Định lượng đường tổng số hòa tan bằng phương pháp Dubois (1956) 1 Lý thuyết Phương pháp này dựa trên cơ sở của phản ứng đặc trưng cho đường và nhiều chất hữu cơ khác dưới sự hiện diện của acid sunfuri.
Định lượng đường tổng số hòa tan phương pháp Dubois (1956) Lý thuyết: Phương pháp dựa sở phản ứng đặc trưng cho đường nhiều chất hữu khác diện acid sunfuric Các yếu tố ảnh hưởng đến độ xác phản ứng định lượng này: - Độ dụng cụ Độ tinh khiết hóa chất sử dụng trình phản ứng Sự ổn định nhiệt độ mơi trường q trình phản ứng diễn a b c Tiến hành: Hóa chất: Nguyên liệu: Trái giàu đường Cồn 960 Phenol H2SO4 đđ H2SO4 60% Saccharose 0,1% Glucose 0,2mg/ml Dụng cụ: Quang phổ kế Ống nghiệm: Bình định mức 250ml Bình định mức 100ml Erlen 100ml Cối chày sứ Phễu thủy tinh Pipette 1ml Pipette 5ml Nồi cách thủy Tiến hành: Phadung dịch đường mẫu: - Saccharose 0,1%: 0,5g Scaharose, sấy khô 600C, hòa tan 500ml nước cất Chuẩn bị mẫu thí nghiệm: + Nghiền 1-2g nguyên liệu 9caan cân phân tích), cho vào Erlen 100ml + Cho thêm vào 100 ml cồn 960, đun sôi nồi cách thủy (đun sôi ba lần) Khuấy que thủy tinh, để nguội, lọc qua giấy lọc không tro (lọc phần nước Cho phần lọc vào erlen 100ml Cho thêm vào phần bã 10ml cồn 960 đun sôi nồi cách thủy (đun cho sôi hai lần) Khuấy que thủy tinh, để nguội, lọc qua giấy lọc (lọc phần nước trong) Làm chừng hai lần Xong đưa bã lên phễu lọc dùng cồn 960 để rửa bã Cho phần lọc vào erlen 100 Cho phần nước thu bay hết cồn nồi đun cách thủy nhẹ Sau bay hết cồn mẫu để lâu nồi hút ẩm Pha loãng mẫu thành 50 lần (dùng bình định mức) Trong trường hợp mẫu có độ đường cao pha lỗng thành 100 – 250 lần + Xây dựng đồ thị mẫu – đo saccharose: Lấy bình định mức 100ml cho dd sacharose 0,1% vào ống từ 1-7 theo thứ tự tăng dần lần tăng ml Sau cho nước cất vào đến vạch định mức Lấy từ bình số ml dd cho vào ống nghiệm Cho thêm 1ml dung dịch phenol 1% cho vào ống nghiệm, cho xác 5ml H2SO4 dung dịch vào ống nghiệm (khơng để dính lên thành ống) Để 10 phút, lắc Giữ nồi cách thủy chừng 20 phút 25 – 300C Màu xuất bền vài So màu bước sóng 490nm, vẽ đồ thị BĐM (số ml Saccharose 0,1%) ống nghiệm (số ml dd từ BĐM) Lượng Saccharose tương ứng (µg) Cường độ màu (E) 1 10 20 30 40 50 60 70 Thực thí nghiệm: + Hút ml dd đường vừa chiết suất từ nguyên liệu pha loãng cho vào ống nghiệm Cho thêm 1ml dd phenol 1% vào ống nghiệm Cho xác ml H2SO4 đđ vào ống nghiệm (không để giấy lên thành ống) Để 10 phút, lắc Giữ nồi cách thủy chừng 20 phút 25 – 300C Màu xuất bền vài So màu bước sóng 490nm + Làm đồng thời với màu trắng (1ml nước cất) Chú ý mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu trắng nên làm đồng thời với Tính kết quả: Vẽ đồ thị chuẩn nồng độ hấp thu A nồng độ C Sau xác định số đường mẫu đo cách dóng đồ thị Trị số lượng đường thật có mẫu nguyên liệu lúc đầu cách nhân với hệ số pha loãng K