Đang tải... (xem toàn văn)
Định lượng đường tổng số hòa tan bằng phương pháp Dubois (1956) Đề tài Trình bày phương pháp xác định tổng hàm lượng đường trong mẫu thực vật Định lượng đường tổng số hòa tan bằng phương pháp Dubois (.
Đề tài: Trình bày phương pháp xác định tổng hàm lượng đường mẫu thực vật Định lượng đường tổng số hòa tan phương pháp Dubois (1956) Nguyên tắc phương pháp dùng axit sunfuric đậm đặc phá vỡ polysacarit, oligosacarit disacarit thành monosacarit Pentoses (hợp chất carbon) sau khử nước thành furfural hexoses (hợp chất carbon) thành hydroxymethyl furfural Các hợp chất sau phản ứng với phenol để tạo màu vàng Các yếu tố ảnh hưởng đến độ xác phản ứng định lượng này: Độ dụng cụ Độ tinh khiết hóa chất Sự ổn định nhiệt độ mơi trường q trình phản ứng diễn Hố chất dụng cụ làm thí nghiệm Hố chất Dụng cụ Nguyên liệu: Trái giàu đường Cồn 960 Phenol H2SO4 đđ Quang phổ kế H2SO4 60% Erlen 100ml Saccharose 0,1% Glucose 0,2mg/ml Cối chày sứ Phễu thủy tinh Pipette 1ml Pipette 5ml Nồi cách thủy Ống nghiệm Bình định mức 250ml Bình định mức Quy trình thực hiện: • Pha dung dịch đường mẫu: 0.5g Saccharose 0,1% Sấy khô 60°C hòa tan 500ml nước cất Chuẩn bị mẫu thí nghiệm: Nghiền 1-2g nguyên liệu cho vào Erlen 100ml Thêm vào 100 ml cồn 960 Đun sôi cách thủy (đun sôi ba lần) Khuấy, để nguội, lọc qua giấy lọc Cho phần lọc vào erlen 100ml Cho thêm vào phần bã 10ml cồn 960 Đun sôi cách thủy (đun lần) Khuấy, để nguội, lọc qua giấy lọc đưa bã lên phễu lọc dùng cồn 960 để rửa bã Cho phần lọc vào erlen 100ml ■Cho phần nước thu bay hết cồn nồi đun cách thủy nhẹ ■Pha loãng mẫu thành 50 lần (dùng bình định mức) Nếu mẫu có độ đường cao pha lỗng thành 100- 250 lần + Xây dựng đồ thị mẫu chuẩn – đo saccharose: Bảng chuẩn bị mẫu thí nghiệm BĐM (số ml Saccharose 0,1%) ống nghiệm (số ml dd từ BĐM) 1 1 1 Lượng Saccharose tương ứng (µg) 10 20 30 40 50 60 70 Cho vào ống 1ml dd phenol 1% 5ml dd H2SO4, để 10 phút, lắc Đun nồi cách thủy 20 phút 25- 300C Màu phản ứng xuất hiện, đem đo OD bước sóng 490 nm Cường độ màu (E) + Đo mẫu thử: Hút 1ml dd đường từ nguyên liệu pha loãng cho vào ống nghiệm Cho thêm phenol 1% 5ml H2SO4 dung dịch vào ống nghiệm Để 10 phút, lắc Giữ nồi cách thủy chừng 20 phút 25 – 300C Màu xuất hiện, đo màu bước sóng 490 nm + Làm đồng thời với mẫu trắng (1ml nước cất) Chú ý mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu trắng nên làm đồng thời với • Tính kết quả: Vẽ đồ thị chuẩn nồng độ hấp thu A nồng độ C Sau xác định số đường mẫu đo cách dóng đồ thị Trị số lượng đường thật có mẫu nguyên liệu lúc đầu cách nhân với hệ số pha loãng K TÀI LIỆU THAM KHẢO • A method for routine measurements of total sugar and starch content in woody plant tissues PAK S CHOW and SIMON M LANDHÄUSSER, December 15, 2003; accepted February 15, 2004; published online August 2, 2004 • Dubois,M, Gilles, KA, Hamilton, JK, Rebers, PA and Smith, F (1956) Anal Chem 26 350 • Tài liệu thực hành hóa sinh .. .Định lượng đường tổng số hòa tan phương pháp Dubois (1956) Nguyên tắc phương pháp dùng axit sunfuric đậm đặc phá vỡ polysacarit, oligosacarit... đồng thời với mẫu trắng (1ml nước cất) Chú ý mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu trắng nên làm đồng thời với • Tính kết quả: Vẽ đồ thị chuẩn nồng độ hấp thu A nồng độ C Sau xác định số đường mẫu đo cách dóng... thủy nhẹ ■Pha lỗng mẫu thành 50 lần (dùng bình định mức) Nếu mẫu có độ đường cao pha loãng thành 100- 250 lần + Xây dựng đồ thị mẫu chuẩn – đo saccharose: Bảng chuẩn bị mẫu thí nghiệm BĐM (số