(Luận văn thạc sĩ) xác định thành phần hóa học và đặc điểm cấu trúc của polysaccharide sulfate được phân lập từ rong nâu sargassum microcystum

Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân hướng dẫn PGS.TS Trần Thị Thanh Vân tham khảo thêm tài liệu đáng tin cậy, có nguồn gốc rõ ràng Các số liệu, kết luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Nha Trang, ngày 25 tháng 12 năm 2020 Tác giả luận văn Trần Nữ Ngọc Minh Luan van Lời cảm ơn Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực đồng nghiệp bạn bè Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Trần Thị Thanh Vân gợi mở cho ý tưởng nghiên cứu, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện tốt giúp tơi hồn thành đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Ban chủ nhiệm Khoa Hóa học Phịng Đào tạo tổ chức công tác giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thiện luận văn thủ tục cần thiết Tôi chân thành cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện mặt Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ứng dụng Công nghệ Nha Trang anh chị em công tác phịng Hóa Phân tích tạo điều kiện tốt để làm thực nghiệm động viên, giúp đỡ để tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Sở Y tế Ninh Thuận, Trung tâm kiểm soát bệnh tật tỉnh Ninh Thuận tạo điều kiện tốt để tơi có thời gian học tập nghiên cứu, hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời tri ân tới gia đình, bạn bè, người thân động viên giúp đỡ suốt trình học tập hồn thành luận văn Nha Trang, ngày 25 tháng 12 năm 2020 Xin chân thành cảm ơn! Trần Nữ Ngọc Minh Luan van Danh mục kí hiệu chữ viết tắt Carbon-13 NMR Spectroscopy Phổ CHTHN Carbon 13 COSY Correlation Spectroscopy Phổ tương tác hai chiều đồng hạt nhân DMSO Dimethylsulfoxide Dimethylsulfoxid DSS 4,4-dimethyl-4silapentane-1-sulfonic acid EtOH Ethanol Ethanol Electron Spray Ionization - Mass Phổ khối ion hóa nguồn mù electron Electron Spray Ionization - Mass/Spray Ionization Mass Phổ khối ion hóa nguồn mù electron hai lần Fuc Fucose Đường fucose Fucf Fucofuranose Fucofuranose Fucp Fucopyranose Fucopyranose Gal Galactose Đường galactose GlaNA N-Acetylgalactosamine Đường NAcetylgalactosamine GPC Gel permeation chromatography 13 C-NMR ESI-MS ESI-MS/MS Luan van Axit 4,4-dimethyl-4silapentane-1-sulfonic Sắc ký lọc gel Gluc Glucose Đường glucose GlucA Glucuronic Axit Axit glucuronic HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng cao áp HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence Phổ tương tác dị nhân qua liên kết Proton NMR Spectroscopy Phổ CHTHN proton IR Infrared Spectroscopy desorption/ionization Phổ hồng ngoại Man Mannose Đường mannose MeOH Methanol Methanol NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân (CHTHN) TFA Trifluoroacetic axit Axit trifluoroacetic TMS Tetra metyl silan Tetra metyl silan Xyl Xylose Đường