Bài viết bước đầu định lượng đột biến JAK2 V617F bằng kỹ thuật PCR kỹ thuật số (ddPCR) để chẩn đoán và theo dõi điều trị ở những bệnh nhân tân sinh tăng sinh tủy (MPN) có đột biến JAK2 V617F (đột biến điểm tại vị trí V617).
KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU BƯỚC ĐẦU ĐỊNH LƯỢNG JAK2 V617F BẰNG DROPLET DIGITAL PCR TRÊN BỆNH TÂN SINH TĂNG SINH TỦY TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC Cao Sỹ Luân1, Nguyễn Trần Nam An1, Đoàn Thị Tuyết Thu1, Phù Chí Dũng1, Phan Thị Xinh1 TĨM TẮT 33 Mục tiêu: Bước đầu định lượng đột biến JAK2 V617F kỹ thuật PCR kỹ thuật số (ddPCR) để chẩn đoán theo dõi điều trị bệnh nhân tân sinh tăng sinh tủy (MPN) có đột biến JAK2 V617F (đột biến điểm vị trí V617) Phương pháp nghiên cứu: Mô tả loạt ca, hồi cứu, triển khai kỹ thuật Trong nghiên cứu này, đánh giá độ xác, độ nhạy độ tái lặp phương pháp định lượng đột biến JAK2 V617F kỹ thuật ddPCR Sau đó, sử dụng kỹ thuật để xác định tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mẫu ngoại kiểm mẫu bệnh nhân MPN chẩn đoán điều trị Bệnh viện Truyền máu Huyết học (BVTMHH) Kết quả: Chúng xác định tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mẫu chứng mẫu bệnh nhân MPN chẩn đoán điều trị BVTMHH có độ nhạy, độ xác độ tái lặp cao với hệ số biến thiên (CV) < 0,05 Đồng thời, chúng tơi nhận thấy có tương đồng kết xác định đột biến JAK2 V617F ddPCR phương pháp định tính PCR đặc hiệu alllele (ASO-PCR) Ngoài ra, kết ngoại kiểm Bệnh viện Truyền máu Huyết học Chịu trách nhiệm chính: Phan Thị Xinh SĐT: 0932.728.115 Email: bsphanthixinh92@gmail.com Ngày nhận bài: 01/8/2022 Ngày phản biện khoa học: 01/8/2022 Ngày duyệt bài: 15/9/2022 290 xác định tình trạng đột biến JAK2 V617F với mẫu gửi từ Trung tâm đánh giá chất lượng ngoại kiểm Anh quốc (UK NEQAS) cho thấy có phù hợp hồn tồn tương đồng kết UK NEQAS với số z-score ≤ 0,5 Kết luận: Chúng thiết lập thành công kỹ thuật ddPCR để xác định tỷ lệ đột biến JAK2V617F bệnh nhân MPN chẩn đoán điều trị BVTMHH với độ nhạy, độ xác độ tái lặp cao Từ khóa: tân sinh tăng sinh tủy, đột biến JAK2 V617F, PCR kỹ thuật số SUMMARY QUANTIFICATION OF JAK2 V617F MUTATION IN CHRONIC MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASMS USING DROPLET DIGITAL PCR Objective: We initially quantify the JAK2 V617F mutation by droplet digital PCR (ddPCR) technique for diagnosis and monitoring treatment in proliferative myeloid syndromes (MPN) patients with JAK2 V617F mutation Method: A case series, retrospective study and evaluation new technique In this study, we evaluated the accuracy, sensitivity and reproducibility of quantification of the JAK2 V617F mutation by ddPCR technique Then, this technique was used to determine the ratio of JAK2 V617F mutation in the control samples and MPN patient samples diagnosed and treated TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 at the Blood Transfusion Hematology Hospital (BTH) Results: We determined