương ứng Nhưng phần trăm ức chế (%I) ngưng tập tiểu cầu chất lại thấp nhiều so với chứng dương (aspirin 0,1 mg/mL), ngoại trừ CGE4 0,4 mg/mL có giá trị %I 36,11%, tương tự chứng dương (%I = 35,62%) thí nghiệm ngưng tập tiểu với chất kích tập ADP (p > 0,05) Đối với số AUC độ dốc (S), chất có tác dụng làm giảm AUC so với chứng âm (DMSO 0,1%) không đáng kể giá trị AUC cao nhiều so với chứng dương (aspirin 0,1 mg/mL) Điều cho thấy tác dụng không đáng kể chất ngưng tập tiểu cầu tối đa, trình ngưng tập tiểu cầu tổng thể tốc độ ngưng tập Có thể kết luận hợp chất CGE4 từ Ngải hoa có tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu; kết thử nghiệm in vitro ban đầu cần có nghiên cứu sâu để khẳng định kết chế tác dụng hợp chất Tác dụng chống đông máu hợp chất từ Ngải hoa Bằng cách so sánh số liệu thu được, thấy hợp chất CGE4, CGE3, CGE2 chiết xuất từ Ngải hoa khơng có tác dụng chống đơng máu đường đông máu ngoại sinh, nội sinh đường đông máu chung 4.3 Hạn chế nghiên cứu Hạn chế cỡ mẫu lượng huyết tương thu nhận lần lấy mẫu Việc cho thuốc thử ủ với máu tồn phần tình nguyện viên, sau làm tổng phân tích tế bào máu ngoại vi để xem ảnh hưởng thuốc đến 36 hồng cầu, tiểu cầu số liên quan đến tiểu cầu thể tích tiểu cầu, phân bố tiểu cầu, với việc quan sát xem tiểu cầu có bất thường kết dính tiểu cầu, hay tế bào máu, vón tiểu cầu, vỡ tiểu cầu… chưa thực Chính vậy, nghiên cứu cịn hạn chế đánh giá tác dụng không mong muốn in vitro hợp chất Nghiên cứu bước đầu dừng lại mức khảo sát, cần có nghiên cứu chuyên sâu để khẳng định tác dụng, hiệu hợp chất từ Ngải hoa Thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết chưa nghiên cứu đầy đủ, gây khó khăn việc biện luận kết nghiên cứu Nghiên cứu chưa tiến hành cho thuốc thử ủ với máu tồn phần tình nguyện viên sau làm tổng phân tích tế bào máu ngoại vi để xem ảnh hưởng thuốc đến số huyết học chưa đánh giá giá trị IC50 37 KẾT LUẬN Nghiên cứu sở để khẳng định đặc tính chống ngưng tập tiểu cầu, chống đông máu hợp chất tinh khiết phân lập từ Ngải hoa Trong khi, số thử nghiệm chống đông máu cho thấy tác dụng không tốt hợp chất thử đường đông máu ngoại sinh, nội sinh đường đông máu chung khơng tốt; tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu hợp chất nghiên cứu khẳng định rõ qua số liệu thu Vì vậy, Ngải hoa coi nguồn dược liệu đầy hứa hẹn với hợp chất có hoạt tính sinh học để quản lý điều trị bệnh tim mạch Nghiên cứu sâu cần thiết để phát chất có hoạt tính, chế hoạt động chúng 38 ĐỀ XUẤT Đổi với thử nghiệm chống ngưng tập tiểu cầu Tiến hành nghiên cứu chất kích tập tiểu cầu khác acid arachidonic, ristocetin để đánh giá rõ đầy đủ đích tác dụng hợp chất từ Ngải hoa Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu hợp chất thử tương đối thấp nên cân nhắc tăng nồng độ chất nghiên cứu Tiến hành nghiên cứu in vivo mơ hình gây huyết khối để đánh giá hiệu chống ngưng tập tiểu cầu tính an tồn hợp chất từ Ngải hoa Đối với thử nghiệm chống đông máu Nghiên cứu với cỡ mẫu lớn để xác định tính đắn kết nghiên cứu Nghiên cứu thử nghiệm ủ chất thử với máu toàn phần sau làm tổng phân tích tế bào máu ngoại vi để xem ảnh hưởng chất thử đến hồng cầu, tiểu cầu, thời gian đông máu Tiến hành nghiên cứu in vivo mơ hình gây huyết khối để đánh giá hiệu chống đông máu tính an tồn hợp chất từ Ngải hoa 