xylose H-NMR Luan van DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hoá học (%) số loài rong biển 11 Bảng 1.2 Thành phần hóa học số Fucoidan 18 Bảng 1.3 Sự phân bố trọng lượng phân tử Fucoidan 25 Bảng 1.4 Cấu trúc hóa học Fucoidan từ số loài rong nâu…… 30 Bảng 1.5 Hàm lượng, thành phần hóa học KLPT trung bình mẫu Fucoidan phân lập từ lồi rong nâu Việt Nam …………………………….36 Bảng 1.6 Hoạt tính gây độc tế bào mẫu Fucoidan dòng tế bào ung thư gan Hep-G2 ung thư mô liên kết RD ……………………………38 Bảng 2.1 Các mảnh đặc trưng cho sulfate fucose có nhóm sulfate vị trí khác phổ khối dạng ion âm………………………………… 47 Bảng 3.1 Hàm lượng thu nhận thành phần hóa học Fucoidan từ hai khu vực biển khác nhau………………………………………………………… 50 Bảng 3.2 Hàm lượng Fucoidan thu nhận từ 06 loài rong nâu Việt Nam……51 Bảng 3.3 Hàm lượng Fucoidan thu nhận từ 07 loài rong nâu giới ……52 Bảng 3.4 Hàm lượng thu nhận thành phần hóa học Fucoidan từ hai khu vực biển khác 54 Bảng 3.5 Thành phần hóa học mẫu Fucoidan chiết từ rong S.microcystum 55 Bảng 3.6 Hàm lượng, thành phần hóa học KLPT trung bình mẫu Fucoidan phân lập từ loài chi với S.microcystum rong nâu Việt Nam………………………………………………………………………….56 Bảng 3.7 Hàm lượng thu nhận phân đoạn Fucoidan………………… 59 Bảng 3.8.Thành phần hóa học phân đoạn chiết từ rong S.microcystum 62 Bảng 3.9 Một số mảnh đặc trưng phổ ESI-MS Fucoidan………….72 Luan van DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Biểu đồ so sánh ngành rong Thế giới…………………… Hình 1.2 Bản đồ vị trí khu vực điều tra phân bố số chi rong nâu tỉnh Khánh Hòa 14 Hình 1.3 Cấu trúc Fucoidan từ F.vesiculosus mô tả vào năm 1950 19 Hình 1.4 Cấu trúc Fucoidan có sunfat vị trí liên kết 3-O-linked từ lồi rong E Kurome mơ tả vào năm 1991 20 Hình 1.5 Cấu trúc Fucoidan phân đoạn F32 tách từ rong nâu Hizikia fusiforme 21 Hình 1.6 Cấu trúc phân đoạn Fucoidan tách phân lập từ rong nâu A.nodusum 21 Hình 1.7 Cấu trúc phân đoạn Fucoidan tách phân lập từ rong nâu Cladosiphon okamuranus 22 Hình 1.8 Cấu trúc phân đoạn Fucoidan tách phân lập từ rong nâu Chorda filum 23 Hình 1.9 Cấu trúc Fucoidan từ Fucus serratus 24 Hình 1.10 Cấu trúc Fucoidan từ Sargassum polycystum 34 Hình 1.11 Mảnh cấu trúc Fucoidan chiết tách từ rong Turbinaria decurrens 37 Hình 1.12 Sơ đồ cấu trúc deS-2, deS-4, deS-6 rong Sargassum aquifolium 39 Hình 2.1 Mẫu rong Sargassum microcystum 40 Hình 2.2 Sơ đồ chiết theo quyền Nga (Paten WO 2005,014657) 41 Hình 2.3 Nguyên lý hoạt động k thuật ion hóa ESI-MS .45 Hình 2.4 Cơ chế phân mảnh carbohydrate…………………………… 46 Hình 2.5 Cơ chế phân mảnh carbohydrate……………………………46 Hình 3.1 Sắc ký đồ HPLC mẫu đường đơn chuẩn…………………53 Luan van Hình 3.2 Phân đoạn Fucoidan chiết từ rong S.microcystum sắc ký trao đổi anion cột DEAE-cellulose…………………………………… 59 Hình 3.3 Sắc ký đồ HPLC xác định thành phần đường đơn phân đoạn F1…………………………………………………………………………….60 Hình 3.4 