the ratio of JAK2 V617F mutation in the control samples as well as in the MPN patient samples diagnosed and treated at the BTH with high sensitivity, accuracy and reproducibility with the coefficient of variation (CV) < 0.05 Furthermore, we also found a similarity in the results of JAK2 V617F mutation identification between ddPCR and ASO-PCR method In addition, the external test results of the JAK2 V617F mutation identification with samples from UK NEQAS show that our results are completely matched and highly equivalent with the results of UK NEQAS with z-score ≤ 0.5 Conclusions: We have successfully established ddPCR technique to determine the ratio of JAK2 V617F mutation in MPN patients diagnosed and treated at BTH with high sensitivity, accuracy and reproducibility Keywords: proliferative myeloid syndromes, JAK2 V617F mutation, droplet digital PCR I ĐẶT VẤN ĐỀ Tân sinh tăng sinh tủy (MPN) nhóm bệnh lý tăng sinh bất thường tế bào dòng tủy tủy xương, bao gồm thể bệnh đa hồng cầu (PV: Polycythemia Vera), tăng tiểu cầu tiên phát (ET: Essential Thrombocythemia) xơ tủy nguyên phát (PMF: Primary Myelofibrosis) Nguyên nhân gây bệnh xuất bất thường di truyền đột biến gen tế bào gốc tạo máu dẫn tới tăng sinh kiểm soát làm rối loạn q trình biệt hóa chúng Một đột biến gen phổ biến nhóm bệnh lý đột biến gen JAK2, đặc biệt đột biến JAK2 V617F Đây đột biến chiếm tỷ lệ cao thể bệnh MPN, cụ thể PV (81-99%), ET (41- 72%) PMF (39-57%) [1] Chính vậy, đột biến sử dụng làm tiêu chuẩn để chẩn đoán thể bệnh MPN theo tiêu chuẩn WHO 2016 [2] Hơn nữa, tỷ lệ đột biến JAK2 V617F cịn giúp phân biệt chẩn đoán ET (tỷ lệ đột biến thấp), PV PMF (tỷ lệ đột biến trung bình), postPV MF (tỷ lệ đột biến cao) [3] Ngồi vai trị chẩn đốn, số nghiên cứu cịn cho thấy giá trị đột biến JAK2 V617F phân nhóm tiên lượng theo dõi điều trị Cụ thể, tỷ lệ cao đột biến JAK2 V617F ảnh hưởng đến tiên lượng, bao gồm nguy cao thuyên tắc huyết khối tĩnh mạch (VTE), xơ hóa tủy xương (post-PV MF) tiến triển bệnh [3,4] Đồng thời, với việc thuốc ức chế hoạt động protein JAK2 (Ruxolitinib) FDA phê duyệt sử dụng định lượng đột biến JAK2 V617F giúp đánh giá xác đáp ứng với thuốc trúng đích ức chế JAK2 sử dụng để đánh giá mức độ đáp ứng sinh học phân tử bệnh nhân sau điều trị với Interferon-α (IFN-α) [5] Để xác định đột biến JAK2 V617F bệnh nhân MPN thời điểm chẩn đốn cần sử dụng phương pháp PCR định tính ASO-PCR Tuy nhiên, để định lượng đột biến JAK2 V617F cho mục đích phân biệt chẩn đốn thể bệnh MPN, tiên lượng bệnh hay đánh giá đáp ứng sau điều trị cần thực PCR định lượng Hiện có phương pháp PCR định lượng sử dụng để xác định tỷ lệ đột biến JAK2 V617F PCR định lượng theo thời gian thực (RQ-PCR) PCR kỹ thuật số (ddPCR: droplet digital PCR) Trong kỹ thuật ddPCR đánh giá có nhiều ưu điểm so với RQ-PCR Cụ thể ddPCR có độ nhạy, độ xác độ tái lặp cao [6] Ngoài ra, kỹ thuật ddPCR 291 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU phương pháp định lượng tuyệt đối, không định lượng gián tiếp dựa đường chuẩn RQ-PCR nên kết định lượng không phụ thuộc vào chất lượng đường chuẩn [6] Thêm ưu điểm ddPCR phản ứng PCR chia nhỏ nhiều giọt dầu riêng biệt nên bị ảnh hưởng chất ức chế phản ứng PCR [7] Hiện tại, đa số nghiên cứu Việt Nam dừng lại việc xác định đột biến JAK2 V617F để hỗ trợ chẩn đoán bệnh MPN chưa có nghiên cứu định lượng đột biến JAK2 V617F để hỗ trợ phân biệt chẩn đoán thể bệnh MPN tiên lượng bệnh đánh giá đáp ứng điều trị Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu “Bước đầu định lượng đột biến JAK2 V617F phương pháp ddPCR nhóm bệnh MPN chẩn đoán điều trị Bệnh viện Truyền máu Huyết học” nhằm cung cấp thêm thông tin hỗ trợ cho bác sĩ điều trị chẩn đoán, tiên lượng bệnh theo dõi đáp ứng điều trị II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Mẫu ngoại kiểm (10 mẫu) gửi từ Trung tâm đánh giá chất lượng ngoại kiểm Anh quốc (UK NEQAS) mẫu lưu DNA người bệnh chẩn đoán MPN (10 mẫu) từ tháng 06/2020 đến hết tháng 03/2022 Khoa Di truyền học phân tử, Bệnh viện Truyền máu Huyết học (BVTMHH) 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả loạt ca, hồi cứu, triển khai kỹ thuật 2.2.2 Phương pháp tiến hành Ly trích DNA: Lấy ml máu ngoại biên chống đơng EDTA Ly trích DNA từ 292 máu ngoại biên kit ReliaPrep™ Blood gDNA Miniprep System (Promega, Mỹ) theo hướng dẫn nhà sản xuất Sau đó, sản phẩm ly trích đo độ tinh nồng độ DNA máy quang phổ hai bước sóng 260 nm 280 nm, pha loãng để thu nồng độ 20 ng/uL Thực phản ứng ddPCR: Thành phần phản ứng ddPCR gồm có 2x ddPCR supermix for Probes (No dUTP), JAK2 Assay (20x), Enzyme HaeIII, nước nuclease free mẫu DNA 22 µL thể tích phản ứng Hút 20 µL phản ứng ddPCR có chứa DNA vào hàng giếng cartridge 70 µL dầu tạo vi giọt (DG Oil for Probes) vào hàng giếng cartridge để tạo vi giọt chứa thành phần phản ứng ddPCR Tiếp theo, chuyển vi giọt vào đĩa PCR 96 giếng, dán giấy nhôm lên đĩa chạy chương trình luân nhiệt máy PCR C1000 Touch Thermal Cycler (Bio-Rad, Hoa Kỳ), gồm bước 950C 10 phút; theo sau 40 chu kỳ với 940C 30 giây 550C 60 giây; cuối 980C 10 phút Sau đó, chuyển sản phẩm PCR qua máy Droplet Reader IVD (Bio-Rad, Hoa Kỳ) để đọc tín hiệu phản ứng PCR vi giọt Phân tích kết quả: Kết phân tích phần mềm QuantaSoft 1.7.4 (BioRad, Hoa Kỳ) Tiêu chuẩn để đánh giá hiệu tạo vi giọt phản ứng ddPCR dựa số lượng vi giọt giếng (>10000 vi giọt/giếng) Sử dụng kết mẫu chứng dương âm để thiết lập vị trí ngưỡng kênh màu FAM màu HEX theo nguyên tắc 1/3 trục, ghi nhận lại giá trị Threshold cho Ch1 Ch2 áp dụng làm ngưỡng cho mẫu cịn lại, điều chỉnh lại giá trị Threshold (nếu cần) cho đường ngưỡng kênh màu không cắt cụm vi giọt TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 Hình 1: Minh họa kết đếm số lượng vi giọt giếng phản ứng ddPCR (tất có > 10000 vi giọt/giếng) Hình 2: Minh họa kết thiết lập vị trí ngưỡng kênh màu FAM màu HEX theo nguyên tắc 1/3 trục Màu