Kĩ thuật tạo vector tái tổ hợp

NHÓM CÁC PHƯƠNG PHÁP KĨ THUẬT SINH HỌC Chủ Đề: Kĩ Thuật Tạo Vector Tái Tổ Hợp KHÁI QUÁT CHUNG Nội dung 01 Phần mở đầu Nội dung 02 Vector tái tổ hợp Nội dung 03 Vector biểu Gen - Là CN cốt lõi CNSH đại đời từ 1977 Bao gồm kĩ thuật thực axit Nucleic, nhằm nghiên cứu cấu trúc gen, điều chỉnh biến đổi gen KỸ THUẬ T GEN PHẦN MỞ ĐẦU CÁC KĨ THUẬT CHỦ YẾU BẢN CHẤT KỸ THUẬT GEN + Kĩ thuật tách chiết gen + Nhân dịng gen + Xác định trình tự gen + Thiết kế vecto chuyển gen + Biểu gen thể nhân ghép nối hay biến đổi có định hướng gen gen tạo gen , gen mới, để tạo protein tái tổ hợp hình thành nên đặc điểm , tính trạng sinh vật theo mong muốn người Vector chuyển gen Khái niệm : Vector phân tử DNA nhỏ( ngắn) dạng thẳng dạng vịng , người ta cài mảnh DNA ( gen quý) cần nghiên cứu Vector chuyển gen đoạn phân tử DNA nhỏ có khả mang đoạn DNA ngoại lai cần thiết xâm nhập vào tế bào chủ có khả tự tái khơng phụ thuộc vào chép tế bào chủ Vector chuyển gen Đặc điểm : -Vector chuyển gen phải có điểm khởi đầu chép để tự chép mà tồn độc lập tế bào -Có đoạn trình tự nhận biết cho emzym giới hạn cắt để hở tạo nơi lắp ráp -Có đoạn trình tự khởi điểm ( pranoter) - Có dấu chuẩn chọn lọc để dễ dàng phát nhận biết tế bào chủ nhận gen kháng sinh chất, gen tổng hợp chất màu Các đặc tính quan trọng + Chứa đoạn gen vơ hiệu hóa đoạn DNA khơng mong muốn + Có khả tạo nhiều nhằm có số lượng lớn, đảm bảo khuếch đại gen Các loại vector - Vector plasmid: + Plasmid phân tử DNA có kích thước nhỏ (2-5kb), dạng vịng, nằm độc lập tế bào chất, có khả chép độc lập Mỗi tế bào vi khuẩn có trung bình khoảng 20 plasmid +Có nhiều loại plasmid khác Các loại vector Vector phage: -Các phage (virut vi khuẩn) dùng làm vector chuyển gen khả thực việc mang gen từ tế bào vi khuẩn cho sang tế bào chủ nhận (tải nạp) -Phage λ dùng rộng rãi để giải trình tự lập ngân hàng gen Những yêu cầu tối thiểu vector chuyển gen: Có cần điều + Vector phải có vùng nhận biết enzym giới hạn loại II chủ qua nhiều hệ gây xáo trộn tế bào + Vector phải tồn trongkiện tế bào chủ khơng + Vector có kích thước nhỏ tốt để thu nhận lượng DNA tối đa dễ biến nạp vậy???? vào tế bào chủ + Có khả tự chép tích cực tế bào chủ, không phụ thuộc vào chép gen tế bào chủ + Đảm bảo di truyền bền vững DNA tái tổ hợp + Có khả thẩm tốt vào tế bào chủ vector mang gen tái tổ hợp + Dễ theo dõi biểu gen tái tổ hợp yêu cầu cần thiết cho việc phát dòng cần tìm + Tinh chế dễ dàng với khối lượng lớn gen gắn vào vector ...NHÓM CÁC PHƯƠNG PHÁP KĨ THUẬT SINH HỌC Chủ Đề: Kĩ Thuật Tạo Vector Tái Tổ Hợp KHÁI QUÁT CHUNG Nội dung 01 Phần mở đầu Nội dung 02 Vector tái tổ hợp Nội dung 03 Vector biểu Gen - Là CN cốt... gen tế bào chủ + Đảm bảo di truyền bền vững DNA tái tổ hợp + Có khả thẩm tốt vào tế bào chủ vector mang gen tái tổ hợp + Dễ theo dõi biểu gen tái tổ hợp yêu cầu cần thiết cho việc phát dịng cần... lọc + Sử dụng kĩ thuật nhân gen PCR để nhân gen cần tách dòng lên số lượng cần thiết - Tổng hợp nhân tạo đoạn gen cần tách dịng + Dự đốn trình tự gen + Thực kĩ thuật tổng hợp nhân tạo đoạn oligonucleotit