Mục tiêu của đề tài Đánh giá hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu và chống đông máu in vitro của dịch chiết thân lá cây Gừng đen Việt Nam (Distichochlamys citrea) là đánh giá được hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu in vitro của dịch chiết thân lá cây Gừng đen Việt Nam; đánh giá được tác dụng chống đông máu in vitro của dịch chiết thân lá cây Gừng đen Việt Nam.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN THỊ LAN ANH ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CHỐNG NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VÀ CHỐNG ĐÔNG MÁU IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT THÂN LÁ CÂY GỪNG ĐEN VIỆT NAM (DISTICHOCHLAMYS CITREA) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Người thực hiện: NGUYỄN THỊ LAN ANH ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CHỐNG NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VÀ CHỐNG ĐÔNG MÁU IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT THÂN LÁ CÂY GỪNG ĐEN VIỆT NAM (DISTICHOCHLAMYS CITREA) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2017.Y Người hướng dẫn: TS Lê Hồng Luyến Ths Nguyễn Xuân Tùng Hà Nội – 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban chủ nhiệm Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội, Bộ môn Khoa học sở Dược, thầy cô tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giảng dạy, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua Em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt đến TS Lê Hồng Luyến, trường Đại học Khoa học Công nghệ Hà Nội – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam ThS Nguyễn Xuân Tùng, trường Đại học Y dược – Đại học Quốc Gia Hà Nội ln tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp em hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn Khoa Khám bệnh Điều trị ngoại trú, Khoa Đông máu, Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương giúp đỡ em thực thí nghiệm Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè người thân ln quan tâm, khích lệ tinh thần giúp em có thêm tâm hồn thành khóa luận Do thời gian làm thực nghiệm vốn kiến thức thân hạn chế Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khoa học nên khó tránh khỏi sai sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy giúp em hồn thiện khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 06 năm 2022 Sinh Viên Nguyễn Thị Lan Anh DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Giải nghĩa ADP Adenosin diphosphat AMP Adenosin monophosphat APTT Thời gian Thromboplastin phần hoạt hoá ( Activated partial Thromboplastin Time) ATP Adenosin triphosphat AUC Diện tích đường cong (Area Under the aggregation curve) COX-2 Cyclooxygenase cGMP guanosine monophosphat GP HMWK IC50 NTTC Glycoprotein Kininogen trọng lượng phân tử cao Liều ức chế 50% đối tượng thử (Inhibitory concentration 50%) Ngưng tập tiểu cầu PPP Huyết tương nghèo tiểu cầu (Platelet Poor Plasma) PRP Huyết tương giàu tiểu cầu (Platelet Rich Plasma) PT Thời gian Prothrombin (Prothrombin Time) TT Thời gian Thrombin ( Thrombin Time) vWF Von - willerbran DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Mười yếu tố nguy gây tử vong liên quan đến CVDs Hình 1.2: Minh họa tác dụng thuốc chống ngưng tập tiểu cầu Hình 1.3: Tác dụng dẫn xuất coumarin Hình 1.4: Cấu trúc hố học số hợp chất tinh dầu Gừng đen 14 Hình 1.5: Hình ảnh Gừng đen (Distichochlamys citrea) 15 Hình 2.1: Sơ đồ chiết tách dược liệu Gừng đen 19 Hình 2.2: Máy ACL TOP500 20 Hình 2.3: Máy CHRONO-LOG 530 VS 20 Hình 2.4: Mẫu máu sau ly tâm 500 vòng/phút 10 phút 22 Hình 2.5: Mẫu PRP (bên trái) PPP (bên phải) thu sau ly tâm 22 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết thân Gừng đen đến tỉ lệ ngưng tập tiểu cầu 27 Biểu đồ 3.2: Ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết thân Gừng đen đến tốc độ ngưng tập tiểu cầu (Slope) 29 Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết thân Gừng đen đến mức độ ngưng tập tiểu cầu (AUC) 31 Biểu đồ 3.4: Ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết gừng đen đến thời gian đông máu (s) 33 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan bệnh tim mạch 1.1.1.Giới thiệu chung bệnh tim mạch 1.1.2.Các yếu tố gây bệnh tim mạch 1.2.Thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu điều trị bệnh tim mạch 1.2.1.Vai trò thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu điều trị bệnh tim mạch 1.2.2.Các thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu 1.3.Hạn chế số thuốc chống ngưng tập tiểu cầu thuốc chống đông máu 10 1.3.1.Hạn chế thuốc chống ngưng tập tiểu cầu 10 1.3.2.Hạn chế thuốc chống đông máu 11 1.4 Tổng quan Gừng đen 12 1.4.1 Giới thiệu chung chi Distichochlamys 12 1.4.2 Vài nét sơ lược Gừng đen (Distichochlamys citrea) 14 1.4.3 Thực trạng phấn bố Gừng đen (Distichochlamys citrea) 15 1.4.4 Thành phần hóa học Gừng đen (Distichochlamys citrea) 16 1.4.4 Công dụng tác dụng dược lý Gừng đen (Distichochlamys citrea) 16 CHƯƠNG 2.ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nguyên liệu, đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.2 Nguyên liệu dụng cụ nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Đánh giá hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu dịch chiết thân Gừng đen 23 2.2.2 Đánh giá hoạt tính chống đông máu dịch chiết thân Gừng đen 24 2.3 Phương pháp phân tích số liệu 25 CHƯƠNG 3.KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 Kết 26 3.1.1 Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu dịch chiết thân Gừng đen 26 3.1.2 Tác dụng chống đông máu dịch chiết thân Gừng đen 32 3.2 Bàn luận 34 3.2.1 Mơ hình nghiên cứu 34 3.2.2 Kết nghiên cứu 35 3.2.3 Hạn chế nghiên cứu 38 KẾT LUẬN 37 ĐỀ XUẤT 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam quốc gia nằm khí hậu nhiệt đới gió mùa Đây điều kiện thuận lợi để thảm thực vật phát triển phong phú đa dạng Thế giới thực vật nguồn tài nguyên thiên nhiên quý giá, cung cấp nguyên liệu cho y học cổ truyền nước nhà Việc sử dụng nguồn tài nguyên để phòng, chữa bệnh nâng cao sức khỏe cho người dân có q trình lịch sử hàng nghìn năm Các thuốc sử dụng hình thức độc vị hay phối hợp với tạo nên thuốc quý giá Ngày nay, xu hướng sâu nghiên cứu tìm kiếm hoạt chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học cao từ lồi thực vật làm dược phẩm chữa bệnh ngày thu hút quan tâm nhà khoa học ưu điểm khơng độc hại độc tính, dễ hấp thu chuyển hóa thể Hiện nay, huyết khối động mạch huyết khối tĩnh mạch nguyên nhân hàng đầu gây nên tử vong toàn giới [10] Các thuốc chống đông máu biết đến như: Heparin, wafarin, hay thuốc chống ngưng tập tiểu cầu như: Aspirin, clopidogrel, prasugrel,… cho tác dụng điều trị tốt bên cạnh đó, chúng gây nên nhiều tác dụng phụ dị ứng, giảm tiểu cầu, loét dày,… [4] Trong năm gần đây, nghiên cứu nhằm tìm hợp chất từ tự nhiên tổng hợp có hoạt tính chống kết tập tiểu cầu, chống đông máu quan tâm đẩy mạnh Tuy nhiên, việc sử dụng chất tổng hợp gây nhiều tác dụng phụ Do đó, việc sử dụng hợp chất chiết xuất từ tự nhiên có khả chống đông máu, chống kết tập tiểu cầu, không gây tác dụng phụ cho sức khỏe lựa chọn hàng đầu việc nâng cao chất lượng thực phẩm, mỹ phẩm dược phẩm Cây Gừng đen (Distichochlamys citrea ) loài thực vật thuộc chi Gừng đen (Distichochlamys), họ Gừng (Zingiberaceae) Loài M.F.Newman phát Vườn quốc gia Bạch Mã (Thừa Thiên Huế) mô tả khoa học lần năm 1995 Đây lồi điển hình chi với màu xanh hoa màu vàng, có điểm vệt đỏ nụ Hiện nay, chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Gừng đen Theo y học cổ truyền, Gừng đen biết đến vị thuốc phá huyết hành khí mạnh Nhiều thầy thuốc y học dân tộc dùng Gừng đen vị thuốc để hỗ trợ điều trị nhiều chứng bệnh như: đau bụng đầy trướng, khí huyết ngưng trệ, bệnh máu đơng thành hòn, tiêu mủ, trị vết thương, mau lành da, mau lên da non,…[2] Để làm rõ sở khoa học giá trị sử dụng Gừng đen (Distichochclamys citrea), góp phần sử dụng hiệu tài nguyên thuốc vào điều trị bệnh huyết khối, em thực đề tài “Đánh giá hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu chống đông máu in vitro dịch chiết thân Gừng đen Việt Nam (Distichochlamys citrea)” Các mục tiêu đề tài là: Đánh giá hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu in vitro dịch chiết thân Gừng đen Việt Nam Đánh giá tác dụng chống đông máu in vitro dịch chiết thân Gừng đen Việt Nam ... tiêu đề tài là: Đánh giá hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu in vitro dịch chiết thân Gừng đen Việt Nam Đánh giá tác dụng chống đông máu in vitro dịch chiết thân Gừng đen Việt Nam CHƯƠNG TỔNG... ANH ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CHỐNG NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VÀ CHỐNG ĐƠNG MÁU IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT THÂN LÁ CÂY GỪNG ĐEN VIỆT NAM (DISTICHOCHLAMYS CITREA) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: ... nghiên cứu 21 2.2.1 Đánh giá hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu dịch chiết thân Gừng đen 23 2.2.2 Đánh giá hoạt tính chống đơng máu dịch chiết thân Gừng đen 24 2.3