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bệnh viện Trung ương quân đội 108 (2016), Các xét nghiệm đánh giá chức cầm – đông máu Bộ môn huyết học truyền máu - Trường đại học Y Hà Nội (2006), Bài giảng huyết học truyền máu - Sau đại học, Nhà xuất Y học, tr 267-270 Bộ Y tế (2015), Hướng dẫn chẩn đốn điều trị số bệnh lí huyết học, tr 132-133 Nguyễn Thị Nữ (2005), Nghiên cứu ngưng tập tiểu cầu số yếu tố đông máu bệnh nhân tăng huyết áp có rối loạn lipid máu, Luận văn Tiến sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội, tr 4-6 Hoàng Sầm (2008), Nghiên cứu dịch chiết Dong riềng đỏ điều trị bệnh tim thiếu máu cục bộ, Đề tài nghiên cứu số B200504-46TĐ Hoàng Sầm cộng (2007), "Nghiên cứu chiết xuất Dong riềng đỏ vật thể bệnh nhân thiếu máu cục bộ", Y học thực hành, pp Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2012), Dược lí học, NXB Y học, Tập 2, tr 122-124 Nguyễn Anh Trí (2008), Đơng máu ứng dụng lâm sàng, NXB Y học, tr 7-64 Quách Hữu Trung (2014), Nghiên cứu tình trạng kháng aspirin bệnh nhân có yếu tố nguy tim mạch cao, Luận án tiến sĩ y học, Viện Nghiên Cứu Khoa Học Y Dược Lâm Sàng 108 - Bộ Quốc Phòng, tr 4950 10 Nguyễn Xuân Trường, Hoàng Văn Sầm (2017), "Nghiên cứu tác dụng giãn mạch co bóp tim bốn đoạn cao c hiết Dong riềng đỏ (Canna sp.) Trên tim thỏ lập", Tạp chí Dược học, 490, pp tr 39-42 11 Trần Văn Tú (2009), Bài giảng Điều trị chống tiểu cầu, thankinh.edu.vn Tài liệu Tiếng Anh 12 Al-Snafi Ali Esmail (2015), "Bioactive components and pharmacological effects of Canna indica- An overview", International Journal of Pharmacology & Toxicology, 5(2), pp 71-75 13 Alduhisa Gema U., Demayo Cesar G (2019), "Ethnomedicinal plants used by the subanen tribe in two villages in ozamis city mindanao philippine", Pharmacophore, 10(4), pp 28-42 14 Ali Esmail Al-Snafi (2015), "Bioactive components and pharmacological effects of Canna indica – An overview", International Journal of Pharmaclology & Toxicology, 5(2), pp 71-75 15 Bachheti R K., Joshi Archana, Rawat Gs (2013), "Phytochemical Investigation Of Aerial Parts Of Canna indica Collected From Uttarakhand India", International Journal of PharmTech Research, 5(2), pp 974-4304 16 Bang Myun-Ho, Song Myoung-Chong, Lee Dea-Young, et al (2006), "Isolatation and identification of lipids from the roots of Canna generalis", J Korean Soc Appl Biol Chem, 49(4), pp 339-342 17 Born G V R (1962), "Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal", Nature, 194(4832), pp 927929 18 D Varon, G Spectre (2009), "Antiplatelet agents", Hematology, 1, pp 267-272 19 Edward F Gilman (1999), Canna x generalis, Fact Sheet FPS103, University of Florida 20 Eikelboom John W., Weitz Jeffrey I (2010), "New anticoagulants", Circulation, 121, pp 1523-1532 21 Heng Jung Chen, Cheng-Nan Chen, Mao-Lin Sung (2013), "Canna indica L attenuates high-glucoseand lipopolysaccharideinduced inflammatory mediators in monocyte/macrophage", J Ethnopharmacol, 148(1), pp 317-321 22 HM Van Beusekom, PW Serruys, WJ van der Giessen (1994), "Coronary stent coatings", Coron Artery Dis, 5(7), pp 590-600 23 Hoffbrand Victor (2002), Essential haematology, WileyBlackwell, pp 248 24 Indrayan A K., Bhojak Narendar (2011), "Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil from the rhizome of Canna