Mô hình đánh giá hoạt tính hạ cholesterol bằng dịch chiết xuất quả óc chó nigeria (plukenetia conophora)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HĨA HỌC Mơ hình đánh giá hoạt tính hạ Cholesterol dịch chiết xuất óc chó Nigeria (Plukenetia conophora) Nội dung 01 Tình hình bệnh giới 02 Tổng quan Cholesterol 03 Mơ hình thử hoạt tính in vỉtro 04 Mơ hình thử hoạt tính in vivo 05 Tài liệu tham khảo 1 Tình hình giới Vào 2008: Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) Trong 10 nguyên nhân gây tử vong hàng đầu toàn giới + Bệnh thiếu máu tim đứng đầu (12.8%) + Đột quỵ bệnh mạch máu não khác đứng thứ hai (10.8%) ! Do lượng cholesterol máu cao (tăng cholesterol máu) 2 Tổng quan Cholesterol • Là sterol có mơ động vật Tạo từ gan phần ăn  Thành phần thiết yếu màng tế bào + tiền chất để tổng hợp s steroid axit mật hormone nt te n Co làm • Phân loại dựa protein kết hợp để vận chuyển máu HDL (tốt) • High-density lipoprotein • Mang 1/3 tổng cholesterol đến gan LDL (xấu) • Low-density lipoprotein • Đưa 2/3 tổng cholesterol trực tiếp đến động mạch • < 40 mg/dL  Thấp • < 100 mg/dL  Tối ưu • • 160–189 mg/dL  Cao 60 mg/dL  Cao  Gây xơ vữa động mạch, đau tim đột quỵ 2.1 Nguyên nhân tăng Cholesterol 2.2 Phương pháp hạ Cholesterol Ức chế enzyme HMG-CoA Ức chế enzyme Cholesterol Esterase • Được tổng hợp tuyến tụy, thành phần dịch tụy • Esterase cholesterol tuyến tụy thủy phân este cholesterol chế độ ăn uống, este vitamin tan chất béo, phospholipid triglycerid • CEase có nồng độ cao sữa mẹ đóng vai trị quan trọng phát triển cách cung cấp enzym cho trẻ sơ sinh có tuyến tụy chưa phát triển đầy đủ Enzyme Cholesterol Esterase (CEase) Mơ hình in vitro Nguyên liệu Chuẩn bị hóa chất - Dung dịch CEase từ tuyến tụy - p-Nitrophenylbutyrate (p-NPB) (Control) - Acetonitrile - Dung dịch Na2CO3 - Đệm sodium phosphate Hạt Óc chó Nigeria (Plukenetia conophora) Chất đối chứng dương Mơ hình in vitro 500g hạt óc chó Khảo sát hoạt tính ức chế enzyme CEase Nấu chín, bóc vỏ Nghiền mịn Trong curvette 1mL bao gồm: • 430 µL đệm Na3PO4 (pH 7.0) • 500 µL Taurocholate (12mM), ã 40 àL Acetonitrile (6%) ã 10 àL dung dch p-NPB ã 10 àL dch chit Bt mu Đun với nước cất Dd + chất rắn (25oC) Lọc tách chất rắn Dung dịch Ủ phút 25oC Thêm 10 µL dd enzyme CEase Đo quang ʎ = 405 nm (hấp thu màu tím) Nồng độ thử nghiệm: 10, 20, 40, 80, 160, 320 μg/mL 𝑰 %= 𝑨𝑪 − 𝑨𝑺 × 𝟏𝟎𝟎 𝑨𝑪 Giá trị IC50 Chất đối chứng dương: Simvastatin Ủ tủ lạnh Dịch chiết Dung dịch có màu vàng Bảng 1: Hoạt tính ức chế enzyme CEase dịch trích Inhibitor 20 36.08±0.54 40 45.73±0.58 80 57.17±1.13 160 129.30±0.10 72.40±0.03 Inhibitor 