Đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính chống oxy hóa in vitro của dịch chiết thân lá loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii)” tiến hành với các mục tiêu cụ thể như sau: Nghiên cứu thành phần hóa học của dịch chiết thân lá loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii); đánh giá hoạt tính chống oxy hóa in vitro của dịch chiết thân lá loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii).
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC - - LÊ THỊ HỒNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT THÂN LÁ LỒI GỪNG ORLOW (Distichochlamys Orlowii) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC - - LÊ THỊ HỒNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT THÂN LÁ LỒI GỪNG ORLOW (Distichochlamys Orlowii) KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khoá: QH.2017.Y Người hướng dẫn: TS LÊ HỒNG LUYẾN ThS NGUYỄN XUÂN TÙNG HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Lê Hồng Luyến, trường Đại học Khoa học Công nghệ Hà Nội – Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam ThS Nguyễn Xuân Tùng, trường Đại học Y dược – Đại học Quốc Gia Hà Nội ln tận tình hướng dẫn, bảo, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện tốt để em hồn thành khóa luận Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Ban giám hiệu, thầy cô Trường Đại học Y dược – Đại học Quốc Gia Hà Nội nói chung Bộ mơn Khoa học sở Dược nói riêng giảng dạy, giúp đỡ tạo điều kiện để em học tập, nghiên cứu, rèn luyện suốt năm học vừa qua suốt trình thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, anh chị em, bạn bè ủng hộ, đồng hành, quan tâm, sát cánh em suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Mặc dù có nhiều cố gắng, nỗ lực, song với kiến thức, kỹ thời gian cịn hạn chế, khóa luận em khó tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khóa luận em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Lê Thị Hồng DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ABTS 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) DCM Dichloromethane DMSO Dimethyl sulfoxide DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl EtOAc Ethylacetate EtOH Ethanol GC-MS Sắc ký khí khối phổ IC50 Nồng độ ức chế 50% (μg/mL) (50% Inhibitory Concentration) MeOH Methanol RNS Reactive Nitrogen Species ROS Reactive Oxygen Species TFC Tổng hàm lượng flavonoid (Total Flavonoid Content) TPC Tổng hàm lượng phenolic (Total Phenolic Content) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân bố họ Gừng (Zingibeaceae) Quốc gia Châu Á Bảng 1.2 Các chất hoạt động chứa oxy nito 11 Bảng 3.1 Hiệu suất chiết (%) trình chiết thân Distichochlamys orlowii 25 Bảng 3.2 Khả quét gốc tự DPPH (IC50, μg/mL) 26 Bảng 3.3 Khả quét gốc tự ABTS (IC50, μg/mL) 29 Bảng 3.4 Hàm lượng phenolic toàn phần, flavonoid toàn phần 32 Bảng 3.5 Các thành phần hợp chất xác định dịch chiết n-Hexan thân Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) qua GC-MS 37 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) Hình 1.2 Cấu tạo gốc tự 11 Hình 2.1 Cây Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) 15 Hình 2.2 Máy đo quang spectramax ID5 17 Hình 2.3 Hệ thống máy GC-MS 17 Hình 2.4 Hệ thống Soxhlet 18 Hình 3.1 Ảnh hưởng phương pháp chiết đến khả trung hòa gốc tự DPPH 27 Hình 3.2 Ảnh hưởng phương pháp chiết đến khả quét gốc tự ABTS+ cao chiết thân loài Distichochlamys orlowii 30 Hình 3.3 Đường chuẩn Acid Galic 31 Hình 3.4 Đường chuẩn Quercertin 32 Hình 3.5 Ảnh hưởng phương pháp chiết tới tổng hàm lượng phenolic 34 Hình 3.6 Ảnh hưởng phương pháp chiết tới tổng hàm lượng flavonoid 36 Hình 3.7 Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết n-Hexan thân loài D.Orlowii 37 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan 1.1.1 Tổng quan họ gừng (Zingibeaceae) 1.1.2 Tổng quan Chi Distichochlamys 1.1.3 Đặc điểm thực vật phân bố loài Distichochlamys orlowii 1.2 Tổng quan chiết xuất 1.2.1 Khái niệm chiết xuất 1.2.2 Các kỹ thuật chiết xuất 1.3 Tổng quan oxy hóa 10 1.3.1 Gốc tự 10 1.3.2 Hệ thống chống oxy hóa thể 12 1.3.3 Một số phương pháp