xám: JAK2 bình thường đột biến, Màu xanh dương: có JAK2 đột biến, Màu xanh lá: có JAK2 bình thường Màu cam: có JAK2 bình thường đột biến III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trong nghiên cứu này, chúng tơi đánh giá độ xác độ tái lặp phương pháp định lượng đột biến JAK2 V617F kỹ thuật ddPCR Trước hết, dựa kết định lượng mẫu chứng gồm chứng dương 1% (PC 1%), chứng dương 0,1% (PC 0,1%), chứng âm (NC, chứa JAK2 bình thường), mẫu trắng (NTC, không chứa DNA) cho thấy kết định lượng đột biến JAK2 V617F kỹ thuật ddPCR có tương đồng cao Cụ thể, mẫu PC 1% cho kết tỷ lệ đột biến gần 1% (trung bình 1,11%); mẫu PC 0,1% cho thấy tỷ lệ đột biến gần 0,1% (0,13%); mẫu NC NTC tỷ lệ đột biến 0% (Hình 3) 293 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU Hình 3: Kết xác định tỷ lệ đột biến mẫu chứng, gồm PC 1%, PC 0,1%, NC (chứng âm) NTC (chứng âm không chứa DNA) Kết định lượng đột biến JAK2 Ngồi ra, chúng tơi nhận thấy có V617F mẫu bệnh nhân MPN (10 mẫu) tương đồng kết xác định đột biến cho thấy có độ lặp lại cao Dựa kết JAK2 V617F hai phương pháp ddPCR tỷ lệ đột biến JAK2 V617F xác định ASO-PCR Cụ thể, trường hợp xác hai giếng mẫu bệnh nhân định có tỷ lệ đột biến JAK2 V617F cho thấy có độ lặp lại cao, tất mẫu ddPCR cho kết dương tính có hệ số biến thiên (CV) < 0,05 (Bảng 1) ASO-PCR ngược lại (Bảng 1) Bảng 1: Tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mẫu bệnh nhân MPN xác định kỹ thuật ddPCR kết PCR định tính (ASO-PCR) Tỷ lệ đột biến JAK2 V617F (%) PCR định tính Mẫu Hệ số biến (ASO-PCR) Giếng Giếng Trung bình thiên (CV) MPN01 1,49 1,44 1,46 0,02 Dương tính yếu MPN02 53,5 54,2 53,9 0,01 Dương tính MPN03 33,6 33,6 33,6 0,00 Dương tính MPN04 8,2 8,0 8,09 0,01 Dương tính MPN05 0 * Âm tính MPN06 38,2 38,2 38,2 0,00 Dương tính MPN07 49,2 48,1 48,7 0,01 Dương tính MPN08 0 * Âm tính MPN09 70,9 70,5 70,7 0,00 Dương tính MPN10 73,4 73,1 73,3 0,00 Dương tính * Do kết định lượng đột biến JAK2 V617F nên khơng tính hệ số biến thiên Đồng thời, kiểm tra ổn định kết định lượng đột biến JAK2 V617F lần thực phản ứng ddPCR Kết cho thấy tỷ lệ đột biến JAK2 V617F xác định hai lần thực phản ứng ddPCR mẫu có CV< 0,05 (Bảng 2) 294 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 Bảng 2: Tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mẫu bệnh nhân MPN xác định kỹ thuật ddPCR lần thực phản ứng ddPCR khác Tỷ lệ đột biến JAK2 V617F (%) Mẫu Kết lần Kết lần Trung Hệ số biến bình thiên (CV) Giếng Giếng Giếng Giếng MPN06 38,2 38,2 38,8 39,5 38,68 0,02 MPN07 49,2 48,1 47,5 48,6 48,35 0,01 MPN08 0 0 * MPN09 70,9 70,5 70,5 71 70,73 0,00 MPN10 73,4 73,1 73,8 72,8 73,28 0,01 * Do kết định lượng đột biến JAK2 học phân tử, BVTMHH đạt tiêu chí V617F nên khơng tính hệ số biến đánh giá định tính định lượng Cụ thể, thiên đánh giá định tính kết BVTMHH Ngồi ra, chúng tơi tham gia thực báo cáo hoàn toàn tương đồng với kết ngoại kiểm xác định tình trạng đột biến NEQAS đưa liên tục xếp hạng