indica Linn", Indian Journal of Chemistry, pp 11361139 25 JAVA clinical Research (2011), "Principles of platelet aggregation in clinical trials", pp 26 Josephine O Ofeimun, Josephine Owolabi Omonkhelin, Cosmos Oluyole Taye (2013), "Evaluation of the antidiarrhoea activity of the methanolic extract of Canna indica leaf (Cannaceae)", International journal of pharmaceutical and chemical sciences, 2(2), pp 669-674 27 Kamer Maas-van de, Maas P J M (2008), "The Cannaceae of the World", Blumea Journal of Plant Taxonomy and Plant Geography, 53(2), pp 247-318 28 Karsten Schrör (2009), Acetylsalicylic Acid, Wiley - Blackwell, Weinheim 29 Khoshoo T N., Mukherjee IVA (1970), "Genetic-Evolutionary Studies on Cultivated Cannas", Theoretical and Applied Genetics 40, pp 204-217 30 Krishnaswamy Amar, Lincoff A Michael, Cannon Christopher P (2010), "The use and limitation of unfractionated heparin", Crit Pathw Cardiol, 9(1), pp 35-40 31 Lau A J., Ding F T et al (2009), "Antiplatelet and anticoagulant effects of Panax notoginseng: comparison of raw and steamed Panax notoginseng with Panax ginseng and Panax quinquefolium", Journal of ethnopharmacology 125(3), pp 380-386 32 Li C et al (2013), "A comparative study on anticoagulant activities of three Chinese herbal medicines from the genus Panax and anticoagulant activities of ginsenosides Rg1 and Rg2", Pharmaceutical biology, 51(8), pp 1077-1080 33 Lin ZL, Bai'e Z (2011), "Hemostatic Effect of Canna Indica L.", Journal of Dali University, 10(12), pp 24-26 34 M Cattaneo (2009), "Results of a Worldwide Survey on the Assessment of Platelet Function by Light Transmission Aggregometry: a Report from the Platelet Physiology Subcommittee of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis", J Thromb Haemost, 7(6), pp 1029 35 Mahmoud Toka N., El-Maadawy Walaa H., Zeinab A Kandil et al (2020), "Canna x generalis L.H Bailey rhizome extract ameliorates dextran sulphate sodiuminduced colitis via modulating intestinal mucosal dysfunction, oxidative stress, inflammation, and TLR4/ NF-ҡB and NLRP3 inflammasome pathways", Journal of Ethnopharmacology, 269, pp 1-56 36 Matteo Nicola Dario Di Minno et al (2011), "Overcoming limitations of current antiplatelet drugs: A concerted effort for more profitable strategies of intervention", Annals of Medicine, 43(7), pp 531-544 37 Mukhtar H, Katiyar SK, Agarwal R (1994), "Green tea and skin-anticarcinogenic effects", J Invest Dermatol, 102(1), pp 3-7 38 Nguyen Thi Van Anh, Vu Thi Thom (2018), "Novel finding on anticoagulant activity of Canna warszewiczii extracts", Asian Journal of Pharmacognosy, 2(2), pp 30-31 39 Olas Beata, Brys Magdalena (2018), "Is it safe to use Acorus calamus as a source of promising bioactive compounds in prevention and treatment of cardiovascular diseases?", Chemico-Biological Interactions, 218, pp 32-36 40 Omar M Atrooz (2007), "The incorporation effects of methanolic extracts of some plant seeds on the stability of phosphatidylcholine liposomes", Pakistan Journal of Biological Sciences, 10(10), pp 1643-1648 41 Packham M A., Rand M L (2011), "Historical perspective on ADP-induced platelet activation", Purinergic Signal, 7(4), pp 283–292 42 Previtali Emanuele, Bucciarelli Paolo, Passamonti Serena M., Martinelli Ida (2011), "Risk factors