đánh giá tác dụng chống oxy hóa 13 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.1 Nguyên liệu 15 2.1.2 Hóa chất sử dụng 15 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Chiết xuất thân Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) phương pháp chiết soxhlet 18 2.2.2 Chiết xuất thân Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) phương pháp chiết lắc 19 2.2.3 Chiết xuất thân Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) phương pháp chiết siêu âm 19 2.2.4 Phương pháp xác định khả quét gốc tự DPPH 19 2.2.5 Xác định khả quét gốc tự ABTS 20 2.2.6 Xác định hàm lượng phenolic tổng flavonoid tổng có cao chiết thân lồi D orlowii 21 2.2.7 Sắc ký khí - Khối phổ (GC-MS) 23 2.2.8 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 25 3.1 Hiệu suất chiết 25 3.2 Khả chống oxy hóa in vitro cao chiết thân Distichochlamys orlowii.26 3.2.1 Khả quét gốc tự DPPH 26 3.2.2 Khả quét gốc tự ABTS 28 3.3 Thành phần hóa học dịch chiết thân loài Distichochlamys orlowii 31 3.3.1 Hàm lượng phenolic toàn phần, flavonoid toàn phần thân Distichochlamys orlowii 31 3.3.2 Xác định thành phần tinh dầu cao chiết thân D orlowii 37 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 40 4.1 Về hiệu suất chiết 40 4.2 Về khả chống oxy hóa 40 4.2.1 Khả quét gốc tự DPPH 40 4.2.2 Khả quét gốc tự ABTS 41 4.3 Về thành phần hóa học 41 4.3.1 Tổng hàm lượng henolic tổng hàm lượng Flavonoid 41 4.3.2 Đánh giá thành phần tinh dầu dịch chiết thân loài D orlowii 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Trong thể người tồn cân dạng oxy hoạt động dạng chống oxy hóa Đó trạng thái cân nội môi (homeostasis) Do ảnh hưởng nhiều yếu tố tác động từ bên hay bên thể, làm cho cân di chuyển theo chiều hướng gia tăng dạng oxy hóa hoạt động, hình thành nhiều gốc tự Có nhiều chứng cho thấy gốc tự nguyên nhân quan trọng gây nên số bệnh mạn tính thối hóa xơ vữa động mạch, bệnh tim thiếu máu cục bộ, ung thư, tiểu đường, bệnh thối hóa thần kinh lão hóa [1] Các chất chống oxy hóa tự nhiên tổng hợp có vai trị làm giảm ngăn chặn hình thành gốc tự thể, góp phần vào việc chống lại hình thành bệnh tật thể người [2] Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu gần cho thấy chất chống oxy hóa tự nhiên thể nhiều tác dụng ưu việt so với chất tổng hợp Do đó, việc tìm kiếm hợp chất tự nhiên có khả chống oxy hóa trở nên quan trọng cấp thiết Các hợp chất phenolic, flavonoid, tanin phổ biến tự nhiên chứng minh có tác dụng chống oxy hóa cao thơng qua khả quét gốc tự Một nguồn thực phẩm chứa nồng độ cao chất chống oxy hóa rau, củ, [3] Trong tài nguyên thực vật Việt Nam, gừng loại quen thuộc Nó xem nguồn nguyên liệu có giá trị để làm gia vị chế biến thực phẩm làm thuốc chữa bệnh [4] Trong họ Gừng (Zingiberaceae) có nhiều loại mơ tả nghiên cứu Tuy nhiên, lồi Distichochlamys orlowii có nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học hoạt tính sinh học chúng Do đó, để làm rõ sở khoa học giá trị sử dụng Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii), góp phần sử dụng hiệu tài nguyên thuốc, em tiến hành đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính chống oxy hóa in vitro dịch chiết thân loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii)” với mục tiêu cụ thể sau: Nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết thân loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa in vitro dịch chiết thân loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) ... Orlow (Distichochlamys orlowii)? ?? với mục tiêu cụ thể sau: Nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết thân loài Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii) Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa in vitro dịch chiết. .. dụng Gừng Orlow (Distichochlamys orlowii), góp phần sử dụng hiệu tài nguyên thuốc, em tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính chống oxy hóa in vitro dịch chiết thân lồi Gừng Orlow. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC - - LÊ THỊ HỒNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT THÂN LÁ LỒI GỪNG ORLOW (Distichochlamys Orlowii)