Sắc ký đồ HPLC xác định thành phần đường đơn phân đoạn F3…………………………………………………………………………….61 Hình 3.5 Sắc ký đồ HPLC xác định thành phần đường đơn phân đoạn F4…………………………………………………………………………….61 Hình 3.6 Sắc ký đồ HPLC xác định thành phần đường đơn phân đoạn F5 61 Hình 3.7 Phổ hồng ngoại IR mẫu Fucoidan thô chiết tách từ rong Sargassum microcystum…………………………………………………… 65 Hình 3.8 Phổ hồng ngoại IR phân đoạn F4 S.microcystum 66 Hình 3.9a Phổ 1H-NMR F4 67 Hình 3.9b Phổ 13C-NMR F4 68 Hình 3.10 Phổ HSQC phân đoạn F4 70 Hình 3.11 Phổ ESI-MS phân đoạn F4 72 Hình 3.12 Phổ ESIMS/MS ion [FucSO3]-, m/z 243……………………74 Hình 3.13 Phổ ESIMS/MS ion [Fuc2SO3]-, m/z 389………………… 75 Hình 3.14 Phổ ESIMS/MS ion [FucGalSO3]-, m/z 405……………… 76 Hình 3.15 Sự phân mảnh Fucoidan từ rong nâu Sargassum microcystum dựa vào phổ ESI-MS/MS……………………………………………………78 Hình 3.16 Cấu trúc Fucoidan F4 từ rong nâu Sargassum microcystum 79 Luan van MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ RONG NÂU 1.1.1 Giới thiệu rong biển 1.1.2 Giới thiệu rong nâu 12 1.1.2.1 Phân loại phân bố rong nâu giới 12 1.1.2.2 Phân loại phân bố rong nâu Việt Nam 12 1.1.3 Thành phần hóa học rong Nâu 15 1.1.3.1 Polysaccharide 15 1.1.3.2 Một số hợp chất khác 16 1.2 TỔNG QUAN VỀ FUCOIDAN 17 1.2.1 Giới thiệu chung Fucoidan 17 1.2.2 Thành phần hóa học Fucoidan số loài rong nâu 17 1.2.3 Cấu trúc hóa học Fucoidan 19 1.2.4 Tính chất hóa lý Fucoidan 24 1.2.5 Hoạt tính sinh học ứng dụng Fucoidan 25 1.2.5.1 oạt t nh chống ng t máu chống hu ết khối 25 1.2.5.2 oạt t nh chống virus 26 1.2.5.3 oạt t nh kháng u iều hòa miễn dịch 26 1.2.5.4 oạt t nh chống ox hóa 27 1.2.5.5 Giảm lipid máu 27 1.2.5.6 Kháng viêm 27 1.2.5.7 Chống lại bệnh gan 28 1.2.5.8 oạt t nh kháng khuẩn 28 Luan van 1.2.5 ác d ng giảm l ợng ng hu ết máu 28 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM LIÊN QUAN ĐẾN NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI 29 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 29 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 32 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 40 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 40 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.2.1 Phương pháp chiết tách phân đoạn Fucoidan 40 2.2.1.1 Ph ơng pháp chiết tách Fucoidan từ rong nâu 40 2.2.1.2 Ph ơng pháp phân oạn Fucoidan 40 2.2.2 Phương pháp phân tích cấu trúc Fucoidan 41 2.2.2.1 Ph ơng pháp xác ịnh hàm l ợng tổng carboh drate 41 2.2.2.2 Ph ơng pháp xác ịnh thành phần monosaccharide 41 2.2.2.3 Ph ơng pháp xác ịnh hàm l ợng sulfate 42 2.2.2.4 Ph ơng pháp xác ịnh hàm l ợng uronic axit 42 2.2.2.5 Ph ơng pháp phổ hồng ngoại IR 42 2.2.2.6 Ph ơng pháp phổ cộng h ởng từ hạt nhân NMR 42 2.2.2.7 Ph ơng pháp phổ MS 45 2.3 THỰC NGHIỆM 47 2.3.1 Chiết tách phân đoạn tinh chế Fucoidan từ rong nâu 47 2.3.2 Phân tích hàm lượng tổng carbohydrate 