JAK2 V617F với mẫu gửi từ UK “Satisfactory” (nộp đủ kết kết NEQAS Theo báo cáo đánh giá từ UK đúng) hiệu xét nghiệm (Bảng 3) Còn NEQAS cho thấy kết xác định tình trạng đánh giá định lượng tỷ lệ đột biến đột biến JAK2 V617F theo phương pháp JAK2 V617F BVTMHH báo cáo ln có ddPCR thực Khoa Di truyền số z-score ≤ 0,5 (Bảng 4) Bảng 3: Kết ngoại kiểm đánh giá định tính tình trạng đột biến JAK2 V617F Kết Kết Đợt Xếp hạng hiệu Mẫu định tính định tính tham gia xét nghiệm* (BTH) (NEQAS) 165 Âm tính Âm tính 06-07/ Satisfactory 2020 166 Dương tính Dương tính 167 Dương tính Dương tính 10-11/ Satisfactory 2020 168 Âm tính Âm tính 169 Dương tính Dương tính 02-03/ Satisfactory 2021 170 Dương tính Dương tính 173 Dương tính Dương tính 10-11/ Satisfactory 2021 174 Dương tính Dương tính 175 Âm tính Âm tính 02-03/ Satisfactory 2022 176 Dương tính Dương tính * Xếp hạng hiệu xét nghiệm lab theo hai bậc “Satisfactory” (nộp đủ kết kết đúng) “Critical” (nộp đủ kết kết sai không nộp kết quả) 295 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU Bảng 4: Kết ngoại kiểm đánh giá định lượng đột biến JAK2 V617F Kết Kết Đợt Mẫu định tính định tính z-score tham gia (BTH) (NEQAS) 165 0% 0% * 06-07/ 2020 166 74,1% 74,4% * 167 67,87% 66% * 10-11/ 2020 168 0% 0% * 169 4,975% 4,92% 0,04 02-03/ 2021 170 6,036% 5,12% 0,51 173 3,355% 3% 0,33 10-11/ 2021 174 23,722% 23,39% 0,05 175 0% 0% N/A 02-03/ 2022 176 7,3% 7,38% −0,03 * Chưa áp dụng đánh giá kết định lượng, N/A: Not analysed (Do kết định lượng đột biến JAK2 V617F nên khơng phân tích) IV BÀN LUẬN Theo kết xác định đột biến JAK2 V617F mẫu chứng gồm mẫu PC 1%, PC 0,1%, NC NTC tất mẫu đạt yêu cầu phân tích tổng số vi giọt/giếng, thành phần mẫu tỷ lệ đột biến, đảm bảo độ tin cậy kết xét nghiệm Ngoài ra, với kết định lượng xác tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mẫu có tỷ lệ đột biến thấp (PC 0,1%) cịn chứng tỏ độ nhạy cao kỹ thuật ddPCR Theo số nghiên cứu giới hạn phát đột biến JAK2 V617F kỹ thuật ddPCR đạt tới 0,01% [8,9] Kết xác định tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mẫu bệnh nhân MPN nghiên cứu cho thấy ddPCR phương pháp định lượng có độ xác độ tái lặp cao với hệ số biến thiên (CV) thấp (< 0,05) giếng mẫu lần thực ddPCR khác Khi đối chiếu với PCR định tính (ASO-PCR) cho thấy tương đồng kết xác định đột biến JAK2 V617F Không 296 thế, phương pháp định lượng nên ddPCR cung cấp thơng tin xác tỷ lệ đột biến JAK2 V617F với phương pháp định tính cho biết có đột biến JAK2 V617F Việc biết tỷ lệ đột biến giúp cung cấp thêm thông tin cho bác sĩ việc phân biệt chẩn đoán thể bệnh MPN, tiên lượng bệnh theo dõi đáp ứng điều trị Một số nghiên cứu cho thấy ddPCR có độ nhạy cao so với RQ-PCR, đặc biệt trường hợp tỷ lệ đột biến JAK2 V617F mức thấp [6,9] Như vậy, với độ nhạy độ xác cao ddPCR đề nghị sử dụng để đánh giá MRD bệnh nhân đáp ứng sâu sau điều trị [9] Dựa báo cáo đánh giá kết ngoại kiểm mẫu UK NEQAS (Bảng 4), thấy kết tất đợt