for venous and arterial thrombosis", Blood Transfus, 9(2), pp 120-138 43 Purintrapiban Juntipa, Suttajit Maitree, Neil E Forsberg (2006), "Differential activation of glucose transport in cultured muscle cells by polyphenolic compounds from Canna indica L Root", Biol Pharm Bull, 29 (10), pp 1995-1998 44 Sjögren Bengt, Bigert Carolina, Gustavsson Per (2015), Handbook on the Toxicology of Metals, pp 313-331 45 Srivastava Jyoti, Padma S Vankar (2010), "Canna indica flower: New source of anthocyanins , 2010 48(12): p 1015-9.", Plant Physiol Biochem, 48(12), pp 1015-1019 46 Sunil A Nirmal, Kolhe N.M (2008), "Nonpolar compounds from Canna indica rhizomes.", 6(1), pp 141-144 47 Tanaka N (2001), "Taxonomic revision of the family Cannaceae in the New World and Asia", Biology, pp 1-74 48 Tanmayee Mishra, Arvind K Goyal, Sushil K Middha (2011), "Antioxidative properties of Canna edulis Ker-Gawl", Indian Journal of Natural Products and Resources, 2(3), pp 315-321 49 Tinoi Jidapha, Rakariyatham Nuansri, Richard L Deming (2006), "Determination of major carotenoid constituents in petal extracts of eight selected flowering plants in the north of Thailand", Changmai Journal of science, 33(2), pp 327-334 50 Tran Quoc Hung (2019), Investigation of phytochemicals and bioactivities of Canna plants, extraction and isolation of pure compounds from Canna warszewiczii, Intership report, Paris Descartes University 51 Vu Thi Thom et al (2018), "Antithrombotic activity and saponin composition of the roots of Panax bipinnatifidus Seem growing in Vietnam", Pharmacognosy Research, 10(4), pp 333-338 52 Walker H Kenneth, Hall W Dallas, Hurst J Willis (1990), Clinical Methods: The History, Physical, and Laboratory Examinations., Boston: Butterworths 53 Weitz Jeffrey I., Eikelboom John W., Samama Meyer Michel (2012), "New antithrombotic drugs", Chest, 141(2 Suppl), pp e120Se151S 54 World Health Organization (2008), Causes of death, Geneva 55 World Health Organization (2011), Global Atlas on cardiovascular disease prevention and control, pp 2-18 56 Yadunath M Joshi et al (2009), "Investigation of Hepatoprotective activity of Aerial Parts of Canna indica L on carbon tetrachloride treated rats", Journal of Pharmacy Reasearch, 2(12), pp 1879-1882 57 Yun Young Sook, Satake Motoyoshi, Katsuki Shigeki (2004), "Phenylpropanoid derivatives from edible canna, Canna edulis", Phytochemistry, 65(14), pp 2167-2171 Zhang Juan, Wang Zheng-Wu, Mi Qin (2011), "Phenolic compounds from Canna edulis Ker residue and their antioxidant activity", LWT - Food science and technology, 44(10), pp 2091-2096 58 ... ? ?Đánh giá hoạt tính chống đông máu chống ngưng tập tiểu cầu in vitro số hợp chất phân lập từ Ngải hoa (C generalis Bail. )? ?? với mục tiêu cụ thể sau: Đánh giá tác dụng chống đông máu hợp chất phân. .. Y DƯỢC NGUYỄN THỊ THANH HOA ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CHỐNG ĐÔNG MÁU VÀ CHỐNG NGƯNG TẬP TIỂU CẦU IN VITRO CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ CÂY NGẢI HOA (Canna generalis Bail. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI... ngưng tập tiểu cầu hợp chất từ Ngải hoa 3.1.1 Ảnh hưởng hợp chất khác từ Ngải hoa ngưng tập tiểu cầu sử dụng chất kích tập collagen Phần trăm ức chế (% I) ngưng tập tiểu cầu hợp chất COLLAGEN