48 2.3.3 Phân tích thành phần monosaccharide 48 2.3.4 Phân tích hàm lượng sulfate 49 Luan van 2.3.5 Phân tích hàm lượng uronic axit 49 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50 3.1 CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN LẬP FUCOIDAN TỪ RONG NÂU 50 3.2 PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA HỌC 53 3.2.1 Xây dựng đường chuẩn 53 3.2.2 Phân tích thành phần hóa học Fucoidan 54 3.2.3 Tách phân đoạn thành phần hóa học phân đoạn Fucoidan 58 3.3 ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC CỦA POLYSACCHARIDE SULFATE 64 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 80 4.1 KẾT LUẬN 80 4.2 KIẾN NGHỊ 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO 82 Luan van 88 52.Bilan M.I., Grachev A.A., Shashkov A.S, Thuy T.T.T, Van T.T.T, Ly B.M, Nifantiev N.E, Usov A.I, 2013, Preliminary investigation of a highly sulfateed galactofucan fraction isolated from the brown alga Sargassum polycystum, Carbohydrate Research, 377, pp 48-57 53.Chevolot, L.; Mulloy, B.; Racqueline, J, 2001, A disaccharide repeat unit is the structure in Fucoidans from two species of brown algae, Carbohydrate Research, 330, pp 529-535 54.Chizhov, A.O.; Dell, A; Morris, H.R, 1999, A study of Fucoidan from the brown seaweed Chorda filum, Carbohydrate Research, 320, pp 108-119 55.Usov A I ; Smirnova G P ; Bilan M I., 1998, Polysaccharides of brown alga Laminaria Saccharina (l.) lam asa source of Fucoidan, Bioorganic chemisppy, 24 (6), pp 437-445 56.Adhikari Utpal Cecilia, G.Mateu, KausikChattopadhyay, Carlos A.Pujol, Elsa B.Damonte, BimalenduRay, 2006, Structure and antiviral activity of sulfated fucans from Stoechospermum Marginatum, Phytochemisppy, 67(22), pp 2474-2482 57.Anastyuk, S D., Imbs, T.M., Shevchenko, N.M., Dmitrenok, P.S., Zvyagintseva, T.N, ESIMS analysis of Fucoidan preparations from Costaria costata, Chem Nat Comp, 2009, 45, 79-86 58.Anastyuk, S.D.; Shevchenko, N.M.; Nazarenko, E.L.; Imbs, T.I.; Gorbach, V.I.; Dmitrenok, P.S.; Zvyagintseva, T.N, Structural analysis of a highly sunphated fucan from the brown alga Laminaria cichorioides by tandem MALDI and ESI mass spectrometry, Carbohydr Res, 2010, 345, 22062212 59.A.I Usov, G.P Smirnova, M.I Bilan, A.S Shashkov, Polysaccharides of Algae: 53 Brown Alga Laminaria saccharina (L.) Lam as a Source of Fucoidan, Russ J Bioorg Chem, 1998, 24, 382-389 60.Roza V Usoltseva, Stanislav D Anastyuk, Natalia M Shevchenko, Valerii V Surits, Artem S Silchenko, Vladimir V Isakov, Tatiana N Zvyagintseva, Luan van 89 Pham Duc Thinh, Svetlana P Ermakova, 2017, Polysaccharides from brown algae Sargassum duplicatum: The structure and anticancer activity in vitro, Carbohydrate Research 61.Roza V Usoltseva, Stanislav D Anastyuk, Irina A Ishina, Vladimir V Isakov, Tatiana N Zvyagintseva , Pham Duc Thinh, Pavel A Zadorozhny, Pavel S