đánh giá hoàn toàn tương đồng có chênh lệch so với giá trị trung vị NEQAS tính Như vậy, với kết ngoại kiểm đánh giá cao định tính định lượng, cho thấy phương pháp định lượng đột biến JAK2 V617F TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 kỹ thuật ddPCR thực Khoa Di truyền học phân tử, BVTMHH đạt tiêu chuẩn quốc tế đáng tin cậy V KẾT LUẬN Chúng triển khai thành công phương pháp định lượng đột biến JAK2 V617F kỹ thuật ddPCR cho mẫu người bệnh MPN chẩn đoán điều trị BVTMHH Với kết thu từ mẫu chứng, mẫu người bệnh mẫu ngoại kiểm cho thấy độ xác độ tái lặp cao kỹ thuật ddPCR định lượng đột biến JAK2 V617F TÀI LIỆU THAM KHẢO Levine RL, Pardanani A, Tefferi A, et al Role of JAK2 in the pathogenesis and therapy of myeloproliferative disorders Nat Rev Cancer 2007 Sep;7(9):673-83 Arber DA, Orazi A, Hasserjian R, et al The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia Blood 2016 May 19;127(20):2391-405 Passamonti F, Rumi E Clinical relevance of JAK2 (V617F) mutant allele burden Haematologica 2009 Jan;94(1):7-10 Borowczyk M, Wojtaszewska M, Lewandowski K, et al The JAK2 V617F mutational status and allele burden may be related with the risk of venous thromboembolic events in patients with Philadelphia-negative myeloproliferative neoplasms Thromb Res 2015 Feb;135(2):272-80 Kiladjian JJ, Cassinat B, Chevret S, et al Pegylated interferon-alfa-2a induces complete hematologic and molecular responses with low toxicity in polycythemia vera Blood 2008 Oct 15;112(8):3065-72 La Rocca F, Grieco V, Ruggieri V, et al Superiority of Droplet Digital PCR Over Real-Time Quantitative PCR for JAK2V617F Allele Mutational Burden Assessment in Myeloproliferative Neoplasms: A Retrospective Study Diagnostics (Basel) 2020 Mar 5;10(3):143 Nystrand CF, Ghanima W, Waage A, et al JAK2 V617F mutation can be reliably detected in serum using droplet digital PCR Int J Lab Hematol 2018, 40, 181–186 Waterhouse M, Follo M, Pfeifer D, et al Sensitive and accurate quantification of JAK2 V617F mutation in chronic myeloproliferative neoplasms by droplet digital PCR Ann Hematol 2016 Apr;95(5):739-44 Link-Lenczowska D, Pallisgaard N, Cordua S, et al A comparison of qPCR and ddPCR used for quantification of the JAK2 V617F allele burden in Ph negative MPNs Ann Hematol 2018 Dec;97(12):2299-2308 297 ... myeloid syndromes, JAK2 V617F mutation, droplet digital PCR I ĐẶT VẤN ĐỀ Tân sinh tăng sinh tủy (MPN) nhóm bệnh lý tăng sinh bất thường tế bào dòng tủy tủy xương, bao gồm thể bệnh đa hồng cầu (PV:... định tỷ lệ đột biến JAK2 V617F PCR định lượng theo thời gian thực (RQ -PCR) PCR kỹ thuật số (ddPCR: droplet digital PCR) Trong kỹ thuật ddPCR đánh giá có nhiều ưu điểm so với RQ -PCR Cụ thể ddPCR... vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu ? ?Bước đầu định lượng đột biến JAK2 V617F phương pháp ddPCR nhóm bệnh MPN chẩn đoán điều trị Bệnh viện Truyền máu Huyết học? ?? nhằm cung cấp thêm thông tin hỗ