20 42.50±0.40 40 59.92±0.08 80 73.95±1.47 160 90.31±1.97 f(x) = 17.3700482923031 ln(x) − 17.2510142624439 R² = 0.989104549571427 60 50 40 20 30 60 90 120 150 180 Nồng độ chất ức chế Bảng 2: Hoạt tính ức chế enzyme CEase chất đối chứng dương, thuốc Simvastatin Concentration 70 30 IC50 (μg/mL) 51.42±0.13 Hoạt tính ức chế enzyme CEase thuốc Simvastatin 100 Phần trăm ức chế (%I) Concentration Phần trăm ức chế (%I) P.conophora IC50 (μg/mL) Hoạt tính ức chế enzyme CEase P.conophora 80 90 f(x) = 22.7166761138376 ln(x) − 25.0020797820964 R² = 0.998456168712711 80 70 60 50 40 30 60 90 Nồng độ chất ức chế 120 150 180 Mơ hình in vivo Chuẩn bị chuột Ăn thức ăn cho chuột + uống nước theo chế độ tùy thích Chuột bạch trưởng thành (90 – 120g), nhốt lồng riêng Làm quen với chế độ 12h có ánh sáng, 12h tối tuần Chia thành 11 nhóm, nhóm Gây bệnh nhóm Tyloxapol 11 nhóm chuột nhóm Ăn nhiều chất béo Chọc thủng mắt Lấy máu Nhịn ăn qua đêm Chọc mắt nhóm đối chứng ăn bình thường Dữ liệu ban đầu Dữ liệu ban đầu Ăn thức ăn cho chuột + uống nước cất Nhịn ăn 12h Tiêm Tyloxapol (300mg/kg) hòa tan 0.9% nước muối Bột nhão: nghiền 50g lòng đỏ trứng luộc, thêm dầu dừa lên đến 100 mL (0.5g/mL) Tăng lipid máu Cho chuột ăn ống mL ngày 60 ngày Tăng lipid máu Dữ liệu ban đầu 10 Mô hình in vivo Điều trị Nhóm 1:uống dịch chiết P conophora 125 mg/kg thể trọng Nhóm 2: uống dịch chiết P conophora 250 mg/kg thể trọng Chuột tăng lipid máu Tyloxapol điều trị ngày Nhóm 3: uống dịch chiết P conophora 500 mg/kg thể trọng Nhóm 4: uống thuốc tiêu chuẩn Simvastatin 10 mg/kg thể trọng Nhóm 5: đối chứng âm, khơng điều trị thuốc Nhóm 6: đối chứng bình thường, ăn thức ăn cho chuột + nước cất Nhóm 1:uống dịch chiết P conophora 125 mg/kg thể trọng Xét nghiệm máu Nhóm 2: uống dịch chiết P conophora 250 mg/kg thể trọng Chuột tăng lipid máu chất béo điều trị 15 ngày Nhóm 3: uống dịch chiết P conophora 500 mg/kg thể trọng Nhóm 4: uống thuốc tiêu chuẩn Simvastatin 10 mg/kg thể trọng Nhóm 5: đối chứng âm, khơng điều trị thuốc Nhóm 6: đối chứng bình thường, ăn thức ăn cho chuột + nước cất 11 HDL-C (mmol/L) Group LDL-C (mmol/L) TC (mmol/L) Tyloxapol + P.conophora 125mg/kg 1.06 0.07ns 1.08 0.18ns 2.62 0.28ns Tyloxapol + P.conophora 250mg/kg 1.48 0.15ns 0.82 0.11ns 2.46 0.24* Tyloxapol + P.conophora 500mg/kg 1.52 0.07* 0.69 0.10* 2.25 0.10** Tyloxapol + Simvastatin 1.62 0.09* 0.58 0.09** 2.18 0.09** Tyloxapol control 1.25 0.06ns 1.14 0.06*** 3.21 0.13*** Normal control 1.19 0.07 0.34 0.03 2.11 0.06 Bảng 3: Ảnh hưởng chiết xuất P conophora HDL-C LDL-C, total Cholesterol mơ hình chuột tăng lipid máu Tyloxapol ***P