Dmitrenok, Svetlana P Ermakova, 2017, Structural characteristics and anticancer activity in vitro of Fucoidan from brown alga Padina boryana, Carbohydrate Research 62.Nguyễn Duy Nhứt, Bùi Minh Lý, Thành Thị Thu Thủy, Nguyễn Mạnh Cường, Trần Văn Sung, 2009, Nghiên cứu Fucoidan có hoạt tính gây độc tế bào tách từ rong nâu Sargasum swartzii phương pháp phổ khối nhiều lần, ạp ch óa học ,47 (3), tr 300 - 307 63.Nguyễn Duy Nhứt, 2008, Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt t nh sinh học pol saccharide từ số loài rong nâu tỉnh Khánh ịa, Luận án tiến s Hóa học, Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, Hà Nội 64.Thuy Thi Thanh Thu, Van Thi Thanh Tran, Yoshiaki Yuguchi, Ly Minh Bui and Tai Tien Nguyen, 2013, Structure of Fucoidan from brown seaweed Turbina ornata as Studied by Elecppospray ionization Mass spectrometry (MSIMS) and Small Angle X-ray Scattering (SAXS) Techniques, Mar.Drugs, 11, pp 2431-2443 65.Phạm Đức Thịnh, 2015, Nghiên cứu phân t ch thành phần, cấu tr c hóa học Fucoidan có hoạt t nh sinh học từ số loài rong nâu Vịnh Nha Trang, Luận án tiến sĩ Hóa học, Viện Hóa học, Hà Nội 66.Hồ Đức Cường, 2014, Nghiên cứu cấu tr c khảo sát hoạt t nh sinh học Fucoidan alginate từ hai loài rong nâu Sargassum henslowianun Sargassum swartzii Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Hóa học, Đại học Bách Khoa Hà Nội Luan van 90 67.Bùi Văn Nguyên, 2019, Nghiên cứu c iểm cấu pp c hoạt t nh sinh học Fucoidan từ số loài rong nâu Việt Nam, Luận án tiến sĩ Hóa học, Viện Hóa học, Hà Nội 68.Dubois, M., Gilles, K A., Hamilton, J K., Rebers, P A., and Smith, F 1956, Colorimeppic method for determination of sugars and related substances, Anal Chem, 28, pp 350-356 69.Dodgson, K S.; Price, R G A, 1962, Note on the Determination of the Ester Sulfate Content of Sulfated Polysaccharides, Biochem J 84, pp 106 110 70.Bitter, T.; Muir, H.M, 1962, A modified uronic acid carbazole reaction Anal Biochem, 4, pp 330–334 71.Cheng H N And Thomas G Neiss (2012), “Solution NMR Spectroscopy of Food Polysaccharides”, Polymers Reviews, 52 (2), pp – 114 72 Tissot, B., Salpin, J Y., Martinez, M., Gaigeota M P & Daniel, R (2006) Differentiation of the Fucoidan sulfated L-fucose isomers constituents by CE-ESIMS and molecular modeling Carbohydrate Research, 341, 598–609 73.Duarate, M.; Cardoso, M.; Noseda, M, 2001, Structural studies on Fucoidans from the brown seaweed Sargassum stenophyllum, Carbohydrate Research, 333, pp 281-293 74.Hiroe Mori and Kazutosi Nisizawa, 1982, Sugar Constituents of Sulfated Polysaccharides from the Fronds of Sargassum ringgoldianum, Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries 48 (7), pp 981-986 75.Cun Zhuang, Hiroko Itoh, Takashi Mizuno, and Hitoshi Ito, 1995, Antitumor Active Fucoidan from the Brown Seaweed, Umitoranoo (Sargassum thunbergii), Biosci, Biotech, Biochem 59 (4), pp 563-567 76.Riki Shiroma, Teruko Konishi, Shuntoku Uechi and Masakuni Tako, 2008, Structural Study of Fucoidan from the Brown Seaweed Hizikia fusiformis, Food Sci, Technol Research, 14 (2), pp 176 - 182 Luan van 91 77.Eluvakkal T, Sivakumar S.R and Arunkumar K, 2010, Fucoidan in Some Indian Brown Seaweeds Found along the Coast Gulf of Mannar, Inter Journal of Botany, (2), pp 176-181 78.Virginia García-Ríos, Elvira Ríos-Lea, Daniel Robledo and Yolanda FreilePelegrin, 2012, Polysaccharides composition from Tropical brown seaweeds, Phycological Research, 60, pp 305-315 79.Peter N Pusey, Dennis E Koppel, Dale E Schaefer, Rafael D CameriniOtero, and Seymour H Koenig, Intensity fluctuation spectroscopy of laser light scattered by solutions of spherical viruses, R17, Q.beta., BSV, PM2, and T7 I Light-scattering technique, Biochemistry, 1974, 13 (5), 952–960 80 Maria I Bilan, Alexey A Grachev, Nadezhda E Ustuzhanina, Alexander S Shashkov, Nikolay E Nifantiev and Anatolii I Usov (2002), “Structure of a Fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C.Ag”, Carbohydrate Research, Volume 337, Issue 8,17April Pages 719-730 81 Lionel Chevolot, Barbara Mulloy, Jacqueline Ratiskol, Alain Foucault, Sylvia Colliec-Jouaultb (2001), “A dissaccharide repeat unit is the major structure in Fucoidan from two species of brown algae”, Carbohydrate Research-330, pp 529-535 82 Maria E.R Duarte,a Marc A Cardoso,a Miguel D Noseda,a,1 Alberto S Cerezo (2001), “Structural studies on Fucoidans from the brown seaweed Sargassum stenoph llum”, Carbohydrate Research 333, pp 281–293 83 Maria I Bilan, Alexey A Grachev, Alexander S Shashkov, Nikolay E Nifantiev and Anatolii I Usov (2006), “Structure of a Fucoidan from the brown seaweed Fucus serratus L”, Carbohydrate Research-314, pp 238245 84 Be´range`re Tissot,a,_ Jean-Yves Salpin,a Michael Martinez,b, MariePierre Gaigeota,b and Re´gis Daniela (2006), “The Synthesis and NMR and Conformational Studies of Fucoidan Fragments”, Carbohydrate Research 341, pp598–609 Luan van 92 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN CARBOHYDRATE BẢNG GIÁ TRỊ MẬT ĐỘ QUANG TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ CHUẨN Nồng độ carbohydrate (µg/ml) λ=490nm A1 A2 Atb 50 0,19 0,19 0,19 100 0,42 0,43 0,42 200 0,81 0,81 0,81 250 1,08 1,08 1,08 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN CARBOHYDRATE (µg/mL)-MẬT ĐỘ QUANG Phương trình có dạng: y = 0,004x - 0,015 Với giá trị R2= 0,996 Trong đó: x : nồng độ (µg/mL) y : mật độ quang Luan van 93 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN SULFATE BẢNG GIÁ TRỊ MẬT ĐỘ QUANG TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ CHUẨN λ =360nm Nồng độ sulfate (µg/ml) A1 A2 Atb 100 0,18 0,18 0,18 250 0,24 0,25 0,25 500 0,33 0,32 0,33 750 0,40 0,40 0,40 1000 0,49 0,49 0,49 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN SULFATE (µg/mL)-MẬT ĐỘ QUANG Phương trình có dạng: y = 0,0003x + 0,155 Với giá trị R2= 0,997 Trong đó: x : nồng độ (µg/mL) y : mật độ quang Luan van 94 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN URONIC ACID BẢNG GIÁ TRỊ MẬT ĐỘ QUANG TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ CHUẨN λ =525nm Nồng độ uronic acid (µg/ml) A1 A2 Atb 10 0,12 0,12 0,12 20 0,26 0,27 0,27 30 0,40 0,40 0,40 40 0,54 0,54 0,54 50 0,67 0,67 0,67 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN URONIC ACID (µg/mL)-MẬT ĐỘ QUANG Phương trình có dạng: y = 0,013x - 0,016 Với giá trị R2= 0,999 Trong đó: x: nồng độ (µg/mL) y : mật độ quang Luan van 95 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN FUCOSE BẢNG GIÁ TRỊ DIỆN TÍCH PEAK TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ FUCOSE Nồng độ fucose (µmol/L) Diện tích peak 250 56,95 500 113,32 1000 223,72 2000 437,31 5000 1001,16 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN URONIC FUCOSE (µmol/mL) Phương trình có dạng: y = 0,1979x + 20,203 Với giá trị R2= 0,9987 Trong đó: x: nồng độ (µmol/mL) y : Diện tích peak Luan van 96 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN GALACTOSE BẢNG GIÁ TRỊ DIỆN TÍCH PEAK TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ GALACTOSE Nồng độ galactose(µmol/L) Diện tích peak 250 124,09 500 247,87 1000 494,48 2000 984,46 5000 2308,25 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN GALACTOSE (µmol/mL) Phương trình có dạng: y = 0,4587x + 29,042 Với giá trị R2= 0,9993 Trong đó: x : nồng độ (µmol/mL) y: Diện tích peak Luan van 97 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN GLUCOSE BẢNG GIÁ TRỊ DIỆN TÍCH PEAK TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ GLUCOSE Nồng độ glucose(µmol/L) Diện tích peak 250 103,85 500 206,57 1000 408,00 2000 800,49 5000 1812,17 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN GLUCOSE (µmol/mL) Phương trình có dạng: y = 0,358x + 39,759 Với giá trị R2= 0,9983 Trong đó: x: nồng độ (µmol/mL) y: Diện tích peak Luan van 98 PHỤ LỤC SỐ LIỆU XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN N-AXETYL GALACTOSAMINE BẢNG GIÁ TRỊ DIỆN TÍCH PEAK TƯƠNG ỨNG VỚI NỒNG ĐỘ N-AXETYL GALACTOSAMINE Nồng độ N-axetyl galactosamine (µmol/L) Diện tích peak 250 128,61 500 224,08 1000 351,64 2000 508,35 5000 1100,00 ĐỒ THỊ ĐƯỜNG CHUẨN N-AXETYL GALACTOSAMINE (µmol/mL) Phương trình có dạng: y = 0,1977x + 116,59 Với giá trị R2= 0,9951 Trong đó: x : nồng độ (µmol/mL) y : Diện tích peak Luan van 99 PHỤC LỤC CÁC ĐỈNH PHỔ ĐẶC TRƯNG CỦA FUCOIDAN TRÊN PHỔ HỒNG NGOẠI Đỉnh Dao động 775 Dao động dãn vòng - anomer 802-810 Dao động gấp liên kết C-O-S nhóm SO3 vị trí C6 822 Dao động gấp liên kết C-O-S nhóm SO3 vị trí equatorial 845 Dao động gấp liên kết C-O-S nhóm SO3 vị trí axial 847 Dao động liên kết C1-H -anomer 893 Dao động liên kết C1-H anomer 917 Dao động vòng -anomer 1030-1167 Dao động hoá trị hemiacetal 1034 Dao động hoá trị đối xứng C-O-C 1255-1264 Dao động hoá trị S=O 1420 Dao động hoá trị đối xứng COO 1430 Dao dộng gấp C-H 1730 Dao động hoá trị C=O 3300-3440 Dao động hoá trị O-H Luan van 100 PHỤ LỤC ĐỘ DỊCH CHUYỂN HÓA HỌC CỦA C VÀ H TRONG MỘT SỐ GỐC ĐƯỜNG KHI ĐO PHỔ NMR Vị trí H H1 H2 H3 H4 H5 3--Man-1 5.2 4.2 3.96 3.92 4.04 3--L-fuc-4-SO3 -1 5.15 3.91 4.07 4.76 4.55 4--GlucpA-1 4.15 3.44 3.63 3.82 3.76 2--Glap-1 4.72 3.67 3.84 3.94 3.60 3.74 C1 105 C2 73 C3 74.5 C4 89.7 C5 75.6 C6 61.9 Vị trí H H1 H2 H3 H4 H5 H-6a Vị trí C C1 C2 C3 C4 C5 C6 3--D-man-1 5.14 4.21 3.99 3.82 3.81 103.1 71 79.7 67.5 74.8 5.26 4.24 4.05 3.93 3.75 101.8 78.5 79.3 68.1 74.7 5.26 4.1 3.95 3.71 3.71 101.8 78.5 79.3 68.1 74.7 62.3 5.03 4.12 3.89 3.57 3.86 1.3 103 71.3 79.1 72.6 70.4 17.9 101.9 79.2 71.2 73.6 70.4 17.8 - 3,2--D-man-1 2--D-man-1 3--L-rha-1 2--L-rha-1 Luan van H-6a 62.3 62.3 H-6b H-6b 101 5.19 4.07 3.94 3.48 3.82 1.30 5.24 4.26 3.99 3.65 3.09 1.36 102.1 76.1 77.3 72.2 70.6 18.0 3--D-glucp-1 4.791 3.431 3.654 3.563 3.466 3.915 3.727 -D-galp-16 4.419 3.590 3.43 3.928 3.712 3.81 105.4 72.74 74.49 70.66 70.21 63.1 4.55 3.35 3.55 3.45 3.53 3.77 102.9 73.5 75.9 69.8 76.5 60.9 4.98 3.99 3.99 4.24 3.78 3.78 100.1 73.7 81.6 70.3 76.1 62.15 4.64 3.59 3.64 3.99 3.69 3.77 105.2 72.5 74.6 70.1 76.5 62.4 4.47 3.38 3.48 3.51 3.37 3.96 103.7 73.9 76.9 70.5 77.6 62.1 101.1 73.2 73.8 73.2 72.8 74.4 5.03 3.61 3.88 3.56 4.78 5.30 4.62 4.26 4.17 4.5 1.31 101.4 76 76 71 69.4 18.2 5.29 3.85 3.95 4.22 4.16 3.78 2,3--L-rha-1 3--D-glucp-1 2,3--D-galp-1 3--D-galp-13 -D-glucp-1 -D-glucpA-1 3--L-fuc-2-SO3 4--D-gal-1 - Luan van 3.95 3.78 3.77 3.82 102 3--D-gal-1 -L-fuc -L-fuc-2-SO3 -L-fuc-3-SO3 -L-fuc-4-SO3 2,3--L-fuc-1 - - - 102.9 71.5 70.9 80.9 73.9 63.0 4.40 3.78 3.75 4.12 3.73 3.78 105.3 72.3 82.7 70.4 77.5 63.0 5.20(3.9) 3.77 3.86 3.81 4.20 1.21 93.12 69.09 70.29 72.79 67.10 16.33 5.49(3.6) 4.41 4.00 3.89 4.27 1.22 93.22 78.62 70.21 75.00 69.03 18.36 5.26(4.0) 3.94 4.54 4.17 4.27 1.23 95.11 69.00 80.82 73.05 69.03 18.36 5.22(3.7) 3.81 3.98 4.62 4.34 1.27 95.11 71.26 71.26 83.66 68.46 5.34 4.65 4.26 4.17 4.5 1.3 101.4 76 76 72.1 69.4 18.2 Luan van ... rong nâu Việt Nam thập kỉ số công bố thành phần, cấu trúc Fucoidan phân lập từ loài rong nâu Việt Nam cịn hạn chế Do vậy, tơi chọn đề tài “ Xác định thành phần hóa học đặc điểm cấu trúc Polysaccharide. .. xuất Fucoidan vào mục đích làm thực phẩm chức làm thuốc Vì vậy, thực đề tài ? ?Xác định thành phần hóa học đặc điểm cấu trúc Polysaccharide Sulfate phân lập từ rong nâu Sargassum microcystum? ?? cần... thập rong nâu Sargassum microcystum số nơi vùng biển Nha Trang - Tách chiết phân đoạn Fucoidan từ rong nâu thu - Phân tích thành phần hóa học Fucoidan phân đoạn chúng - Xác định đặc trưng cấu trúc